血清心肌肌钙蛋白Ⅰ光激化学发光免疫测定法的建立

目的采用光激化学发光免疫测定法（LICLIA）建立血清心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）的定量检测方法。方法使用2株特异性的cTnI单克隆抗体,一株包被发光微粒,另一株进行生物素化,与包被有链霉亲合素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测条件并评价检测性能。结果方法的分析灵敏度为0.05 ng/mL,在1.10～29.36 ng/mL范围内线性良好。批内和日间变异系数（CV）分别为4.89%～5.93%和6.76%～8.96%。cTnI浓度为161 ng/mL时方法无Hook效应。与Biocheck cTnI酶联免疫吸附试验（ELISA）具有较好的相关性（r=0.964）。结论血清cTnI的LICLIA定量检测方法的建立有助于急性心肌梗死诊断试剂盒的研制。     

铁蛋白笼形纳米颗粒应用于HIV-1P24抗原高灵敏检测的研究

目的构建以铁蛋白笼形纳米颗粒为基础的分子展示平台,并应用于HIV-1P24抗原检测,实现低丰度、高灵敏检测。方法采用分子生物学手段,构建生物素耦联的铁蛋白笼形纳米颗粒,基于链霉亲和素与生物素特异性结合,将其应用于HIV-1P24抗原的酶联免疫吸附测定(ELISA)检测中,并测试其检测灵敏度。结果构建出具有链霉亲和素特异性结合能力的生物素化铁蛋白笼形纳米颗粒,应用到HIV-1的P24抗原ELISA检测中,实现0.1ng/mL的检测下限,显著提高检测灵敏度。结论成功建立基于铁蛋白笼形纳米结构的分子展示平台,以HIV-1P24抗原ELISA检测为例,该平台能够应用于低丰度、高灵敏检测。     

心肌营养素-1 ELISA测定法的建立及初步应用

目的 应用生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附法(BSA-ELISA)建立血浆心肌营养素-1(CT-1)测定法,并初步应用于冠心病患者血浆CT-1水平的检测。方法 用鼠抗重组人CT-1单抗包被酶标板,加入待测抗原,并依次加入生物素化羊抗重组人CT-1多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记链霉亲合素,用H2O2-邻苯二胺显色。检测35名冠心病患者及对照组血浆CT-1含量的变化。结果 方法的线性范围为10～2000pg／ml,检测下限为10pg／ml,批内变异系数为1．76％～7．64％,批间变异系数为5．96％～9．04％。结论 该方法简便、快速,特异性、敏感性、重复性均在临床检测可接受范围内,标准曲线线性良好,适用于基础研究与临床检验。     

生物素—链霉亲和素免疫学法测定地高辛直接包被方法的研究

笔者曾经成功地应用德国ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｈｅｉｍ公司生产的现成的链霉亲和素包被管建立了生物素－链霉亲和素免疫学潮测定地高辛的反应模型。本文用国产的链霉亲和素自行包被，采用的是一种直接包被方法，即将链霉亲和素溶于去离子水，冰箱过液包被２４ｈ，并应用到地高辛的临床检测中，其灵敏度为０．０７８１μｇ／Ｌ，最低检测限为０．１９５２μｇ／Ｌ，测定三份低、中、高浓度血清标本，批内变异系数分别为８．７％     

妊娠相关血浆蛋白A酶联免疫诊断方法学研究

目的建立供临床检测妊娠相关血浆蛋白A（PAPP—A）的酶联免疫诊断方法。方法用足月孕妇血清通过分子筛以及离子交换层析纯化后制备抗体,进而制备生物素标记的PAPP—A以及酶标记抗体。按照常规的酶联免疫吸附试验（ELISA）操作步骤检测标本,观察本方法的敏感性、特异性、回收率、稳定性等指标。测定30份早孕患者血清与美国DRG公司试剂盒做对比。结果分子筛与离子交换层析纯化效果良好。标准曲线范围为1,50μg/mL。敏感性为0．35μg/mL,回收率均〉100％,特异性、稳定性试验结果显示效果良好。本试验方法与美国DRG公司试剂盒检测结果高度相关,回归方程为：Y=2．2861＋1．0269X（r=0．982,P〈0．01）。结论PAPP—A抗体标记生物素后,利用生物素与亲和素的高度亲和力进行ELISA,该方法在PAPP-A的临床检测中有较大的实际意义。     

