多药耐药相关蛋白基因在非小细胞肺癌中的表达

探讨多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）基因表达与非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）多药耐药（ＭＤＲ）发生的关系。采用半定量逆转录多聚酶链反应（ＲＴＰＣＲ）和免疫组织化学染色方法，结合体外化疗药敏实验，检测３２例ＮＳＣＬＣ中ＭＲＰ基因表达水平和对９种化疗药物敏感性。结果：ＮＳＣＬＣ中ＭＲＰｍＲＮＡ表达阳性率为７１．９％，癌旁肺组织中为１０％；ＭＲＰ蛋白表达阳性率为６５．６％，在肿瘤细胞胞膜和胞浆内均有表达，癌旁肺组织中未见表达；中～高分化癌中ＭＲＰｍＲＮＡ和蛋白表达明显高于低分化癌（Ｐ＜０．０５）；ＮＳＣＬＣ中ＭＲＰｍＲＮＡ表达和ＭＲＰ蛋白表达呈正相关（ｒ＝０．９７，Ｐ＝０．０００１）。ＮＳＣＬＣ中对长春新碱、足叶乙甙和阿霉素耐药组，其ＭＲＰ蛋白表达率明显高于敏感组（Ｐ＜０．０５）。表明ＭＲＰ基因表达是非小细胞肺癌原发性多药耐药的重要参与因素，它的过度表达通过转录水平和翻译水平调节实现，ＮＳＣＬＣ对长春新碱、足叶乙甙和阿霉素耐药的重要原因是ＭＲＰ蛋白表达，ＭＲＰ基因检测和体外化疗药敏实验对进一步阐明肺癌耐药机理有重要意义     

非小细胞肺癌组织Bcl-2蛋白的表达和多药耐药检测

目的:观察非小细胞肺癌组织(NSCLC)中Bcl-2蛋白的表达及其化疗耐药性.方法:应用MTT法,观测91例未经化疗的NSCLC组织对环磷酰胺、阿霉素、顺铂 氟尿嘧啶3种用药方案的药物敏感性.用免疫组织化学方法检测NSCLC组织中Bcl-2蛋白的表达,并将其表达情况与化疗耐药性进行相关分析.结果:91例中53例(58.2%)对环磷酰胺耐药,51例(56.0%)对阿霉素耐药,42例(46.2%)对顺铂 氟尿嘧啶耐药.其中,19例(20.9%)对3种用药均敏感,27例(29.8%)对3种用药均耐药.91例中Bcl-2蛋白总的阳性表达率为52.7%,其表达与组织学类型和分化程度无关(P＞0.05),但与3种化疗用药方案耐药性均有关(P＜0.05).结论:NSCLC存在固有的化疗耐药性,Bcl-2蛋白参与介导了NSCLC化疗耐药的机制.     

多药耐药基因产物及p53、Bcl-2蛋白在胃癌组织中的表达

目的 探讨多药耐药基因产物P -糖蛋白(P - gp)、谷胱甘肽 -S-转移酶π(GSTπ)及DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、p53、Bcl-2蛋白在胃癌发生、发展和耐药性产生中的作用以及相互间的关系。 方法 应用免疫组化SP法检测胃癌组织中P - gp、GSTπ及TopoⅡ与 p53、Bcl-2蛋白的表达情况。结果 胃癌组织中P - gp在淋巴结转移组和癌组织浸润达浆膜外组的阳性表达率显著高于无淋巴结转移组和浆膜内浸润组的阳性表达率(P<0.05) ;GSTπ及p53蛋白在淋巴结转移组的阳性表达率显著高于无淋巴结转移组的阳性表达率(P<0.05) ;Bcl-2蛋白的阳性表达率为50.0% ,高分化腺癌的阳性表达率显著高于未分化癌的阳性表达率(P<0.05)。胃癌组织中P- gp与 p53、Bcl-2蛋白的表达有正相关性 (r>0.3)。 结论 p53、Bcl-2蛋白参与了胃癌的发生 ;P - gp阳性表达提示胃癌细胞对化疗药物存在原发性耐药 ,同时与癌细胞浸润深度、淋巴结转移有关。有多种耐药机制参与了胃癌耐药性的发生。     

