兔眼角膜成纤维细胞原代培养

目的:建立眼角膜成纤维细胞体外培养的方法。方法:采用全角膜组织培养法培养兔角膜成纤维细胞。结果:在培养皿中培养1天后细胞开始贴壁,6天有新生细胞分出,形成梭形的成纤维细胞。传代细胞经4-6天可形成密集的成纤维细胞,细胞呈纤维状,呈漩涡形排列,排列整齐,局部细胞相互平行,第4、5代生长情况良好,细胞生长旺盛,细胞呈密集漩涡形排列。结论:眼角膜成纤维细胞全角膜组织培养法是可行的。     

人子宫旁韧带成纤维细胞原代培养的初步研究

目的:初步探索和建立人子宫旁韧带成纤维细胞原代培养的方法,为盆腔器官脱垂的基础研究提供成熟的体外人盆底成纤维细胞系。方法:临床搜集因盆腔器官脱垂(POP)或非POP的良性妇科疾病而行子宫切除患者的子宫旁韧带(包括主韧带和骶韧带),组织剪碎后采用改良的Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶消化法进行原代培养,待细胞长至贴满培养瓶底面80%以上时,消化传代,对所培养的成纤维细胞进行形态学观察及免疫荧光鉴定其来源。结果:原代培养第3-4天开始,可见有单个成纤维细胞迁出、生长,7-10d时可见少部分细胞逐渐贴壁形成较小的成纤维细胞团,第25天左右多个细胞团生长中心爬出的成纤维细胞互相连接聚集成片,铺满培养瓶底;采用免疫组化染色进行细胞鉴定,细胞波形蛋白表达阳性,角蛋白表达阴性,证实其为成纤维细胞。结论:本研究确立了体外人子宫旁韧带成纤维细胞原代培养,为后续研究POP发病机制提供成熟的体外宫旁韧带成纤维细胞。     

酶消化组织块法原代培养人牙周膜成纤维细胞的初步研究

目的 提高人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPIF)原代培养的成功率,快速建立体外细胞研究模型。方法 采取组织块与酶消化相结合的方法处理牙周膜组织块,获取细胞;用形态学、免疫细胞化学染色等方法鉴定细胞来源,通过生长曲线的测定研究体外细胞生长特性。结果 原代培养成功率为77．8％。获得的细胞呈梭形,抗波形丝蛋白染色呈阳性,抗角蛋白染色呈阴性,符合人牙周膜成纤维细胞的形态学特征和生物学特性,生长良好。结论 酶消化组织块法可显著提高人牙周膜成纤维细胞原代培养成功率,方法可行。     

组织贴壁法原代培养人皮肤瘢痕成纤维细胞

目的：探索和建立可靠的人皮肤瘢痕成纤维细胞培养方法,为皮肤瘢痕体外研究提供平台。方法：采用组织块贴壁法进行瘢痕成纤维细胞的原代培养,使用含10%胎牛血清的DMEM培养基,37℃,CO2浓度为5%,饱和湿度下培养。结果：皮肤瘢痕原代成纤维细胞培养成功,18d～20d可传第一代,以后每7d～10d可传一代,细胞形态为长梭形。结论：培养出的人皮肤瘢痕成纤维细胞可用作体外实验研究。     

新生大鼠成纤维细胞原代培养

目的探讨新生sD大鼠成纤维细胞的培养方法。方法采用胰酶消化法和组织块贴壁法原代培养成纤堆细胞。采用HE染色及波形蛋白（Vimentin）免疫细胞化学染色对培养细胞进行鉴定。结果两种方法均能培养出成纤维细胞,其中酶消化法一次性可获得较多细胞,但细胞状态较差,贴壁慢,生长慢;组织块贴壁法短时间内可长出大量成纤维细胞,一周即可传代。HE染色后倒置相差显微镜下观察细胞形态典型,免疫细胞化学染色结果显示Vimentin呈阳性反应。结论组织块贴壁培养法是获取成纤维细胞简单,可行,快速的方法。     

