人舌癌细胞耐药系Tca8113/BLM的建立及其耐药机理的分析

目的 :建立舌癌平阳霉素 (BleomycinA5Hydrochloride ,BLM)耐药细胞系Tca8113/BLM ;研究Tca8113/BLM细胞P 糖蛋白 (P glycoprotein ,P gp)和多药耐药相关蛋白 (MRP)表达变化与其耐药的相关性。方法 :采用大剂量BLM(30 μg/ml)反复间歇 2 4小时暴露法处理舌癌细胞系Tca8113细胞 ;用MTT法检测该耐药细胞模型的多药耐药性 ;激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测P gp、MRP ;并用流式细胞仪检测细胞周期的分布 ,细胞内阿霉素 (ADM)蓄积 ,以及经典钙离子生物泵阻断剂逆转剂黄体酮 (Progesterone,Prog)对ADM蓄积的影响。结果 :①Tca8113/BLM耐药性稳定 ,耐药指数为 12 ,且对其它化疗药物产生交叉耐药性 ;②Tca8113/BLM的倍增时间延长 ,G1期细胞减少 ,G2和S期细胞增多 ;③P gp和MRP在Tca8113/BLM细胞中强阳性表达 ,在Tca8113细胞中弱阳性表达 ,两者相比差异有显著性 (P <0 .0 1) ;④ADM在Tca8113/BLM细胞内蓄积明显低于Tca8113细胞 (P <0 .0 5 ) ;⑤Prog能显著提高Tca8113/BLM细胞内ADM蓄积 ,而对Tca8113细胞内ADM蓄积无明显作用。结论 :建立了舌癌BLM耐药细胞系Tca8113/BLM ,发现Tca8113/BLM的耐药性与P gp和MRP过表达有密切关系     

内皮抑素抑制SKOV3细胞生长及其在裸鼠皮下移植瘤中的作用机制

目的:探讨内皮抑素对卵巢癌SKOV3细胞及其荷瘤鼠卵巢癌组织的生长作用及机制。方法:MTT法观测内皮抑素对体外SKOV3细胞的抑制作用,透射电镜观察细胞凋亡、免疫细胞化学检测SKOV3;细胞中bcl-2和bax蛋白表达;将SKOV3细胞移植至裸鼠皮下,观察内皮抑素对皮下移植瘤生长的影响;TUNEL和电镜法观察肿瘤细胞的凋亡,免疫组织化学和RT-PCR法检测瘤组织中bcl-2和bax的表达。结果:内皮抑素具有体外抑制SKOV3细胞增殖的作用(P<0．01);能诱导SKOV3细胞凋亡,但对bcl-2和bax的表达无明显影响。内皮以抑素能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0．05);其中bcl-2的表达低于对照组,而bax表达无明显改变。结论:内皮抑素具有抑制SKOV3细胞及皮下移植瘤生长的作用,其机制可能与诱发细胞凋亡和调节bcl-2／bax表达相关。     

重组腺病毒介导小鼠内皮抑素对荷骨肉瘤MG-63细胞裸鼠肺转移的抑制

目的: 构建携小鼠内皮抑素(endostatin， ES)基因的重组腺病毒载体，观察其对荷骨肉瘤裸鼠肺转移的抑制，探讨内皮抑素表达水平与骨肉瘤肺转移的关系。方法:构建pDC315mEndo表达质粒，同源重组产生重组腺病毒AdmEndo。裸鼠右前肢皮下注射骨肉瘤MG63细胞建立移植瘤裸鼠模型；随机分为4组：小鼠内皮抑素腺病毒（AdmEndo）组，携带EGFP基因腺病毒（AdEGFP）组， PBS组，未接种肿瘤细胞裸鼠空白对照组。各组裸鼠每周分别注射相应药物200 μl，连续5次，观察各组动物移植瘤体积、瘤组织病理，ELISA法检测各组裸鼠血ES水平；7周后处死动物，观察有无肺转移及肺转移灶病理。结果：AdEGFP组肿瘤体积为（1.53±0.05） cm3,PBS组为（1.56±0.07） cm3, AdmEndo组为（0.91±0 .03） cm3，AdmEndo治疗的抑瘤率达40.7％。AdmEndo组裸鼠血内皮抑素表达水平明显高于AdEGFP组和PBS组（P<0.05）。AdmEndo组裸鼠肺部未发现肿瘤转移灶，其他两组肺部见大量散在转移灶，肺转移率分别为80%和90%。未发生肺转移裸鼠的ES水平显著高于发生肺转移的裸鼠（P<0.05）。结论：腺病毒介导的小鼠内皮抑素显著抑制了荷骨肉瘤裸鼠肺转移，内皮抑素表达水平与肺转移有着直接的关系。     