Bcl-2基因在口腔上皮癌多药耐药细胞的表达

[目的]通过检测Bcl-2基因在口腔上皮癌敏感细胞株（KB）与多药耐药细胞株（KBV）的表达差异,探讨Bcl-2基因在口腔上皮癌细胞多药耐药性发生中的作用。[方法]体外培养口腔上皮癌多药耐药株及敏感株,通过RT-PCR法及免疫荧光法检测Bcl-2基因在KB及KBV细胞中转录及翻译水平的差异,通过MTT法及流式细胞检测技术检测KB及KBV细胞对长春新碱（VCR）敏感度的差异。[结果]免疫荧光图像显示Bcl-2蛋白在KB细胞中弱表达,而在KBV细胞中强表达;RT-PCR检测结果显示,KB细胞Bcl-2/β-actin比值是25.0%,KBV组Bcl-2/β-actin比值为36.1%,两组细胞间差异具有统计学意义（P〈0.01）;MTT法检测结果显示KBV组细胞对长春新碱的耐药性为KB组的16.5倍,流式细胞仪检测结果显示KB细胞凋亡率达（98.8±1.2）%;KBV细胞凋亡率达（23.5±2.1）%,两组间差异具有统计学意义（P〈0.01）。[结论]Bcl-2基因与口腔上皮癌耐药性的发生密切相关。     

凋亡抑制基因在人卵巢癌细胞敏感株及耐药株中的表达

目的 探讨凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌细胞敏感株(A2780)及耐药株(AD6)中的表达及其在卵巢癌多药耐药发生中的分子机制.方法 采用DNA电泳、流式细胞技术及半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测不同浓度(3.0、6.0、9.9μg/ml)顺铂诱导的人卵巢癌细胞敏感株A2780及耐药株AD6的细胞凋亡及其Bcl-2和Bcl-XL基因的表达水平.结果 ①DNA凝胶电泳显示,不同浓度的顺铂均能诱导A2780和AD6细胞产生凋亡,呈现典型的凋亡梯度(DNA Ladder).②流式细胞仪分析结果显示,不同顺铂浓度作用下A2780和AD6细胞凋亡率不同,AD6明显低于A2780(P＜0.05).③RT-PCR结果显示,A2780和AD6细胞均表达Bcl-2、Bcl-XL,但在AD6细胞株中2基因的表达明显强于A2780.在6.0μg/ml顺铂作用下A2780和AD6细胞株中2基因表达下调,但仍以在AD6的表达强于A2780.结论 顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡,凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌多药耐药细胞株中高表达,是导致其细胞凋亡受抑制和对药物敏感性降低的重要原因.     

多药耐药相关蛋白MRP在胰腺癌细胞中的表达及意义

目的初步探讨多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-associated protein,MRP）在胰腺癌细胞中的表达情况及意义。方法采用反转录多聚酶链反应（RT-PCR）和免疫细胞化学方法,分别在基因和蛋白水平上检测MRP在8株人胰腺癌细胞株（SW1990、PCT-2、PCT-3、PCT-4、Aspc-1、Capan-1、Mia-PaCa-2及Panc-1）中的表达情况。结果RT-PCR结果显示,MRP存在于所有的胰腺癌细胞株中,平均表达水平为0.44±0.18,在PCT-2细胞中表达水平最低（0.10±0.03）;免疫细胞化学结果证实在SW1990、Capan-1和Mia-PaCa-2三株细胞中MRP蛋白呈弱表达,在PANC-1、ASPC-1、PCT-4和PCT-3细胞中呈较强表达较强,而在PCT-2细胞中呈过度表达。结论MRP在胰腺癌原发性耐药中可能占有重要地位,在某些时候可能不通过提高转录水平而直接提高翻译产物的表达量而发挥其耐药作用。     

