改良钛支架人工角膜生物相容性的实验研究

目的 探讨改良钛支架人工角膜的生物相容性和角膜生物愈合的过程.方法 实验研究.设计与制备改良钛支架人工角膜,钛支架采用喷砂、羟基磷灰石涂层处理,镜柱用聚甲基丙烯酸甲酯为原料按设计好的图纸手工磨制.将18只正常新西兰白兔采用单纯随机抽样方法分为A、B、C组,每组6只.18只新西兰白兔角膜碱烧伤模型采用单纯随机抽样方法分为E、F、G组,每组6只.其中A、E组和B、F组兔右眼角膜基质层内分别植入改良支架和对照支架(无涂层),C、G组仅做角膜板层切口;另取4只(分别为2只正常动物模型、2只碱烧伤模型)即D、H组分别作为空白对照;术后1、3个月取材,取出支架做拉出实验和扫描电镜检查;角膜组织行苏木素-伊红(HE)染色、透射电镜检查.另取8只兔(其中2只碱烧伤模型)植入改良支架,3个月后植入镜柱.两组剪切力比较采用t检验.结果 改良后的人工角膜支架表面呈鳞片状微孔结构,植入兔角膜反应轻,术后1、3个月取材,组织学检查见A、E组支架与角膜界面处成纤维细胞数多于B、F组支架.3个月时拉出试验测定剪切力A与B组比较、E与F组比较差异均有统计学意义(t=3.297,P<0.05;t=4.237,P<0.05),改良支架植入角膜3个月后的剪切力较对照支架强.扫描电镜检查显示A、E组支架表面被细胞外基质包裹,而B、F组支架细胞附着量明显少.透射电镜检查显示支架周围的胶原纤维束紊乱,A、E组支架与角膜的结合方式垂直或成一定角度,结合更牢固.支架植入后碱烧伤模型组角膜基质较正常兔角膜组愈合延迟.结论 改良钛支架人工角膜促进了材料与组织界面愈合,无论正常还是碱烧伤动物体内,改良钛支架人工角膜提高了材料的生物相容性.     

羟基磷灰石人工角膜支架生物相容性的实验研究

目的 探讨天然珊瑚羟基磷灰石(HA)及仿HA生物陶瓷与角膜的生物相容性及愈合特性,以评价其作为人工角膜支架材料的可行性。方法 分别将天然珊瑚HA支架与相同规格的仿HA生物陶瓷支架植入碱烧伤后兔角膜板层,于不同时间裂隙灯观察并进行组织病理学检查。结果 天然珊瑚HA组：6例植入物,均获得了良好的稳定性及安全性,观察期最长已达17个月,组织病理学检查亦证实其与角膜组织具有良好的生物相容性且不影响角膜组织的营养和代谢。仿HA生物陶瓷组：6例植入物在2个月内全部脱m,前板层角膜溶解、坏死。结论 天然珊瑚HA与角膜组织具有良好的生物相容性,能与受体角膜生物愈合,可用作人工角膜支架。     

人工角膜支架及其生物相容性的研究进展

除了传统的穿透性角膜移植术和角膜内皮植入术外,人工角膜植入术是一种严重性角膜疾病终末期光学增视性选择性治疗方法.人工角膜最常见的结构是柱镜-裙带型,即由中央透明光学柱镜和周围裙边支架两部分组成.支架材料良好的生物相容性是人工角膜植入成功的关键.随着高分子材料科学的发展,支架材料的种类愈加丰富,对生物相容性的要求也愈加提高.目前常见的人工角膜主要以无机、有机或/和生物材料作为支架,不同材料在实际应用中的相容性和优劣性有所差异,了解这些特性有助于提高人工角膜植入的成功率.     

兔角膜缘上皮细胞培养后自体移植修复

目的：运用培养角膜缘上皮细胞联合人羊膜行自体移植的方法，观察植片修复兔眼角膜上皮的疗效。方法：选用健康新西兰白兔20只，制成右眼角膜缘干细胞缺乏的兔眼模型，其中12只兔行角膜缘上皮细胞培养联合羊膜自体移植，另外8只兔只进行单纯羊膜移植。术后每周对眼表情况进行评分，术后1mo眼角膜进行苏木素-伊红(HE)染色和透射电镜观察。结果：移植了含有自体角膜上皮细胞的兔眼，术后早期都形成了角膜上皮化并明显抑制了新生血管的再生，HE染色和电镜观察表明培养并移植的角膜上皮与正常的角膜上皮无明显差异；而只接受羊膜移植的兔眼，术后又出现角膜混浊和明显的新生血管，表明角膜表面被结膜上皮覆盖。结论：该方法术后早期可以恢复角膜上皮化，重建正常眼表，疗效明显优于单纯羊膜移植。     