不同口腔组织来源成纤维细胞的生物学特性比较

目的:初步探讨口腔不同组织来源的成纤维细胞生物学特性的差异,为深入研究口腔癌相关成纤维细胞(CAFs)的生物学行为奠定基础。方法:用组织块培养法获得原代CAFs和正常粘膜成纤维细胞(NMFs),0.25%胰蛋白酶消化传代和纯化细胞;通过形态学观察和免疫细胞化学染色对口腔CAFs和NMFs进行鉴定;采用半定量RT-PCR检测口腔CAFs和NMFs 4种基因的表达。结果:获得第三代纯化口腔CAFs和NMFs,CAFs表达Vimentin和α-SMA,NMFs只表达Vimentin,二者均不表达Cytokeratin;二者的形态、生长方式、生长速度明显有差异,与NMFs相比,口腔CAFs体积大,细胞呈长梭形,胞浆丰满,核圆形或椭圆形一侧有切迹,杂乱排列,生长速度快;半定量RT-PCR结果显示,口腔CAFs表达不同水平的VEGF、TGF-β1、MMP-9、Tenascin-C,而NMFs均不表达。结论:口腔CAFs的形态和生长速度改变以及口腔CAFs过表达上述4种基因可能是口腔CAFs与口腔癌细胞相互作用所致,为口腔癌细胞的生存和发展提供了有利的微环境。     

肿瘤相关成纤维细胞在乳腺癌中的研究进展

乳腺癌是一种具有异质性的全身性疾病。已知肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)是肿瘤微环境中最重要的异质细胞群,其与乳腺癌的进展呈正相关。CAFs存在多种表型和功能性群体,这可能与其自身高度的异质性有关。作为肿瘤微环境的重要组成部分,CAFs在乳腺癌进展中起主导作用。CAFs通过分泌多种细胞因子及外泌体参与上皮-间充质转化及细胞外基质重构,也可通过激活多种相关信号通路促进乳腺癌细胞的代谢、生长、侵袭、进展、转移和耐药等,因此以CAFs为靶标进行抗肿瘤治疗具有良好的应用前景。     

体外胃癌间质成纤维细胞模型建立和生物学特性初步研究

目的：采用原代培养胃间质成纤维细胞（ human gastric mucosal fibroblasts ,HGMF）,构建体外胃癌间质成纤维细胞模型,研究其生物学特性。方法将调整培养条件的胃癌细胞系MKN-45的培养上清液加入HGMF中培养,使其发生转化。MTT法检测其细胞增殖,ELISA方法测定其肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）、转化生长因子-β1（transforming growth factor beta 1,TGF-β1）、趋化因子9（chemokine ligand 9,CXCL9）、趋化因子5（chemokine ligand 5,CCL5）的表达变化,RT-PCR检测其端粒酶活性, BSA法检测蛋白合成能力。结果胃癌细胞培养上清液与HGMF共培养可使其发生转化,转化HGMF细胞增殖能力（0．860±0．055）较HGMF（0．639±0．074）增强,差异有统计学意义（P＜0．05）,HGF、TGF-β1、CCL5和CXCL9表达增强,差异有统计学意义（P＜0．01）,端粒酶活性增高,差异有统计学意义（P＜0．01）,蛋白质合成能力增强,差异有统计学意义（P＜0．01）。结论转化成纤维细胞与亲代细胞相比具有更强的生物学活性和分裂活性,蛋白质合成增强,能表达和分泌更多的与胃癌细胞生长相关的生长因子和趋化因子。     

人皮肤成纤维细胞原代培养及生物学特性

目的 探索和建立人皮肤成纤维细胞原代培养的方法,为皮肤成纤维细胞在临床医学中的应用提供可靠的科学依据.方法 胰蛋白酶消化法分离培养人皮肤成纤维细胞;细胞生长曲线及MTT法测定细胞增殖能力;流式细胞仪测定细胞生长周期及细胞增殖指数;倒置显微镜下观察成纤维细胞生长状态;HE染色观察细胞爬片下的形态及着色;免疫组织化学染色观察成纤维细胞中间丝波形蛋白;电子显微镜下观察成纤维细胞超微结构,结果体外用胰蛋白酶消化法建立了人皮肤成纤维细胞;传5代内细胞及传5代内冻存复苏后人皮肤成纤维细胞增殖能力均很强;倒置镜下观察、HE染色、波形蛋白免疫组化染色及电镜下观察鉴定培养细胞的形态及生物学特性符合成纤维细胞.结论 本研究确立了体外人皮肤成纤维细胞原代培养.     

