Change of anxious behavior and hypothalamic-pituitary-adrenal axis in serotonin transporter knockout mice under stress

目的 研究5-羟色胺转运体( serotonin transporter,SERT)敲除小鼠焦虑行为及ACTH和皮质酮分泌变化.方法 将基因型为SERT+/-的雌雄小鼠交配产子,并把鉴定后子代小鼠按基因型(SERT+/+、SERT+/-、SERT -)分为对照组和EPM组,每组15只.利用高架十字迷宫作为应激原刺激小鼠,观察各组小鼠的焦虑行为,并测定各组小鼠的ACTH和皮质酮分泌.结果 ①基因型PCR成功鉴定SERT+/+、SERT+/-和SERT-/-的小鼠.②SERT+/-和SERT - -小鼠的开臂停留时间、开臂停留时间百分比、进入开臂的次数和进入开臂的次数百分比较SERT+/+均显著降低(P＜0.05,P＜0.01).③EPM刺激下,SERT+/-和SERT-/-小鼠ACTH分泌的增加显著高于SERT+/+(P＜0.05),SERT-/-小鼠皮质酮分泌的增加显著高于SERT+/+ (P ＜0.05).结论 SERT敲除小鼠在应激条件下易产生焦虑,并且ACTH和皮质酮分泌显著升高.     

异丙肾上腺素诱导的慢性应激焦虑样行为学检测

目的 阐明异丙肾上腺素长期作用可以诱导昆明小鼠出现慢性应激焦虑样行为.方法 50只昆明小鼠随机分为对照组、慢性应激组、异丙肾上腺素(Isoprenaline,ISO)组、慢性应激+ICI118,551(ICI)处理组、ISO+ICI 118,551(I S O+I C I)处理组,每组10只.对照组:每天腹腔注射生理盐水;慢性应激组:每天进行慢性应激处理;ISO处理组:每天腹腔注射ISO(5 mg/kg);慢性应激+ICI处理组:每天慢性应激处理后,腹腔注射ICI(0.2 mg/kg);ISO+ICI处理组:每天腹腔注射ISO(5 mg/kg)和ICI(0.2 mg/kg).结果 高架十字迷宫结果中,慢性应激组和ISO组开臂停留时间、进入开臂次数、开臂停留时间百分比和进入开臂次数百分比均显著低于对照组(P<0.05).明暗箱结果中,慢性应激组和ISO处理组明箱停留时间、明箱停留时间百分比、明箱活动次数和穿梭次数显著低于对照组(P<0.05);暗箱停留时间显著高于对照组(P<0.05).结论 在β-AR激动剂异丙肾上腺素长期作用下,昆明小鼠出现了慢性应激焦虑样行为.     

焦虑模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴高反应性与糖皮质激素受体蛋白表达降低相关

目的 研究焦虑模型大鼠在应激条件时下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamus-pituitaryadrenal,HPA)轴呈高反应性是与轴本身功能亢进还是与反馈调节中糖皮质激素受体(glucocorticoid steroid receptor,GR)蛋白表达改变相关.方法 SD健康雄性大鼠随机分为对照组(n=20)和焦虑模型组(n=26).对照组正常饲养.采用不可预知的情绪应激方法建立大鼠焦虑模型.所有大鼠每周称量体质量.造模结束后,通过行为学鉴定造模是否成功.旷场和高架作为应激源刺激大鼠,测定两组大鼠血清中促肾上腺激素和皮质酮水平.Western blot检测GR蛋白在大鼠海马、下丘脑、垂体和肾上腺组织中的表达.结果 焦虑模型大鼠体质量增长率与对照组相比明显降低(P＜0.01).高架十字迷宫实验和旷场实验显示:与对照组相比,模型组大鼠进入开臂次数、开臂停留时间、进入开臂次数百分比和进入开臂时间百分比均显著降低(P＜0.01);总路程、中央活动路程百分比和中央活动时间百分比均显著降低(P ＜0.05,P＜0.01).在基础条件下,两组大鼠分泌促肾上腺激素和皮质酮差异无统计学意义(P＞0.05);而应激条件下,模型组大鼠分泌两种激素显著高于对照组(P＜0.01).与对照组比较,模型组在大鼠海马、下丘脑和肾上腺组织中GR蛋白表达显著降低(P ＜0.05,P＜0.01),而在垂体中表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 焦虑模型大鼠在应激条件下,HPA轴反应性增加与GR所介导的负反馈调节作用减弱有关.     

