C—Ha—ras基因突变与妊娠滋养细胞疾病发生,发展及恶变的关系

应用分子生物学ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法对正常足月新鲜胎盘３０例，葡萄胎（ＨＭ）终止后发展成持续性滋养细胞（ＴＰＤ）３０例，未发展成持续性滋养细胞病（非ＰＴＤ）３０例，恶性滋养细胞疾病（ＧＴＤ）３０例Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因点突变进行检测。结果：正常足月胎盘Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因点突变；在恶性ＧＴＤ中Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因突变的阳性率３６．７％，ＰＴＤ中阳性率４３．４％，非ＰＴＤ中阳性率１６．７％。提示：Ｃ－Ｈａ     

反义寡脱氧核苷酸对人肝癌裸鼠模型生长及转移的影响

目的 观察反义Ｈ－ｒａｓ寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对高表达蛋白ｐ２１Ｈ- ｒａｓ的人肝癌高转移裸鼠模型ＬＣＩ－Ｄ２０细胞生长、凋亡及转移潜能的影响。方法原代培养ＬＣＩ－Ｄ２０细胞，经１０μｍｏｌ／Ｌ浓度反义ＯＤＮ处理后，以１．５×１０细胞数分别接种于１４只裸鼠皮下缝制皮囊内：６只接种反义Ｈ－ｒａｓＯＤＮ处理细胞，４只接种Ｈ－ｒａｓ非特异性反义ＯＤＮ处理细胞，余４只接种未作处理的对照细胞。结果反义Ｈ－ｒａｓ对ＬＣＩ－Ｄ２０细胞增殖具有显著抑制作用（ｔ＝３１．５２９，Ｐ＜０．０１），反义ＯＤＮ处理细胞，Ｓ期比率（３６．０±１．４）显著低于对照组（５８．５±０．９，ｔ＝１３．５１９，Ｐ＜０．０１），而Ｇ１／Ｇ０期比率（５６．７％±１．１％）高于对照组（３７．４±０．７，ｔ＝１４．８０２，Ｐ＜０．０１）；反义Ｈ－ｒａｓＯＤＮ处理细胞的凋亡发生率（３４．０％±４．５％）显著高于对照组（２．５％±１．２％，ｔ＝１３．４３４，Ｐ＜０．０１）；反义Ｈ－ｒａｓ处理对ＬＣＩ－Ｄ２０细胞在接种动物体内的生长具有显著延迟抑制作用（ｔ＝３．５０９，ｔ＝３．４５２，Ｐ＜０．０１）；接种动物的肺转移率，反义Ｈ－ｒａｓＯＤＮ处理组显著低于对照组。     

C-Ha-ras基因突变与妊娠滋养细胞疾病发生、发展及恶变的关系

应用分子生物学ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法对正常足月新鲜胎盘３０例，葡萄胎（ＨＭ）终止后发展成持续性滋养细胞病（ＰＴＤ）３０例，未发展成持续性滋养细胞病（非ＰＴＤ）３０例，恶性滋养细胞疾病（ＧＴＤ）３０例Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因点突变进行检测。结果：正常足月胎盘无Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因点突变；在恶性ＧＴＤ中Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因突变的阳性率３６．７％，ＰＴＤ中阳性率４３．３％，非ＰＴＤ中阳性率１６．７％。提示：Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因点突变与ＧＴＤ的发生、发展和恶性演变有关；阳性率随组织学分级差而升高，反映恶性ＧＴＤ的恶性程度。     

反义N-ras-1基因对成纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因阻断成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的促增殖作用，为防治以血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖为主要特征的血管损伤后再狭窄等心血管疾病提供进一步探索的途径。方法利用构建的含反义Ｎ－ｒａｓ１基因的逆转录病毒质粒（ｆｐＧｖ１－ＭＴ－ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＮ－ｒａｓ１）转染于培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ），ｆｐＧｖ１－ＭＴ逆转录病毒空载质粒及未转染质粒的细胞为对照，观察其对ｂＦＧＦ诱导的ＶＳＭＣ的影响。结果反义Ｎ－ｒａｓ１细胞数为（１６．８±１．３）×１０４（细胞／ｍｌ），空载质粒对照细胞为（３０．１±１．２）×１０４，两者差异有显著意义（Ｐ＜０．００１）；反义Ｎ－ｒａｓ１细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入率为７６４３±６７２（ｃｐｍ），空载质粒对照细胞为１５１３１±１３８（ｃｐｍ），两者差异有非常显著意义（Ｐ＜０．００１），同时应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因的细胞ＲａｓｍＲＮＡ表达水平明显降低，其表达蛋白ｐ２１也明显降低。结论反义Ｎ－ｒａｓ１基因对ＶＳＭＣ及ｂＦＧＦ诱导ＶＳＭＣ增殖有抑制作用。     