不同组织来源的成纤维细胞的生物学特性比较

目的 探讨来自政治家皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织的成纤维细胞的生物学特性。方法 对三种组织均采用组织块法进行细胞的原代培养,采用胰蛋白酶消化传代,分别利用绘制细胞生长曲线,^H-胸腺嘧啶掺入及^3H-脯氨酸掺入等方法观察细胞的增殖,DNA合成代谢及胶原合成等情况。并比较它们之间的差异。结果 瘢痕疙瘩成纤维细胞在细胞增殖、DNA合成代谢及胶原合成量等方面均明显高于正常皮肤及增生性瘢痕组织来源的成纤维细胞。后两者之间有一定区别但无统计学意义。结论 不同组织来源的成纤维细胞其生物学行为亦有所区别,因此,在进行实验研究时应有一定的针对性。     

Biological characteristics of fibroblasts primarily cultured form breast precancerosis

目的 比较乳腺导管不典型增生成纤维细胞(atypical intraductal hyperplasia fibroblasts,AFs)与正常乳腺成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)、乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)在生物学特征上的差异.方法 采用Ⅰ型胶原酶法分离并培养AFs、NFs和CAFs,免疫细胞荧光化学检测其粘连蛋白(fibronectin,FN)表达以鉴定细胞纯度.比较3种细胞的细胞生长曲线、细胞周期和周期蛋白cyclin D1、p21wafl及p53的变化.结果 获得并鉴定了NFs、AFs、CAFs;其生长速度依次增加(P＜0.05),细胞周期S期百分比(8.24±2.47)、(16.94 ±4.77)、(33.31±7.90)依次增大(P＜0.05);与NFs相比,AFs周期蛋白cyclin D1表达增加(P＜0.05),p21wafl和p53蛋白表达降低(P＜0.05);与CAFs相比,AFs的周期蛋白cyclin D1没有升高(P＜0.05),p21 wafl蛋白和p53蛋白表达更强(P＜0.05).结论 AFs相对于NFs和CAFs,细胞生长增殖具有特异性,这种变化提示乳腺肿瘤的癌前病变阶段AFs可能是NFs逐步向CAFs转变的过渡阶段.     

正常人皮肤成纤维细胞不同培养条件下的生物学特性

目的 观察成纤维细胞在不同培养条件下生长,增殖,代谢及蛋白质合成等情况,探讨成纤维细胞的最佳培养模型。方法 将正常皮肤中的成纤维细胞（NsFb）分离出来并进行原代及继代培养,之后建立不同的成纤维细胞培养系统,分别利用绘制细胞生长曲线,^3H-胸腺嘧啶（^3H-TdR）掺入及^3H-脯氨酸掺入等方法观察细胞的增殖,DNA代谢及胶原合成等情况,研究细胞在不同条件下的生物学特性。结果 成纤维细胞在单层及纤维蛋白胶中培养时细胞的增殖,代谢及蛋白质合成等生物学功能均明显强于两种胶原凝胶中培养时的情况。结论 以纤维蛋白胶为支架的三维培养系统能更好地模拟生理条件下创面愈合时成纤维细胞的生物学特性。     

Biological characteristics of breast carcinomas with neuroendocrine cell differentiation

