鸡胚成纤维细胞培养抗肿瘤NDV疫苗的实验研究

目的 用细胞培养法研制高效价人用抗肿瘤NDV.方法 采用鸡胚成纤维细胞低血清培养法,在接种NDV之前的细胞培养中,少量使用优质小牛血清(2 %),让单层细胞基本铺满培养瓶底时,用无血清培养液多次洗涤单层细胞,以尽量降低残余牛血清含量.接种NDV之后,以人白蛋白代替小牛血清继续滋养细胞,培养病毒.结果 NDV收获液Log PFU≥5.5,血凝效价1:640,经反向间接血凝试验检测,残余牛血清蛋白含量≤50 ng/ml.结论 NDV效价和活性符合人用疫苗要求.     

新城疫病毒在鸡胚中增殖影响因素探讨

目的探讨新城疫病毒(NDV)Ⅱ系弱毒株在鸡胚内增殖产生血凝素的最佳条件。方法将NDV按一定浓度稀释接种到鸡胚内孵育48～72h,收获鸡胚尿囊液,测定血凝效价。结果选择9～11日龄鸡胚,种子病毒稀释10^-2～10^-3、接种剂量为0.2～0．3ml;在36℃培养48～72h时,其鸡胚尿囊液量多且血凝效价高。弱毒系产生的NDV血凝效价高于强毒系和C30克隆系病毒。鸡胚培养较鸡成纤维细胞培养产生的NDV血凝效价高。结论鸡胚的病毒接种量和孵育温度对NDV的血凝效价的影响很大,在研究NDV的血凝能力时应注意到这些问题。     

紫外线灭活新城疫病毒体外抗肿瘤作用的研究

目的比较新城疫病毒（NDV）和紫外线灭活的新城疫病毒（NDV-UV）在体外对肿瘤细胞的直接杀伤作用。方法用NDV和NDV-UV作用于喉癌细胞株Hep一2细胞，用MTT法测定病毒的杀瘤活性并测定培养上清液病毒的血凝效价。结果NDV和NDV-Uv对Hep一2细胞均有杀伤作用，且随着病毒与肿瘤细胞作用时间的延长，二者杀瘤率逐渐增强，病毒与细胞作用48h后。NDV对Hep一2细胞的杀伤作用较NDV-UV组强，NDV组可测出血凝效价，且随着病毒与细胞作用时间的延长，NDV组血凝效价逐渐升高，而NDV-UV组血凝效价始终未测出。结论NDV和NDV-UV能直接杀伤肿瘤细胞，NDV能在肿瘤细胞内复制并杀伤肿瘤细胞，而NDV-UV不能在肿瘤细胞内复制亦能杀伤肿瘤细胞，提示NDV的杀瘤作用并不完全依赖于病毒的复制，NDV-UV可作为安全有效的生物调节剂用于肿瘤的生物治疗。     

MTT法测定新城疫病毒对人肝癌细胞的抑制杀伤作用

目的 :研究新城疫病毒 (NDV)对人肝癌细胞株的作用。方法 :利用 MTT方法检测 NDV对人肝癌细胞株的杀伤性。结果 :NDV作用后的人肝癌细胞株的细胞活性比对照的细胞活性有显著下降 ,且 NDV血凝效价显著升高 ,表明 NDV能杀死肿瘤细胞。结论 :NDV能够直接杀死肿瘤细胞 ,可作为治疗肿瘤的一种新生物制剂。     

一种兔圆小囊抗菌肽对新城疫病毒抑制作用

目的观察兔圆小囊抗菌肽对鸡新城疫病毒强毒株有无抑制作用。方法将NDV用圆小囊抗菌肽处理后再接种9日龄鸡胚，测定鸡胚尿囊液中的NDV血凝效价，并观察鸡胚病变。结果与对照组比较，兔圆小囊抗菌肽使鸡胚尿囊液中新城疫病毒的血凝效价降低，同时还能抑制因以上新城疫病毒所引起的鸡胚病变。结论兔圆小囊抗菌肽在体外对鸡新城疫病毒强毒株具有抑制作用。     

流感病毒在MDCK细胞中分离与培养的影响因素

目的探求流感病毒在MDCK（狗肾细胞）中培养的影响因素。方法将流感病毒吸附接种于MDCK细胞,对一些因素（样本处理情况、吸咐和培养时间、血清浓度、胰酶浓度、接种量和传代次数等）进行比较。结果样本反复挤压,最佳收获病毒时间为72h;加牛血清白蛋白组分V和维持液中终浓度为2．5μg/ml的胰酶可明显提高细胞增殖病毒的血凝效价。结论通过对MDCK细胞培养与增毒的影响因素分析,明显提高流感病毒分离与增毒的效价。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型在单层细胞培养中的增殖特征

