基因治疗下肢动脉闭塞症

从 1994年Ｉｓｎｅｒ等实施下肢动脉硬化闭塞症严重缺血临床基因治疗以来 ,下肢动脉闭塞的基因治疗范围从下肢动脉硬化闭塞症扩大到血栓闭塞性脉管炎 ;目的基因从最初的血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ) ,至目前许多与血管生长有关的因子。基因转移的方式方法和载体系统也有不少改进 ,如应用分子结合体(ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ)包括一些能与核酸或ＤＮＡ结合的蛋白或其配体介导的基因转移 ,以及基因缝线技术和基因枪等为血管疾病的基因治疗提供了新的技术方法。实验与临床大多取得了较为满意的效果。一、治疗范围外周动脉闭塞性…     

肝细胞生长因子基因治疗周围动脉闭塞症研究进展

目的 综述利用肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）基因治疗周围动脉闭塞症（peripheral arterial disease，PAD）的实验研究和临床试验。方法 查阅近年来对大鼠、家兔、犬及糖尿病大鼠缺血肢体模型或临床患者缺血部位转染HGF质粒DNA后，评价缺血肢体血流量、血管密度、血压及缺血性溃疡等相关文献。结果 缺血肢体模型转染HGF质粒DNA后，缺血肢体血流量、血管密度及血压均有显著增加。肌肉注射携带HGF质粒DNA对荷瘤小鼠的肿瘤生长和转移无促进作用。Ⅰ／Ⅱa期临床试验表明，6例患者均未观察到与基因治疗相关的不良反应，踝部绝对血压、血压指数增高，可视模拟疼痛尺度减低，缺血性溃疡长径减小、愈合或明显改善。结论 携带HGF质粒DNA可能成为治疗PAD的一种新手段。     

血管内皮生长因子基因治疗大鼠缺血皮瓣的实验研究

目的　研究血管内皮生长因子 (VEGF)基因治疗对大鼠缺血皮瓣生存的影响。方法建立大鼠缺血皮瓣的动物模型 ,采用直接注射法转移 pcD2 /hVEGF12 1真核表达质粒于大鼠缺血皮瓣肉膜层 ,术后 7d ,应用苏木素 伊红 (HE)染色、单光子发射计算机断层摄影 (SPECT)及计算机图像分析软件等方法检测皮下血管密度、皮瓣血供和皮瓣成活率。结果　经VEGF基因治疗组的大鼠缺血皮瓣与对照组相比较具有皮下血管密度增加、血液供应增多和皮瓣成活率显著性增高 (P <0 .0 1)。结论　VEGF基因治疗能够诱导新血管形成、增加血流灌注 ,促进缺血皮瓣的生存。     

人血管内皮生长因子-C基因治疗淋巴水肿的实验研究

目的 观察人血管内皮生长因子-C(VEGF-C)基因治疗阻塞性淋巴水肿的疗效.方法 成年新西兰大白兔制成右后肢淋巴水肿模型;SD大鼠制成尾巴淋巴水肿模型.每种动物随机分2组,治疗组皮内注射人VEGF-C基因,对照组皮内注射生理盐水.测量治疗前后水肿部位体积变化;第3周取材,测VEGF-C mRNA及蛋白的表达水平;用淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(LYVE-1)抗体免疫组化染色观察淋巴管增生情况.结果 基因治疗后兔右后肢体积明显减少,其减少值分别为:治疗组(24.40±1.08)ml,对照组(5.80±1.92)ml,差异有统计学意义(P=0.0001);治疗组VEGF-C mRNA及蛋白明显表达,而对照组则不明显;治疗组淋巴管数量显著多于对照组(P=0.0004),且管腔较粗.结论 用VEGF-C基因治疗可诱导淋巴管生成,减轻或消除淋巴水肿.     

应用转血管内皮生长因子基因治疗肢体缺血的研究

目的研究肌肉内转血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗肢体缺血的可行性,比较各种治疗方法的疗效. 方法雄性新西兰大白兔50只,完全切除股动脉后随机分为3组.实验组为明胶海绵携载法转基因组(n=18)和肌肉内注射转基因组(n=18);只注射pcDNA3为对照组(n=14).通过直接注射法及明胶海绵携载法将构建的质粒pcDNA3-VEGF121基因转入缺血肌肉内,立即测定各组肢体髂内动脉血流量,在术后2天,1、2、3和4周应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定基因表达,术后30天通过测定缺血肢体髂内动脉血流量、动脉血管造影及组织学观察测定血管密度,评价侧支循环变化. 结果术后2天,转VEGF基因治疗的两实验组均测到基因表达,并均维持2周.术后立即测定的髂内动脉血流量各组间无明显差异.术后30天,缺血肢体髂内动脉血流量、肢体血管造影血管数目和肌肉组织血管密度转VEGF基因的两实验组均比对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),明胶海绵携载组较直接注射组亦有明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论肌肉内转VEGF基因治疗可促进急性缺血肢体侧支循环、改善血供,明胶海绵携载法较直接注射法有更好的疗效.     

