倍他米松对毛囊外毛根鞘无色素黑素细胞激活的试验研究

目的：研究倍他米松（betamethasone,BT）对毛囊无色素黑素细胞（amelanotic melanocytes,AMMC）的激活作用。方法：以高、中、低3种不同浓度的BT作用于培养的人毛囊外毛根鞘AMMC,测定药物作用前后酪氨酸酶（tyrosinase,TYR）活性和黑素生成的变化。通过间接免疫荧光法结合激光共聚焦显微镜半定量分析药物作用前、后AMMC TYR、酪氨酸酶相关蛋白（tyrosinase related protein,TRP）-1和TRP-2表达的变化,透射电镜分析黑素小体在药物作用前后的变化。结果：BT促进了AMMC表达TYR和TRP-1,并且以剂量依赖方式促进TYR活性,诱导黑素生成。AMMC主要含有Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期黑素小体,但是BT作用后AMMC含有大量Ⅲ或Ⅳ期黑素小体,并且以Ⅳ期黑素小体为主。结论：BT能够激活AMMC,这可能部分解释了糖皮质激素治疗白癜风的机制。     

人毛囊无色素黑素细胞培养方法的改良及色素生成相关酶表达的研究

目的进一步改良人毛囊无色素黑素细胞（amelanotic melanocytes，AMMC）培养的方法，并研究了AMMC内黑素生成相关酶的表达：酪氨酸酶（tyrosinase,TYR）、酪氨酸酶相关蛋白-1（tyrosinase related protein-1，TRP—1）和酪氨酸酶相关蛋白-2（tyrosinase related protein-1，TRP-2）。方法采用1％分离酶（dispase）消化分离毛囊，选用含干细胞因子（stem cell factor，SCF）、内皮素-3（endothelin-3，ET-3）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast grow factor，bFGF）和霍乱毒素（cholera toxin，CT）的成黑素细胞培养基培养AMMC，同时培养表皮黑素细胞（melanocytes，MC）作为对照，采用免疫组化、多巴染色和透射电镜对细胞进行鉴定，蛋白印记法分析TYR、TRP-1和TRP-2的表达。结果1％分离酶消化24h可以容易获得游离的毛囊，结合我们所用的培养基完全排除了成纤维细胞的污染。所用成黑素细胞培养基促AMMC增殖明显，细胞可传5代以上。免疫组化结果显示，AMMC表达gp100、酪氨酸酶（tyrosinase，TYR）、酪氨酸酶相关蛋白-1（tyrosinase related proteifl-1，TRP-1）和酪氨酸酶相关蛋白-2（tyrosinase related protein-1，TRP-2），证明培养的细胞为黑素细胞。AMMC的多巴染色呈阴性，并且透射电镜发现AMMC胞质中仅含大量的Ⅰ期、Ⅱ期黑素小体，未见Ⅲ、Ⅳ期黑素小体，因此说明AMMC处于未分化状态。TYR和TRP-1在MC中的表达明显强于AMMC。TRP-2的表达在两种细胞间没有明显差别，进一步说明AMMC与MC具有异质性。结论我们成功培养了完全纯化、快速增殖的AMMC，并且培养的细胞不能生成黑素，生物学性状更接近活体中的状态，其与表皮黑素细胞具有异质性。     

外毛根鞘无色素性黑素细胞的免疫组化研究

目的初步探讨外毛根鞘处于静息状态的无色素性黑素细胞(AMMC)生物学特性。方法取正常人头皮,采用NK I/beteb,HMB-45和TYR(酪氨酸酶),TRP1(酪氨酸酶相关蛋白1),TRP2(酪氨酸酶相关蛋白2)抗体特异染色黑素细胞后,研究AMMC分布、形态和NK I/beteb,HMB-45,TYR,TRP1和TRP2等黑素细胞分化标记分子的表达情况。结果外毛根鞘HMB-45,TYR,TRP1,TRP2四种抗体呈阴性;NK I/beteb阳性染色的细胞位于生长期毛囊外毛根鞘的中段,通常平皮脂腺水平或在其之下,这些NK I/beteb阳性细胞就是AMMC,AMMC数目较少,常成群集中分布,外观胞体偏圆,树突不明显,形态类似于周边的毛皮质细胞。结论AMMC位于外毛根鞘的中下段,形态和功能上均不成熟。     