目的：通过对HSV-1在BHK-2l单层细胞培养中的增殖特征的研究，得出获得较高病毒含量的条件，从而对基础研究以及今后即将开展的临床病毒培养进行指导。方法：使用不同滴度的HSV-1毒株接种不同浓度培养的BHK-2l单层细胞，病毒感染后用免疫荧光法及ELISA法检测病毒滴度，并绘制曲线。结果：在细胞传代时，较大浓度的细胞在长成单层细胞后对病毒敏感性较高，并随细胞浓度减少而逐渐下降，但如将病毒滴度控制在适当范围内，仍可得到较高的病毒含量。结论：如需获得较高滴度的病毒悬液，应将培养用单层细胞以较大浓度传代或使接种病毒滴度处于适当范围。     

人早孕蜕膜单层细胞与鼠胚共培养系统的建立

目的　获得鼠胚与人早孕蜕膜单层细胞的共培养系统。方法　经过细胞培养、传代获得蜕膜单层细胞 ;冻融后接种获得冻融蜕膜单层细胞 ;对单层细胞作免疫组织化学检查其雌、孕激素受体的表达。结果　人早孕蜕膜细胞有良好的体外培养活力 ,易于获得培养及传代。将获得的冻融蜕膜单层细胞进行雌、孕激素受体检查 ,见阳性表达。获得昆明白小鼠超促排卵后的单细胞受精卵 ,分别与传代及冻融的蜕膜细胞共培养获得囊胚孵出。结论　人早孕蜕膜单层细胞与鼠胚共培养系统的建立为人胚胎与其冻融的自体子宫内膜单层细胞共培养的研究提供了可行性分析。     

恶性网状细胞病细胞染色体畸变的观察(摘要)

本文报告用骨髓细胞及血细胞短期培养法对6例恶性网状细胞病患者的细胞分裂中期染色体进行观察的结果。细胞培养方法基本上按照项维等报导的短期培养法略加修改。培养基系用含有0.5％水解乳蛋白的Earle液,加入AB型人血清或初生小牛血清及植物血凝集素(PHA)。培养时间72小时,培养终止前4小时,加入秋水仙素,使每毫升培养液含有0.8微克。培养终止后,加入三倍量的蒸馏水,15分钟后,将细胞低速离心沉淀,用1∶2冰醋酸甲醇固定     

用MDCK细胞培养副流感病毒的初步尝试

目的:初步探索用MDCK细胞培养副流感病毒。方法:用不同血凝效价副流感病毒感染MDCK细胞,观察副流感病毒在细胞上的生长情况,并检测血凝效价的变化。结果:1∶512副流感病毒感染MDCK细胞后24h即出现明显的细胞病变效应,但病毒的血凝效价有所下降。结论:副流感病毒可以引起MDCK细胞出现细胞病变效应,但在该细胞内不能复制。     

LDH法检测新城疫病毒野生株与疫苗株对大肠癌的体外杀伤作用

目的比较新分离的新城疫病毒野生株(NDV7793、NDVD817)与疫苗株Lasota对大肠癌的体外杀伤作用。方法3株病毒作用于大肠癌细胞株LS174T和LOVO,用乳酸脱氢酶微量释放法测定病毒的杀瘤活性并通过测定培养上清液的血凝效价来检测病毒的增殖能力。结果3株新城疫病毒均可杀伤大肠癌细胞并可在其复制增殖,对正常大肠细胞无明显细胞毒性。而对正常大肠组织细胞未见明显影响(P<0.05);野生株对癌细胞的杀伤作用较强,72h后对LOVO细胞株的杀伤效应>90%;LOVO大肠癌细胞对NDV敏感性强于LS174T大肠癌细胞。结论3株NDV对大肠癌细胞均有选择性杀伤作用,野生株病毒的抑瘤效应强于疫苗株,对正常大肠组织无细胞毒性。     

人支气管上皮细胞体外不同培养基培养效果比较

目的：比较胎牛血清培养基,小牛血清培养基对经纤维支气管镜（纤支镜）刷检人支气管上皮细胞培养存活率的差异。方法：采用不同细胞培养液,对经纤支镜刷检获得的人支气管上皮细胞进行原代培养,并通过倒置相差显微镜观察原代培养细胞,比较细胞的存活率。结果：胎牛血清培养基细胞成活率比其他培养基高。结论：胎牛血清培养液可提供较为满意的生长条件。     