母子分离应激对Cplx2基因缺陷小鼠中枢神经递质多巴胺分泌的影响

目的本文旨在探讨母子分离应激对complexinⅡ(Cplx2)基因小鼠中枢神经递质多巴胺分泌的影响。方法实验分4组:应激Cplx2-/-组、应激Cplx2+/+组、无应激Cplx2-/-组和无应激Cplx2+/+组。无应激组小鼠正常饲养,应激组小鼠从出生后第2日至第21日每天施加母子分离应激。小鼠生长到第4周时,利用聚合酶链反应技术检测其基因型。4组小鼠腹腔注射激动剂去氧麻黄碱或生理盐水后,采用高效液相加电化学检测器测定纹状体多巴胺含量。结果应激Cplx2-/-组、应激Cplx2+/+组、无应激Cplx2-/-组和无应激Cplx2+/+组注射去氧麻黄碱后,与生理盐水对照组相比,纹状体多巴胺水平显著升高(P<0.05),以应激Cplx2-/-组纹状体多巴胺分泌增多最为明显。与无应激Cplx2+/+组相比较,应激Cplx2+/+组注射去氧麻黄碱后纹状体多巴胺分泌增多(P<0.05);与无应激Cplx2-/-组相比较,应激Cplx2-/-组注射去氧麻黄碱后纹状体多巴胺分泌增多(P<0.05);与应激Cplx2+/+组相比,应激Cplx2-/-组注射去氧麻黄碱后纹状体多巴胺分泌增多(P<0.05)。与无应激Cplx2+/+组相比,无应激Cplx2-/-组注射去氧麻黄碱后纹状体多巴胺分泌增多(P<0.05)。结论本实验证实小鼠中枢神经递质多巴胺分泌可能受去母子分离应激和Cplx2等因素的多重影响。     

慢性束缚应激诱导自发性高血压大鼠出现抑郁焦虑样行为

目的 探讨自发性高血压大鼠（SHR）在慢性束缚应激（Chronic Restraint Stress,CRS）时抑郁焦虑样行为学改变. 方法 雄性SHR大鼠16只,随机分为对照组（CON,n=8）和慢性束缚应激组（CRS,n=8）.通过旷场试验（Open Field test,OFT）、强迫游泳实验（Forced Swimming test,FST）、高架十字迷宫试验（Elevated Plus Maze,EPM）评价其抑郁焦虑样行为,同时比较SHR血压变化及血清ACTH水平.结果 束缚4周后,与对照组相比,CRS组的SHR在OFT中直立次数及总位移均显著降低（P＜0.05）,FST中不动时间显著延长（P＜0.05）,EPM中开臂滞留时间百分比显著下降（P＜0.05）. 结论 慢性束缚应激可诱导SHR出现抑郁焦虑样行为.     

天敌声音应激对SD大鼠的焦虑样行为的影响

目的观察天敌声音在不同时长和重复应激下对SD大鼠焦虑样行为的影响。方法观察大鼠经单次或重复天敌声音应激后,在旷场试验(OFT)和高架十字迷宫(EPM)的行为变化。OFT和EPM的平均速度作为大鼠整体活动水平的指标,OFT中央区和EPM开闭区的路程比例和停留时间比例用于评价大鼠焦虑状态。结果在单次应激前,各组大鼠整体活动水平一致,均处于低焦虑状态;应激后第1(OFT)、3(OFT)和7天(EPM),与空白对照组相比,10 min和60 min单次天敌声音应激均能显著降低大鼠在OFT中央区或EPM开臂区的路程比例和停留时间比例(P 0.01)。大鼠在重复天敌声音应激后第1(EPM)、3(OFT)和7天(EPM),均可见OFT中央区或EPM开臂区的路程比例和停留时间比例较空白对照组显著下降(P 0.01);同时在重复应激后第7天,地西泮(1 mg/kg,i.p.)能有效逆转天敌声音应激大鼠的这种焦虑状态水平(P 0.01)。结论天敌声音应激能增加大鼠的焦虑样行为,而且单次天敌声音应激在较短时间内(10 min)起效,作用持久(不少于7 d),重复应激不耐受。     