RGD修饰的腺病毒介导LIF和IL-24双基因共表达对MEG01白血病细胞的抑制作用

目的 利用RGD修饰改造白血病抑制因子（LIF）和白细胞介素 24（IL-24）双基因共表达腺病毒载体,以提高感染效率,探讨其对人白血病MEG01细胞的抑制作用。方法 同源重组法构建RGD修饰的表达LIF、IL 24的腺病毒载体Ad.RGD-LIF、Ad.RGD -IL24和Ad.RGD-LIF-IL24。在QBI-293A细胞中扩增腺病毒,检测病毒滴度。流式细胞仪检测各组腺病毒载体对MEG01细胞的感染效率。应用Western blotting检测目的基因LIF、IL-24在MEG01细胞中的表达。CCK-8法检测各组腺病毒载体Ad.RGD-LIF、Ad.RGD-IL24、Ad.RGD-LIF-IL24感染MEG01细胞后对细胞增殖的影响。PE-AnexinV／7-AAD双染后,经流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。PI染色后,流式细胞仪检测目的基因表达对MEG01细胞周期的影响。实时定量PCR检测细胞周期调控基因p21和E2F1的表达。结果 成功构建了RGD修饰的腺病毒载体Ad.RGD-LIF、Ad.RGD-IL24和Ad.RGD-LIF-IL24。RGD修饰后的腺病毒能够显著增强对MEG01细胞的感染效率。CCK-8检测显示,与PBS组比较,携带单个目的基因的腺病毒载体Ad.RGD-LIF和Ad.RGD-IL24在第5 d对细胞生长的抑制率分别为29.2％和31.5％,均能够显著抑制MEG01细胞的生长;携带Ad.RGD-LIF-IL24双基因组的抑制率达42.5％,优于单基因组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。凋亡检测显示,与PBS组（4.5％）和空病毒组Ad.RGD（7.4％）比较,Ad.RGD-IL24（20.9％）、Ad.RGD LIF（17.8％）均能够显著促进细胞凋亡,且Ad.RGD-LIF-IL24双基因组（29.7％）的促凋亡作用更强。Western blotting显示,LIF和IL-24能够提高促凋亡蛋白p53、Bax的表达,同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达。目的基因LIF、IL-24过表达会影响MEG01细胞周期的进程,使细胞阻滞在G2期。实时定量PCR显示,LIF和IL-24能够上调细胞周期调控基因p21的转录,抑制E2F1的表达。结论LIF和IL-24过表达的腺病毒载体在体外通过调节p53、Bax、Bcl-xl的表达,影响白血病细胞MEG01的生长,诱导其凋亡,并通过调控p21、E2F1的水平影响细胞周期的进程。     

腺相关病毒介导的人内皮抑素基因转染对肝细胞性肝癌生长的抑制作用

目的　研究腺相关病毒介导的人内皮抑素基因转染对肝细胞性肝癌的抑制作用。方法　用含人内皮抑素的腺相关病毒(r AAV2 /EGFP- Endo)转染肝癌细胞Hep3B,通过流式细胞仪检测其转染率。MTT法检测转染细胞的培养液上清对人脐静脉内皮细胞ECV30 4增生的抑制作用。Hep3B细胞接种裸鼠建立移植瘤模型,分别瘤内注射r AAV2 /EGFP- Endo(2×10 1 0 v.g.)、r AAV2 /EGFP或生理盐水,3周后检测裸鼠血液中内皮抑素的表达及移植瘤的体积和微血管密度(MVD)。结果　流式细胞仪结果显示重组腺相关病毒体外对Hep3B细胞的转染率为6 2 .5 % ;转染内皮抑素基因的Hep3B细胞的培养液上清能显著抑制ECV30 4细胞的生长(P<0 .0 1)。移植瘤内注射r AAV2 /EGFP- Endo后,荷瘤裸鼠血清中内皮抑素浓度为(82 .6 4±7.5 4 ) μg/L,移植瘤的体积和微血管密度均明显低于对照组(P<0 .0 1)。结论　腺相关病毒介导的人内皮抑素基因转染能够有效抑制人肝细胞性肝癌的生长。     