纳米磁粒靶向基因治疗动脉闭塞性疾病的实验研究

目的创立一种新的基因治疗闭塞性血管病的方法。方法采用共沉淀法合成了纳米级磁粒,以逆转录聚合酶链式反应法(RTPCR)克隆人血管内皮生长因子基因并构建高拷贝的真核表达质粒,应用乳化复合技术合成磁粒基因复合微球。中国大耳白兔20只,制造后肢动脉血管闭塞模型。10d后经对侧股动脉注入磁粒基因复合微球,患侧肢体外加磁场。治疗后30d处死动物,分别取肌肉及内脏组织做病理切片。结果血管造影显示治疗组第40天有新生血管形成,并向远断端生长,使得肢体远端血供得以恢复。对照组亦可见血管新生,但数量明显少于治疗组(P<005)。对照组缺血肢体大腿中部肌肉组织(内收肌和半膜肌)微血管密度为(125±23)个mm2,治疗组为(298±27)个mm2,P<001;微血管数和肌纤维数两者比率对照组为042±004,治疗组为083±003,P<001。结论纳米磁粒靶向VEGF基因治疗实验性血管闭塞性病变疗效显著,安全可靠。     

下肢动脉硬化闭塞症——股深动脉重建下肢血液循环

动脉粥样硬化是导致下肢动脉管腔狭窄和闭塞最常见的病变，严重威胁肢体的生存。当髂-股动脉或股浅动脉广泛性闭塞时，股深动脉是髂动脉和月　国动脉之间的主要侧支血管，由于其独特的解剖条件和生理功能，为重建下肢血液循环起到了重要的作用。1961年，Leeds 和Gilfillan首次报告利用股深动脉重建下肢血供取得成功，近年来，其临床应用价值日益受到重视。     

下肢动脉硬化闭塞症 股深动脉重建下肢血液循环

动脉粥样硬化是导致下肢动脉管腔狭窄和闭塞最常见的病变 ,严重威胁肢体的生存。当髂 -股动脉或股浅动脉广泛性闭塞时 ,股深动脉是髂动脉和月国动脉之间的主要侧支血管 ,由于其独特的解剖条件和生理功能 ,为重建下肢血液循环起到了重要的作用。 1961年 ,Ｌｅｅｄｓ和Ｇｉｌｆｉｌｌａｎ首次报告利用股深动脉重建下肢血供取得成功 ,近年来 ,其临床应用价值日益受到重视。一、股深动脉的应用解剖及病理特点股深动脉的应用解剖 :股深动脉在腹股沟韧带以下 2～ 5ｃｍ左右 ,从股总动脉后外侧发出 ,全长 18～ 2 2ｃｍ ,初在股浅动脉的后外侧 ,继经…     

血管内皮生长因子-碱性成纤维细胞生长因子基因治疗家兔肢体缺血的研究

目的　了解血管内皮生长因子 (VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)联合克隆基因 (VEGF bFGF)治疗兔下肢动脉缺血模型后新生血管和侧支形成状况。方法　应用 40只家兔制成下肢缺血模型 ,其中VEGF bFGF组 10只 ,VEGF组 12只 ,空载体组 8只 ,生理盐水 (NS)组 10只。构建pcDNA3 /VEGF和pcDNA3 /VEGF bFGF真核表达载体。转染缺血部位肌组织 ,行下肢血管造影。结果　血管造影计数显示 ,VEGF bFGF组在转染后 14d(1.98± 0 .2 2 ) ,2 8d (1.81± 0 .5 2 ) ,5 6d(2 .2 1± 0 .44 )和 3个月 (2 .10± 0 .2 2 ) ;VEGF组在 2 8d(1.3 8± 0 .2 9) ,5 6d(1.94± 0 .2 5 )和 3个月 (2 .2 4± 0 .3 1) ,新生血管形成较对照组显著增加 (P <0 .0 5 )。结论　VEGF bFGF真核表达载体可以获得局部高效表达 ,刺激新生血管生成 ,建立侧枝循环 ,改善肢体缺血。     

Effects of finasteride on vascular endothelial growth factor

OBJECTIVE: Finasteride has been shown to reduce prostate bleeding in patients with benign prostatic hyperplasia (BPH). The mechanisms behind this are not known, but it has been suggested that finasteride reduces bleeding by inhibiting angiogenesis in the prostate. Studies in animals have shown that castration rapidly induces involution of the prostate vasculature, and androgen-stimulated prostate growth may be angiogenesis dependent. The objective of this study was to explore the response to finasteride on the vasculature and the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF), a potent regulatory factor of angiogenesis in human prostate tissue. MATERIAL AND METHODS: Patients with BPH were randomly assigned to 3 months of treatment either with finasteride (5 mg/day) or placebo before undergoing transurethral resection of the prostate (TURP). Prostate tissue VEGF expression was quantified by Western blot and the vascular density determined in Factor VIII immunostained tissue sections. Serum concentrations of VEGF were measured with ELISA technique. RESULTS: Patients treated with finasteride (n = 15) showed a decrease in prostate tissue VEGF(165) expression compared with placebo (n = 13) treated patients (p < 0.05), but the vascular density and the serum VEGF levels were unaffected. CONCLUSIONS: This study shows that finasteride treatment decreases VEGF expression in the human prostate.     