生物玻璃陶瓷的生物相容性及其与角膜生物愈合特性的研究

目的：研究生物玻璃陶瓷（Bioglass Ceramic,BGC)在角膜中的生物相容性及其与角膜的生物愈合特性,寻找人工角膜支架材料。方法：将孔径20－70μm,孔隙率37－62％,厚度0.5mm,前后曲率半径7.8mm,直径6mm的BGC分别植入11只新西兰白兔角膜板层中。裂隙灯观察并照相,不同时间取材进行光镜检查。结果：最长观察8个月,5只实验2兔的植入物脱出,其中3只碎裂。术后第2,3周角膜新生血管增生明显。术后2个月,出现角膜浅层轻度混浊。光镜检查见植床内少量大小不一的灰色BGC团块,其间混杂红杂物质,周围角膜见大量增生成纤维细胞成同心圆样排列。结论：BGC植入角膜后有较高的脱出率,孔隙率5为1％,62T的BGC强度不够,植入后碎裂。BGC植入影响了角膜代谢,导致角膜前板层混浊。目前的切片技术与设备,较难获得良好的切片效果,难以评价BGC在角膜板层中的生物愈合特性。BGC目前的参数不适宜用于人工角膜的支架材料。     

组织工程角膜支架材料再生丝素膜的生物相容性

目的:研究再生丝素膜作为组织工程角膜支架材料的可行性。方法:制备再生丝素膜,测定其接触角与透光率;在材料上接种兔角膜上皮细胞,观察细胞生长情况,MTT法测定6h贴壁率;将膜材料植入兔角膜基质层间,观察材料的透明性、可降解性及生物反应性。结果:再生丝素膜材料接触角为58.2度;492nm波长透光率为93.0%,570nm波长透光率为94.4%;细胞在材料表面贴附良好,6h贴壁率为31.6%,经统计学比较优于普通培养板;4wk时材料开始变得不透明,从角膜缘长入新生血管,8wk时新生血管达到高峰,12wk时材料部分降解,至16wk材料大部分降解,新生血管显著减少。结论:再生丝素膜具有较好的生物相容性。     

猪脱细胞角膜基质组织结构特点与生物相容性研究

背景构建组织工程化角膜时,载体的选择十分重要。目前有多种载体可供选用,但脱细胞角膜基质是公认的较好载体。目的观察猪脱细胞角膜基质的组织结构特点,评价其与异种角膜基质和上皮细胞的生物相容性。方法取猪角膜组织进行组织块培养,经胰蛋白酶-EDTA酶消化角膜上皮、基质、内皮细胞,支架组织于-20℃冷冻干燥后灭菌保存。猪脱细胞角膜基质石蜡切片行常规苏木精一伊红染色,光学显微镜下观察组织的形态学特征;扫描电镜下观察其组织结构特点;并对其物理特性,如抗拉性、膨胀性、含水量和透明度进行评价。将猪脱细胞角膜基质移植到兔角膜基质层内,同时与体外培养的兔角膜上皮细胞共培养4周,分析其组织和细胞生物相容性。结果经酶消化处理后猪角膜组织中未见上皮、基质和内皮细胞,其胶原纤维直径大小、排列与正常角膜组织相同,抗拉性、膨胀性、含水量和透明度等物理特性与正常猪角膜相似。猪脱细胞角膜基质行异种兔角膜基质层间移植1周时可见轻度水肿,2周后水肿基本消退,4周时透明度较好。猪脱细胞角膜基质与兔角膜基质之间贴附良好,未见炎症反应及新生血管。兔角膜上皮细胞接种于猪脱细胞角膜基质上共培养4周后CK3表达阳性。猪脱细胞角膜基质脱水前与脱水2h、4h后及正常猪角膜基质间的抗拉性、膨胀性、含水量的差异均无统计学意义（P〉0．05）,但脱水2h、4h后及正常猪角膜基质的透明度明显好于脱水前,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论猪脱细胞角膜基质组织结构与正常猪角膜相似,与兔角膜基质和上皮细胞具有良好的生物相容性。     

