高浓度氧暴露对N9小胶质细胞功能的影响

目的探讨常压高浓度氧暴露对N9小胶质细胞功能的影响。方法体外培养N9小胶质细胞,分别在900 ml/L高浓度氧中暴露2、6、12、16、24、48 h后(1)流式细胞术检测细胞存活率及凋亡率;(2)DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)含量的变化;(3)RT-PCR检测Toll样受体4(TLR4)mRNA表达变化;(4)ELISA检测N9细胞培养上清中IL-1β和TNF-α的含量;(5)免疫荧光化学染色检测TLR4蛋白的表达变化。结果流式细胞术结果示,细胞凋亡率在高氧暴露12 h后明显高于空气对照组(P<0.05),16 h达高峰(P<0.01);高氧暴露2 h后,细胞内ROS含量明显增加,呈一定时间依赖性;TLR4 mRNA及蛋白表达水平明显高于空气对照组(P<0.05);高氧暴露后细胞上清中TNF-α及IL-1β含量随暴露时间延长而增加,均在6 h开始升高,12~16 h达高峰(P<0.05),IL-1β增高较TNF-α更为明显。结论高氧暴露后N9小胶质细胞TLR4通路激活,产生大量神经毒性因子(ROS、IL-1β及TNF-α),细胞凋亡增加。     

不同氧糖剥夺时间和不同介质对N9 小胶质细胞活力的影响

目的研究不同氧糖剥夺(OGD)时间和不同介质对N9小胶质细胞活力的影响,以建立体外小胶质细胞的OGD模型。方法以平衡盐溶液(BSS)和无糖DMEM作为OGD介质,OGD 10、30和60 min并复氧复糖24 h后,倒置相差显微镜下观察N9小胶质细胞形态变化,四氮唑盐复合物(XTT)比色法检测细胞活力变化,比较分析不同OGD持续时间和不同介质产生的结果差异。结果氧糖剥夺/复氧复糖后,各OGD处理组不规则细胞比例增多,部分细胞发生皱缩,细胞轮廓不清,折光度较差,细胞密度减小。各BSS介质的OGD处理组与对照组相比,N9小胶质细胞的活力产生不同程度降低,差别均有统计学意义(P<0.01)。各OGD处理组相比,OGD 30 min组和OGD 60 min组细胞活力低于OGD 10 min组,差别有统计学意义(P<0.01)。各无糖DMEM介质的OGD处理组与对照组相比,N9小胶质细胞的活力产生不同程度降低,差别均有统计学意义(P<0.01),且随着OGD处理时间的延长,细胞活力逐渐减小,各OGD处理组间细胞活力差别有统计学意义(P<0.05)。OGD 10 min处理后,无糖DMEM介质组细胞活力比BSS介质组细胞活力高(P<0.01),OGD 30 min处理后,无糖DMEM介质组细胞活力仍比BSS介质组细胞活力高(P<0.05),OGD 60 min处理后,2组间差别无统计学意义(P>0.05)。结论 OGD处理后,N9小胶质细胞形态发生改变,细胞活力与OGD持续时间呈负相关,体外小胶质细胞的OGD模型制备成功。模型中,2种OGD介质对细胞活力影响的差别随着OGD处理时间的延长逐渐缩小并最终消失。     

常压高浓度氧治疗对脑缺血-再灌注大鼠星形胶质细胞活性的影响

目的 观察常压高浓度氧治疗(normobaric hyperoxia, NBO)对脑缺血-再灌注大鼠星形胶质细胞活化的标志物——胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)以及缝隙连接蛋白43(connexin 43, Cx43)表达的影响,初步探讨其作用机制。方法 将健康成年雄性SD大鼠15只(280~320 g)采用数字表法随机分为假手术组(Sham)、正常氧浓度组(Normoxia)和NBO组,应用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血1.5 h 再灌注24 h。Sham组和Normoxia组术后呼吸普通空气,NBO 组于缺血后5 min至再灌注前呼吸100%常压氧气。采用免疫荧光染色和Western blotting检测方法,研究NBO治疗对脑缺血皮质和基底节区星形胶质细胞GFAP和Cx43表达的影响。结果 免疫荧光结果显示:与Normoxia组相比,NBO组缺血侧皮质GFAP阳性细胞数目明显减少,细胞突起减少、荧光强度减弱。Western blotting法分析结果显示:与Normoxia组相比,NBO组皮质和基底节区GFAP水平均有所降低,其中皮质著降低(P<0.05),表达变化与免疫荧光结果一致;与Sham组相比,Normoxia组缺血侧皮质和基底节区Cx43水平均有所降低,其中缺血侧皮质Cx43表达显著减少(P<0.01);与Normoxia组相比,NBO组缺血皮质Cx43蛋白显著升高(P<0.01),NBO组缺血基底节区Cx43蛋白水平差异无统计学意义。结论 NBO治疗可能通过调节缺血侧皮质缝隙连接蛋白Cx43的表达水平来抑制脑缺血星形胶质细胞过度活化,从而实现脑神经保护作用。     