Vimentin基因敲除HIV-1 gp120转基因小鼠模型的构建

目的 构建波形蛋白（VIM）基因敲除和gp120转基因（gp120 Tg）小鼠模型。方法 将VIM基因敲除小鼠（VIM-/-）和gp120 Tg小鼠杂交（F0代）,然后在产生的子代（F1）中,取分组为VIM+/-/gp120Tg的小鼠一公一母杂交,得到基因型分别为VIM+/+、 VIM+/-、VIM-/-和VIM+/+/gp120 Tg、VIM+/-/gp120 Tg、VIM-/-/gp120 Tg的6组小鼠。其中VIM+/+、VIM-/-、VIM+/+/gp120Tg和VIM-/-/ gp120这4组小鼠互为对照。用PCR法鉴定这上述6组小鼠的基因型,免疫印迹法检测小鼠脑组织中VIM和gp120的表达情况。结果 4组基因型VIM+/+、VIM-/-、VIM+/+/gp120Tg和VIM-/-/gp120Tg小鼠的PCR结果符合预期,免疫印迹结果显示VIM-/-/ gp120Tg小鼠VIM无表达,gp120过表达（P<0.001）,符合预期结果。结论 成功构建了VIM基因敲除gp120转基因小鼠模型,为深入研究波形蛋白在gp120神经毒性作用中的作用机制提供了坚实的研究基础。     

新生期母婴分离对小鼠不同年龄段内脏痛敏及焦虑抑郁行为的影响

摘要：目的 探讨新生期母婴分离对小鼠不同年龄段内脏痛敏及焦虑抑郁行为的影响。方法 将新生期小鼠随机分为母婴分离（MS）组和非母婴分离（NMS）组,MS组小鼠于出生后第2 ~ 15天每天与母鼠分离3 h,NMS组小鼠不予处理;待小鼠成年后,按年龄分为青年组（3月龄）、中年组（10月龄）和老年组（18月龄）,分别进行腹外斜肌放电实验和内脏痛阈检测实验,观察小鼠内脏痛敏变化。实验进一步将NMS组和MS组小鼠分别给予急性束缚应激2 h,分为NMS组、急性束缚应激组（NMS+R）、MS组和母婴分离+急性束缚应激组（MS+R）,分别进行高架十字迷宫和旷场实验,观察小鼠焦虑样行为改变;NMS组和MS组小鼠进行糖水偏好实验,观察小鼠抑郁样行为改变。结果 在20mmHg结直肠扩张（CRD）压力刺激下,与NMS组相比,MS组小鼠腹外斜肌放电波幅在青年组和中年组中显著升高[青年组（22.04±3.24）μv比（14.70±3.10）μv,中年组（19.22±4.60）μv比（13.79±4.24）μv,P < 0.05或P < 0.01];在40mmHg CRD压力刺激下,与NMS组相比,MS组小鼠腹外斜肌放电波幅在青年组和中年组中显著升高[青年组（35.56±3.32）μv比（24.11±3.29）μv,中年组（32.38±4.43）μv比（25.61±3.67）μv,P< 0.01];在60mmHg CRD压力刺激下,与NMS组相比,MS组小鼠腹外斜肌放电波幅在青年组中显著升高[（47.16±4.24）μv比（36.96±4.63）μv,P < 0.01];与NMS组相比,MS组小鼠内脏痛阈阈值在青年组和中年组中显著降低[青年组（57.78±7.84）mmHg比（70.25±9.21）mmHg,中年组（59.79±9.07）mmHg比（70.00±6.32）mmHg,P< 0.05],表现出内脏痛觉高敏,随着小鼠年龄增加,内脏痛敏症状可缓解。在高架十字迷宫和旷场实验中,与NMS组相比,MS组小鼠在开臂次数百分比、开臂滞留时间百分比、中心区域停留时间和旷场总距离均显著减少[开臂次数百分比（34.84±5.78）%比（48.26±7.61）%,开臂滞留时间百分比（20.72±4.66）%比（31.39±4.80）%,中心区域停留时间（25.50±8.15）s比（38.81±5.07）s,旷场总距离（21.77±2.41）m比（30.42±5.41）m,P< 0.01],表现出显著的焦虑样行为改变;给予急性束缚应激后,与NMS+R组相比,MS+R组小鼠在开臂次数百分比、开臂滞留时间百分比、中心区域停留时间和旷场总距离均显著减少[开臂次数百分比（29.39±2.57）%比（38.65±5.04）%,开臂滞留时间百分比（15.53±4.80）%比（24.45±5.65）%,中心区域停留时间（20.33±4.98）s比（30.04±7.88）s,旷场总距离（18.57±1.68）m比（25.18±2.72）m,P< 0.05或P< 0.01],可进一步加重小鼠焦虑样行为;糖水偏好实验中,与NMS组相比,MS组小鼠糖水消耗百分比降低[（37.91±13.44）%比（55.64±21.41）%,P< 0.05],表现出显著的抑郁样行为。结论 新生期母婴分离能够引起小鼠成年后内脏痛觉高敏和焦虑抑郁样行为改变,内脏痛敏症状可随小鼠年龄增加而逐渐缓解,而对急性束缚应激的焦虑调节能力显著降低。     

