长期HBV携带者HBsAg和rHBcAg诱导的抗体表达

本文研究了36例长期HBV携带者PBMC，在体外应用HBsAg和rBHcAg诱导特异体抗体的产生。结果表明：（1）长期HBV携带者中有61％的患者也可产生抗－HBs，其含量与正常对照组比明显低下（P＜0．01），导致抗0－HBs低下的原因可能与过量抗原的抑制，免疫细胞水平的耐受或细胞因子网络平衡失调有关。（2）rHBcAg可以诱导PBMC产生抗－HBc，财时亦可诱导抗－HBc，同时亦可诱导抗－HBe的产生，这可能由于HBcAg和HBeAg在细胞识 水平存在交叉反应。     

慢性HBV感染患者HBsAg亚型分析

对包括慢性肝炎、肝炎肝硬变和原发性肝癌在内的１００例慢性ＨＢＶ感染者作了ＨＢｓＡｇ亚型分析。结果显示，在这组病例中ａｄｒ亚型占６１％，ａｄｗ占３３％，ａｙｒ占２％，ａｄｗｒ占４％。ａｄｒ亚型有随年龄增长更占优势的趋向。ａｄｒ和ａｄｗｒ亚型感染者ＨＢｓＡｇ滴度较ａｄｗ组显著增高，且ｅ抗原阳性率亦较高。上述发现提示，具有ａｄｒ和ａｄｗｒ亚型的ＨＢＶ株可能具有较强的复制活性，不易被清除，从而导致受感染者     

乙肝患者HBV感染相关特异性miRNA筛选及其功能研究

目的寻找乙型肝炎病毒特异性的miRNA,并在体内验证找到的miRNA的功能,从而为阻断乙肝进一步发展提供新方法。方法利用miRNA芯片分析3对正常肝脏组织与慢性乙型肝炎组织的miRNA,寻找两者之间差异表达的miRNA。用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR,RT-PCR)在更多的组织标本中验证差异表达,确定有意义的miRNA。在鼠病毒性肝炎模型中通过静脉注射有意义的miRNA或anti-miRNA进行干预,同时刺激向肝癌方向转变,观察其病毒复制情况。结果与正常肝脏组织相比,慢性HBV病毒感染组织中表达上调的miRNA有8个,表达下调的miRNA有16个。miR-143在肝癌组织中的表达降低(P=0.0029);miR-520d-5p在肝癌组织中的表达提高(P=0.0320)。结论 miRNA在乙型肝炎的发生、发展中起重要作用,其功能的失调可能导致其最后发展成为肝硬化甚至肝癌,并且可以影响乙型肝炎治疗效果。     

PCR检测HBV—DNA对HBsAg无症状携带者传染性的监测

用多聚酶链反应和斑点杂交技术检测了５０例ＨＢｓＡｇ无症状携带者血清中ＨＢＶＤＮＡ，检出率分别为５０％和５８％。抗－ＨＢｃ、抗－ＨＢｅ和ＨＢｅＡｇ阳性者ＨＢＶＤＮＡ的检出率高于阴性者．单项ＨＢｓＡｇ阳性无症携带者ＨＢＶＤＮＡ在血中呈不同程度地波动，其排毒情况无明显规律可循。     

HBsAg携带者孕妇胎盘中HBsAg和HBcAg的检测

应用免疫组织化学ABC法,在乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)携带者足月分娩的胎盘组织细胞中检测出HB-sAg和乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg).国外仅有数篇报道,但结果相互矛盾.而国内尚未见有报道.1 材料和方法 52例HBsAg携带者孕妇足月分娩胎盘     