脱细胞角膜基质为支架构建组织工程角膜上皮组织的实验研究

目的 比较氯化钠(NaCl)-十二烷基硫酸钠(SDS)-胰蛋白酶与分散酶(Dispase)-聚乙二醇辛基苯基醚(Triton-X-100)两种角膜组织脱细胞方法的效果,探讨以脱细胞角膜基质为支架构建组织工程化角膜上皮组织的可行性.方法 实验研究.采用完全随机化设计的方法,分别用NaCl-SDS-胰蛋白酶和Dispase-Triton-X-100处理兔角膜组织,使用裂隙灯显微镜、光学显微镜及透射电镜观察经两种方法处理后的角膜基质特性和脱细胞效果.以兔角膜缘上皮细胞为种子细胞,Dispase-Triton-X-100处理的猪角膜前弹力层与基质为支架,体外重建兔角膜上皮细胞层,并进行形态学、组织病理学及免疫组织化学检测.结果 两种方法处理过的兔角膜基质大体形态相似,灰白色不透明,水肿明显,质地柔软.组织病理学和超微形态学观察显示两种方法处理的兔角膜基质胶原排列规整,NaCl-SDS-胰蛋白酶处理的角膜组织残留了部分基质细胞碎片,而Dispase-Triton-X-100处理的角膜组织未见基质细胞碎片.兔角膜缘上皮组织块接种于脱细胞猪角膜前弹力层与基质上,24 h角膜上皮细胞开始游出,3～4 d融合呈片状,7～8 d形成单细胞层.组织工程化角膜上皮细胞表达CK3.结论 Dispase-Triton-X-100处理方法的角膜组织脱细胞效果良好.以脱细胞猪角膜前弹力层与基质为支架.可在体外构建组织工程化兔角膜上皮组织.     

不同壳聚糖膜片兔眼前房生物相容性的实验研究

目的观察不同壳聚糖膜片在兔眼前房的相容性,评价其用作角膜内皮细胞移植载体的可行性。设计实验研究。研究对象新西兰大白兔33只。方法33只兔中30只随机分为三组,分别将脱乙酰度为63％（A组）、74％（B组）、95％（C组）的壳聚糖生物膜植入到兔的左眼前房内,右眼不做操作作为空白组;另3只兔左眼仅做前房穿刺作为对照组。使用裂隙灯显微镜观察并记录植入后3、5、7、10、14天各组兔眼前房反应。1、2,4、8周测量角膜厚度。2、4周行术眼角膜内皮镜观察。1、3个月时病理切片,苏木精一伊红染色,观察术眼的炎症反应情况。主要指标角膜厚度、内皮细胞密度、六角形细胞率、平均细胞大小。结果术后1周内,三组兔眼均出现不同程度的角膜水肿、前房渗出、虹膜充血;术后第2周,A、B组出现前房积脓、虹膜新生血管,且膜片透明度下降,至术后2个月前房积脓、虹膜新生血管基本消失。C组第2周后未出现前房积脓及虹膜新生血管,且膜透明性好。角膜测厚显示,仅术后2周时c组角膜厚度较A、B两组的角膜厚度薄（F=13．425,P=0．000）,其余时间点均未见角膜厚度的差异。术后2周各膜片组术眼内皮细胞密度、六角形细胞率和细胞大小与空白组正常兔眼问均无显著性差异（P均〉0．05）;术后1个月,A、B组HE染色示膜片周围大量炎性细胞聚集,术后3个月形成炎性肉芽肿,膜片被包裹。C组术后1个月,膜片周围未发现炎症细胞的包绕,只在膜片与角膜或虹膜组织接触点上有少量的炎性细胞,3个月后膜片周围无炎症反映。结论脱乙酰度为95％的壳聚糖生物膜较脱乙酰度63％、74％者具有更好的前房生物相容性。     

猪角膜脱细胞基质的制备及生物相容性的实验研究

目的探讨猪角膜脱细胞基质（CACM）的制备方法，评价其组织学特性和生物相容性。方法应用1％TritonX-100去垢剂振洗，经冷冻干燥处理得到猪CACM，通过苏木精-伊红染色、扫描电镜观察行组织学检测。将猪CACM植入兔角膜板层间观察10周，取材做组织切片，评价其生物组织相容性。结果组织学检测证实角膜细胞完全脱净，胶原纤维排列疏松，板层结构同正常角膜；扫描电镜CACM表面未见细胞结构，纵切面上胶原板层间出现清晰的空穴状裂隙；CACM植入兔角膜层间后，观察期内未见明显排异反应。结论TdtonX．100可以有效地脱净角膜细胞，保存胶原排列的结构特征，经过冷冻干燥可形成多孔隙且胶原排列疏松的板层结构，适合作为载体材料，猪CACM与兔角膜生物相容性好。     