c—Ha—ras癌基因低甲基化在胃癌形成中的作用

应用ｃ－Ｈａ－ｒａｓ（６．６Ｋｂ）探针检测人类胃癌组织中ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因序列中５＇－ＣＣＧＧ－３＇甲基化状态，根据胃组织ＤＮＡ用ＨｐａⅡ酶切、杂交后所显示的杂交带的位置和出现的频率不同，并且与ＭｓｐＩ酶切、杂交带型比较来判定ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因甲基化程度的差异。本组胃癌ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因低甲基化发生率是４５％，癌旁组织中发生率是１５％，ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因低甲基化是胃癌发生的重要早期事件。     

慢性粒细胞白血病反义核酸基因治疗的实验研究

目的单独应用ｂｃｒ－ａｂｌ反义硫代磷酸寡聚脱氧核糖核酸（ＡＳＰＯ）或ｃ－ｍｙｂＡＳＰＯ作用于慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）细胞的研究已有报道，但抑制的不彻底性是个主要问题。由于ＣＭＬ的发生是多癌基因协同作用及相互影响的结果，为进一步提高ＡＳ－ＰＯ对ＣＭＬ细胞的作用效果，用互补于两种类型（ｂ２ａ２及ｂ３ａ２）的ｂｃｒ－ａｂｌ基因融合位点两侧各１３个核苷酸的ＡＳＰＯ（ｂ２ＡＳＰＯ和ｂ３ＡＳＰＯ）及ｃ－ｍｙｂ基因起始密码子２－７互补的ＡＳＰＯ（ｍＡＳＰＯ）联合作用于Ｋ５６２细胞株和原代ＣＭＬ细胞。方法硫代磷酸寡核基酸（ＰＳ－ＯＤＮ）的合成由３９２－０５型ＤＮＡ－ＲＮＡ合成仪自动合成，经ＯＰＣ柱纯化；细胞与ＰＳ－ＯＤＮ共培养后２４，４８，９６，１２０ｈ倒置显微镜下活体观察，０．４％台盼蓝拒染法进行死活细胞计数；ＣＦＵ－Ｋ５６２、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ采用０．８％甲基纤维素半固体培养法；采用两对引物ＲＴ－ＰＣＲ半定量法检测细胞ｂｃｒ－ａｂｌｍＲＮＡ表达；通过流式细胞仪检测及电镜观察细胞凋亡情况。结果（１）ＡＳＰＯ能够特异性抑制ｂｃｒ－ａｂｌ基因表达；经ＲＴ－ＰＣＲ的检测发现１０μｍｏｌＡＳＰＯ作用４８ｈ，两种反义     

ODC反义RNA对人肺鳞癌细胞c—myc及c—Ha—ras基因表达的影响

目的：探讨鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）反义ＲＮＡ逆转人肺鳞癌细胞ＬＴＥＰ７８（Ｌ７８）恶性表型的分子机理。方法：核酸杂交，免疫细胞化学染色等。结果：在ＯＤＣ反义基因稳定整合、ＯＤＣ反义ＲＮＡ高效表达的转染细胞株中，ｃｍｙｃ及ｃＨａｒａｓｍＲＮＡ的表达比Ｌ７８亲本细胞显著下降；ｒａｓＰ２１蛋白的表达也受到明显抑制。结论：ＯＤＣ反义ＲＮＡ引起细胞内多胺耗竭，对ｃｍｙｃ及ｃＨａｒａｓ基因表达有明显的下调作用，这可能是其逆转人肺鳞癌细胞恶性表型的重要机制之一。     