HBV聚合酶活性区变异与临床病情变化及HBsAg阳性相关性

研究乙型肝炎病毒(HBV)聚合酶活性区变异与临床病情变化及乙肝表面抗原(HBsAg)阳性的相关性。290例慢性乙型肝炎患者,HBV聚合酶活性区变异140例,其余无变异;分析HBV聚合酶活性区变异与肝功能及HBsAg阳性表达的关系。变异组患者的天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALB)和总胆红素(TBIL)肝功能指标水平显著高于无变异组(P＜0.05);变异组肝细胞内HBsAg阳性率显著低于无变异组(P<0.05);变异组HBsAg以浆核型为主,约占阳性表达患者的47.25%,无变异组以核型为主,约占阳性表达患者的46.15%,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。HBV聚合酶活性区变异的乙肝患者临床病情更重,HBV表面抗原阳性表达比例低。     

Screening host cell miRNA regulating HBV proliferation and HBsAg expression

目的 筛选调节乙型肝炎病毒( HBV)增殖和乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)产生的宿主细胞的miRNA.方法 用328种miRNA的反义链转染HepG2 2.2.15细胞,72 h收获上清,MTS检测细胞的增殖活性,ELISA检测表面抗原和e抗原的表达水平,实时定量PCR检测其中HBV DNA的拷贝数.构建筛选到的miRNA的过表达载体,转染HepG22.2.15细胞,也分别用MTS、ELISA和实时定量PCR进行检测.结果 miR-199a-3pASO、miR-210ASO和miR-185ASO促进了HBsAg产生和HBV增殖(P ＜0.05);miR-199a-3p、miR-210、miR-185的过表达,分别抑制了HBsAg的产生和HBV的增殖(P＜0.05);miR-199a-3p、miR-210和miR-185的ASO转染组与对照组相比,分别降低了细胞内miR-199a-3p、miR-210和miR-185的表达水平(P＜0.05);miR-199a-3p、miR-210和miR-185的过表达载体转染组与对照组相比,分别增加了细胞内miR-199a-3p、miR-210和miR-185的表达水平(P＜0.05).结论 在没有对细胞的增殖活性产生影响的情况下,miR-199a-3p、miR-210和miR-185抑制了HBV表面抗原的产生和HBV的增殖,miRNA作为病毒与宿主细胞相互作用中的调节因子,在HBV的生命活动周期中具有重要作用.     

Kinetics of serum HBsAg in Chinese patients with chronic HBV infection with long-term adefovir dipivoxil treatment

Background Knowledge on Hepatitis B surface antigen （HBsAg） kinetics in chronic hepatitis B （CHB） patients with longterm adefovir dipivoxil （ADV） treatment is limited.The aims of this study were to investigate HBsAg kinetics in patients with chronic hepatitis B virus （HBV） infection treated with long-term ADV and to evaluate different characteristics between patients with and without HBsAg loss.Methods We retrospectively evaluated HBsAg kinetics in 24 Chinese patients with chronic HBV infection who achieved continuous virologic suppression during ADV therapy.HBV genotype was determined at baseline.Liver biochemistry,hepatitis B e antigen status,serum HBV DNA,and HBsAg levels were measured at baseline,6 months,and once every year thereafter.Results Of these 24 patients,3,1,and 20 patients were followed up for 3,5,and 6 years,respectively.Baseline serum HBsAg level had a moderate correlation with baseline HBV DNA level （r=0.52,P=0.01）.The median rate of HBsAg reduction during the therapy period was 0.08 Ig IU·ml-1·y-1.Baseline serum HBsAg level was significantly higher than other time points （P ranges from 0.046 to 0.002）.The HBsAg reduction rate during the first year was similar to that in other years （P〉0.05）.The HBsAg reduction rate during the first year in patients with eventual HBsAg loss was significantly faster than that in patients without HBsAg loss （P=0.005）.Conclusions Serum HBsAg levels in Chinese CHB patients receiving long-term ADV demonstrated a gradual reduction.Patients with eventual HBsAg loss had a significantly faster HBsAg reduction rate during the first year than those without HBsAg loss.     