腺病毒介导p16基因的表达及其对肺癌细胞的周期阻滞作用

目的:以增殖缺陷型腺病毒载体介导p16基因感染人肺腺癌细胞系,观察并鉴定该基因在细胞中的表达及其对细胞周期和细胞凋亡的影响.方法:采用293细胞内同源重组的方法,制备重组腺病毒Ad5-p16,感染肺腺癌细胞SPC-A1;免疫组化方法鉴定P16蛋白的表达;台盼蓝染色计数活细胞数,绘制细胞生长曲线;流式细胞术(FCM)分析细胞周期及细胞凋亡的变化.结果:以M0I=10的重组增殖缺陷型腺病毒Ad5-p16感染SPC-A1细胞48 h后,P16蛋白表达的阳性细胞比率为71%;以MOI=100感染SPC-A1细胞后第2天,细胞开始出现生长抑制及细胞病变;FCM分析发现细胞在感染腺病毒后出现细胞周期阻滞和细胞凋亡.结论:以腺病毒为载体介导p16基因在SPC-A1细胞内表达,可发挥抑制细胞生长、诱发细胞凋亡的作用.本项基因治疗策略以直接调控细胞周期的抑癌基因为靶向治疗基因,为肺癌基因治疗提供了可靠的理论依据.     

转染 cdc25A-Fas嵌合基因表达载体体外诱发 Tca8113细胞凋亡的研究

背景与目的: Fas/FasL与口腔鳞癌的发生、发展相关.本研究旨在探讨 cdc25A-Fas嵌合基因表达载体诱导舌鳞癌 Tca8113细胞凋亡的作用.方法:用基因工程方法分别构建 pAdTrack-CMV-cdc25A-Fas( pCCF)和 pAdTrack-cdc25A-Fas( pCF)嵌合基因表达载体;脂质体法将 pCCF、 pCF、 pAdTrack-CMV分别转染 Tca8113细胞;报告基因绿色荧光蛋白( GFP)观察转染效率; Northern blot、 RT-PCR、 Western blot、免疫组化技术检测 Fas基因的转录及表达时序; DNA凝胶电泳带型分析( DNA agarose gel electrophoresis)、原位缺口末端标记 (TUNEL)、 Annexin V、流式细胞仪( flow cytometry, FCM)检测 Tca8113细胞凋亡.结果:( 1)嵌合基因表达载体 pCCF、 pCF转 染 Tca8113细胞的转染率为 15%左右,出现在转染后第 5～ 7天.( 2)转染第 3天, pCCF、 pCF组 Fas表达显著上调;第 3、 5、 7天均表达 Fas蛋白, Fas蛋白主要在胞膜和胞浆表达;表达 Fas蛋白的 Tca8113细胞呈现部分凋亡的形态特征. (3)pCCF和 pCF转染 2.5天 (60 h), Tca8113细胞开始出现凋亡,第 3天凋亡率达到最高约 25%,与对照组细胞比较具有显著性差异( P< 0.05), pCCF和 pCF比较无显著性差异( P >0.05). (4)流式细胞仪检测到绿色荧光蛋白表达细胞峰与凋亡细胞峰一致.结论:嵌合基因表达载体 pCCF和 pCF转染口腔鳞癌 Tca8113细胞可诱导细胞凋亡.     

纳米羟基磷灰石溶胶对人舌癌细胞株的作用研究

目的 观察纳米羟基磷灰石溶胶(Hap—sol)对人舌癌细胞株Tca8113生长的影响，并探讨其可能机制。方法 将Hap—sol加入Tca8113细胞培养液，Hoechst 33342荧光染色观察细胞形态；DNA抽提琼脂糖凝胶电泳观察DNA“梯状”条带；测定细胞DNA断裂百分率；细胞酸性磷酸酶染色观察溶酶体活性。结果 不同浓度Hap—sol(10～60μl／孔)作用于Tca8113细胞5天及50μl／孔作用不同时间(1～6天)后，荧光显微镜观察细胞出现典型凋亡形态学改变；DNA抽提琼脂糖电泳出现凋亡细胞特征性“梯状”条带；DNA断裂百分率及细胞酸性磷酸酶着色深度随Hap—sol浓度增大或处理时间延长而逐渐增高或明显。结论 Hap—sol能诱导体外培养的人舌癌细胞株Tca8113发生凋亡，启动溶酶体是其可能机制之一。     