人宫颈癌多基因致癌机理的研究

应用核酸分子杂交、ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＡＳＯ杂交等技术，对人宫颈癌上Ｈａ－ｒａｓ等三种癌基因、ＨＰＶ１６病毒基因及Ｐ５３、Ｒｂ抑癌基因等多基因变化及其致癌机理进行了研究。结果表明：①宫颈癌中存在Ｈａ－ｒａｓ等１２位密码子Ｇ→Ｔ点突变，突变率为１８．２％（８／４４），并有Ｈａ－ｒａｓ基因扩增，扩增率为４５％（９／２０）；②ｃ－ｅｒｂ Ｂ２基因在宫颈癌中的扩增率为７３．３％（１１／１５），５例伴有重排；③     

安替可胶囊抗肿瘤作用的机理

目的：探讨安替可（Ａｎｔｉｋｅ）胶囊抗肿瘤的作用机理．方法：采用移植瘤模型、常规体液和细胞免疫测定、细胞毒结晶紫染色、比色及同位素参入等方法，观察Ａｎｔｉｋｅ及其组分蟾皮（ＳＴ）和当归（ＡＳＤ）的抗肿瘤作用、诱导ＴＮＦ、ＮＫＣ、ＩＬ－２活性、血中过氧化氢酶（ＣＡＴ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）和组织中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）含量及脾和瘤细胞中３Ｈ－ＵＲ参入ｃｐｍ等指标．结果：①Ａｎｔｉｋｅ，ＳＴ和ＡＳＤ及５－Ｆｕ对Ｈ２２移植瘤的瘤重抑制率分别为４５．０５％，４３．９５％，２７．７９％，５５．７９％（Ｐ＜０．０１）；②Ａｎｔｉｋｅ和ＡＳＤ诱导ＭΦ释放ＴＮＦ分别为２５９．０±４０．８和２１４．８±４３．５Ｕ·μｌ－１（Ｐ＜０．０１），ＮＫＣ杀伤率为７３．３９％，６７．４７％（Ｐ＜０．０１），显著增强ＩＬ－２活性（Ｐ＜０．０１），提高ＣＡＴ，ＧＳＨ－Ｐｘ和移植瘤中ＳＯＤ含量（Ｐ＜０．０１），显著降低瘤细胞ｃｐｍ（Ｐ＜０．０１）；③ＳＴ诱导ＭΦ释放ＴＮＦ为１７７．１±４２．９Ｕ·μｌ－１（Ｐ＜０．０１），ＮＫＣ杀伤率６７．７４％（Ｐ＜０．０１），增强ＩＬ－２活性；但对荷瘤小鼠血中ＣＡＴ，ＧＳＨ－Ｐｘ，ＳＯＤ     

Src基因产物pp60~（c－src）与胃癌发生关系探讨

用ｃ－ｓｒｃ基因产物ｐｐ６０（ｃ－ｓｒｃ）特异性单克隆抗体（ＭＡｂ３２７）对胎儿胃上皮，成人胃上皮及病变，胃癌等组织进行免疫组化研究。结果：胎儿胃上皮、成人胃上皮炎性增生、肠腺化生、胃癌ｐｎ６０（ｃ－ｓｒｃ）阳性率分别为１００．０％（１２／１２）、１００．０％（３０／３０）、１００．０％（１６／１６）和８３．３％（４０／４８），均高于成人正常胃上皮（６０．０％，１２／２０），有显著性差异（Ｐ＜０．００５）。彼此之间ｐｐ６０（ｃ－ｓｒｃ）表达量也有显著性差异（Ｐ＜０．００５）。肠型及弥漫型胃癌ｐｐ６０（ｃ－ｓｒｃ）阳性率分别为１００．０％（１６／１６）、６８．８％（２２／３２），有显著性差异（Ｐ＜０．０２５），其表达量也有显著性差异（Ｐ＜０．０５），而癌旁组织ｐｐ６０（ｃ－ｓｒｃ）阳性率及表达量则无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。由此表明ｃ－ｓｒｃ基因激活及ｐｐ６０（ｃ－ｓｒｃ）表达量升高与胃上皮细胞增殖更新、转化恶变及胃癌发生有关，也与胃癌的分化和组织学类型有关。     

