肾上腺髓质素抑制内皮素的促血管平滑肌细胞增殖作用

目的观察肾上腺髓质素ａｄｒｅｎｏｍｏｄｕｌｉｎ，ＡＭ）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）内丝裂素活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏ－ｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）活性和ＶＳＭＣ增殖的作用。方法测定培养的ＶＳＭＣ内ＭＡＰＫ活性和３Ｈ－ＴｄＲ参入。结果１０－８ＥＴ－１可明显增加培养的ＶＳＭＣｓ内３Ｈ－ＴｄＲ参入（增加６７％，Ｐ＜０．０１）和ＡＰＫ激活（活性增高１１倍，Ｐ＜０．０１），而１０－１０～１０－７ｍｏｌ／Ｌ肾上腺髓质素（１３－５２）［ＡＭ（１３－５２）］与ＥＴ－１（１０－８ｍｏｌ／Ｌ）同时孵育，则可显著抑制ＥＴ－１的上述作用，与１０－８ｍｏｌ／ＬＥＴ－１单独应用时相比，３Ｈ－ＴｄＲ参入和ＭＡＰＫ活性分别减低２２％～５２％（Ｐ值均＜０．０１）和８．１～２９．４％（Ｐ值分别＜０．０５或０．０１）。而单用ＡＭ（１３－５２）对培养的ＶＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ参入和ＭＡＰＫ活性无明显影响（Ｐ值＞０．０５）。结论ＡＭ（１３－５２）具有抑制ＥＴ所致的ＭＡＰＫ激活和ＶＳＭＣ增殖的作用。ＡＭ与ＥＴ相互作用，参与内皮源的细胞旁分泌调节体系的构成，共同维持循环系统功能的稳态     

日本血吸虫（中国大陆株）FABPc重组抗原高效融合表达,纯化及 …

目的 构建Ｓｊ－ＦＡＢＰｃ表达克隆,获得大量纯化ｒＳｊ－ＦＡＢＰｃ重组（日本血吸虫脂肪酸结合蛋白）抗原,了解其作为侯选疫苗抗原的潜能。方法 以ＰＣＲ法从Ｓｊ－ｃＤＮＡ库中扩增出目的基因片段后亚克隆入表达载体ｐＧＥＸ－６Ｐ－１进行融合表达,经Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＾ＴＭ ４Ｂ亲和层析柱和ＰｒｅＳｃｉｓｓｉｏｎ＾ＴＭ Ｐｒｏｔｅａｓｅ酶切后纯化出ｒＳｊ－ＦＡＢＰｃ,Ｗｅｓｔｅｒｎ     

恶性疟原虫海南FCC1/HN株环子孢子蛋白(CSP)基因的克隆与表达

目的　为疟疾疫苗的研制提供靶抗原。方法　根据恶性疟原虫ＩＭＴＭ２２ 株７Ｇ８ 克隆环子孢子蛋白基因编码区序列, 设计一对引物, 采用ＰＣＲ技术从恶性疟原虫ＦＣＣ１／ＨＮ株基因组ＤＮＡ中特异扩增ＣＳＰ基因的Ⅰ区、中央重复区和Ⅱ区片段, 全长１－０８ｋｂ; 纯化扩增产物用ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨ Ⅰ双酶切后, 定向克隆入ｐｃＤＮＡ３ 载体, 转化大肠杆菌ＴＧ１ 株, 重组克隆经筛选后, 用ＰＣＲ 扩增和ＨｉｎｄⅢ＋ ＢａｍＨ Ⅰ双酶切进行鉴定： 用磷酸钙贴壁细胞转化法将重组质粒ｐｃＤＮＡ—ＣＳＰ导入ＨｅＬａ细胞, 用Ｇ４１８ 筛选出稳定分泌ＣＳＰ抗原的阳性细胞克隆; 将阳性细胞克隆系扩大培养并用Ｇ４１８ 加压, 以表达重组ＣＳＰ, 分离细胞培养上清和培养细胞, 进行ＳＤＳ ＰＡＧＥ分析。结果　（１） 从ＦＣＣ１／ＨＮ株基因组ＤＮＡ中特异扩增出ＣＳＰ基因Ⅰ区, 中央重复区和Ⅱ区编码序列;（２） 将扩增的目的片段正向插入ｐｃＤＮＡ３ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨⅠ位点; （３） 在人宫颈癌细胞系ＨｅＬａ 细胞中表达重组ＣＳＰ抗原, 其分子量为３８－３ｋＤａ, 蛋白扫描分析表达量占细胞培养上清液中蛋白总含量的１５－７７％ 。结论　成功构建真核表达系统ｐｃＤＮＡ３     