两种软性聚甲基丙烯酸羟乙酯一体式人工角膜植入碱烧伤兔角膜的研究

目的 评估两种软性聚甲基丙烯酸羟乙酯(PHEMA)一体式人工角膜(Ⅰ型和Ⅱ型)植入碱烧伤角膜后的临床结果.方法 实验研究.将12枚两种人工角膜植入(各6枚)碱烧伤后的兔角膜,进行裂隙灯、眼底照相、B超及超声生物显微镜(UBM)检查.结果 所有植入物均稳定存留于角膜内,实验观察最长达72周.所有的人工角膜位置无移位,无结膜瓣裂开,无漏水,无感染,指测眼压正常,B超显示后节情况正常,UBM显示大部分动物出现虹膜粘连(10只眼),眼底照相无视网膜脱离.Ⅰ型有3只眼发生后增殖物;Ⅱ型无后增殖物发生.每一例人工角膜表面可见增生的结膜覆盖光学区域.结论 新型的PHEMA一体式人工角膜没有界面问题,手术一次植入,其中Ⅰ型无需摘除晶体和玻璃体切除,Ⅱ型光学区后突出部分可能会降低后增殖膜的发生,并且采用的软性水凝胶材料使眼压测量成为可能,其长期效果需要进一步观察.     

羟基磷灰石表面改性人工角膜支架植入兔角膜后基质金属蛋白酶-2及胶原纤维的表达

目的 探讨经羟基磷灰石(HA)表面改性的三襻式人工角膜钛支架植入兔角膜板层后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及胶原纤维的表达,评价其生物相容性.方法 实验研究.24只新西兰白兔采用单纯随机抽样方法随机分为3个组,HA-Ti支架组(9只)及Ti支架组(9只)分别于右眼角膜板层植入HA表面改性后的三襻式人工角膜钛支架(HA-Ti)及人工角膜钛支架(Ti),6只仅制备囊袋不植入支架作为对照组.观察人工角膜支架的生物相容性及新生血管生长情况,并分别于术后2周、4周、16周取材,角膜组织行苏木素-伊红染色、并用免疫组织化学方法检测各组角膜基质中MMP-2的表达并进行半定量分析;用苦味酸天狼猩红苏木素染色的方法观察支架植入后对胶原的影响.多组间比较应用单因素方差分析,组间两两比较应用SNK-q检验.结果 观察期间Ti-HA支架组及Ti支架组均未见角膜感染、溶解、支架排出.早期实验组角膜有水肿及新生血管长入,HA-Ti支架组新生血管明显多于Ti支架组.组织学观察术后2周,植入HA-Ti支架组角膜基质内2周可见少量炎性细胞(中性粒细胞及噬酸细胞为主),此后逐渐减少.支架周围2周时可看到较多成纤维细胞,16周时成纤维细胞减少,粉染的胶原纤维增多.术后2周,HA-Ti支架组、Ti支架组及对照组MMP-2阳性细胞IOD值分别为103.729±15.112、84.439±13.699、69.310±13.078,组间比较差异有统计学意义(F =6.083,P＜0.05),但Ti支架组和对照组差异无统计学意义(F=3.209,P＞0.05);4周时3个组MMP-2阳性细胞IOD值逐渐降低,分别为88.963±9.017、53.005±4.605、49.326±4.443,组间比较差异有统计学意义(F=47.074,P＜0.01);16周时3个组MMP-2阳性细胞IOD值分别为72.176±12.815、50.014±8.813、46.734±11.670,组间比较差异有统计学意义(F=6.079,P＜0.05).偏光镜下观察见角膜组织内4周有大量绿色的Ⅲ型胶原纤维及黄红色Ⅰ型胶原纤维,16周时角膜内主要为鲜红色的Ⅰ型胶原纤维,仍有少量的Ⅲ型胶原纤维.结论 兔角膜植入HA-Ti支架引起MMP-2活化,持续高表达并未造成对角膜的溶解;其影响周围角膜细胞外基质中Ⅲ型胶原纤维向Ⅰ型胶原纤维的转化,利于支架稳定,HA-Ti支架具有较好的生物相容性.     