急性创伤应激对小鼠行为变化的影响

目的 研究急性创伤应激对小鼠自发行为、焦虑、学习记忆的影响.方法 将16只小鼠分为实验组(n=8)和对照组(n=8),实验组给予足底电击,对照组不给予任何处理;分别在处理后0 h、12 h、7 d进行旷场实验以及高架十字迷宫实验,以评价小鼠行为学改变;用水迷宫实验以评价小鼠学习记忆改变.结果 (1)两组小鼠的站立次数和中央区域活动时间、路程在应激后0 h和12 h差异均有统计学意义(P<0.01),实验组少于对照组;应激后7 d两组仅中央活动时间差异有统计学意义(P<0.05);(2)实验组小鼠进入开臂次数及停留时间在应激后立即、12 h较对照组均显著减少(P<0.05);(3)实验组小鼠第2、3天的逃避潜伏期较对照组显著延长(P<0.05),穿越平台次数及目标象限游程比例较对照组均显著增多(P<0.05).结论 足底电击可引起小鼠自发行为减少,导致探索样行为减弱,焦虑增加,学习能力降低,但在一定程度上增强小鼠的空间记忆能力.     

生与炒酸枣仁配伍对小鼠抗焦虑作用研究

目的:采用Triple-test实验装置来评价药物的抗焦虑作用。方法:清洁级雄性小鼠24只,随机分为空白组、阳性对照组、生与炒酸枣仁配伍组,连续给药7 d,每日1次。末次给药后30 min进行Triple-test 15 min,观察实验动物在Triple-test实验装置中的活动情况,记录并分析与焦虑情绪相关的行为学指标。结果:与空白组比较,阳性组和生与炒酸枣仁配伍组小鼠的旷场中央区运动时间百分比、中央区运动距离和周边区运动距离都没有显著性变化(P0.05);进入高架十字迷宫开臂次数百分比和在高架十字迷宫开臂停留时间百分比都有显著增加(P0.01);在明暗穿梭箱明区运动时间百分比显著性增加(P0.05),明暗穿梭箱穿梭次数有极显著性增加(P0.01)。阳性组小鼠进入高架十字迷宫闭臂次数显著增加(P0.01),生与炒酸枣仁配伍组无显著变化(P0.05)。阳性组小鼠在明箱中运动距离有显著性增加(P0.05),生与炒酸枣仁配伍组小鼠有极显著性增加(P0.01)。阳性组和生与炒酸枣仁配伍组小鼠在暗箱中运动距离与空白组比较无显著性变化(P0.05)。结论:生与炒酸枣仁配伍可以使Tripletest情绪应激模型小鼠的焦虑行为减少,探究行为增加,生与炒酸枣仁配伍有显著的抗焦虑作用。     