HBV感染各阶段血清乙肝表面抗原与HBV DNA及年龄的相关性分析

目的:探析未接受抗病毒干预治疗的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者各阶段的血清乙肝表面抗原(HBsAg)定量值与HBV DNA及患者年龄的关系.方法:2015年3月~2016年12月在我院就诊但未接受抗病毒治疗的498例慢性HBV感染患者的临床资料.根据临床诊断结果,将入选者分成非活动性HBsAg携带组(145例)、慢性HBV携带组(57例)、乙型肝炎E抗原(HBeAg)(+)慢性乙型肝炎(CHB)组(151例)、HBeAg(-)CHB组(65例)、HBeAg(-)乙肝肝硬化(LC-B)组(43例)和HBeAg(+)LC-B组(37例)6组.对血清HBsAg定量与血清HBV DNA及患者年龄进行相关性分析.结果:各组间的HBsAg定量值有统计学差异,其中HBeAg(-)、(+)的CHB组间HBsAg水平差异显著.除外非活动性HBsAg携带的HBV感染者的HBV DNA与血清HBsAg定量值呈显著正相关性.HBV感染者的血清HBsAg定量值与其年龄间存在显著负相关性.年龄>40岁的非活动性HBsAg携带者血清HBsAg定量值明显低于同年龄段的HBeAg(-)CHB患者.结论:HBV感染各阶段的血清HBsAg水平各不相同,该水平与患者的年龄及HBV DNA关系密切,是区分年龄超过40岁的非活动性HBsAg携带者与HBeAg(-)CHB患者的一个重要预测指标.     

丁型肝炎病人肝组织HDAg与HBsAg/HBcAg和HBV DNA表达及关系

目的：探讨丁型肝炎病人肝组织中ＨＤＡｇ与ＨＢｓＡｇ／ＨＢｃＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ表达及关系。方法：应用免疫组化双重染色和原位杂交,检测７９例丁型肝炎病人肝组织ＨＤＡｇ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ表达,以５２例乙型肝炎作对照。结果：丁型肝炎ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ检出率（８１％、７１％）较乙型肝炎（９４％、９２％）低（Ｐ〈０．０５或０．０１）。ＨＤＡｇ以肝细胞核表达为主,ＨＢｓＡｇ以肝细胞浆表达     

原代培养人肝细胞体外乙型肝炎病毒感染和乙型肝炎病毒表面抗原黏附模型初探

目的研究建立人肝细胞体外乙型肝炎病毒（HBV）感染模型和乙型肝炎表面抗原（HBsAg）黏附模型，为后期研究小分子抗体Fab的作用打下基础。方法体外原代培养人肝细胞，对人原代肝细胞进行HBsAg黏附实验及HBV感染实验。采用正常人胎肝细胞系（L-02）及鼠原代肝细胞进行实验对照。倒置相差显微镜下观察细胞形态，生化法检测其白蛋白分泌功能。免疫组化法检测HBsAg黏附情况和HBV感染肝细胞内HBsAg的表达。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肝细胞感染HBV后HBsAg的持续表达。PCR检测肝细胞内HBV复制中间体-闭合环状双链DNA（cccDNA）。结果人原代肝细胞体外培养达2周以上。HBsAg黏附实验检测到HBsAg可黏附于人原代肝细胞、L-02、鼠原代肝细胞胞膜。HBV体外仅感染人原代肝细胞，从第2天起即可检测到细胞培养上清中存在HBsAg，并持续到观察结束第16天，免疫组化检测人原代肝细胞内HBsAg呈阳性；PCR检测到人原代肝细胞内存在HBV—cccDNA，而L—02及鼠原代肝细胞实验检测结果均为阴性。结论人原代肝细胞体外分离培养成功，HBsAg黏附和HBV感染模型初步建立于人原代肝细胞。     

HBV DNA原位杂交与HBsAg免疫金银法双标记技术

用生物素标记HBV DNA探针与免疫金银法相结合,对5例慢性活动性乙型肝炎肝组织进行了原位杂交与免疫组化双染色。结果显示,在同一组织切片上,HBV DNA阳性物(鲜红色)与HBsAg阳性物(黑色)对比鲜明,背景清晰,组织结构完整,方法稳定。文中讨论了影响双染色的几个重要因素。     