腺相关病毒介导的血管内皮生长因子基因与内皮祖细胞联合治疗肢体缺血

目的探讨腺相关病毒(AAV)介导的人血管内皮生长因子165(hVEGF165)基因转染的兔骨髓内皮祖细胞(EPCs)自体移植对于移植细胞存活率和缺血肢体血管再生的影响。方法构建、制备携带hVEGF165基因或β-半乳糖苷酶(β-gal)基因的AAV载体AAV-hVEGF165和AAV- LacZ;用AAV—hVEGF165和AAV-LacZ分别转染体外培养的EPCs,得到AAV/VEGF-EPC和AAV/LacZ-EPC,用RT-PCR、免疫细胞化学、流式细胞术检测外源基因的表达。分别用AAV/VEGF-EPC、AAV/LacZ-EPC和PBS自体移植于兔右下肢缺血的肌组织,28 d后行双侧肢体血流和免疫组织化学检测。结果AAV/VEGF—EPC和AAV/LacZ-EPC内可检测到外源基因的表达。AAV/VEGF—EPC、AAV/LacZ-EPC和PBS组患/健侧血流比值、毛细血管密度分别为0.73±0.21、0.64±0.13、0.45±0.10;(962±291)、(557±132)、(361±69)/mm2。AAV/VEGF-EPC和AAV/LacZ-EPC组移植成活的EPCs密度分别为(330±81)/mm2和(204±55)/mm2。结论AAV能够高效将外源基因转入EPCs,对其进行基因修饰。自体移植AAV-hVEGF165转染的EPCs可提高其移植存活率和增强其促进缺血肢体血管再生能力。     

Transplantation of endothelial progenitor cells transferred by vascular endothelial growth factor gene for vascular regeneration of ischemic flaps

BACKGROUND: Neovascularization occurs through two mechanisms: angiogenesis and vasculogenesis. Therefore, there are two strategies to promote neovascularization: therapeutic angiogenesis and therapeutic vasculogenesis (endothelial progenitor cells therapy). MATERIALS AND METHODS: In this study, we examined whether or not endothelial progenitor cells combined with vascular endothelial growth factor (VEGF) gene therapy is useful for ischemia surgical flaps in vivo. At the same time, we quantitatively compared the neovascularization ability of transplanted endothelial progenitor cells (EPCs) transducted with VEGF165 gene and EPCs alone. EPCs were isolated from cord blood of healthy human volunteers, cultured in vitro for 7 days and identified by immunofluorescence. After transduced with VEGF165 gene in vitro, proliferative activity of EPCs was assessed using MTT assay. CM-DiI was used to trace EPCs in vivo 4 days after injection of 5 x 10(5) VEGF-transduced EPCs(VEGF-transduced EPCs group, n = 10), 5 x 10(5) EPCs (non-transduced EPCs group, n = 10) in 500 microL EBM-2 media, or 500 microL EBM-2 media (EBM-2 media group, n = 10) local, a cranially based flap was elevated on the back of nude mice. The percent flap survival, neovasculariztion and blood flow recovery of flaps was detected. RESULTS: EPCs expressed cell markers CD34, KDR, and CD133. A statistically significant increase in percent flap survival was observed in mice of VEGF-transduced EPCs group as compared with that of non-transduced EPCs group: 67.99 +/- 6.64% versus 59.43 +/- 4.69% (P < 0.01), and 41.24 +/- 2.44% in EBM-2 media group (P < 0.01). The capillary density and blood flow recovery of flaps in VEGF-transduced EPCs group were both improved. CM-DiI-labeled VEGF-transduced EPCs were observed in vivo and the numbers of cells increased. CONCLUSION: EPCs from human cord blood can increased neovascularization of ischemic flaps and augmented the survival areas, and VEGF-transduced EPCs have more powerful ability of promoting neovascularization in animal model of ischemic flaps.     

血管内皮生长因子反义核酸对肝癌生长的抑制作用

目的　探讨血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在实体肿瘤中的作用。方法　应用分子克隆技术构建人全长ＶＥＧＦｃＤＮＡ反义基因真核表达载体,并用脂质体法转入人肝癌细胞系（ＨｅｐＧ２） ,观察转染后肝癌细胞在裸鼠体内的生长及瘤体内微血管的通透性。结果　各组细胞在裸鼠体内的成瘤时间无明显差别,但反义核酸转染组肿瘤的生长速度及瘤体的重量均明显落后于其他组,肿瘤内血管的通透性也显著降低。结论　ＶＥＧＦ在实体肿瘤的生长过程中起着十分重要的作用。