阿霉素诱导人卵巢癌细胞耐药株的建立及多药耐药表型测定

[目的]探讨卵巢癌细胞多药耐药的发生机制,寻找克服及逆转卵巢癌多药耐药的方法。[方法]采用阿霉素较大剂量间歇诱导和浓度梯度递增培养法,建立人卵巢癌耐药细胞株（SK—OV-3／adr）。运用MTT法检测药物敏感性和细胞生长规律变化,流式细胞仪检测细胞周期分布,荧光显微镜观察耐药株细胞内药物含量变化。[结果]建立的SK—OV-3／adr对阿霉素、5-氟尿嘧啶、长春新碱、紫杉醇、足叶乙甙有明显的交叉耐药,耐药指数分别为5．6（296．7／53．4ng·mL^-1）、6．3（12008．4／1921．6ng·mL^-1）、4．6（1176．2／254．3ng·mL^-1）、12．5（4269．6／342．0ng·mL^-1）、〉10．9（〉20000／1830．1ng·mL^-1）。与卵巢癌细胞敏感株（SK—OV-3）相比,半数细胞抑制剂量IC50明显增加,差异有统计学意义（P〈0．01）。给予P-糖蛋白抑制剂（盐酸维拉帕米）时,交叉耐药性减弱。与SK—OV-3相比,SK—OV-3／adr细胞内阿霉素荧光强度明显变弱。[结论]建立了具有多药耐药表型的SK—OV-3／adr细胞株。     

多药耐药相关蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达

目的探讨多药耐药基因产物P-糖蛋白（P-gp）、拓扑异构酶（TOPOⅡ）、谷胱甘肽转移酶（GST-π）、肺耐药蛋白（LRP）在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP法,对80例乳腺浸润性导管癌的主要耐药指标P—gp、TOPOⅡ、GST-Ⅱ、LRP进行检测,并分析其与临床病理特征之间的关系。结果P-gp、TOPOⅡ、GST-π、LRP在乳腺浸润性导管癌的阳性表达率分别为40％、55％、65％、80％,P-gp、TOPOⅡ、GST-Ⅱ、LRP在乳腺浸润性导管癌的表达无相关性。结论联合检测LRP、GST-π、TOPOⅡ、LRP对乳癌化疗药物的选择具有指导作用,对预后的判断有参考价值。     

多药耐药相关蛋白-2在乳腺癌组织中的表达及与预后关系

目的:研究多药耐药相关蛋白-2(Multidrug resistance-associated protein2,MRP2)在乳腺癌组织中的表达,评估其在乳腺癌预后中的作用。方法:采用免疫组织化学方法(I mmuno Histo Chemistry,I HC)检测47例手术切除的乳腺癌组织中MRP2的表达,并分析其与临床、病理特征的关系及对预后的影响。结果:MRP2在乳腺癌组织中的阳性表达率为85.1%(40/47),其中高表达者25例(53.2%);MRP2表达与月经状况、肿瘤大小、腋淋巴结转移、组织分级和激素受体状况均无关(P>0.05);Kaplan-Meier生存分析结果表明MRP2表达与无病生存期和总生存期均无关(P>0.05);COX多因素分析显示只有肿瘤大小和腋淋巴结转移和无病生存期和总生存期明显相关(P<0.05)。结论:MRP2在乳腺癌组织中具有一定的表达水平,但与乳腺癌患者预后无关。     

多药耐药相关蛋白在肾母细胞瘤中的表达

目的 :检测多药耐药相关蛋白 (MRP)在肾母细胞瘤中的表达 ,探讨其在肾母细胞瘤术前术后化疗蛋白水平的依据及耐药问题。方法 :采用免疫组织化学方法检测 36例肾母细胞瘤及瘤旁组织MRP的表达。结果 :肾母细胞瘤中阳性表达者 6例 ,占 16 .7% ,瘤旁组织中阳性表达者 2 2例 ,占 6 1.1% ,两者表达差异显著 (P<0 .0 1)。结论 :MRP表达显著差异 ,从蛋白水平上为肾母细胞瘤术前和术后的化疗疗效提供了依据     