168例HBsAg阳性患者HBV基因型分布及临床表现分析

目的研究乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布及临床表现。方法选择上海市杨浦安图医院2010年1月至2013年8月收治的168例HBsAg阳性患者为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应方式进行HBV基因型的筛选,并比较不同基因型患者的肝炎严重程度、肝功能指标及肝纤维化指标。结果 HBV-B型占78.57%,C型占11.43%;HBV-B型患者的炎症活动程度、肝纤维化程度均弱于HBV-C型患者,HBV-B型患者与HBV-C型患者比较,谷草转氨酶[(34.8±6.8)U/L vs(58.2±9.3)U/L]、谷丙转氨酶[(32.9±5.7)U/L vs(54.7±8.9)U/L]、碱性磷酸酶[(83.8±11.4)U/L vs(153.9±18.2)U/L]、γ-谷氨酰转肽酶[(32.7±7.4)U/L vs(78.2±11.3)U/L]、总胆红素[(21.3±4.4)μmol/L vs(35.2±8.5)μmol/L]、HBV-DNA拷贝数[(11.5±3.2)×106vs(32.8±6.2)×106]、血清透明质酸[(60.8±10.3)μg/L vs(114.2±17.4)μg/L]、层粘连蛋白[(109.3±14.6)μg/L vs(188.3±20.4)μg/L]、Ⅳ型胶原[(72.4±11.8)μg/L vs(145.4±18.9)μg/L]、Ⅲ型胶原N端肽[(10.2±2.6)μg/L vs(17.9±4.1)μg/L]均低于HBV-C型患者。结论入组的HBsAg阳性患者中HBV基因型主要为B型和C型,且B型感染后的炎症活动程度、肝纤维化程度均较弱。     

无症状乙型肝炎病毒表面抗原携带者血清HBV复制指标的检测

对96例无症状HBsAg携带者(ASC)的血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)、DNA多聚酶(DNA P)、乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)和e系统作了检测,80例献血员作为正常对照。结果发现,ASC组HBV DNA阳性者22例(22.9％),其中e抗原阳性者HBV DNA检出率为45.8％(11/24),HBeAg阴性者为15.5％(11/71)。DNAP阳性率39.5％(38例)。HBcAg的阳性率最高达81.3％(78例),且与HBeAg、HBV DNA、DNA P活力间有显著的正相关性。表明血清HBV DNA与HBeAg关系密切。提示血清HBcAg的检测,可作为判断HBV复制、ASC传染性的可靠指标。     

ECLIA定量检测HBsAg及HBeAg与HBV-DNA相关分析

目的探讨电化学免疫发光法(ECLIA)定量检测HBeAg和HBsAg,并分析与DNA(HBV-DNA)含量之间的相关性,为临床提供诊断治疗依据。方法筛选乙肝病人标本500份,以荧光定量PCR法检测HBV-DNA(以HBV-DNA>500 copies/ml为阳性),按DNA含量不同分9组,同步以ECLIA检测HBeAb、HBeAg、HBsAg。结果HBeAg的含量(IU/ml)与HBV-DNA的含量(copies/ml)成正相关(r=0.99),在HBV-DNA 5×102~1×106copies/ml时,HBV-DNA的阳性率比HBeAg高(P<0.05),在HBV-DNA大于1×106copies/ml时,HBV-DNA的阳性率与HBeAg相比差异无显著性(P>0.05);HBV-DNA在500~1×106copies/ml之间,HBeAb有较高的阳性率,并随着HBV-DNA含量增加而逐渐下降。HBsAg的含量COI(cut off index)与HBV-DNA含量呈负相关(r=-0.94)。结论ECLIA的HBeAg定量检查可指示病人的传染性强弱,但尚不是最可靠的指标;HBeAg阴性、HBeAb阳性不是传染性消失的可靠指标;HBsAg的定量检测意义不大。