Myostatin基因敲除对哺乳期幼鼠骨骼肌生长的影响

目的 构建稳定的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因敲除小鼠模型,观察敲除MSTN基因对哺乳期幼鼠骨骼肌生长的影响,并初步探讨其相关机制.方法 采用Cre-LoxP系统建立MSTN基因敲除的小鼠模型,通过PCR法鉴定子代小鼠基因型;比较MSTN基因敲除后小鼠体质量及腿部骨骼肌质量的变化;免疫荧光法检测野生型小鼠与MSTN基因敲除小鼠腿部骨骼肌纤维横截面积;qPCR法检测MST基因敲除小鼠Atrogin-1和MuRF-1 mRNA的表达.结果 PCR结果显示:子代小鼠的基因型符合MSTN-loxP+/+MCK-Cre+/-;与野生型小鼠(WT)相比,MSTN敲除小鼠(KO)体质量及骨骼肌质量显著增加,在出生第7、21天差异均具有统计学意义(P＜0.05),腿部骨骼肌纤维显著增粗,差异具有统计学意义(P＜0.01);而MSTN基因敲除后小鼠Atrogin-1和MuRF-1的mRNA表达较野生型小鼠显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 利用Cre-loxP系统成功建立稳定的MSTN基因敲除的小鼠模型,该小鼠腿部骨骼肌纤维增粗,其质量以及小鼠体质量显著增加,其机制可能与泛素连接酶Atrogin-1和MuRF-1的表达下调有关.     

促肾上腺皮质激素释放激素基因敲除小鼠的繁殖与基因型鉴定

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)基因敲除(KO)小鼠饲养、繁殖及基因型鉴定的方法。方法从美国Jackson实验室引进CRH KO小鼠,按照遗传学规则,对杂合子型(CRH+/-)小鼠进行配对繁殖,提取幼鼠尾部组织全基因组DNA,通过聚合酶链反应(PCR)对幼鼠基因型进行鉴定。结果 CRH KO纯合子型(CRH-/-)小鼠的繁殖和饲养均获得成功,采用PCR成功地对所获得的小鼠进行基因分析,在子代小鼠中存在野生纯合子型(CRH+/+)、杂合子型(CRH+/-)及CRHKO纯合子型(CRH-/-)小鼠。CRH-/-小鼠较另外2种基因型小鼠存活率明显下降,但3种基因型小鼠在出生后10 d及30d体质量无明显差异。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法可从杂合子型(CRH+/-)小鼠中获得CRH KO纯合子型(CRH-/-)小鼠。     

Smad4条件基因敲出小鼠的前庭功能检测

目的通过设计的一系列前庭功能检测实验对同窝成组的软骨组织Smad4条件基因敲除野生型、杂合子、纯合子小鼠的前庭功能进行评估。方法前庭功能检测方法:一般行为观察;空间姿势反射;游泳实验;前庭眼反射(VOR),使用前庭功能检查系统记录眼震电图;短声刺激前庭诱发肌源性电位(VEMP)记录麻醉下椎前颈长肌表面第3颈椎水平的声刺激诱发电位。结果虽然软骨组织Smad4条件基因敲除小鼠的耳蜗感受声音能力下降,但没有发现软骨组织Smad4条件基因敲除小鼠出现行为、步态、空间姿势反射和游泳实验等前庭综合功能障碍;3个基因型小鼠均能诱出眼震且相互之间没有差别(P>0.05);VEMP的潜伏期在3个基因型组间无差异(P>0.05),与野生型和杂合子相比,纯合子小鼠VEMP的反应阈值明显增加(P<0.01)。结论只有Smad4条件基因敲除纯合子小鼠的部分球囊功能受到一定程度的影响,其他前庭功能不受影响。     

清心丸对小鼠抗焦虑行为影响的实验研究

目的：通过高架十字迷宫小鼠的行为学试验,观察清心丸对小鼠的抗焦虑作用。方法：选用小鼠50只,随机分为5组,每组10只。分别为空白对照组,地西泮阳性对照药组,清心丸高、中、低剂量组,各组分别给予与清心丸等体积蒸馏水、地西泮片（2mg/kg）、清心丸（4.0g/kg、2.0g/kg、1.0g/kg）。灌胃给药,每日1次,连续7日。7日后观察清心丸高、中、低剂量对小鼠进入开放臂和封闭臂的总次数 (OE+CE)、进入开放臂次数百分比 (OE％)、开放臂停留时间比例 (OT％)的影响。结果：清心丸中、高剂量组的进入开放臂次数 （OE）均明显增加 (P<0.05),清心丸中、高剂量组与地西泮组在开臂停留时间 (OT)分别占进入两臂总次数和在两臂停留总时间的百分比 (OE％和 OT％)均比对照组明显增加 (P<0.05),而各组 OE+CE的总次数未见明显变化。结论：清心丸具有较强的抗焦虑作用。     