凋亡抑制基因c-FLIPs对人肺腺癌细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨过表达凋亡抑制基因c-FLIPs重组腺病毒对人肺腺癌细胞增殖和凋亡的作用。方法:构建过表达凋亡抑制c-FLIPs的重组腺病毒Ad5 c-FLIPs,感染人肺腺癌细胞Calu-3。Real-time PCR检测感染前后c-FLIPs、Caspase-8,Caspase-10和Bcl-2的表达。MTT法检测细胞增殖。流式细胞仪检测感染Ad5 c-FLIPs后人肺腺癌细胞的凋亡情况。结果:成功构建过表达c-FLIPs重组腺病毒Ad5 c-FLIPs,real-time PCR检测凋亡抑制基因c-FLIPs在Calu-3细胞株高表达,过表达c-FLIPs基因,凋亡相关基因Caspase-8、Caspase-10和Bcl-2的表达明显降低。MTT法检测感染前后细胞增殖情况发现,过表达c-FLIPs基因可诱导细胞增殖,流式细胞仪分析经PI染色后的Calu-3细胞株,对照组和腺病毒感染组细胞的凋亡率分别为（55.17±9.68）%和（10.97±1.66）%,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:凋亡抑制基因c-FLIPs可明显诱导人肺腺癌细胞增殖并抑制凋亡。     

PTEN抑制人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖和VEGF的表达

目的:探讨与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology deleted on chromo-some ten gene,PTEN)对人脐静脉内皮细胞ECV304细胞增殖、凋亡,及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体1(VEGF receptor 1,VEGFR1)的影响。方法:将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒Ad-PTEN-GFP及空载体腺病毒Ad-GFP感染ECV304细胞,MTT实验、Hoechst3342染色法及流式细胞术检测ECV304细胞的增殖和凋亡。实时荧光定量PCR法检测Ad-PTEN-GFP感染后ECV304细胞中PTEN、VEGF和VEG-FR1 mRNA表达水平,ELISA检测ECV304细胞培养上清中VEGF的水平。鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管生长实验检测PTEN对鸡胚血管生长的影响。结果:与Ad-GFP相比,Ad-PTEN-GFP感染能明显抑制ECV304细胞的增殖,诱导细胞凋亡,5 d时增殖抑制率可达(50.38±5.42)%、细胞凋亡率达(73.3±5.3)%。当感染复数为100时,Ad-PTEN-GFP组ECV304细胞的VEGF及VEGFR1 mRNA表达水平分别为未感染组的(13.40±1.32)%及(46.12±5.20)%。同时,Ad-PTEN-GFP感染能够明显抑制CAM体内血管生长[血管指数(57.6±3.37)%vs(92.2±4.37)%,P<0.05]。结论:PTEN能显著抑制人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖、促进其凋亡,其机制可能与抑制VEGF和VEGFR1表达,抑制血管新生有关。     

Using attenuated Salmonella typhi as tumor targeting vector for MDR1 siRNA delivery

OBJECTIVE: To investigate the feasibility of using attenuated Salmonella typhi as an in vivo delivery vector for multidrug-resistance gene (MDR1) small interference RNA (siRNA) in a mouse model bearing human tongue squamous cell cancer. This technique may represent a novel and effective route for the in vivo administration of siRNA against malignant tumors. METHODS: The cisplatin (DDP)-resistant human tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113/DDP, which highly expresses the MDR1 gene, was established by exposure to gradually increasing concentrations of cisplatin. A plasmid MDR1 siRNAwas constructed and transformed into attenuated Salmonella typhi strain SL7207. Tca8113/ DDP cells were infected with recombinant salmonella and expression of the MDR1 gene encoding P-glycoprotein (P-gp) product was detected. Tca8113/DDP tumor-bearing nude mice were established by inoculation by gavage administration of recombinant salmonella and were simultaneously injected intraperitoneally with cisplatin. Tumor growth was observed. RESULTS: Recombinant salmonella-bearing MDR1 siRNA expression plasmids can infect Tca8113/DDP cells in vitro and suppress P-gp expression and reverse DDP tolerance in Tca8113/DDP cells. Oral administration of recombinant salmonella in tumor-bearing nude mice can suppress tumor proliferation and enhance the therapeutic effect of DDP. CONCLUSION: Attenuated Salmonella typhi is expected to act as an in vivo targeting delivery vector for siRNA in tumor tissues.     