Background The aim of this study was to investigate DNA content and expression of c-erbB-2, PS2, and prostate-specific antigen (PSA) proteins in breast carcinomas with neuroendocrine (NE) cell differentiation.
Methods Chromogranin, c-erbB-2, PS2, and PSA in 131 samples of breast cancer were detected immunohistochemically. Classic Feulgen staining image analysis techniques were used to quantify DNA content in 81 of the breast cancer samples.
Results The c-erbB-2 positive rate in breast carcinoma samples containing neuroendocrine cells was 37.5% and the rate of high expression of c-erbB-2 (++ or +++) was 33.3%, both significantly lower than that in breast carcinomas without neuroendocrine cells (62.6% and 68.7%, respectively, P<0.05). The rates of positive PS2 and PSA expression in breast carcinoma samples containing neuroendocrine cells were 72.2% and 55.0%, respectively, both significantly higher than that in breast carcinoma samples without neuroendocrine cells (45.0% and 16.4%, respectively, P<0.05). In NE (+) samples, the integral optical density, DNA index, DNA stemline peak, > 5c aneuploidy cells, and rate of aneuploidy among cells were all lower than that in NE (-) breast carcinomas (P<0.01). In NE (+) grade I or II breast carcinomas, these indices were also all lower than that in the NE (-) breast carcinoma samples (P<0.01).
Conclusion Breast carcinomas with neuroendocrine differentiation have a lower rate of malignancy. Neuroendocrine differentiation could serve as a prognostic marker in clinical practice.     

Caveolin-1在乳腺癌间质中的表达及与预后的关系

目的 检测Cav-1在乳腺癌间质中的表达,探讨其与临床病理学指标,乳腺癌分子亚型及与三阴型乳腺癌预后的关系.方法 选取258例有完整随访资料的乳腺癌切除标本,用免疫组织化学方法 检测间质中CAF细胞的Cav-1表达,与肿瘤临床T分期、病理分级、淋巴结转移情况及肿瘤细胞分子标记物(ER、PR、HER-2、P53、PCNA)的表达情况进行相关性分析,同时分析在Luminal A型、Luminal B型、HER-2型和三阴型中Cav-1的差异性表达,并在三阴型乳腺癌中根据Cav-1的表达进行生存分析.结果 258例乳腺病例中,78例间质Cav-1的阴性/微弱阳性表达,94例中等阳性表达,86例强阳性表达.肿瘤分期越高,Cav-1的表达的阳性率越低,T1、T2及T3~T4各组之间差异有显著性意义(P<0.05).有淋巴结转移的肿瘤比无淋巴结转移的肿瘤Cav-1表达水平低,二者具有显著性差异(P<0.05).与患者年龄、肿瘤大小、ER、PR和HER-2的状态无关.三阴型乳腺癌与Luminal A型、B型、HER-2型相比, Cav-1的表达明显降低(P<0.05),而A型、B型、HER-2型之间无明显差异.三阴型乳腺癌间质中Cav-1(-)、Cav-1(+)、Cav-1(++)三组生存率差异有显著性(P<0.05),Cav-1的表达缺失是三阴型乳腺癌预后差的独立预后指标(HR=1.583 95%CI=1.031-2.431,P<0.05).结论 Cav-1表达水平随着临床分期的增高而降低;间质中Cav-1是三阴型乳腺癌的独立预后指标,Cav-1的低表达与预后差密切相关.     

黄体酮促进培养乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的研究黄体酮对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。方法100nM黄体酮刺激黄体酮受体阳性的乳腺癌细胞株T-47D和MCF-748小时后,用MTT方法检测细胞增殖,用细胞划痕愈合实验检测细胞迁移,用Western blotting检测细胞内E-Cadherin的表达。结果黄体酮刺激MCF-7和T-47D细胞的增殖和迁移;并且可以下调MCF-7和T-47DE-Cadherin的表达。结论黄体酮能够促进培养乳腺癌细胞的增殖和迁移,提示抗黄体酮治疗可能有临床意义。     