p75NTR敲除对小鼠股骨矿化发育的抑制作用

目的 对比野生型和p75 neurotrophin receptor(p75 NTR)敲除小鼠股骨骨质的改变,探讨p75 NTR敲除对小鼠股骨矿化发育的影响.方法 取同窝p75 NTR+/+(野生型)和p75 NTR-/-(敲除型)雄性小鼠,出生后8周龄时行股骨Micro-CT扫描,检测股骨松质骨的骨量(BV)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨表面积/骨量(BS/BV)、骨小梁分离度(Tb.Sp)和皮质骨的骨量(Ct.BV)、骨皮质厚度(Ct.TbTh)、骨皮质的骨表面积/骨量(Ct.BS/BV);出生后40 d分别取同窝两种基因型雄性小鼠行钙黄绿素荧光双标实验,以检测股骨的矿化沉积速率;提取4周龄大小鼠股骨总RNA及蛋白质,RT-PCR和Western blot检测ALP、Runx2的表达.结果 Micro-CT结果显示:p75 NTR--小鼠股骨的BV、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Ct.BV、Ct.TbTh明显低于同窝p75 NTR+/+小鼠(P＜0.05),同时,p75 NTR-/-小鼠的BS/BV、Tb.Sp、Ct.BS/BV明显高于p75 NTR+/+小鼠(P＜0.01);钙黄绿素荧光双标检测结果显示:p75 NTR-/-小鼠股骨的矿化速率明显低于同窝p75 NTR+/+小鼠(P＜0.01);RT-PCR及Western blot结果显示:p75 NTR--小鼠的ALP、Runx2表达均明显低于p75 NTR+/+小鼠(P＜0.01).结论 p75 NTR敲除对小鼠股骨的矿化发育有一定的抑制作用.     

高脂血症促进载脂蛋白E基因敲除小鼠牙周炎进展的实验研究

目的探讨高脂血症是否影响牙周炎进展。方法以ApoE基因敲除的C57BL/6J(ApoE-/-)小鼠和相同基因背景的野生型C57BL/6J(C57)小鼠各分为实验组和对照组,采用丝线结扎小鼠的上颌双侧第二磨牙,实验组接种牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis),对照组只完成牙周结扎过程而不接种细菌。用纸尖从牙周袋获取P.gingivalis进行菌落计数;截取上颌骨标本行亚甲基蓝染色,观察牙周组织损伤程度。结果普通饮食条件下,ApoE-/-小鼠血清脂质水平显著高于C57小鼠;实验第7d时实验组ApoE-/-小鼠牙周组织中获取的P.gingivalis菌落数为(8 341.66±1 217.88)个,显著高于C57小鼠(4 466.66±1 115.87)个(P<0.05);实验组ApoE-/-小鼠牙槽骨吸收量为(506.87±93.89)μm,显著高于C57小鼠(322.18±41.40)μm(P<0.05)。结论 ApoE-/-小鼠血清脂质水平升高,牙周清除P.gingivalis能力下降,牙周病进展加速。     

SUMO特异性蛋白酶1在动脉粥样硬化发病机制中的作用

目的探讨SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)在小鼠动脉粥样硬化发病机制中的作用。方法采用主动脉整体和主动脉根部油红O染色以及主动脉根部巨噬细胞标志物MOMA-2的免疫组织化学染色,观察SENP1+/+X Apoe-/-(n=5)与SENP1+/-XApoe-/-(n=4)两组小鼠在饲喂高胆固醇高脂食物后动脉粥样硬化病理改变。采用乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)诱导巨噬细胞RAW264.7泡沫化,油红O染色检测RAW264.7 si-ns及RAW264.7 si-SENP1的泡沫细胞形成能力。采用Real-Time PCR和Western blotting分别检测RAW264.7 si-ns和RAW264.7 si-SENP1中脂肪酸结合蛋白4(FABP4)mRNA和蛋白的相对表达量。结果饲喂高胆固醇高脂食物后,油红O染色显示,SENP1+/-X Apoe-/-小鼠的斑块相对面积(斑块面积/血管总面积)和主动脉弓斑块面积均大于SENP1+/+X Apoe-/-小鼠,分别为(6.716±1.442)%和(5.952±2.332)%以及(364 249±45 838)和(273 486±158 814)μm2;免疫组织化学染色显示,主动脉根部巨噬细胞面积/斑块面积分别为(41.00±0.05)%和(40.47±0.07)%,差异无统计学意义(P=0.954)。Real-Time PCR和Western blotting检测以及油红O染色结果显示,RAW264.7 si-SENP1的FABP4表达水平及泡沫细胞形成能力均较RAW264.7 si-ns高。结论 SENP1通过下调FABP4的表达,抑制巨噬细胞源性泡沫细胞形成,从而抑制动脉粥样硬化的发生。     