维A酸促毛囊外毛根鞘无色素黑素细胞分化的实验研究

目的：研究维A酸(all-transretinoic acid，ATA)对毛囊无色素黑素细胞（famelanotic melangeytes，AMMC)的激活作用。方法：以高、中、低3种不同浓度的ATA作用于培养的人毛囊外毛根鞘AMMC，倒置显微镜观察细胞形态的变化，细胞计数法测定ATA对AMMC增殖率的影响，通过间接免疫荧光法结合激光共聚焦显微镜半定量分析药物作用前后AMMC酪氨酸酶(tyrosinase，TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinase related protein-1，TRP-1)和酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)表达的变化。结果：ATA能抑制AMMC的增殖，并能促进AMMC表达TYR和TRP-1，但对TRP-2的表达没有影响。结论：ATA能够促进AMMC的分化，同时抑制增殖，其抑制机制可能与凋亡有关。     

毛囊外毛根鞘无活性黑素细胞研究最新进展

白癜风的色素恢复过程中,白斑边缘正常表皮基底层黑素细胞和毛囊外毛根鞘无活性黑素细胞(AMMC)是白癜风恢复色素的两个途径,外毛根鞘无黑素细胞是黑素细胞重要储库。该细胞以及其中的黑素干细胞的活化、增殖、黏附、移行受多种因素影响,8-MOP促进黑素细胞活化,内皮素一1可促进黑素细胞黏附,在黑素细胞增殖方面,环孢A促进黑素细胞增殖,米诺地尔通过降低细胞内钙离子和扩张血管促进黑素细胞增殖,女贞子可促进毛囊干细胞生长因子mRNA的表达而促进黑素细胞增殖,紫外线,补骨脂,白芷促进黑素细胞移行,这些发现为白癜风以毛囊为靶点治疗提供了科学依据。     

甲氧沙林对体外培养的人毛囊外根鞘无色素黑素细胞的激活作用

目的:观察甲氧沙林(8-MOP)对体外培养的人毛囊外根鞘无色素黑素细胞黑素合成相关酶的影响。方法:3种浓度(10、50、100μmol/L)的8-MOP作用于体外培养的人毛囊外根鞘无色素黑素细胞,经免疫荧光染色后,采用激光共聚焦显微镜观察不同浓度、不同作用时间的8-MOP对无色素黑素细胞形态的影响,荧光定量分析酪氨酸酶、酪氨酸相关蛋白(TRP)1、TRP2表达量的变化。结果:50、100μmol/L8-MOP作用于人毛囊外根鞘无色素黑素细胞3d能显著促进酪氨酸酶的表达(P<0.01)熏作用7d后TRP1、TRP2的表达也增加(P<0.05)。结论:8-MOP在体外能直接刺激毛囊外根鞘无色素黑素细胞的活化。     

维生素D3衍生物对黑素细胞调控作用的研究进展

维生素D3衍生物通过其细胞核维生素D受体发挥重要的生理作用,除了经典的调节钙、磷代谢外,其对黑素细胞增殖、迁移、酪氨酸酶活性抑制,黑素细胞SCF/c-kit途径及黑素细胞氧化应激的作用正在被逐渐认识。因此,进一步了解维生素D3衍生物在黑素细胞的调控机制,对于更有效地治疗白癜风具有重要的意义。     

人头皮毛囊外根鞘无色素黑素细胞的分离和纯化培养进一步研究

目的：从人头皮毛囊外根鞘分离纯化培养无色素黑素细胞。方法：采用两步酶法(0．50％分离酶和0．50％胶原酶V)获得游离的毛囊，高浓度0．50％，胰酶30min消化游离的毛囊外根鞘细胞，并以优化的培养基进行细胞培养。用HMB-45和NKI／beteb单克隆抗体免疫组化染色、透射电镜对培养物进行鉴定。结果：培养物中初始贴壁细胞大多数为无色素黑素细胞，仅有少量的角质形成细胞，无成纤维细胞污染。经二次传代差别胰酶处理很容易去除角质形成细胞。取培养3周的细胞经免疫组化和透射电镜鉴定证实为无色素黑素细胞。传3代后细胞得到完全纯化。结论：两步酶法结合高浓度的胰蛋白酶处理细胞可彻底清除成纤维细胞，获得无色素黑素细胞的纯培养。     