miR-205慢病毒表达载体的构建及其对乳腺癌细胞作用的初步研究

目的 构建micoRNA-205(miR-205)慢病毒表达载体,感染乳腺癌细胞MB231,建立稳定表达miR-205的MB231细胞株,观察其增殖能力的变化.方法 酶切慢病毒载体GV369,设计并合成miR-205引物,通过PCR扩增目的基因连接到慢病毒载体上.对重组质粒双酶切鉴定,进行慢病毒hsa-miR-205的包装和滴度测定.用构建好的慢病毒感染MB231细胞,定量PCR检测细胞中miR-205表达水平的变化,MTT和划痕实验观察过表达miR-205后MB231细胞增殖和迁移能力的变化.结果 测序显示,目的基因连接慢病毒载体成功.慢病毒稳定感染了MB231,定量PCR结果显示,感染hsa-miR-205的MB231中miR-205表达明显提高,MTT和划痕实验结果显示感染后MB231的细胞增殖和迁移能力受到抑制.结论 成功构建了miR-205慢病毒表达载体,并建立了稳定表达miR-205的细胞株MB231,显示其可能负调控乳腺癌细胞的恶性生物学行为,为后期进一步研究miR-205的功能和机制奠定了基础.     

新辅助化疗对乳腺癌细胞周期的影响

目的:探讨新辅助化疗对乳腺癌细胞周期的影响。方法:应用流式细胞仪检测20例新辅助化疗组和对照组乳腺癌细胞S期比例,DNA含量,细胞增殖指数(PI)。结果:新辅助化疗组对化疗的总反应率为100%,均为轻度缓解。新辅助化疗组DNA指数(DI)、PI、G1期、S期与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:新辅助化疗可以降低PI与增殖活性。     

乳腺癌代谢重编程与微环境重塑的研究进展

近年来,诸多报道表明致癌信号通路与代谢活动间存在密切联系,因此,研究者们开始认识到代谢重编程在肿瘤中的重要性.在肿瘤发生发展的过程中,乳腺肿瘤细胞经历代谢重编程,包括增强的糖酵解、三羧酸循环、谷氨酰胺分解和脂肪酸生物合成过程,然而不同亚型之间的代谢重编程会有所差异.此外,乳腺肿瘤细胞的代谢改变重塑了肿瘤的微环境,例如促...     

喉肿瘤相关成纤维细胞促进原代喉鳞状细胞癌细胞体外生长

 目的  验证喉肿瘤相关成纤维细胞 (cancer associated fibroblasts,CAFs)对原代培养的喉鳞状细胞癌 (laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)细胞的体外生长是否有促进作用。方法  选取20例喉癌临床标本进行原代培养,将生长出的原代喉癌细胞中的CAFs通过差速消化法去除后继续单独培养,相差显微镜观察喉癌细胞在传代培养过程中的形态学变化,流式细胞仪检测喉癌细胞在传代过程中凋亡细胞比例的变化,Western blot检测喉癌细胞在传代过程中凋亡蛋白Caspase 3表达水平的变化,以始终与CAFs共培养传代的喉癌细胞作为对照。结果  与CAFs分离后喉癌原代细胞在体外传代培养过程中生长活性很快下降,多数在3代以内停止生长。相差显微镜观察到形态学上凋亡漂浮的喉癌细胞逐代增多,流式细胞仪检测到的凋亡细胞比例逐代增加,Western blot检测到的Caspase 3表达水平逐代增加;而始终与CAFs共培养生长的LSCC细胞在传代过程中生长活性却无明显下降 (P<0.05)。结论  喉肿瘤相关成纤维细胞对体外原代培养的LSCC细胞的生长具有明显的促进作用。     

乳腺癌干细胞耐放射性与细胞周期的关系

肿瘤的放射疗法是一种建立在细胞周期基础上的治疗方法,乳腺癌干细胞在放疗过程中出现的G2/M期阻滞、衰老途径下调、APE1水平升高及细胞周期调控相关基因p21和p53活性等改变直接或间接导致细胞周期紊乱,均与乳腺癌干细胞的耐放射性密切相关,是分子遗传学和肿瘤生物学研究的热点.