人血清中总前列腺特异性抗原化学发光免疫分析法的建立

目的建立一种定量分析人血清中总前列腺特异性抗原（t—PSA）的化学发光免疫分析方法。方法采用生物素和碱性磷酸酶分别标记捕获抗体与检测抗体,与样本中的抗原形成免疫复合物,然后通过链霉亲和素与生物素的反应被链霉亲和素标记的磁微粒捕获,利用碱性磷酸酶与发光底物的反应建立了双单抗夹心法检测人血清中t—PSA的化学发光免疫分析方法。结果标准品对WHO96／670国际标准品进行溯源,同时检测血清样本,线性回归方程为y=0．9434X-0．1605,相关系数r=0．99。选择具有等摩尔分子反应性的单抗,对不同存在形式的PSA检测偏差在士3％以内。病人血清样本的测试结果与雅培architecti2000化学发光试剂盒检测结果显著相关,相关系数r=0．989。结论该方法具有较高的灵敏度和重复性,检测结果准确,提高了国产同类试剂的竞争力,同时比同类进口试剂成本低,适于临床检测和科研应用。     

检测血清p185糖链凝集素酶联免疫吸附试验的建立及初步应用

目的 建立检测血清p185糖链的凝集素酶联免疫吸附试验（ELISA），并初步应用于乳腺癌的临床诊断。方法 用改良过碘酸钠氧化法制备c—erbB-2单克隆抗体-辣根过氧化物酶结合物（A18-HRP），经棋盘滴定确认A18-HRP、生物素化麦胚凝集素（Bio—WGA）及链霉亲和素（SA）的最适浓度（或稀释度），建立了检测p185糖链的凝集素ELISA，用所建立的方法检测血清p185糖链，免疫组化方法检测组织p185蛋白表达。结果 乳腺癌患者血清p185糖链水平明显高于乳腺增生和正常对照（P〈0．01），免疫组化阳性和阴性的乳腺癌患者血清p185糖链水平均高于乳腺增生和正常对照（P〈0．01），乳腺增生患者血清p185糖链与正常对照相比差异无显著性（P〉0．05）。血清p185糖链诊断乳腺癌的敏感度为86．7％，特异度为94，6％，准确度为91．9％。结论 本实验建立的凝集素ELISA检测血清p185糖链诊断乳腺癌与病理学诊断符合率高，临床具有实用价值。     

生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF方法的建立及其初步应用

目的 建立生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF的方法(简称“系统ELISA血清CTGF法”),初步评估CTGF在诊断慢性肝炎(CHB)患者肝纤维化的临床价值.方法 用生物素化抗CTGF单克隆抗体和多克隆抗体建立生物素-链霉亲和素ELISA方法,测定CHB患者血清CTGF水平.264例CHB患者根据肝穿刺病理诊断...     

血清肌红蛋白光激化学发光免疫测定法的建立

目的采用光激化学发光免疫测定技术（LICI）建立定量检测肌红蛋白（Mb）的方法。方法使用针对Mb不同表位的2株单克隆抗体，一株包被发光微粒，另一株进行生物素化，与包被有链霉亲合素的感光微粒共同构成检测试剂，优化检测条件并评价检测性能。结果该方法的灵敏度为1．36ng／ml，在33．8～1521．0ng／ml的范围内线性良好。批内和日间变异系数分别为3．05％～4．41％和5．80％～6．56％。在血红蛋白浓度〈2．6g／L，总胆红素浓度〈342μmol／L、三酰甘油浓度〈11．3mmol／L时的干扰率无临床意义。与Roche Elecsys电化学发光法有较好的相关性（r=0．9971）。结论血清MbLICI的建立有助于进一步对检测试剂盒的研制。     

甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素化学发光免疫检测方法的建立及分析性能评估

目的 构建甲氧基肾上腺素(MN)和甲氧基去甲肾上腺素(NMN)的化学发光免疫检测试剂.方法 将MN、NMN的特异性抗体分别包被到磁微粒表面,通过标本前处理工艺将待测物生物素化,把与生物素特异性结合的亲和素用辣根过氧化物酶(HRP)标记,通过免疫反应,可以形成固相化的抗体-待测物-生物素-亲和素-HRP免疫反应产物.结果 分别建立了MN、NMN的校准曲线,通过性能评估试验测得该检测试剂与多种结构类似物均无明显的交叉反应;MN检测试剂的分析灵敏度为10.21 ng/mL,NMN检测试剂的分析灵敏度为6.91 ng/mL;MN、NMN检测试剂变异系数分别为4.79％～5.25％、3.85％～4.73％;且两种检测试剂的稳定性评估结果显示试剂稳定性较好.结论 该研究成功构建了MN、NMN化学发光免疫检测试剂.     