内皮素-1对毛囊外根鞘无色素黑素细胞黏附和移行及其细胞骨架形态的影响

目的：体外研究内皮素-1（ET-1）对毛囊外根鞘无色素黑素细胞（AMMC）黏附和移行的作用,并观察其对细胞骨架蛋白微丝、微管的形态影响。方法：3种浓度的ET-1作用体外纯化培养的人AMMC,观察其在细胞外基质蛋白如纤维连接蛋白、层黏连蛋白、Ⅳ型胶原包被培养板上的黏附,以及通过Boyden小室微孔滤膜的情况。采用免疫荧光双重染色法对AMMC分别进行罗丹明（红色）和异硫氰酸（绿色）标记纤维型-肌动蛋白（F-actin）、β微管蛋白,激光共聚焦显微镜观察3种浓度ET-1处理前后AMMC纤维型-肌动蛋白、B微管蛋白形态的变化。结果：与空白对照组相比,ET-1促进了AMMC在纤维连接蛋白上的黏附,20ng/mL ET-1作用最明显（P〈0．01）,而200ng/mL时对细胞的黏附不继续增加。但对层黏连蛋白和Ⅳ型胶原上的黏附无明显影响（P〉0．05）。另外,ET-1呈浓度依赖性地促进AMMC通过微孔滤膜。激光共聚焦显微镜观察显示,〉20ng/mL ET-1可明显促进AMMC胞质中束状应力纤维形成,并集中分布于细胞膜内侧,但对微管结构无明显影响。结论：ET-1在体外可以促进AMMC的黏附和移行．其作用可能与诱导束状应力纤维形成和促进其向细胞膜内侧分布有关。     

血清1,25-(OH)2D3水平与盆腔子宫内膜异位症的相关性研究

目的 探讨106例盆腔子宫内膜异位症(EMs)患者血清1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2 D3]水平及其与EMs的相关性.方法 选取2018年1月至2019年7月温州市人民医院妇产科收治的106例盆腔EMs患者纳入观察组,另选取同期具有EMs临床表现但经病理检查确诊为卵巢其他良性肿瘤的57例患者纳入对照组...     

中药菟丝子水提取物促毛囊无色素黑素细胞分化的实验研究

目的观察中药菟丝子水提取物诱导毛囊无色素黑素细胞(amelanotic melanocytes,AMMC)分化的作用。方法以8-甲氧补骨脂素(8-MOP)作为阳性对照,选择系列浓度的中药菟丝子水提取物和8-MOP作用于体外培养的AMMC,然后测定酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率的变化。透射电镜观察药物作用前后AMMC超微结构的变化。结果菟丝子水提取物明显促进AMMC生成黑素(P<0.01),且呈浓度依赖性,但是促进作用弱于阳性对照8-MOP(P<0.01)。电镜结果显示,无药物作用的AMMC主要含有I,II和III期黑素小体,药物作用以后,AMMC内出现了大量的IV期黑素小体。菟丝子水提取物对细胞增殖无明显影响,但明显增强酪氨酸酶的活性。结论菟丝子水提取物促进了AM-MC的分化,这种作用与其增强酪氨酸酶活性有关。     

毛囊内无色素黑素细胞的超微结构特点

目的 探讨来自人毛发的毛囊内无色素黑素细胞的超微结构特点.方法 胶原酶V消化正常人头皮,获取毛囊.游离毛囊用0.1mol/LPBS冲洗,胰酶消化,得细胞悬液.将细胞悬液接种到适合黑素细胞生长的培养基.细胞传第3代后,收集细胞,电镜观察摄片.结果 透射电镜下可见此细胞为单核圆形或椭圆形细胞,核大,核膜双层,核内常染色体丰富,而异染色质很少.胞质中充满黑素体,多为Ⅱ和Ⅲ期,极少为Ⅰ、Ⅳ期.黑素体内的电子密度颗粒多排列成同心圆形,少数排列呈线状.胞质内高尔基复合体不明显.结论 毛囊内无色素黑素细胞超微结构不同于表皮黑素细胞,这种结构变化导致功能上的不成熟,无色素黑素细胞是成熟黑素细胞的贮库.     

甲氧沙林对人毛囊黑素细胞增殖、活化和黑素合成作用的研究

目的 研究甲氧沙林对人毛囊黑素细胞活化、增殖和黑素合成的影响.方法 体外培养正常人毛囊黑素细胞,观察不同浓度甲氧沙林(10～500μmol/L)对毛囊黑素细胞形态、增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响.结果 50μmol/L甲氧沙林处理细胞7d后,毛囊黑素细胞树突明显增多延长,胞浆内出现较多棕褐色颗粒,酪氨酸酶活性和黑素含量增加显着高于对照组(P<0.01).结论 甲氧沙林能诱导毛囊黑素细胞树突增多延长,酪氨酸酶活性和黑素含量增加.     