新城鸡瘟病毒弱毒株对BT325细胞系多细胞球体的作用

为研究新城鸡瘟病毒（ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ , Ｎ Ｄ Ｖ） 的抗肿瘤作用,观察了 Ｎ Ｄ Ｖ Ｌｏｓｏｔａ ４ 弱毒株对人脑多形胶质母细胞瘤细胞系 Ｂ Ｔ３２５ 多细胞球体的杀伤效应。发现：随着培养时间延长,与对照组球体直径相比,各滴度试验组球体平均直径增长数明显减少（ Ｐ ＜ ０ ．０１） ;克隆率分析结果进一步证明, Ｎ Ｄ Ｖ Ｌｏｓｏｔａ ４ 弱毒株能有效杀伤 Ｂ Ｔ３２５ 肿瘤细胞（ Ｐ ＜ ０ ．０１） 。     

人树突状细胞与肺癌细胞A-549融合疫苗生物学特性研究

目的探讨人树突状细胞(DC)与人肺癌细胞A-549融合所得疫苗在制备过程中的生物学特性,总结高效制备融合疫苗的方法。方法应用GM-CSF和IL-4优化的方法制备肺癌患者人外周血单核细胞以获得DC,寻找DC制备率最高时间段;同时应用PKH672GL(绿色荧光)和PKH262GL(红荧光)分别标记DC和肺癌细胞A-549细胞,筛查最佳的融合比例。结果应用GM-CSF和IL4优化法进行DC制备第7天所得百分率为(66.26±5.13)%,高于其他时间(P<0.05);通过对比不同融合比例DC与人肺癌细胞A-549,显示1:1时所取得的融合百分率为(35.15±2.16)%,高于其他比例(P<0.05)。结论在DC制备过程中制备第7天所得DC百分率最高,应选取此时作为提取DC的最佳时间;同时DC与人肺癌细胞A-549以1:1比例相融合所得疫苗百分率最高。     

PEG6000修饰的流感疫苗脂质体的制备和稳定性

目的 筛选出PEG6000流感疫苗脂质体的最佳制备工艺并且评价其稳定性。方法 将小鼠免疫7 d,通过MTT法确定加入PEG6000的最佳摩尔百分比和最佳制备工艺。采用冻融冻干法制备PEG修饰的流感疫苗脂质体,将样品分别储存于不同温度[4℃、（25±2）℃、（37±2）℃]下,在设定时间取样测定包封率、胸腺指数和抗体滴度,考察其物理和生物稳定性。结果 MTT实验结果表明,PEG6000占磷脂摩尔百分比为4%时为最佳用量（P <0.01）,最佳工艺为后修饰法。PEG6000修饰的流感疫苗脂质体冻干粉在（37±2）℃条件下放置6个月后,包封率仍在80%以上;在（25±2）℃放置3个月后抗体滴度比> 4,表明仍具有较好的免疫效应。结论 PEG6000占磷脂摩尔百分比为4%时为最佳用量,采用后修饰法制备为最佳工艺;PEG6000脂质体具有良好的物理稳定性及生物稳定性。     

EB病毒膜蛋白家兔免疫血清的制备及其特性研究

目的：制备高效价EB病毒膜蛋白抗体,并对其效价及其与EBV结合的特异性进行鉴定。方法：将B95-8细胞培养至3×10^5/mL时,超声破碎,纯化获得EB病毒膜蛋白抗原;EB病毒膜蛋白抗原经弗氏佐剂乳化,在家兔背部皮下多点免疫注射,间隔2周免疫,共3次,并分别于免疫前和每次免疫后1周取兔血清,检测兔免疫血清抗体IgG;进一步采用Western blot检测制备的血清抗体与EBV结合的特异性,同时采用ELISA法检测兔血清抗体水平及各周抗体滴度的变化趋势。结果：所有家兔在全程免疫后都产生了高效价膜蛋白的特异性抗体,最高滴度达1：6400。结论：用B95-8细胞制备的EB病毒膜蛋白抗原免疫家兔,可成功制备高效价的特异性血清抗体,为EB病毒膜蛋白抗原的免疫学检测奠定了基础。     

不同浓度胎牛血清对原代心肌成纤维细胞增殖及分化的影响

目的:探讨不同浓度胎牛血清体外培养对原代心肌成纤维细胞增殖和分化的影响。方法:用酶消及差速贴壁法分离并培养SD乳鼠心肌成纤维细胞;采用不同浓度胎牛血清(1%、5%、10%和20%)培养心肌成纤维细胞并观察细胞形态,免疫荧光共聚焦法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达,划痕实验检测心肌成纤维细胞的迁移能力,CCK8实验检测心肌成纤维细胞的增殖能力。结果:随着胎牛血清浓度升高,细胞形态逐渐变圆,细胞表面积增加,α-SMA阳性细胞比例增加,心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞分化增多,细胞迁移能力增加。高浓度胎牛血清(20%)培养时心肌成纤维细胞增殖能力最旺盛,低浓度胎牛血清(1%)培养时心肌成纤维细胞增殖能力最低,5%和10%胎牛血清培养时心肌成纤维细胞增殖均旺盛。结论:高浓度胎牛血清培养会导致心肌成纤维细胞分化,5%胎牛血清培养心肌成纤维细胞较10%和20%胎牛血清培养分化程度少,增殖能力较1%胎牛血清好,选用5%胎牛血清培养心肌成纤维细胞较好。     