NLRX1对低氧诱导的小胶质细胞极化的影响

背景 研究表明急进海拔4000 m以上高原低氧地区脑水肿发生率明显增加,小胶质细胞极化介导许多中枢神经系统炎性反应过程,NOD样受体家族X1(NOD-like receptor family X1,NLRX1)蛋白是一种炎症反应的负性调控因子;目前,低氧及NLRX1对小胶质细胞极化的调节作用尚不清楚.目的 分析低氧对小胶质细胞极化和NLRX1蛋白表达的影响,探讨NLRX1是否参与了小胶质细胞极化.方法 将小鼠小胶质细胞BV-2按处理条件分为3组:对照组(21％O2,5％CO2,37℃),实验组(1％O2,5％CO2,37℃处理6 h、12 h、24 h、48 h),M1型极化阳性对照组(LPS 1μg/mL处理24 h).干扰NLRX1基因的BV-2细胞分为3组:BV-2 sh-Control常氧组(21％O2,5％CO2,37℃),BV-2 sh-Control低氧组(1％O2,5％CO237℃处理6 h、24 h、48 h),BV-2 sh-NLRX1组(1％O2,5％CO237℃处理6 h、24 h、48 h).相差显微镜观察细胞形态变化;CCK-8测定细胞活力;流式细胞术检测小胶质细胞极化分型;RT-PCR分析TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10及TGF-β的mRNA水平;蛋白免疫印迹测定NLRX1蛋白水平.结果 低氧培养及LPS处理可见细胞突起变多变短,阿米巴样形态细胞增多;细胞活力在低氧2 h和6 h组增加,而在低氧12 h、24 h、48 h及LPS组降低(F=459.1,P<0.05);与对照组相比,低氧培养48 h后,CD11b++CD86+M1型小胶质细胞百分比下降,CD11b++CD86++CD206+M1和M2混合型细胞百分比升高,CD11b++CD206+M2型小胶质细胞比例均无明显变化;随低氧时间延长,促炎因子TNF-α、IL-6、IL-1β基因的mRNA水平逐渐降低(P<0.05)并在24 h达到最低,而抗炎因子IL-10基因的mRNA水平升高(F=11.38,P<0.05);NLRX1蛋白水平随低氧时间延长而升高;与sh-Control常氧组相比,sh-Control低氧组IL-1βmRNA水平下降(P<0.05),IL-10 mRNA水平低氧处理6 h和48 h均上升;与sh-Control低氧组相比,sh-NLRX1组低氧处理后IL-1βmRNA水平在24 h和48 h下降(P<0.05),IL-10 mRNA水平低氧处理后均下降(P<0.05).结论 低氧可上调NLRX1蛋白水平并减少小胶质细胞M1型极化,该过程可能通过NLRX1下调抗炎因子介导.     

脂多糖对部分神经胶质细胞NgR表达的实验研究

目的:观察脂多糖诱导早产鼠小胶质细胞和少突胶质前体细胞NgR的表达及变化,了解NgR表达在TLR-4介导的神经胶质细胞释放炎性细胞因子中的作用。方法:采用振荡和差速贴壁法体外纯化培养MG和OPCs,分别用特异性抗体CD11b和O4做细胞鉴定;用实时荧光定量PCR检测各组MG、OPCs的NgR和MG的TLR-4基因表达情况,并用ELISA测各组TNF-α的含量。结果:LPS诱导后较其他对照组及处理组MG的TLR-4表达水平和MG、OPCs的NgR表达水平均增高,差异具有统计学意义(P<0.05),各组MG经LPS诱导后较其对照组及处理组的TNF-α的含量增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:细菌感染使MG和OPCs的NgR表达增高;脂多糖诱导小胶质细胞表达大量TLR-4需要NgR的介导;TLR-4可能存在上调NgR基因表达的作用。     