多药耐药相关蛋白在人肝细胞癌亚群细胞中的表达及意义

目的检测肝细胞癌异质性亚群细胞对化疗药物的耐药差异,探讨耐药蛋白在肝癌组织中不同亚群细胞的表达意义。方法①通过MTT法分别测定人肝细胞癌异质性亚群细胞在不同浓度、不同化疗药物（ADM、VP-16、DDP）作用下的抑制率,计算每种药物IC50值。②应用流式细胞仪分别检测耐药相关蛋白MDR1、MRP、LRP、GST在两亚群细胞中的表达率。结果①LCSC-1和LCSC-2亚群细胞对阿霉素（ADM）、顺铂（DDP）、鬼臼乙叉苷（VP-16）等药物都产生了耐药性（F=249.651）。三种药物对LCSC-2亚群细胞和LCSC-1亚群细胞抑制率有显著差异（P〈0.01）。②LCSC-1和LCSC-1亚群细胞MDR1、MRP、LRP、GST的表达量分别是：（23.97±0.34）%、（17.03±0.59）%、（24.02±0.63）%、（23.93±0.59）%;（26.59±0.78）%、（19.43±0.60）%、（26.43±1.06）%、（26.24±1.06）%;两亚群比较,t=5.32,P=0.006;t=4.94,P=0.008;t=3.85,P=0.028;t=3.30,P=0.030。两亚群细胞MDR1、MRP、LRP、GST的表达有显著性差异。结论MRP、LRP、GST、MDR1的高表达,可能是人肝癌细胞异质性亚群多耐药产生的部分分子基础,耐药是肝细胞癌干细胞的特征之一。     

逆转录病毒转染法建立兔VX-2多药耐药株

目的：建立VX-2多药耐药(MDR)细胞(VX-2mdrI)。方法：利用逆转录病毒转染法将带有mdrI cDNA全序列的逆转录病毒载体pHaMDR1转入到兔VX-2细胞中，MTT法检测细胞在不同化疗药物作用下的存活率；免疫组化检测细胞的P-糖蛋白(P-gp)表达，RT-PCR检测细胞内mdrI mRNA的表达量．结果：转基因的细胞对吡柔比星、秋水仙素的耐药性分别提高10和25倍，免疫组化见转基因细胞中P-gp表达增加，RT-PCR示细胞内mdrI mRNA的表达量增加。结论：利用逆转录病毒转染法构建了兔VX-2 MDR细胞。     

多药耐药相关蛋白与肿瘤多药耐药性

恶性肿瘤是最常见的恶性疾病 ,已成为人类死亡的主要原因之一。化疗在肿瘤的综合治疗中发挥着重要作用 ,然而 ,由于肿瘤耐药性的产生 ,尤其是多药耐药性的产生 ,使肿瘤患者的治愈率仍很低。多药耐药 (maltidrugrsistance,MDR)是指肿瘤细胞对一种化疗药物产生耐药现象后会对结构、作用靶点和作用机制迥然不同的多种其他抗肿瘤药物产生交叉耐药的一种现象 ,是影响肿瘤化疗效果的重要因素。肿瘤细胞MDR分为内在性 (未接触药物时原已存在的 )和获得性 (接触药物后产生的 )两大类 ,其机制相当复杂 ,比如 :特殊膜糖蛋白的增加而使细胞排出药物…     

多药耐药相关蛋白1在骨肉瘤中的表达

目的　探讨骨肉瘤组织中多药耐药相关蛋白 1(MRP1)的表达及其与临床病理特征的关系。方法　采用免疫组织化学方法检测 6例正常成年骨组织和 4 5例骨肉瘤组织中 MRP1,结合临床病理指标进行分析。结果6例正常骨组织中 MRP1的表达均为阴性。 4 5例骨肉瘤中 MRP1阳性 32例 (71.11% ) ,其中高分化骨肉瘤阳性率2 8.5 7% (2 / 7) ,中、低分化骨肉瘤阳性率 78.95 % (30 / 38) ,两组间差异有显著性 (P<0 .0 5 )。且随着骨肉瘤分化程度的降低 ,MRP1表达率升高 ,MRP1的表达与骨肉瘤的恶性程度呈正相关 (r=0 .84 4 )。根据肿瘤大小、Enneking外科分期、血清碱性磷酸酶 (AL P)含量、患者性别、年龄及就诊前病程长短等分组 ,MRP1表达无统计学意义。结论正常成年骨组织中 MRP1表达阴性。骨肉瘤组织中有 MRP1的表达 ,MRP1的表达与骨肉瘤的恶性程度呈正相关 ,提示 MRP1可能为骨肉瘤原发耐药的重要原因之一。     