环氧合酶-2抑制剂对人舌鳞癌Tca8113/BLM 细胞MDR1/P-gp表达的影响

 目的 探讨环氧合酶 2抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌耐药细胞系Tca8113/BLM细胞多药耐药基因和P-糖蛋白表达的影响。方法 采用BLM（30 μg/ml）反复24h暴露法处理人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞,采用不同浓度的塞来昔布作用于Tca8113/BLM细胞,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪测定P-gp的表达水平,RT-PCR检测多药耐药基因mRNA的表达。结果 塞来昔布显著抑制Tca8113/BLM细胞增殖、下调Tca8113/BLM细胞MDR1基因表达,其作用呈剂量依赖关系。结论 塞来昔布以剂量依赖方式抑制人舌鳞癌耐药细胞系Tca8113/BLM细胞MD1l/P-gp表达,并抑制细胞增殖,这种作用可能与COX-2抑制剂增强抗癌药物对肿瘤细胞的杀伤作用有关。     

紫甘蓝提取物对X线照射后舌癌细胞双向作用的实验研究

目的:探讨紫甘蓝提取物（purple cabbage extract,PCE）对X线照射后舌癌细胞的双向作用。方法:将对数生长期的人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞及人正常口腔黏膜HOK细胞分为Tca8113细胞对照组（Tca CON）、Tca8113细胞10 μmol/L PCE组（Tca PCE-10 μmol/L）、Tca8113细胞50 μmol/L PCE组（Tca PCE-50 μmol/L）、Tca8113细胞照射组（Tca IR）、Tca8113细胞照射加10 μmol/L PCE组（Tca IR+PCE-10 μmol/L）、Tca8113细胞照射加50 μmol/L PCE组（Tca IR+PCE-50 μmol/L）及HOK细胞对照组（HOK CON）、HOK细胞10 μmol/L PCE组（HOK PCE-10 μmol/L）、HOK细胞50 μmol/L PCE组（HOK PCE-50 μmol/L）、HOK细胞照射组（HOK IR）、HOK细胞照射加10 μmol/L PCE组（HOK IR+PCE-10 μmol/L）、HOK细胞照射加50 μmol/L PCE组（HOK IR+PCE-50 μmol/L）。MTT实验检测加入不同浓度PCE对舌癌细胞Tca8113及正常口腔黏膜HOK细胞增殖的影响;流式细胞术检测6 MeV X 线直线加速器照射后（6 Gy）PCE对Tca8113及HOK细胞凋亡的影响;qRT-PCR实验检测在加入不同浓度PCE作用下对照射后Caspase 3及Caspase 9表达的影响。结果:MTT结果显示,PCE可明显抑制Tca8113细胞的增殖,其增殖抑制率随药物浓度的增加而升高,PCE对正常口腔黏膜HOK细胞增殖无明显的抑制率。流式细胞术结果显示,对于Tca8113细胞,PCE显著提高了照射后Tca8113细胞凋亡率（P＜0.05）;但对于HOK细胞,PCE显著降低了照射后HOK细胞凋亡率（P＜0.05）。qRT-PCR结果显示,对于Tca8113细胞,照射给药组（加10 μmol/L PCE组、加50 μmol/L PCE组）Caspase 3及Caspase 9的表达较单纯照射组明显上调（P＜0.05）;对于HOK细胞,照射给药组（加10 μmol/L PCE组、加50 μmol/L PCE组）Caspase 3及Caspase 9的表达较单纯照射组明显下调（P＜0.05）。结论:PCE通过调节凋亡通路对舌癌Tca8113细胞起到放射增敏的作用,对正常口腔黏膜细胞起到放射防护作用,即PCE对X线照射后舌癌细胞起到双向作用。     

Combined effects of soluble vascular endothelial growth factor receptor FLT-1 gene therapy and cisplatin chemotherapy in human tongue carcinoma xenografts