纳米细菌对肾小管上皮细胞损伤在肾结石形成中作用的研究

目的　探究纳米细菌（NB）损伤人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）并导致晶体滞留的机制。方法　于2016年10月—2017年10月在石河子大学医学院第一附属医院泌尿外科收集临床确诊肾结石且未应用药物或手术治疗患者的尿液培养NB。实验分为5组：对照组（胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）、NB组（NB菌液、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）、一水草酸钙（COM）组（5 mmol/L COM悬液、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）、纳米级羟基磷灰石（nHAP）组（300 mg/L nHAP、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）和四环素干扰组（5 mg/L四环素、NB菌液、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞）。共同培养6、12、24 h后,采用光学显微镜及透射电子显微镜观察HK-2细胞的形态学变化;超声粉碎细胞后检测Na+/K+ ATP酶和Ca2+/Mg2+ ATP酶活性;检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、过氧化氢（H2O2）和丙二醛（MDA）含量;用激光扫描共聚焦显微镜观察加入COM晶体后各组细胞的晶体黏附情况。结果　苏木素-伊红（HE）染色和透射电子显微镜结果可见,nHAP组和四环素干扰组HK-2细胞的损伤程度明显低于NB组。共同培养12、24 h后,NB组和COM组Na+/K+ ATP酶和Ca2+/Mg2+ ATP酶活性均低于对照组,H2O2含量均高于对照组（P<0.05）,nHAP组Ca2+/Mg2+ ATP酶活性均低于对照组（P<0.05）,四环素干扰组Na+/K+ ATP酶和Ca2+/Mg2+ ATP酶活性均高于NB组（P<0.05）。共同培养6、12、24 h后,NB组和COM组MDA含量均高于对照组（P<0.05）,四环素干扰组MDA含量均低于NB组（P<0.05）,COM组LDH含量均高于对照组（P<0.05）,nHAP组、四环素干扰组LDH含量均低于COM组（P<0.05）。结论　NB可能通过诱导脂质过氧化反应损伤HK-2细胞,损伤程度和晶体黏附量与NB作用时间呈正比。四环素可以抑制NB对HK-2细胞的损伤并减少损伤后的晶体滞留。     

新城疫病毒的制备纯化与初步鉴定

目的获得纯化的新城疫病毒,为下一步病毒的应用打下基础。方法利用传统鸡胚培养方法制备新城疫病毒（NDV）,通过PEG-6000沉淀,差速离心和蔗糖密度梯度离心等方法提取纯化了新城疫病毒（NDV）。以血凝实验微量法测定其滴度和活性。用电镜及SDS-PAGE方法对纯化病毒进行鉴定。结果纯化病毒经磷钨酸复染后电镜观察,能看到典型病毒颗粒,SD孓PAGE电泳显示有较纯的蛋白条带。结论病毒纯化效果较好,为我们下一步病毒的功能研究及其应用打下了坚实的基础。     

新城疫病毒合用中药黄芪诱生内源性干扰素的研究

目的研究新城疫病毒（NDV）合用中药黄芪在小鼠体内诱生内源性干扰素-α及对小鼠的免疫调节作用。方法实验分3部分,实验1：分别以NDV、黄芪及二者合用予小鼠口腔喷洒给药,连续10日后以ELISA法测定小鼠唾液中干扰素-α和SIgA的含量;实验2：分别以NDV、黄芪及二者合用予小鼠腹腔注射给药（黄芪灌胃方式给药）,ELISA法测定给药10日后血清干扰素-α的含量;实验3：分为NDV、黄芪及二者合用的高、中、低三种剂量,给药方法同第二组,6天后MTT法测定脾脏NK细胞的活性。每组分别设置阴性对照。结果NDV和黄芪口腔给药能升高小鼠唾液干扰素-α（35.54±10.20IU/ml,5.69±1.35IU/ml）和SIgA含量（68.88±15.47ng/ml,44.32±9.87ng/ml）,腹腔给药能诱生血清干扰素-α（120.54±29.21IU/ml,10.69±6.35IU/ml）,并能激活NK细胞活性（50.4%,32.1%）。NDV合用黄芪组的诱生效果远高于单独使用组（98.55±16.95IU/ml,101.31±27.59ng/ml,262.55±26.91IU/ml,75.6%）,显示出较强的协同作用。结论NDV合用黄芪能诱生小鼠内源性干扰素,并能发挥对小鼠SIgA和NK细胞的免疫调节作用。