降钙素原在感染性发热诊断中的意义

目的分析感染性发热患者中细菌感染和病毒感染血清降钙素原(PCT)水平的差别,探讨血清PCT在感染性发热诊断中的意义。方法采用半定量固相免疫测定法测定48例细菌感染性发热患者、40例病毒感染性发热患者以及30例健康对照组血清中的PCT,将检测结果分成4个水平,PCT<0.5 ng/mL,0.5 ng/mL≤PCT<2.0 ng/mL,2.0 ng/mL≤PCT<10.0 ng/mL和PCT≥10.0 ng/mL,分析PCT水平与细菌病毒感染之间的关系。以PCT≥0.5 ng/mL为阳性诊断标准。结果细菌感染组患者血清PCT水平高于病毒感染组和对照组,差异有统计学意义(P≤0.05),病毒感染组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论检测PCT能有效地鉴别细菌性和非细菌性感染性发热,有利于早期正确治疗。     

定量与半定量检测血清降钙素原在细菌感染诊断中的应用价值评价

目的评价定量与半定量方法检测血清降钙素原（PCT）对细菌感染性疾病诊断的应用价值。方法选取186例入院疑为细菌感染的患者,分别采用化学发光定量法和胶体金免疫结合半定量法检测患者血清PCT含量,并采用Kappa一致性检验评价两种方法检测结果的一致性,ROC曲线分析其对细菌感染诊断的敏感度及特异度。结果非感染组、局部细菌感染组血清PCT均未升高,脓毒血症组PCT显著升高,细菌感染性全身炎症反应综合征（SIRS）组血清PCT轻中度升高,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。定量与半定量检测PCT结果总体一致性较好（Kappa检验,K=0.77）,以PCT≥0.5ng/mL为阳性诊断界点,ROC分析表明定量方法的敏感度98.9%、特异度92.6%均高于半定量方法的92.6%、88.4%。结论检测血清PCT水平对全身细菌感染诊断具有良好的敏感度和特异度,定量法检测结果客观、精确,对于处于阳性临界值或需要监测疗效的患者,定量检测PCT是首选方法。     

C-肽时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的研制血清C-肽的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂盒。方法采用双抗体夹心法建立C-肽TRFIA试剂盒,并进行方法学评价。结果C-肽可测量范围为0.4~20 ng/mL;分析敏感性为0.23 ng/mL;分析批内、批间精密度分别为7.99%、11.97%;C-肽回收率为99.57%;与胰岛素和胰岛素原无交叉反应。稳定性试验表明,试剂可以贮存在4℃稳定9个月,37℃稳定7 d;该试剂盒测试200份正常人血清样本,其参考范围为0.358~3.590 ng/mL;收集122份血清样本,用该试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.9432,线性方程为Y=0.9854X+0.5063。结论C-肽TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适合临床推广使用。     

Should procalcitonin be introduced in the diagnostic criteria for the systemic inflammatory response syndrome and sepsis?

PURPOSE: To define whether procalcitonin should be introduced in the diagnostic criteria of sepsis. METHODS: Procalcitonin was estimated in sera of 105 critically ill patients by an immunochemiluminometric assay. Diagnosis was settled by 3 types of criteria: A, the American College of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine (ACCP/SCCM) 1992 criteria; B, the ACCP/SCCM criteria and concentrations of procalcitonin above 1.0 ng/mL as indicative of SIRS/sepsis; and C, the ACCP/SCCM criteria and concentrations of procalcitonin 0.5 to 1.1 ng/mL for SIRS and above 1.1 ng/mL for sepsis. RESULTS: Criteria A identified 50.5% of patients with SIRS, 18.1% with sepsis, 0.9% with severe sepsis and 22.9% with septic shock; respective diagnosis by criteria B were 26.7%, 9.5%, 10.5% and 25.7%; and respective diagnosis by criteria C were 19.0%, 25.7%, 9.5%, and 25.7%. Sensitivity of concentrations between 0.5 ng/mL and 1.1 ng/mL was 25.6% for Systemic Inflammatory Response Syndrome (SIRS); and above 1.1 ng/mL 92.8% for sepsis. Sepsis-related death was associated with elevated procalcitonin upon presentation of a clinical syndrome. CONCLUSIONS: Despite the limited diagnostic value of procalcitonin for SIRS, concentrations of procalcitonin above 1.1 ng/mL are highly indicative for sepsis without, however, excluding the presence of SIRS.     