The aim of the present study was to assess the anti-tumor effect of a defective adenovirus that expresses soluble vascular endothelial growth factor (VEGF) receptor FLT-1 (AdsFLT-1) in combination with cisplatin (cis-diamminedichloroplatinum, DDP) on human tongue carcinoma Tca8113 cell xenografts that had been pre-established in nude mice. In vitro, Tca8113 cells secreted soluble FLT-1 (sFLT-1) after infection with AdsFLT-1, and the conditioned medium from AdsFLT-1-treated Tca8113 cells seemed to inhibit VEGF-induced proliferation of human umbilical vein endothelial cells. The combined effects of sFLT-1 gene therapy and DDP chemotherapy was then studied in well-established Tca8113 xenografts. The concentration of sFLT-1 in serum reached a peak 8 days after intratumoral injection of AdsFLT-1. In these tumors, AdsFLT-1 intratumoral injections had only a small effect. Interestingly, when the cells were also exposed to DDP chemotherapy, significantly higher (P<0.05), and possibly synergistic, anti-tumoral effects were observed that were highly correlated to a marked reduction in intratumoral vascularization and an increase in tumor-cell apoptosis. Together, these data emphasize the potential of combining an anti-angiogenic gene therapy strategy with a destructive approach directed against the tumor cells to fight human tongue carcinoma.     

c-myc转染对舌鳞癌细胞系Tca8113fas表达和凋亡的影响

背景与目的：恶性肿瘤的发生不仅与细胞的异常增殖有关,还与细胞的凋亡异常有关,本实验目的在于研究原癌基因c-myc(cellular avian myelocytoma virus)介导舌鳞癌细胞凋亡的可能性和分子机制。方法：脂质体法将含c-myc的重组质粒转染到舌鳞癌细胞Tca8113,G418筛选阳性克隆,RT－PCR检测转染前后fas(fatty acid synthase）表达水平,TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果：转染后fas mRNA表达上调,正常培养条件下,转染前后细胞凋亡指数无明显改变,低浓度血清条件下细胞凋亡指数增加,结论：低营养状态下c-myc可以介导舌鳞癌细胞凋亡,凋亡机制可能与上调fas mRNA表达有关。     

P75NTR 基因在舌鳞状细胞癌细胞凋亡中的作用及其机制

目的：探求p75神经营养因子受体（P75 NTR）基因在舌鳞状细胞癌细胞凋亡中的作用及其可能的分子作用机制。方法p75NTR 特异性小干扰 RNA（siRNA）转染 p75NTR 阳性舌鳞状细胞癌细胞;P75NTR 阳性舌鳞状细胞癌株 Tca8113细胞分为空白对照组、阴性对照组、实验组-776（转染siRNA-P75NTR-776）、实验组-1234（转染 siRNA-P75NTR-1234）。流式细胞仪双染色标记法检测转染率及细胞凋亡;荧光定量 PCR 检测 P75NTR 基因;Western blotting 检测各组 P75NTR 蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝法检测 siRNA 对细胞增殖的影响;细胞免疫荧光标记法观察核转录因子-κB（NF-κB）在细胞质及细胞核中的分布变化。结果测得转染效率为30％;实验组-776、实验组-1234与阴性对照组的凋亡率分别为（20．35±0．18）％、（12．32±1．51）％、（2．63±0．10）％,前两者与阴性对照组相比,差异有统计学意义（t ＝177．20,P ＜0．005;t ＝37．12,P ＜0．005）。P75NTR 基因干扰成功,实验组-776组的 P75NTR蛋白抑制率达31％。P75NTR-siRNA 干扰后实验组-776、实验组-1234与阴性对照组 Tca8113细胞存活率分别为70．02％、78．01％和95．81％,前两者与阴性对照组相比,差异有统计学意义（χ2＝235．3,P ＜0．001;χ2＝117．5,P ＜0．005）。实验组内 NF-κB 在细胞质内分布明显增多。结论P75NTR 能促进舌鳞状细胞癌细胞增殖或抑制其凋亡,其分子机制可能与阻碍 NF-κB 核内转运密切相关。     

The inhibitory effect of a novel organoselenium compound BBSKE on the tongue cancer Tca8113 in vitro and in vivo