绞股蓝总皂甙及与化疗药合用对体外培养慢粒急性变病人癌细胞增殖的影响

目的：观察绞股蓝总皂甙（ＧＰ）及ＧＰ与化疗药合用对体外培养慢性粒细胞性白血病急性变病人癌细胞增殖的影响。方法：用ＭＴＴ比色分析法测定ＧＰ及ＧＰ与阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）、高三尖杉酯碱ＨＨＲＴ分别合用对慢粒急变细胞的相对抑制率。结果：ＧＰ（１２．５～５０．０μｇ·ｍｌ－１）对体外培养慢性粒细胞性白血病急性变病人癌细胞具有明显抑制作用（Ｐ＜０．０５～０．０１）。ＧＰ（３．１２５μｇ·ｍｌ－１）同Ａｒａ－Ｃ（５．０μｇ·ｍｌ－１）、ＨＨＲＴ（６．７５μｇ·ｍｌ－１）分别合用相对抑制率（７７．０％，８６％）较单用Ａｒａ－Ｃ（１５．０μｇ·ｍｌ－１）或ＨＨＲＴ（２０．０μｇ·ｍｌ－１）的相对抑制率（４７％、４１％）高（Ｐ＜０．０５）。结论：１．ＧＰ对慢性粒细胞性白血病急性变病人癌细胞生长增殖具有抑制作用，呈剂量相关性。２．ＧＰ能增强阿糖胞苷、高三尖杉酯碱抑制增殖作用。     

多囊卵巢综合征的高胰岛素血症与神经肽

对多囊卵巢综合征（ＰＣＯＳ）患者２０例及已婚经产健康妇女１０名行口服葡萄糖耐量试验（ＯＧＴＴ），以观察有关内分泌变化。结果ＰＣＯＳ组①ＯＧＴＴ后无糖耐量损害，但有显著高血糖反应；②空腹胰岛素（ＩＮＳ）与空腹β－内啡肽（β－ＥＰ）浓度及ＯＧＴＴ后ＩＮＳ净增量与β－ＥＰ净增量呈正相关（ｒ＝０．４９，Ｐ＜０．０５；ｒ＝０．３７，Ｐ＜０．０５）；③ＯＧＴＴ后ＩＮＳ净增量与强啡肽（ＤｙｎＡ）净增量亦呈正相关（ｒ＝０．５８，Ｐ＜０．０１）；④患者组空腹生长抑素（ＳＳ）显著低于对照组，但ＯＧＴＴ后两组ＳＳ浓度相似。表明ＰＣＯＳ患者空腹高ＩＮＳ与ＳＳ抑制程度不足有关，而ＯＧＴＴ后高ＩＮＳ与β－ＥＰ，ＤｙｎＡ刺激程度过强有关。     

人宫颈癌多基因致癌机理的研究

应用核酸分子杂交、ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＡＳＯ杂交等技术，对人宫颈癌中Ｈａ－ｒａｓ等三种癌基因、ＨＰＶ１６病毒基因及Ｐ５３、Ｒｂ抑癌基因等多基因变化及其致癌机理进行了研究。结果表明：①宫颈癌中存在Ｈａ－ｒａｓ第１２位密码子Ｇ→Ｔ点突变，突变率为１８．２％（８／４４），并有Ｈａ－ｒａｓ基因扩增，扩增率为４５％（９／２０）；②ｃ－ｅｒｂＢ２基因在宫颈癌中的扩增率为７３．３％（１１／１５），５例伴有重排；③ｃ－ｍｙｃ基因在宫颈癌中的扩增率为９１．７％（１１／１２）；④ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７为引物的ＰＣＲ检测结果，宫颈癌中的阳性率为８０．５％（３３／４１）；⑤１２例宫颈癌中未发现Ｐ５８、Ｒｂ基因缺失。上述多基因致癌机理的研究表明，人宫颈癌中Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ２经点突变、扩增、重排而被激活，在癌变中起着协同致癌作用。ＨＰＶ１６基因的整合可能启动ｃ－ｍｙｃ，为癌变的起始因素，而Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ２的基因改变可能为中、晚期事件，抑癌基因Ｐ５３、Ｒｂ的作用尚需进一步研究。     