Toll样受体在视网膜缺血小胶质细胞激活过程中的作用

Toll样受体(TLRs)是模式识别受体的一类,其能够特异性识别病原体相关模式分子,激活TLRs通路,分泌促炎性细胞因子,从而引起神经细胞的变性损伤。视网膜缺血性损伤是多因素综合作用的结果,而近年的研究越来越重视激活的小胶质细胞在视网膜缺血损伤中的作用,激活的小胶质细胞通过TLRs介导炎症信号通路,诱导神经损伤,形成视网膜慢性炎症环境。而视网膜慢性炎症环境是糖尿病视网膜病变、青光眼等视网膜缺血性疾病的共同病理过程。未来可通过对TLRs所介导信号通路的深入研究,探寻潜在的治疗手段去抑制TLRs介导的炎症信号通路和小胶质细胞激活,从而减轻视网膜缺血性损伤的病理改变。     

丙泊酚对小胶质细胞炎症因子的影响及其机制研究

目的 探讨丙泊酚对小胶质细胞炎症因子的影响及其机制。方法 将小胶质BV-2 细胞分为对照组、丙泊酚组、脂多糖（LPS）组、LPS+ 丙泊酚组,对照组细胞加入PBS 液,丙泊酚组细胞加入丙泊酚30μmol/L,LPS 组细胞加入LPS 1μg/ml,LPS+ 丙泊酚组细胞加入丙泊酚30μmol/L+LPS 1μg/ml。采用MTT 比色实验测定细胞活性,采用酶联免疫吸附法测定细胞上清液中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,采用逆转录- 聚合酶链反应测定细胞p38MAPK 和TLR4mRNA 的表达,采用Western blot 检测细胞p38MAPK 和TLR4 蛋白表达量。结果 LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞活性低于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞活性高于LPS 组（P <0.05）;LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平高于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平低于LPS 组（P <0.05）;LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞p38MAPK、TLR4 mRNA 和蛋白表达量高于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚 组小胶质细胞p38MAPK、TLR4 mRNA 和蛋白表达量低于LPS 组（P <0.05）;丙泊酚组和对照组小胶质细胞各指标比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 丙泊酚能抑制小胶质细胞过度活化和炎症反应,其机制可能与丙泊酚可下调TLR4-p38MAPK 信号通路有关。     

小胶质细胞(MG) TLR 4介导T细胞获得性免疫炎症反应的机制

 目的 探讨以小胶质细胞(microglia,MG)为中心Toll样受体 4 (toll like receptor 4,TLR 4) 介导的T细胞获得性免疫炎症损伤机制在早产儿脑白质损伤中的作用。方法 分别分离纯化C3H/HeJ(tlr4基因缺失)小鼠和C57B/L (野生型) 小鼠脾脏CD4＋T细胞和大脑MG细胞并制作交互共培养模型。各组分别加以细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)为刺激因素,流式细胞术和细胞化学染色观察MG变化,检测CD4＋ T细胞增殖变化和ELISA方法检测其分泌功能;通过上调(LPS刺激)或下调TLR 4(tlr4基因缺失)表达对MG活化和共同免疫刺激因子MCH Ⅱ的影响及对CD4＋T细胞增殖分化及Th1/Th2极化方向的影响,阐明TLR 4在T细胞获得性免疫中的关键作用。结果 显微镜下观察,LPS刺激后tlr4基因缺失小鼠MG细胞胞体较小,突起细长,仍处于静息状态;相反,野生型组LPS刺激后出现较明显的细胞体积变大、胞体变大显圆满,突起增加呈分支状。LPS活化的MG其TLR 4和MCH Ⅱ蛋白表达显著上调与tlr4基因缺失小鼠比较有显著性差异(P<0.01)。此外,LPS刺激活化的CD4+ T淋巴细胞增殖明显,且伴有Th1型细胞因子显著升高和Th2型细胞因子的显著下降,与tlr4基因缺失小鼠比较均有显著性差异(P< 0.01)。TLR-4表达与CD4＋T细胞Th1细胞因子浓度间具有显著相关性(P<0.01)。结论 TLR-4介导MG活化在固有免疫和获得性免疫中发挥桥梁作用,并由此提出由Th1/Th2偏移向TLR4、Th1偏移的新的早产儿脑白质损伤模式。     

RSV感染小胶质细胞活化Toll样受体3、7介导炎性反应的初步研究

目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠小胶质细胞(BV2)后,Toll样受体3(TLR3)和Toll样受体7(TLR7)的活化及其介导的炎性反应.方法 ①RSV体外感染BV2,利用免疫荧光技术分别在12、24和36 h检测细胞内RSV-F蛋白.②分别于感染4、8、12、16、24和36 h收集细胞,以未感染细胞作为...     

Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺调节脑缺血后小胶质细胞激活的作用研究

【目的】 脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury, CIRI)是指因脑缺血致脑组织坏死前,闭塞的脑血管再通后脑损伤进一步加重的现象,是引起多种脑部疾病的重要病理生理基础。小胶质细胞被证实是中枢神经系统的免疫细胞,有吞噬、抗原提呈和表达大量免疫相关因子的功能,脑缺血时小胶质细胞过度活化,释放大量自由基、炎症因子和前炎症物质,对中枢神经系统造成过多的病理损害,促使神经细胞的死亡,加重缺血性中风的损伤。Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺(N15)是油酰乙醇胺(oleoylethanolamide, OEA)的类似物,前期我们已经建立了稳定的小鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,同时发现N15治疗后可以明显降低小鼠脑缺血后的神经功能损伤、减小脑梗死体积、减轻脑水肿和血脑屏障的通透性,降低脑缺血后损伤侧皮层炎症因子TNF-α、IL-6蛋白的表达。前期研究中已证明N15确切的脑缺血保护作用,但相关机制尚不清楚。在此课题中,我们利用线栓法建立小鼠局灶性脑缺血(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,研究N15对脑缺血再灌注小鼠的保护作用。 【方法】 利用免疫组化和蛋白质印迹法观察N15对脑缺血后小胶质细胞活化及分泌的前炎症细胞因子和细胞毒性介质的作用,并考察MAPKs(ERK、JNK和p38)、NF-κB、Nrf2、HO-1、NQO1等信号转导通路在N15调节小胶质细胞活化过程中的调控作用。以小胶质细胞活化及其释放的因子诱导的炎症反应为靶点,探索N15抗脑缺血新的作用机制。我们的研究将为N15开发成为新一代抗脑缺血药物奠定理论基础。     

大黄酚对LPS诱导小胶质细胞炎性因子分泌的影响

[目的]抑制小胶质细胞的过度活化,对中风、神经退行性病变等疾病的治疗有重要意义。考察大黄酚对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞炎性因子分泌的影响。[方法]培养小胶质细胞细胞株,检测大黄酚对小胶质细胞活力及LPS诱导的小胶质细胞一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)产生的影响。[结果]与LPS相比,大黄酚可以抑制NO、TNF-α的分泌。[结论]大黄酚可以抑制LPS诱导小胶质细胞炎性因子的分泌。     

脂多糖刺激N9小胶质细胞释放炎性因子的时间和剂量效应

目的研究脂多糖刺激N9小胶质细胞释放炎性因子的时间和剂量效应。方法不同剂量脂多糖刺激N9小胶质细胞,在不同时间点,酶联免疫吸附试验检测培养基中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,硝酸还原酶法检测培养基中一氧化氮(NO)水平,Western blot检测细胞质和细胞核中核转录因子-κB(NF-κB)蛋白水平。结果刺激6、12 h后,各脂多糖组培养基中IL-1β和NO水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),刺激24 h后1 000、10 000μg.L-1脂多糖组培养基中的IL-1β和NO水平均较对照组升高(P<0.01)。刺激30 min后,各脂多糖组培养基中TNF-α水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),刺激6、24 h后,各脂多糖组培养基中TNF-α水平均较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.01),且1 000μg.L-1脂多糖组TNF-α水平最高。Westernblot检测结果显示,各脂多糖组细胞质和细胞核内NF-κB蛋白水平较对照组显著增多(P<0.01),其中1 000μg.L-1脂多糖组细胞质和细胞核中NF-κB蛋白水平最高。结论 1 000μg.L-1脂多糖是激活N9小胶质细胞诱发其炎症反应的最佳剂量,脂多糖作用6 h主要促进TNF-α的释放,作用24 h后则IL-1β和NO的释放明显增加。     

大鼠皮层小胶质细胞氧糖剥夺模型的制备

目的培养Wistar大鼠皮层小胶质细胞,建立氧糖剥夺模型。方法培养Wistar大鼠皮层小胶质细胞,应用OX42抗体进行鉴定,缺氧培养小胶质细胞后测定LDH漏出率。结果小胶质细胞培养至第8天OX42染色阳性细胞为（97.33±2.15）%;氧糖剥夺60min时,LDH漏出率明显增加（P〈0.05）。结论成功培养大鼠皮层小胶质细胞,在培养第8天可制备氧糖剥夺模型。     