人多药耐药基因1在CHO细胞中的表达及功能研究

目的:构建人多药耐药基因(MDR1)的真核表达载体,转染CHO细胞,研究MDR1基因在真核细胞中的表达及功能。方法:将MDR1全长基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),利用阳离子脂质体转染CHO细胞,RT-PCR检测MDR1转染阳性细胞,并用G418筛选稳定表达MDR1基因的细胞,通过测定细胞对Rh123的外排作用以及对阿霉素的耐受性确定MDR1基因在正常细胞中的功能。结果:酶切鉴定和测序结果证明构建的重组表达载体pcDNA-MDR1序列正确。RT-PCR分析以及荧光显微镜观察结果表明:该重组表达载体已在CHO细胞中有效转录并稳定表达。Rh123外排和MTT药敏实验结果显示:转染pcDNA-MDR1的CHO细胞对Rh123外排作用显著高于未转染的CHO细胞,并且转染后的CHO细胞对阿霉素的耐药性也有显著提高。结论:成功构建了稳定表达MDR1并具有多药耐药功能的细胞株,有望成为多药耐药性药物研究的细胞模型。     

两种人骨肉瘤 U2OS 细胞阿霉素耐药株的比较

目的研究不同方式建立的人骨肉瘤 U2OS 细胞阿霉素耐药株的生物学特性及其耐药机制.方法采用大剂量间隙作用、浓度梯度递增间隙作用建立 U2OS 阿霉素耐药株 U2OS/ADM1,U2OS/ADM2,光镜及透射电镜下观察细胞形态变化;MTT 法测定其耐药指数、药物敏感性,绘制生长曲线计算倍增时间;罗丹明外排实验检测 P-糖蛋白(P-gp)泵功能;RT-PCR 检测多药耐药基因1(MDR1)mRNA、多药耐药相关蛋白1(MRP1)mR-NA 的表达.结果 U2OS/ADM1,U2OS/ADM2的耐药指数分别为79.63和91.06,对紫杉醇、顺铂有交叉耐药;细胞倍增时间延长(P <0.01);耐药株细胞线粒体丰富,粗面内质网及游离核糖体增多;细胞内罗丹明蓄积量低于亲本细胞(P <0.01),两种耐药株之间无明显差异(P >0.05);MDR1mRNA,MRP1mRNA 表达均高于亲本细胞(P <0.05),MDR1mRNA 表达两种耐药株间无明显差异(P >0.05),U2OS/ADM1的 MRP1mRNA 表达低于U2OS /ADM2(P <0.05).结论两种耐药株均可产生 MDR,耐药机制可能与 MDR1,MRP1过表达有关;不同建立方式存在一定差异,浓度梯度递增间隙作用方式更容易产生耐药.     

多药耐药相关蛋白-2在白血病耐药细胞株K562/A02的表达

目的:研究多药耐药相关蛋白-2（MRP-2）与白血病细胞耐药的关系,并探讨其在白血病多药耐药中的意义。方法：应用RT-PCR方法检测白血病细胞株K562与耐药细胞株K562/A02中MRP-2 mRNA的差异表达,然后将MRP-2反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染至耐药细胞株K562/A02,采用MTT法、流式细胞术及RT-PCR法检测转染后细胞内阿霉素的荧光强度、耐药指数及MRP-2 mRNA的表达情况。结果：耐药细胞株K562/A02中MRP-2 mRNA表达水平明显高于白血病细胞株K562（P<0.05）。MRP-2反义寡核苷酸片段转染后耐药细胞株K562/A02细胞内的阿霉素浓度升高,耐药指数较未转染细胞明显降低（P<0.05）;转染后耐药细胞株K562/A02细胞MRP-2 mRNA表达水平较未转染细胞下降了67.5%,两者比较差异具有显著性（P<0.05）。结论：MRP-2的高表达导致白血病耐药细胞内化疗药物浓度降低,可能是其导致白血病多药耐药的机制之一。     

多药耐药蛋白在胆汁淤积中的作用研究进展

多药耐药蛋白(multidrug resistance proteins,MRPs)是位于多种极性细胞膜表面介导其底物依赖ATP自细胞内转运至细胞外的一类膜糖蛋白,属于具有ATP结合域的盒式跨膜转运子蛋白超家族(ATP binding cassette,ABC-transporter proteins superfamily)[1].