甲基丙烯酸改性甲基丙烯酸β羟乙酯水凝胶义眼台的实验研究

目的研究兔眶内植入甲基丙烯酸(MMA)改性甲基丙烯酸β羟乙酯(PHEMA)水凝胶义眼台的生物相容性和纤维血管化情况,为其临床应用奠定实验基础。方法将直径为14 mm的MMA改性PHEMA水凝胶义眼台分别手术植入32只兔眼眶内,分别于术后2、4、8、12及24周做单光子发射型计算机体层摄影术(SPECT)检查,并在不同时间点(2、4、8、12及24周)取出植入物进行光镜、免疫组化(Actin、Vimentin、CD34)及电镜观察。结果 SPECT检查改性PHEMA植入物在在体情况下随时间延长,同位素示踪剂在局部逐渐浓集。光镜、免疫组化、电镜检查结果显示2周时纤维血管组织从植入物外周长入,4～8周孔隙内胶原纤维逐渐致密,至12周全部纤维血管化。32例中仅1例术后出现结膜裂开、义眼台暴露,经二次手术修补愈后好。结论经改性的PHEMA水凝胶义眼台组织相容性好、血管化快,手术操作简单,并发症少,是一种安全、实用的新型眶内植入材料。     

人工角膜表面组织增生的临床病理分析

目的 探讨人工角膜植入术后表面组织增生(STP)的临床和病理特点,以及其形成原因和防治方法.方法 回顾性病例研究.选择2000年1月至2009年12月间在解放军总医院接受人工角膜植入手术的患者85例(85只眼),男性72例,女性13例,平均年龄为(45±15)岁.术前诊断包括眼烧伤(56只眼)、自身免疫性干眼终末期(14只眼)、眼爆炸伤(10只眼)和重复移植失败(5只眼),对术后STP进行临床观察和治疗.以正常眼前节标本作为对照,对手术切除的增生膜进行病理和免疫组织化学分析.应用Pearson卡方检验比较不同病因患者人工角膜STP阳性率的差异.结果 22例(26%)患者在二期术后出现STP,发生组织增生的中位数时间为7个月(2～63个月).不同病因患者STP的阳性率依次为眼烧伤34%(19/56)、自身免疫性干眼终末期14%(2/14)、爆炸伤10%(1/10)、重复移植失败患者未见组织增生,各组间比较差异无统计学意义(x2=5.93,P=0.11).22例患者中,11例表现为上皮增生,于裂隙灯显微镜下去除增生的上皮,适当调高镜柱后增生被抑制;4例接受了超高频眼表成形手术;7例由于增生膜较厚,在手术显微镜下进行了切除.组织学上,增生膜由上皮细胞和纤维血管组织组成,伴间质慢性炎症反应.免疫组织化学显示,与正常角膜和结膜相比,增生膜上皮层中增殖细胞核抗原表达增多、增强,间质组织中可见大量波形蛋白表达阳性的成纤维细胞和一些α平滑肌肌动蛋白表达阳性的肌纤维母细胞,基质中散在CD45RO阳性的T淋巴细胞,还可见灶状分布的CDllc阳性的树突状细胞和CD68阳性的巨噬细胞.结论 人工角膜镜柱周围组织增牛会导致人工角膜前膜形成,材料-组织交界处过度的炎症反应以及不适当的镜柱高度是引起组织增生的主要原因.

Abstract：

Objective To investigate the clinical and histopathologic features of the superficial tissue proliferation ( STP) following the implantation of MICOF keratoprosthesis, and to analyze the formation and treatment of STP. Methods Retrospective study. Eighty-five patients ( 85 eyes) received MICOF keratoprosthesis surgery from January 2000 through December 2009 in Genera) Hospital of PLA, which included 72 males and 13 females. The mean age of the patients was (45 ±15) years. Preoperative diagnoses were ocular burn (56 eyes) , end-stage of autoimmune dry eye ( 14 eyes) , severe ocular trauma (10 eyes) and repeated graft failure (5 eyes). Postoperatively, STPs of Kpro were observed and treated. The membranes anterior to the optical cylinder were removed and investigated by histological and immunohistochemical methods, and anterior segment specimens from normal eyes were taken as control. Results Twenty-two (26% ) patients presented STP during the follow-up, and proliferations occurred ranging from 2 to 63 months (median, 7 months). The incident rates of STP were 34% (19/56 eyes) in burned eyes,14% (2/14 eyes)in end-stage dry eye, 10% (1/10 eyes)in severe mechanical ocular trauma, and none in repeated grafts failure. Difference among four groups did not arrive significance statistically (x2 =5. 93, P = 0. 11). The epithelial proliferations were observed in 11 patients, which were removed easily. To prevent from recurrence, the height of the cylinder was adjusted. Other 4 patients underwent ultra-high frequency ocular surface plastic operation and 7 patients received membranectomy. Histologically, the superficial proliferative membrane was composed of proliferative epithelium and fibrovascular tissue incorporating inflammatory cells. The immunohistochemical staining demonstrated the expression of PCNA increased in the epithelium, compared with control cornea and conjunctiva. Many vimentin-positive fibroblasts and a few α-SMA-positive myofibroblasts presented in the interstitial tissue, and the numbers of CD45RO-positive T cells, CD11c-positive dendritic cells, and CD68-positive macrophages were increased in proliferative membranes. Conclusions The tissue proliferation around optical cylinder results in membrane formation anterior to the Kpro. The excessive inflammation at the prosthesis-corneal junction and the unsuited height of the optical cylinder might have been the main reasons of STP.     