腺病毒介导血管紧张素Ⅱ2型受体基因转染表达抑制血管平滑肌细胞迁移

血管平滑肌细胞 (ＶＳＭＣ)内膜下迁移是血管成形术后再狭窄主要成因之一 ,血管紧张素Ⅱ 2型受体 (ＡＴ2Ｒ)可能介导抑制ＶＳＭＣ迁移的作用。本研究用腺病毒介导方法使ＶＳＭＣ转染表达ＡＴ2Ｒ ,并研究ＶＳＭＣ迁移所受到的影响。一、材料与方法1 ＡＴ2ＲｃＤＮＡ的腺病毒载体采用同源重组的方法构建。ＡＴ2ＲｃＤＮＡ(1 0 9ｋｂ)与穿梭质粒载体ｐＡＣＣＭＶｐＬｐＡ连接构成重组子ｐＡＣＣＭＶ ＡＴ2Ｒ ,用脂质体介导其与ｐＪＭ17一起转染 2 93细胞 ,进行同源重组产生带有ＡＴ2Ｒ基因的重组腺病毒载体 (ＡｄＣＭＶ ＡＴ2Ｒ) ,用该载体再转…     

重组丙型肝炎病毒基因转染H9细胞模型的建立

目的：建立重组ＨＣＶ基因转染的Ｈ９细胞（人ＣＤ４，Ｔ细胞）模型。方法：以载体ＣＤＺ２（连接有１６９３ｂｐＨＣＶＤＮＡ，包括完整的ＨＣＶ结构区）为模板，通过ＰＣＲ获得高保真的１．７３ｋｂＤＮＡ片段（包括１６９３ｂｐＨＣＶｃＤＮＡ和部分载体ＤＮＡ序列），其特异性被ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实。将ＨＣＶｃＤＮＡ片段插入载体ｐＣＤ－ＳＲα，经菌落原位杂交以及酶切分斤和ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｏＩｔ筛选，获得重组ＨＣＶ（ｐＣＤ－ＨＣＶ），并与ｐＳＶ２－ｇｐｔ载体共转染Ｈ９细胞。结果：从选择性培养基中筛选口阳性克隆细胞，经ＲＴ－ＰＣＲ．ｄｏｔＥＬＩＳＡ和ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ验证表明ｐＣＤ－ＨＣＶ在Ｈ９细胞中可进行复制、转录和表达，表达的约１．３×１０５大小蛋白具有ＨＣＶ抗原性。转染ｐＣＤ－ＨＣＶ的细胞培养至９０天时，仍可检测到ＨＣＶｍＲＮＡ和ＨＣＶ抗原。结论：建立ｐＣＤ－ＨＣＶ转染的Ｈ９细胞模型获得成功。     

精氨酸加压素促血管平滑肌细胞增殖效应及其对IL－6分泌的影响

我们以培养的ＳＤ大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）为模型，动态观察了精氨酸加压素（ＡＶＰ）对ＶＳＭＣｓ增殖作用和白细胞介素－６（ＩＬ－６）分泌功能的影响，亦对ＩＬ－６与ＶＳＭＣｓ增殖效应的关系进行了研究，旨在探讨ＡＶＰ和ＩＬ－６在高血压发病中的意义。结果表明：（１）ＡＶＰ对培养大鼠ＶＳＭＣｓ具有明显促增殖效应，随剂量增加和时间延长其作用加强；（２）ＶＳＭＣｓ可自身分泌ＩＬ－６，ＡＶＰ对其分泌有明显的抑制作用，且作用时间愈长，抑制作用愈显著；（３）ＩＬ－６作用于ＶＳＭＣｓ可明显促进其ＤＮＡ合成。上述结果提示，ＡＶＰ与ＩＬ－６可能均参与了高血压的发病。     