The aim of this study was to evaluate the anti-cancer effect of a novel organoselenium compound BBSKE (1,2-[bis(1,2-Benzisoselenazolone-3(2H)-ketone)]ethane, BBSKE, PCT: CN02/00412) on cell growth and apoptosis, focusing on the protein activity of Thioredoxin Reductase (TrxR) and Caspase-3, in oral squamous cell carcinoma (OSCC) in vitro and in vivo. Oral squamous cancer cell line Tca8113 was treated with various concentrations of BBSKE. Growth and apoptosis as well as the protein activities were analyzed. Morphologic changes of Tca8113 cells after 24h treatment of BBSKE were determined by fluorescence microscopy. The increase of Caspase-3 activity and decrease of Thioredoxin reductase (TrxR) activity were also measured. BBSKE induced a significant cell growth inhibition and elicited typical apoptotic morphologic changes (chromatic condensation, nucleus fragmentation). This phenomenon was accompanied by a change in protein activity of Thioredoxin reductase (TrxR) and Caspase-3. The anti-cancer effect of BBSKE was then studied in well-established Tca8113 xenografts in nude mice. In those tumors, anti-cancer effects were observed and significantly higher than the controls. Together, these results indicate that BBSKE can inhibit tongue cancer cell proliferation in vitro and in vivo, and induce apoptosis in Tca8113 cell lines partially via inhibiting the activity of TrxR and promoting the activity of Caspase-3.     

8-Br-cAMP上调舌癌细胞株间隙连接蛋白基因Cx43表达的研究

目的：探讨 8-Br-cAMP（ 8-Bromo 3'： 5'-cyclic adenosine monophosphate）对舌癌细胞株 (Tca8113)细胞间隙连接蛋白基因 Cx43表达的调节作用。方法：应用 MTT法检测 8-Br-cAMP对舌癌细胞株生长的抑制作用；应用免疫细胞化学、流式细胞仪等技术，对 8-Br-cAMP诱导舌癌细胞株细胞间隙连接蛋白基因 Cx43的表达进行分析。结果：舌癌细胞经 10－ 5 mol/L、 10－ 4 mol/L、 10－ 3 mol/L 8-Br-cAMP处理后，细胞生长受抑制，其抑制率随浓度升高而升高；免疫细胞化学检测可见 Cx43蛋白的表达明显提高；流式细胞仪分析 ,Cx43蛋白荧光强度增强，阳性细胞计数率由 4.8％上升至 26.5％，经 t检验两组间存在显著性差异（ P< 0.01）。结论： 8-Br-cAMP对舌癌细胞的抑制作用可能通过上调 Cx43蛋白的表达而实现。     

开环及闭环羟基喜树碱对口腔鳞癌细胞株抗癌作用的研究

背景与目的:羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)的抗癌活性与其内酯环(包括闭环和开环)密切相关,但关于闭环HCPT和开环HCPT的抗癌活性仍有争议,研究已显示开环HCPT对口腔鳞癌具有明显的体内外抑制作用,本文比较开环及闭环HCPT对口腔鳞癌细胞株Tca8113的体内外抗瘤作用及其作用机理。方法:采用开环及闭环HCPT处理Tca8113细胞及其裸鼠移植瘤,MTT法及流式细胞仪(FCM)检测HCPT对Tca8113细胞的细胞毒作用及对细胞周期的影响;观察经HCPT处理后Tca8113细胞移植瘤的生长状态,计算肿瘤倍增时间和抑瘤率;高效液相色谱仪检测裸鼠血浆及移植瘤中HCPT的浓度,计算药代动力学参数。结果:开环及闭环HCPT对Tca8113细胞具有相同的强杀伤作用,FCM检测显示小于1μmol/LHCPT可将细胞阻滞在S期和G2/M期,100μmol/LHCPT则诱导细胞凋亡。与对照组比较,HCPT组移植瘤生长减慢,倍增时间延长,肿瘤抑制率分别为69.6%(3mg/kg开环HCPT)、65.0%(3mg/kg闭环HCPT)和74.1%(10mg/kg开环HCPT)。腹腔注射10mg/kgHCPT后裸鼠血浆曲线下面积分别为2.66μg·h·ml-1(闭环HCPT)和0.42μg·h·ml-1(开环HCPT),肿瘤组织中可检测到HCPT。HCPT3mg/kg组未见明显的毒副作用,开环HCPT10mg/kg组可见明显的胃肠道反应,闭环HCPT10mg/kg组所有裸鼠死亡。结论:开环及闭环HCPT均对口腔鳞癌细胞具有强的体内外细胞毒作用,其机理与阻断细胞于S期和G2/M期以及诱导细胞凋亡有关,但闭环HCPT毒性较开环HCPT毒性大。