兔眼角膜去端肽猪皮Ⅰ型胶原膜移植的研究

目的 探讨去端肽猪皮I型胶原行板层角膜移植术后的角膜愈合情况,及其作为角膜移植替代物的可行性.方法 实验研究.选用中国白兔100只,其中80只兔根据角膜植片来源不同随机分为胶原材料实验组(A组)及同种异体对照组(B组),两组均行单眼前板层角膜移植术.各组根据不同处死时间,随机分为3 d、14 d、1个月、3个月和6个月亚组,每组8只.余20只兔(40只眼)作为B组角膜移植供体来源.术后行大体、裂隙灯观察角膜愈合情况并记录角膜透明度与角膜新生血管(CNV)评分情况,HE染色组织学观察以及上皮细胞标志蛋白K3的免疫组化检测.结果 采用Friedman秩和检验行组内比较,两两之间比较行Wilcoxon符号秩和检验.结果 两组术后角膜透明度逐渐升高(A组:x2=31.250,P=0.000;B组:x2=32.566,P=0.000),1、3及6个月两组角膜透明度评分(A组:2.50、1.94、1.94;B组:2.88、2.25、1.63)比较差异无统计学意义(Z=-1.414,0.000,-0.743;P=0.157,1.000,0.458).术后7 d两组均有CNV长入,A组CNV评分逐渐增高,14 d最高,术后1个月变化不明显,后逐渐减轻(x2=20.727,P=0.001);B组CNV评分逐渐增高,14 d达高峰,后逐渐减轻(x2=25.562,P=0.000);术后6个月两组CNV比较差异有统计学意义(Z=-2.070,P=0.038).组织学观察A组术后1个月胶原材料几乎完全降解,胶原排列趋于规则,术后6个月胶原排列基本规则,但两组局部均有不同程度胶原紊乱区.结论 去端肽猪皮I型胶原可促进角膜上皮细胞与基质细胞重建,但完全取代同种异体角膜植片还需进一步研究.

Abstract：

Objective To investigate corneal wound healing in rabbit after lamellar keratoplasty with porcine type I atelocollagen. Methods One hundred Chinese white rabbits, 80 rabbits were randomly divided into collagen materials group (group A) and allograft group (group B) , and group A and B were operated for the lamellar keratoplasty in one eye. Rest 20 rabbits'eyes (40 eyes) were used as the source of allograft for group B. After operation,the rabbits'eyes were observed by naked eyes and slit lamp, and recorded the score of the transparency and neovascularization of the cornea. The rabbits were sacrificed at 3rd, 14th day, the 1st, 3rd, and 6th month (each group eight eyes). The corneas were observed by histopathology, and the epithelial cells marker protein K3 were detected by immunohistochemistry. The results were analyzed by Rank sum test. Results The transparency of the cornea was increased gradually in A and B groups, and reached the peak on the 6th month(group A; x2 =31.250, P=0.000; group B: x2= 32.566, P = 0.000). The difference had not statistics significance in the comparison of the transparency from the 1st to 6th month(Z= -1.414, 0.000, -0.743;P=0. 157, 1.000, 0.458). The two groups had corneal neovascularization after 7 days, the intensity of corneal neovascularization in A group increased gradually, reached the peak on day 14, then decreased gradually (x2 = 20.727, P = 0.001); the intensity of corneal neovascularization in B group increased gradually, reached the peak on day 14, and then decreased gradually (x2 =25. 562, P =0. 000). The difference had statistics significance in the comparison of the neovascularzation of the cornea on the 6th month between A and B group(Z=-2.070,P=0.038).Histopathology showed the collagen material nearly disappeared after 1 month of surgery and arrangement of collagen tends to be regular.On the 6th month,arrayed collagen was regular in general,but disordered partly.Conclusions Porcine type I atelocollagen can promote corneal cells regeneration.But it needs more study to be a cornea substitute that can completely replace the corneal allogaft.     