猪囊尾蚴特异抗原的基因克隆和表达

目的 寻找可用于诊断猪囊尾蚴病或可诱发宿主保护性免疫力的特异抗原。方法 用免疫血清筛选猪囊尾蚴头节λＺＡＰⅡｃＤＮＡ文库，阳性克隆基因测序，并亚克隆人表达载体ｐＥＴ２８ｂ。对重组体进行诱导表达并对表达产物进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果 从ｃＤＮＡ文库中筛到２个阳性克隆Ｃｙ１和Ｃｙ４。Ｃｙ４片段在原核体系（ｐＥＴ２８ｂ）中表达，获得高产量的融合蛋白Ｃｙ４。结论 Ｃｙ１为编码     

血管紧张素转换酶抑制剂对血管紧张素Ⅱ介导的钙信号传导的作用及其机理研究

本研究以血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）为对象，探讨了血管紧张素转换酶抑制剂（ＡＣＥＩ）对血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的直接作用。结果发现：ＡＣＥＩ呈时间依赖性地抑制ＡｎｇⅡ介导的钙内流，而不影响其钙释放。ＡＣＥＩ的这种作用与ＶＳＭＣ的血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性无关，其抑制ＡｎｇⅡ介导的钙内流特点也不同于钙通道阻滞剂和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂。ＡＣＥＩ并不直接抑制钙通道，但激活ＶＳＭＣ的内源性蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）则可消除ＡＣＥＩ对钙内流的抑制作用。本研究表明：ＡＣＥＩ有新的作用途径，它在受体后可直接影响ＡｎｇⅡ介导的钙信号传导，其机制可能与下调内源性ＰＫＣ活性有关。     

内皮细胞损伤和糖皮质激素对血管平滑肌细胞AT1基因表达的影响

为了探讨内皮细胞损伤和糖皮质激素对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）１型受体（ＡＴ１）基因ｍＲＮＡ表达和细胞超微结构的影响。本试验将３５只家兔随机分为５组,每组７只。１．对照组２．内膜损伤组：用球囊进行髂动脉内膜损伤。３．内膜损伤＋ＲＵ４８６组：髂动脉内膜损伤后,给家兔口服糖皮质激素受体拮抗剂（ＲＵ４８６）。４．地塞米松组：腹腔注射地塞米松（７ｍｇ／ｋｇ／ｄ）。５．地塞米松＋ＲＵ４８６组：地塞米松和ＲＵ４８６同时给药。各实验组家兔４周后处死,用ＲＴ－ＰＣＲ的方法检测髂动脉ＶＳＭＣＡＴ１的基因表达。透射电镜观察ＶＳＭＣ的超微结构。结果表明内皮细胞损伤和地塞米松可使ＶＳＭＣ的ＡＴ１ｍＲＮＡ的表达上调（Ｐ＜０．０１）,糖皮质激素受体阻断剂米非司酮（ＲＵ４８６）可阻断这种表达的上调。内皮细胞损伤和地塞米松还能使ＶＳＭＣ内粗面内质网增多,肌丝减少,促进ＶＳＭＣ向合成型转化。所以,内皮细胞损伤和地塞米松等应激因素可通过激活糖皮质激素受体,诱导ＡＴ１的基因表达,促进ＶＳＭＣ增殖,这个过程与动脉粥样硬化的发生有关。     

重组质粒pGEX—6P—1／Sj—FABPc的构建及在大肠杆菌中的表达

目的 构建基因工程菌株、获得重组蛋白Ｓｊ－ＦＡＢＰｃ（日本血吸虫脂肪酸结合蛋白）。方法 用ＰＣＲ法从日本血吸虫ｃＤＮＡ文库中扩增Ｓｊ－ＦＡＢＰｃ基因片段，再将该片段重组于ｐＧＥＭ－Ｔ中并进行ＤＮＡ测序鉴定，经酶切后将目的片段构建成重组质粒ｐＧＥＸ－６Ｐ－１／Ｓｊ－ＦＡＢＰｃ，转化于大肠杆菌ＢＬ２１，ＩＰＴＧ诱导表达。用Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ＾ＴＭ ４Ｂ亲和层析柱对表达产物进行纯     

缺氧及一氧化碳对大鼠血管平滑肌细胞的作用

目的 探讨缺氧及低浓度一氧化碳（ＣＯ）对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的作用机制。方法 应用改良的Ｌｏｗｒｙ法测ＶＳＭＣ蛋白质含量,Ｆｕｒａ－２荧光指标剂测ＶＳＭＣ内的钙浓度（〔Ｃａ＾２＋〕）,放射免疫环腺苷酸（ｃＡＭＰ）、环一磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）药盒测ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ浓度。结果 （１）缺氧组ＶＳＭＣ内质网扩张,胞浆内出现髓鞘样结构,线粒体肿胀、空泡化。低浓度ＣＯ复合缺氧组ＶＳＭＣ的损害减轻,仅     