扶正保真汤对荷瘤鼠化疗增效实验研究

对荷人肺腺癌（ＳＰＣ－Ａ－１）、肉瘤（Ｓ１８０）ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠采用扶正保真汤加环磷酰胺化疗合并治疗，与单用化疗组相比较。结果表明：扶正保真汤加化疗组抑瘤率较高（Ｐ＜０．０１）；且能升高瘤组织内ｃＡＭＰ水平，提高ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ值（Ｐ＜０．０５）；增加Ｇ０＋Ｇ１期细胞，减少Ｓ期细胞（Ｐ＜０．０５）；降低血清ＴＮＦ－α水平及ＭＤＡ含量（Ｐ＜０．０１）；提高Ｔ－ＳＯＤ活力（Ｐ＜０．０１）。提示扶正保真汤能增加化疗疗效     

Ha—ras,p53基因变异与膀胱癌预后关系的探讨

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测了３９例膀胱癌及７例正常膀胱组织中Ｈａ－ｒａｓ基因，ｐ５３基因变异，并结合临床分期，病理分级等参数进行了综合分析，结果表明，膀胱癌组织中Ｈａ－ｒａｓ基因，ｐ５３基因变异率分别为３６％，３０．８％两者均显著高于正常对照组（Ｐ〈０．０５），且与分级分期呈正相关，复发肿瘤的Ｈａ－ｒａｓ基因突变率显著高于原发肿瘤；６例标本同时呈现Ｈａ－ｒａｓ基因与ｐ５３基因突变，提示Ｈａ－ｒａ     

非胰岛素依赖型糖尿病患者红细胞膜ATPase活性改变及其影响因素

目的探讨非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ及Ｃａ２＋－ＡＴ－Ｐａｓｅ活性改变的影响因素。方法测定７７例ＮＩＤＤＭ患者和５０例正常人血糖、总胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬＣ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、谷胱甘肽（ＧＳＨ）、糖化血红蛋白（ＨｂＡｌｃ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰＸ）、红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴ－Ｐａｓｅ和Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性。ｔ检验、直线相关分析和多元逐步回归分析。结果ＮＩＤＤＭ组血糖、ＨｂＡｌｃ、ＴＣ、ＴＧ、ＴＣ／ＨＤＬＣ、ＬＰＯ显著高于对照组（Ｐ＜０．０１），ＨＤＬＣ、ＧＳＨ、ＳＯＤ、ＧＳＨＰＸ、红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ和Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性低于对照组（除ＧＳＨ的Ｐ＜０．０５外，其他Ｐ＜０．０１）；不同ＨｂＡｌｃ、ＴＣ／ＨＤＬＣ、ＧＳＨ、ＬＰＯ、ＴＣ组的红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性有显著性差别。红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性＝１２．８０＋０．２７（ＧＳＨ）－０．１２（ＬＰＯ）－０．０９（ＴＣ／ＨＤＬＣ），红细胞胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性＝１０８．２０＋１．     

C-myc反义核酸对内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

应用不同浓度的Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸处理体外培养的经１０－８ｍｏｌ／Ｌ内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的人肺动脉平滑肌细胞,通过细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入值观察该反义核酸对细胞增殖及ＤＮＡ合成的抑制作用,应用斑点杂交法检测平滑肌细胞Ｃ－ｆｏｓ和Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ的表达水平。结果表明,１０、２０、５０μｇ／ｍｌ反义寡核苷酸对细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入值与对照组相比抑制率分别为１１．９％和１２．３％（Ｐ＜０．０５）,２１．６％和１４．７％（Ｐ＜０．０１）,３６．３％和２７．２％（Ｐ＜０．０１）;对Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达抑制率分别为７１．３％（Ｐ＜０．０５）,８０．７％（Ｐ＜０．０５）,９２．５％（Ｐ＜０．０１）;５０μｇ／ｍｌ反义核酸对Ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ表达抑制率是７９．７％,１０、２０μｇ／ｍｌ组无抑制作用。Ｃ－ｍｙｃ反义核酸能显著抑制内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖,其作用系依赖反义核酸的序列特异性和剂量依赖。     