Moroz人工角膜植入术后并发青光眼患者的临床分析

目的 探讨Moroz人工角膜植入术后并发青光眼患者的发病原因及相关诊疗措施.方法 回顾性病例系列研究.2000年4月至2011年6月对90例(90眼)患者行Moroz人工角膜植入术,15例(15只眼)术后并发青光眼.12例(12只眼)术前有青光眼病史,3例(3眼)术后继发青光眼.所有患者术后1～3个月定期随访,详细记录每名患者眼压、最佳矫正视力、手术前后相关病史、药物及治疗方案.结果 Moroz人工角膜可以显著提高患者术后最佳矫正视力.15例(15只眼)并发青光眼的患者中有8例(53.3％)术前诊断为碱烧伤.5例(5只眼)术后行睫状体冷凝控制眼压,最佳矫正视力分别从0.8降至0.2,0.25降至光感,0.3降至0.1,0.2降至眼前手动,0.4降至指数.结论 Moroz人工角膜植入术后青光眼发生率较低,术前碱烧伤可能是其高危因素.诊断需综合患者的眼压、视野和眼底检查结果.可考虑全身及局部降眼压进行治疗.     

视网膜假体的研究进展

视觉通路上的任何疾病都会影响视觉信号的传导,严重者甚至导致不可逆性盲.视网膜假体的研究是指在视网膜的不同部位植入相应的视网膜微电极,由植入物产生电信号或者释放神经递质,刺激并激活视网膜细胞产生神经冲动,从而使盲人或濒于盲的眼重新获得有用或部分有用视力.笔者分别介绍3类视网膜假体的结构组成、作用机制、植入方式、影响因素、优缺点及植入后效果和生物相容性等,以供同道参考.     

物理交联再生丝素膜组织工程角膜的生物相容性研究

背景角膜组织工程生物材料在体内应当具备透明性、一定的机械强度、生物相容性和缓慢降解的特点,丝素膜生物材料具备这些特征。目的研究采用物理交联再生丝素膜构建组织工程角膜的可行性。方法用常规培养法培养人角膜上皮细胞（CECs）,将对数生长期的CECs在用家蚕丝制备的物理交联再生丝素膜上进行培养,分别于培养后24、48、72h在倒置显微镜、扫描电子显微镜下观察CECs的生长状态和形态学,并与细胞培养板培养的人CECs形态进行对照。MTT法每日检测和记录再生丝素膜培养后人CECs的增生情况,流式细胞仪检测再生丝素膜培养人CECs的细胞周期和凋亡率。将再生丝素膜4mm×3mm植入新西兰白兔右眼角膜基质层间,于术后1个月、2个月时裂隙灯下检查眼表,术后2个月摘除兔眼并制备移植眼角膜组织切片行组织病理学检查,观察再生丝素膜材料的降解情况及角膜新生血管（CNV）的生长情况。采用免疫组织化学法检测术后1个月、2个月CD34在移植眼角膜组织中的表达,并与正常眼进行对照。结果在24、48、72h3个时间点,倒置显微镜、扫描电子显微镜下见再生丝素膜培养的人CECs与细胞培养板培养法培养的人CECs形态结构无明显差别。再生丝素膜或细胞培养板培养CECs在1、2、3、4、5、6、7d各个时间点A490值比较,差异无统计学意义（F=0．641,P〉0．05）。再生丝素膜和细胞培养板培养的CECs凋亡率分别为1．8％、2．0％,细胞G2／G1期分别为1．956、1．945。再生丝素膜角膜植入后2个月时,再生丝素膜为排列整齐的胶原组织替代,角膜内新生血管和炎性细胞均少于移植后1个月。角膜免疫组织化学染色检测显示再生丝素膜植入角膜后1个月、2个月CD34表达量均明显低于Ad—VEGF165诱导的阳性对照,而与正常的角膜相比差异无统计学意义（P〉0．05）。术后1个月与术后2个月比较,角膜中CD34阳性率的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论物理交联再生丝素膜构建组织工程角膜可行,再生丝素膜与角膜组织生物相容性良好,再生丝素膜植入兔角膜基质后无明显的炎症反应和新生血管。     