槲皮素对肺动脉平滑肌细胞酪氨酸磷酸化蛋白表达及大鼠低氧性肺动脉高压的影响

肺血管构型重建是慢性缺氧性肺动脉高压的病理学基础,主要表现为中膜平滑肌细胞增殖及迁移,而平滑肌细胞的增殖依赖于多种生长因子的作用,尤其是血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）。我们通过酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）抑制剂槲皮素（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）来观察ＰＤＧＦ诱导的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）酪氨酸磷酸化蛋白的表达及其对大鼠低氧性肺动脉高压的影响。材料与方法　（１）材料：ＰＤＧＦＢＢ,Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ,抗磷酸化酪氨酸（均购自美国Ｓｉｇｍａ公司）,ＡＳＭ６８Ｋ图象分析仪（德国Ｌｅｉｔｅ公司）;流式细胞仪…     

HBsAg在不同真核表达载体中的表达

目的建立ＨＢｓＡｇ及其变异体的高效真核表达系统。方法从已构建的ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ＋－ＨＢｓ系列突变重组体获取ＨＢＶ－Ｓ基因片段,将其亚克隆到真核表达载体ｐＭＥＰ４,ｐＣＥＰ４,ｐＬＸＳＮ,ＰＸＴ１及ｐｃＤＮＡ３,从而构建了含ＨＢＶ－Ｓ基因及其突变型的一系列表达载体,并将其转染（或感染）人肝癌细胞系ＨｅｐＧｅ２。结果获得稳定分泌ＨＢｓＡｇＲ其突变体的抗性细胞系。结论各组真核表达载体皆能表达ＨＢｓＡｇ及其突变体,但在转染率、表达量及稳定性上存在差异。选择其中的高效、准确表达系统,将为ＨＢｓＡｇ变异株生物学性状的深入研究及进一步基因治疗、基因免疫的研究提供有用的工具。     

反义c—myc寡核苷酸对AVP诱导鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：探讨ＡＶＰ对鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响和反义ｃ－ｍｙｃ寡核苷酸对ＡＶＰ作用的干预效应。方法：以培养ＳＤ大鼠ＶＳＭＣ为模型,采用培养细胞计数,蛋白质定量和细胞周期分析方法及ｍＲＮＡ打点杂交技术,动蛋白质定量和细胞周期分析方法及ｍＲＮＡ打点杂交技术,动态观察ＡＶＰ对ＶＳＭＣ增殖的影响和反义ｃ－ｍｙｃ寡核苷酸的干预效果。结果：（１）ＡＶＰ促ＶＳＭＣ数目增加,在４８ｈ时与对照组比较,有统     

GT1细胞株在研究GnRH释放机理中的应用

ＧＴ１细胞株是同时表达促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ）基因和致癌的ＳＶ４０抗原基因的细胞株,具有高度分化的神经内分泌细胞的特性。在ｃＡＭＰ／ＰＫＡ、ｃＧＭＰ／ＰＫＧ、Ｃａ＾２＋／ＰＫＣ等信号传导通路的调控下,能脉冲式同步释放ＧｎＲＨ。同时一些神经递质、激素通过各自的受体或功能性受体,直接调控ＧＴ１细胞释放ＧｎＲＨ。由于ＧｎＲＨ神经元在脑内含量少且弥散分布,给离本研究带来困难,而ＧＴ１细胞作为替代研究     

单纯疱疹病毒Ⅱ型感染极早期对离体人动脉平滑肌细胞原癌基因c-sis及c-myc表达的影响

目的：观察单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－２）感染极早期对离体人动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）原癌基因ｃ－ｓｉｓ及ｃ－ｍｙｃ表达的影响。方法：采用不同感染剂量的ＨＳＶ－２吸附单层ｈＡＳＭＣ１小时作为病毒感染细胞模型,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法观察上述原癌基因表达。结果：病毒吸附细胞后０分钟、３０分钟、６０分钟,病毒感染组［５感染复数（ＭＯＩ）和１０ＭＯＩ;ＭＯＩ＝空斑形成单位／细胞数（ＰＦＵ／细胞数）］均比对照组的原癌基因ｃ－ｓｉｓ、ｃ－ｍｙｃ表达增加,且基因表达与感染时间也有关。结论：ＨＳＶ－２感染可以诱导ｈＡＳＭＣ原癌基因ｃ－ｓｉｓ、ｃ－ｍｙｃ表达增加,该作用可能是病毒促进ｈＡＳＭＣ异常增殖进而参与动脉粥样硬化或血管成形术后再狭窄形成的分子机制之一。     