代谢重编程对小胶质细胞功能的调节作用

免疫细胞通过改变营养物质的摄取和代谢酶的活性,以支持免疫激活的代谢需求,这一过程被称为免疫细胞的代谢重编程。小胶质细胞是脑内重要的免疫细胞之一,其表达大多数能源代谢途径底物的基因。越来越多研究证实小胶质细胞代谢具有高度灵活性,且调控代谢可调节小胶质细胞免疫功能,进而影响神经炎性疾病的发展与转归。本文综述了小胶质细胞在不同微环境下的代谢特征,以及小胶质细胞代谢重编程对其免疫功能的调节及机制。     

脑出血后的炎症机制

炎症可以加重脑出血后的继发性损伤,并在其中发挥重要作用。脑出血后,血肿成分通过激活小胶质细胞触发炎性通路。活化的小胶质细胞释放促炎性细胞因子和炎症趋化因子来募集周围的炎性细胞。渗入的炎性细胞和小胶质细胞释放炎性因子,最终导致细胞死亡。死亡的细胞释放危险相关分子,加重炎症反应,最终导致脑水肿和神经功能障碍。该文对脑出血后的炎症机制及其最新研究进展予以综述,以期发现脑出血新的治疗靶点。     

氧糖剥夺对小鼠小胶质细胞NKG2D受体及其配体表达的影响

目的 探究自然杀伤细胞活化受体（NKG2D）在氧糖剥夺损伤小胶质细胞中的表达变化及炎症反应中的潜在作用。方法 建立小鼠神经元细胞HT22氧糖剥夺(OGD)模型,造模19小时后复氧复糖,分别收集正常条件培养基(Control)和OGD培养基(Model)刺激小鼠BV2小胶质细胞。CCK-8法检测HT22和BV2细胞活性;qPCR检测BV2细胞中NKG2D受体信号通路及炎症因子表达;ELISA法检测BV2细胞培养上清中炎症因子含量。结果 OGD可介导HT22神经元细胞存活率明显下降（P＜0.01）,但OGD上清对BV2细胞活性无明显影响（P＞0.05）。与Control组比较, NKG2D受体及其H60配体、接头蛋白DAP10的mRNA表达水平明显上升（P＜0.01）,但RAE-1与MULT1配体未见明显变化（P＞0.05）;同时,肿瘤坏死因子（TNF-α）在Model组BV2细胞中的mRNA水平及培养基中的蛋白含量均明显上升（P＜0.01）。结论 氧糖剥夺可诱导BV2细胞H60/NKG2D、下游效应器DAP10及炎症因子表达。提示NKG2D受体信号通路可能在脑缺血后小胶质细胞的炎症反应中发挥重要作用。     

小胶质细胞与阿尔茨海默病神经炎症的关系研究进展

查阅相关文献,从神经炎症与阿尔茨海默病（AD）的关系、小胶质细胞与AD神经炎症的关系两方面概述小胶质细胞与AD的作用及相关机制。认为小胶质细胞是参与介导神经炎症的重要靶点,因此,要明确发挥小胶质细胞活化后的神经保护作用,使其能够及时清除β淀粉样蛋白（Aβ）和Tau蛋白,保护神经元免受伤害,为临床治疗AD提供参考。     

探索全氟辛烷磺酸对HAPI小胶质细胞炎症反应的影响

目的：探讨全氟辛烷磺酸(perfluorooctane sulfonate,PFOS)对HAPI小胶质细胞的毒性反应及作用机制。方法：用20 nmol/L PFOS处理HAPI小胶质细胞6、12 h后;采用细胞免疫荧光检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的表达;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)的分泌量。结果：细胞免疫荧光显示 HAPI小胶质细胞在PFOS处理后,ROS的表达显著增加(P＜0.05);ELISA检测显示TNF-α的分泌量增加并达到(81.00±2.38) pg/mL,而对照组TNF-α为(22.00±1.63) pg/mL。结论：PFOS可以引起HAPI小胶质细胞产生氧化应激并分泌TNF-α。     

白细胞介素-4对原代星形胶质细胞炎症因子的影响

目的：探讨白细胞介素‐4（IL‐4）对星形胶质细胞炎症因子释放的影响。方法选取新生1～2 d的C57乳鼠,取大脑皮层制备原代星形胶质细胞,传代3次,检测星形胶质细胞纯度,IL‐4刺激后,用Q‐PCR来检测多种炎症因子的释放。结果原代培养的星形胶质细胞纯度高达95％,用IL‐4刺激后,抗炎因子A RG1、CD206、TGFβ、IFNβ、IL‐10表达升高,促炎因子 TNFα、IL‐6表达降低。结论 IL‐4对星形胶质细胞抗炎因子的分泌有促进作用,对促炎因子的分泌有抑制作用。