准分子激光角膜原位磨镶术后角膜后表面的高度变化

背景准分子激光角膜原位磨镶术（LASIK）术后发生的角膜扩张是一种严重影响视力的并发症,角膜后表面高度的测量有助于术后早期发现角膜的这种变化。目的探讨近视散光患者在LASIK术后角膜后表面高度变化规律及影响角膜后表面高度变化的因素。方法采用系列病例观察研究设计。对2008年5月至2010年1月在北京同仁医院眼科中心接受LASIK的66例近视散光患者127眼的角膜后表面高度变化进行回顾性分析。分别于术前和术后3个月、6个月及1年用Ocu[yzer眼前节分析系统对术眼角膜后表面高度进行测量及统计分析。结果术前角膜后表面最高点、最低点和角膜顶点的高度值分别为（12．20±3．39）、（-19．02±7．38）和（1．05±3．25）μm;术后3个月时分别为（14．38±3．80）、（-18．55±7．11）和（2．83±4．81）μm;6个月时分别为（13．99±3．38）、（-17．57±6．54）和（2．45±4．61）μm;1年时分别为（14．40±3．85）、（-17．76±6．00）和（2．16±5．00）μm,术后角膜后表面最高点和角膜顶点的高度值较术前均明显增加,差异均有统计学意义（表面最高点：q：6．813、5．594、6．875,均P〈0．001;角膜顶点：q=4．488,P：0．002;q=3．530,P=0．013;q=2．799,P=0．047）;术后不同时间点各项高度值差异均无统计学意义（P〉0．05）。术后1年角膜后表面顶点高度与等效球镜度、切削深度和切削比呈正相关（r=0．295、0．297、0．295,均P=0．001）,与残留基质厚度呈负相关（r=-0．208,P=0．019）。术前非接触眼压计测量值为（14．24±3．33）mmHg（1mmHg=0．133kPa）,术后3个月、6个月、1年分别为（8．42±1．90）、（8．61±1．64）、（8．76±1．64）mmHg,术后各个时间点的眼压值均明显低于术前眼压,差异均有统计学意义（q=29．851、28．317、26．337,均P〈0．001）,而术后各时间点差异无统计学意义（P〉0．05）。Ehlers法校正后术后眼压值与术前眼压值的差异无统计学意义（P〉0．05）。术前眼压值与术后1年角膜后表面顶点高度值呈正相关（r=0．258,P=0．003）。结论LASIK术后早期角膜后表面较术前轻度膨隆,随时间的延长逐渐稳定,屈光度是影响LASIK术后角膜后表面形态的主要因素,手术时应注意保留安全的残留角膜基质厚度并尽量减小切削偏心程度,从而降低术后角膜扩张的风险。     

正常兔角膜生物力学特性和参数的测定

背景 研究证实软体生物组织在受力状态下具有稳定的生物力学特性.对于人的眼球来说,全面研究其生物力学特性较为困难,常常受到仪器设备、跨学科知识及材料获得等多因素的影响.兔是眼科学研究的主要动物模型之一,有关正常兔中央角膜的生物力学特性尚不清楚. 目的 了解兔角膜生物力学特性,获得正常兔角膜中央区的生物力学参数.方法 10只清洁级家兔处死后沿角膜缘分离完整的角膜,按照7 mm×5 mm的模具制备20个长方形角膜组织试件,在常温和空气加湿器加湿以模拟活体组织环境下,用BOSE electroforce3220-AT型生物力学试验机进行拉伸破坏试验、应力-应变试验、应力松弛试验和蠕变试验,得到角膜组织的拉伸破坏曲线、应力-应变关系曲线、应力松弛曲线和蠕变曲线,评估兔角膜组织的生物力学参数.结果 兔角膜的最大强度为(7.7432±0.6099) MPa,经过3次循环加载后,应力-应变曲线逐渐平稳.应力随着时间的延长逐渐衰减,前期衰减较快,随着时间的延长曲线趋于平缓,松弛率为30.33％;而角膜试件的形变随时间的延长而逐渐增大,早期形变较快,后期逐渐变缓,蠕变率为24.33％. 结论 揭示了兔角膜生物力学特性,为以后能否用兔眼模型研究人类眼部疾病提供力学指导.