精氨酸加压素促血管平滑肌细胞增殖效应及其对IL—6分泌的…

我们以培养的ＳＤ大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）为模型，动态观察了精氨酸加压素（ＡＶＰ）对ＶＳＭＣｓ增殖作用和白细胞介素－６（ＩＬ－６）分泌功能的影响，亦对ＩＬ－６与ＶＳＭＣｓ增殖效应的关系进行了研究，旨在探讨ＡＶＰ和ＩＬ－６在高血压发病中的意义。结果表明：（１）ＡＶＰ对培养大鼠ＶＳＭＣｓ具有明显保增殖效应，随剂量增加和时间延长其作用加强；（２）ＶＳＭＣｓ可自身分泌ＩＬ－６ＡＶＰ对其分泌有明显的抑     

反义乙肝病毒S基因真核载体构建及体外抗乙肝病毒作用

目的：探讨反义ＲＮＡ抗乙肝病毒（ＨＢＶ）作用。方法：构建了正，反义ＨＢＶＳ基因重组ＥＢ病毒载体ｐＭＥＰ４ｓ，ｐＭＥＰ４Ｓａｓ，ＤＮＡ－磷酸钙共沉淀法将重组载体ＤＮＡ转染２．２．１５细胞，潮霉素筛选１个月得到抗性细胞克隆，ＥＬＩＳＡ，斑点杂交法分别检测抗性细胞上清ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇＨＢＶＤＮＡ水平，结果：转染后１，２月，反义载体ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ的抑制率分别达７５％，５１．６％，７０％，４６     

红细胞抗高血压因子和川芎嗪对大鼠血管平滑肌cGMP含量的影响

观察红细胞抗高血压因子（ＡＨＦ）和中药川芎嗪（ＴＭＰ）对血管平滑肌细胞环一磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）产生的影响。方法实验用８～１０周的Ｗｉｓｔａｒ大鼠（ｎ＝６）。分离主动脉（Ａ）及肠系膜动脉（ＭＡ），其中Ａ一半去内皮，另一半保留内皮完整，将肌条分别制备成匀浆，用放射免疫分析法测定ｃＧＭＰ含量。结果ＡＨＦ（１０－５ｇ／ｍｌ）和ＴＭＰ（１０－４ｍｏｌ／Ｌ）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）ｃＧＭＰ生成有显著刺激作用。在ＡＨＦ作用下，Ａ组有、无内皮组和ＭＡ组ｃＧＭＰ含量分别是对照组的１．２５倍，１．２６倍和１．７２倍；在ＴＭＰ作用下的实验组ｃＧＭＰ含量分别为对照组的１．６０倍，１．５０倍和１．５２倍，与对照组比较差异均有显著性（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．００１）。结论ＡＨＦ和ＴＭＰ均能升高Ａ和ＭＡｃＧＭＰ水平，且ＡＨＦ对阻力血管的影响明显高于容量血管，而ＴＭＰ对两种血管的ｃＧＭＰ水平影响无明显差异，ＡＨＦ与ＴＭＰ对血管ｃＧＭＰ的增高作用似乎与内皮无关。     

单个核细胞趋化蛋白—1和马兜铃酸Ⅰ在诱导人类肾小管 …

目的 探讨单个核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）和马兜铃酸Ⅰ（ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉｃ ａｃｉｄⅠ,ＡＡⅠ）及其两者的协同作用,对人类肾小管上皮细胞（ＨＫＣ）转分化的影响。方法 应用间接免疫荧光法测定ＨＫＣ细胞皮形蛋白（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）、α－平滑肌肌动蛋白（α－ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ａｃｔｉｎ,α－ＳＭＡ）及角蛋白（ｃｙｔｏｃｒｅａｔｉｎ）的表达;应用流式细胞技术测定表达α－ＳＭＡ＾（＋）Ｈ