多囊卵巢综合征患者糖耐量试验前后血中活性物质测定

为了研究多囊卵巢综合征（ＰＣＯＳ）的黄体生成素（ＬＨ）及胰岛素升高与神经肽的关系，我们检测了正常组（ｎ＝１５）、１型患者组（ＬＨ／ＦＳＨ≥３，ｎ＝３０）和２型患者组（ＬＨ／ＦＳＨ＜３，ｎ＝２５）糖耐量试验（ＯＧＴＴ）前后外周血中胰岛素、生长抑素（ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ，ＳＳ）、β－内啡呔（β－ｅｎｄｏｒｐｈｉｎ，β－ＥＰ）和强啡呔Ａ（ｄｙｎｏｒｐｈｉｎＡ，ＤｙｎＡ）浓度的变化。结果在基础状态下，１型组的ＬＨ与ＳＳ有负相关性（ｒ＝－０．５１，Ｐ＜０．０５），２型组ＬＨ与β－ＥＰ也有负相关性（ｒ＝－０．４９，Ｐ＜０．０５）；ＯＧＴＴ后，１型组β－ＥＰ和ＤｙｎＡ较对照组升高，２型组的ＳＳ较对照组有相对不足。表明内源性ＳＳ不足及β－ＥＰ和ＤｙｎＡ升高可能导致了ＰＣＯＳ的ＬＨ及胰岛素的升高     

8—Br—cAMP对肺癌NSCLC—3细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：观察８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人肺癌ＮＳＣＬＣ－３细胞凋亡相关基因表达的影响。方法：将体外培育的ＮＳＣＬＣ－３细胞分为实验组和对照组,采用原位杂交方法观察８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对ＮＳＣＬＧ－３细胞ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２基因表达的影响。结果：８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ处理后的实验且较未加８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ的对照组－ｃ－ｍｙｃ,ｂｃｌ－２基因表达降低（Ｐ〈０．０１）。结论：８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可下调与ＮＳＣＬＣ－３     

ＮＡＮＯＧ基因在侧群表型干细胞样肝癌细胞中的表达及意义

摘要：【目的】基于侧群（ＳＰ）细胞分选方法,从肝癌细胞Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ中分选ＳＰ表型干细胞样肝癌细胞,观察干细胞标记物ＮＡＮＯＧ基因在该ＳＰ表型肝癌细胞中的表达。【方法】采用流式细胞术检测和分选肝癌细胞Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ中的ＳＰ细胞和非侧群（ＮＳＰ）细胞,细胞生长曲线法检测ＳＰ和ＮＳＰ细胞的增殖能力,Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵袭实验检测ＳＰ和ＮＳＰ细胞的侵袭能力,ＭＴＴ法检测ＳＰ和ＮＳＰ细胞对５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）和阿霉素（ＤＯＸ）的药物敏感性;Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ和ＷＢ检测ＳＰ与ＮＳＰ细胞中ＮＡＮＯＧ基因的表达。【结果】肝癌细胞Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ中分选的ＳＰ细胞比例分别为（５．３±０．８）％和（１３．４９±１．０）％。生长曲线表明Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ的ＳＰ细胞的增殖速度快于ＮＳＰ细胞（Ｐ＜０．０５）,体外侵袭实验结果显示Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ的ＳＰ细胞体外侵袭能力高于ＮＳＰ细胞（Ｐ＜０．０５）,ＭＴＴ结果显示Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３ＢＳＰ细胞对５－ＦＵ和ＤＯＸ有耐药性,高于ＮＳＰ细胞（Ｐ＜０．０５）。Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３ＢＳＰ细胞ＮＡＮＯＧｍＲＮＡ平均表达水平分别是ＮＳＰ细胞的４．１７和５．５１倍（Ｐ＜０．０５）,ＮＡＮＯＧ蛋白平均表达水平分别是ＮＳＰ细胞的３．７８和５．０１倍（Ｐ＜０．０５）。【结论】肝癌细胞Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ中分选的ＳＰ细胞符合肿瘤干细胞的部分生物学特征,ＮＡＮＯＧ基因在ＳＰ表型干细胞样肝癌细胞中高表达。