NB-UVB Induces Melanocytic Differentiation of Human Hair Follicle Neural Crest Stem Cells

BackgroundPhototherapy is an important method to treat vitiligo. However, it is unclear how phototherapy affects melanocyte precursors and skin neural crest stem cells.ObjectiveTo investigate the underlying mechanisms of narrow-band ultraviolet B (NB-UVB) induced melanocyte lineage differentiated from human scalp-derived neural crest stem cells (HS-NCSCs).MethodsHS-NCSCs were expanded from scalp hair follicles. The c-Kit⁻/CD57⁻ HS-NCSCs were isolated by cell sorting. Different doses of NB-UVB were used to irradiate these HS-NCSCs. Cell ultrastructure was examined by transmission electron microscope. Melanocyte marker expression was analyzed by Quantitative RT-PCR and Western blot. Cell proliferation and migration were also evaluated.ResultsThe c-Kit⁻/CD57⁻ HS-NCSCs expressed embryonic NCSC biomarkers. NB-UVB at a dose of 100 mJ of NB-UVB had little effect on the cell proliferation of differentiated melanocytes from c-Kit⁻/CD57⁻ HS-NCSCs, while 700 mJ inhibited cell proliferation significantly. The dendritic processes of differentiated melanocytes increased after radiation. The tyrosinase and Melanocortin 1 receptor (Mc1R) expression of differentiated melanocytes increased after NB-UVB exposure. The effect of NB-UVB on tyrosinase expression was modulated by signaling inhibitors H89 and PD98059 as well as Mc1R level in the cells. The migration ability of differentiated melanocytes was enhanced under 100 mJ exposure.ConclusionThese data demonstrate that NB-UVB facilitates melanocytic differentiation of the HS-NCSCs and enhances migration of these cells. Mc1R and cAMP pathway play a critical role in NB-UVB induced melanocytic differentiation.     

5-羟色胺/褪黑素能系统对MC和AMMC的作用机制

白癜风患者皮损在色素恢复过程中,白斑边缘正常表皮基底层黑素细胞和毛囊外毛根鞘无活性黑素细胞(AMMC)是白癜风患者皮损色素恢复的两个途径.AMMC可被某些特定因子激活、增殖和游走,并产生黑素,可能是黑素千细胞.5-羟色胺/褪黑素能系统(5-HTs/MTs)对黑素细胞(MC)和AMMC的增殖和凋亡产生作用;5-羟色胺(5-HT)抑制黑素生成,黑素细胞内生成褪黑(激)素(MT)可能是黑素的内在调节剂,因而探讨5-HTs/MTs信号转导途径对AMMC的作用机制,可进一步揭示白癜风的发病机理,对开发新的5-HT类药物及临床治疗提供科学依据,具有重要的理论和应用价值.     

维生素D3及其类似物对树突细胞表达和分泌白介素10的作用

目的 研究1,25-二羟维生素D₃及其类似物卡泊三醇和他卡西醇对来源于单核细胞的树突细胞(DC)表达和产生白介素10(IL-10)的调节作用。方法 在体外将人外周血单核细胞分化成树突细胞。分别采用半定量RT-PCR和ELISA法分析1,25-二羟维生素D₃及其类似物对MDDC表达IL-10mRNA和产生IL-10蛋白的影响。并以1,25-二羟维生素D₃的代谢物24,25-二羟维生素D₃作对照。结果 1,25-二羟维生素D₃、卡泊三醇和他卡西醇以相当的作用强度上调MDDC表达和产生IL-10,但24,25-二羟维生素D₃未显示调节作用;1,25-二羟维生素D₃对IL-10蛋白水平的上调作用呈剂量依赖方式。结论 1,25-二羟维生素D₃及其类似物治疗银屑病的作用可能是通过调节IL-10的表达和分泌来实现的。     

毛囊混合细胞诱导毛囊重建的研究

目的分离培养人毛囊外根鞘细胞株(ORSC)和人毛囊毛乳头(DPC),在体内和体外诱导毛囊形成。方法利用酶消化法和组织块法获得第三代DPC和ORSC,将上述两种细胞混合后接种于海藻酸钠3D细胞支架,构建毛囊的体外三维模型,同时将该三维模型移植入SD大鼠皮下,8周后移植部位取材,行HE染色、免疫组化和电镜观察毛囊形成情况。结果 SD大鼠移植部位取材,HE染色可见细胞聚集成团状的毛囊样结构,CK14,CK15和波形蛋白染色阳性,电镜下可见支架中有散在细胞分布。结论 SD大鼠体内三维模型培养,证明在该模型中诱导出了具有向毛囊分化倾向的毛囊样结构,为以后成功重建毛囊做出了有益探索。