支架蛋白JLP基因敲除小鼠的构建及其肾脏表型的初步观察

目的 繁殖和鉴定支架蛋白JLP基因敲除小鼠,对其肾脏表型进行初步观察。方法 将JLP基因敲除杂合小鼠进行配种繁殖,提取子代小鼠的组织DNA,用PCR技术检测小鼠的基因型,并用Western blot法验证基因敲除效果。通过PAS病理染色等观察肾脏微观结构。结果 成功繁殖并获得子代小鼠,子代小鼠有3种基因型,包括纯合子（JLP+/+、JLP-/-）和杂合子（JLP+/-）。PCR检测基因型的方法方便且结果准确。结论 笔者成功建立了JLP基因敲除小鼠模型,能够进一步探究发现JLP基因对生物体的作用及机制。     

局部应用肉桂醛通过激活Nrf2通路促进糖尿病小鼠创口愈合

目的 探讨局部应用肉桂醛(cinnamic aldehyde,CA)对糖尿病小鼠创口愈合的影响及其机制.方法 8周龄Nrf2野生型(Nrf2+/+)和Nrf2敲除型(Nrf2-/-)雄性SKH-1无毛小鼠各8只,持续5d腹腔注射链脲霉素(streptozotocin,STZ,50 mg/kg),建立糖尿病小鼠模型.采用随机数字表法分为:①Nrf2+/+鼠对照组(Nrf2+/+Veh组);②Nrf2+/+鼠CA治疗组(Nrf2+/+ CA组);③Nrf2-/-鼠Veh组(Nrf2-/-Veh组);④Nrf2-/-鼠CA组(Nrf2-/-CA组)(n=4).STZ注射后第4周,在小鼠背部建立直径6 mm的全层皮肤切除创口.Nrf2+/+CA组和Nrf2-/-CA组术后当日开始局部应用20 μL含4μmol/LCA的聚乙二醇400(polyethylene glycol400,PEG400),每隔1天干预直至第14天,收集创缘处皮肤,Nrf2+/+Veh组和Nrf2-/-Veh组采用20 μL PEG400(Vehicle,Veh)局部应用作为空白对照.术后2周内每隔1天监测皮肤创口愈合面积评估愈合速率.免疫组化染色对比各组创缘处皮肤组织Nrf2蛋白、下游靶蛋白HO-1和氧化应激损伤相关指标8-oxo-dG的表达水平.结果局部应用CA明显加速Nrf2+/+糖尿病小鼠创口愈合(P＜0.05),但是并不影响Nrf2-/-糖尿病小鼠创口愈合(P＞0.05).免疫组化示Nrf2+/+糖尿病溃疡小鼠局部应用CA后,其创缘皮肤Nrf2的表达水平[(2.42±0.29) vs (7.42±0.73),P＜0.05]和下游靶蛋白HO-1的表达水平[(5.92 ±0.36) vs (8.88 ±0.53),P＜0.05]显著增强,8-oxo-dG的表达水平则明显减少[(9.46 ±0.28)vs(8.46 ±0.23),P＜0.05].Nrf2-/-糖尿病小鼠创口局部外用CA后,其创缘处皮肤Nrf2、HO-1及8-oxo-dG的表达水平与Nrf2-/-Veh组相比并无明显变化.结论 局部应用CA通过激活糖尿病小鼠皮肤组织Nrf2通路,减轻氧化应激损伤,从而促进糖尿病创口愈合.