C-肽时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的研制血清C-肽的时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）试剂盒。方法采用双抗体夹心法建立C-肽TRFIA试剂盒,并进行方法学评价。结果C-肽可测量范围为0．4-20ng／mL;分析敏感性为0．23ng／mL;分析批内、批间精密度分别为7．99％、11．97％;C-肽回收率为99．57％;与胰岛素和胰岛素原无交叉反应。稳定性试验表明,试剂可以贮存在4℃稳定9个月,37℃稳定7d;该试剂盒测试200份正常人血清样本,其参考范围为0．358-3．590ng／mL;收集122份血清样本,用该试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0．9432,线性方程为Y=0．9854X＋0．5063。结论C-肽TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适合临床推广使用．     

降钙素原在小儿肺炎诊断中的应用

目的比较分析病毒性肺炎与细菌性肺炎患儿血清降钙素原（PCT）水平，探讨血清降钙素原在细菌性肺炎患儿中的诊断意义，为临床抗生素的使用提供依据。方法42例肺炎患儿，男24例，女18例，平均年龄5．6岁，其中病毒性肺炎25例，细菌性肺炎17例。采用半定量固相免疫测定法测定患儿血清中的PCT。PCT水平分为〈0．5ng／mL、≥0．5ng／mL、≥2ng／mL和≥10ng／mL4个等级，进行X^2检验。结果细菌性肺炎组患儿血清PCT水平高于病毒性肺炎组，差异有显著性意义（P〈0．01）。结论血清PCT是小儿细菌性肺炎的敏感标志物之一，血清PCT检测有助于小儿肺炎的诊断及鉴别诊断，可作为临床抗生素的使用依据。     

血清降钙素原检测对新生儿败血症的临床诊断价值及分析

目的 探索血清降钙素原检测对新生儿败血症的临床诊断价值.方法 半定量固相免疫层析测定法检测46例新生儿败血症及两个对照组,组一:20例足月健康新生儿,组二:20例非细菌感染性疾病新生儿血清降钙素原水平(PCT).结果 46例新生儿败血症组血清PCT水平有26例＞0.5 ng/ml,10例＞2.0 ng/ml,7例＞10 ng/ml阳性率达93.49%.其它两对照组各仅1例PCT水平＞0.5 ng/m1,阳性率为0.05%,相对比有显著性差异.结论 血清降钙素原可作为一项快速有效诊断和评估病情的检测指标.     

Clinical relevance of procalcitonin values in bacteremia

IntroductionThe aim of this study was to investigate procalcitonin levels according to the causative pathogens of bacteremia. The relationships between the clinical outcomes and procalcitonin levels were also studied.MethodsFrom among 452 patients, 507 cases of positive blood culture were included in the present study. Procalcitonin levels were studied according to the pathogen types. The prevalence of septic shock and the mortality rates were also studied in four groups stratified by the procalcitonin levels (groups 1, 2, 3, and 4 had procalcitonin levels of <0.5 ng/mL, 0.5 ≤ 2.0 ng/mL, 2.0 < 10 ng/mL, and ≥10 ng/mL, respectively).ResultsThe procalcitonin levels were significantly higher in bacteremia cases with Gram-negative rods (19.50 ng/mL), such as Escherichia coli (32.5 ng/mL), than those with Gram-positive rods (8.45 ng/mL) or Gram-positive cocci (9.21 ng/mL) (p < 0.01). The 28-day mortality rates in groups 1, 2, 3, and 4 were 6.0%, 12.0%, 14.9%, and 19.8%, respectively. The procalcitonin levels of samples taken before or on the same day of blood cultures were significantly lower than those taken one day after blood cultures. Multiple logistic regression analysis showed that C-reactive protein and procalcitonin ≥10 ng/mL were independently associated with a higher risk of mortality within 28 days.ConclusionsThe PCT levels were higher in cases of bacteremia caused by GNR than those caused by GPR or GPC. The 28-day mortality rate increased as the PCT levels increased. Clinical importance of early evaluations and appropriate interpretation of procalcitonin levels for bacteremia were indicated.     

孕中期孕妇血清sEng、sFlt-1联合检测预测子痫前期的探讨

目的 探讨联合检测孕妇孕中期血清可溶性内皮因子（sEng）、可溶性血管内皮生长因子受体1（sFlt-1）对子痫前期的预测.方法 选择孕25～28周的子痫前期孕妇29例作为子痫前期组,另选择同期妊娠结果正常的42例孕妇作为对照组,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测血清sEng、sFlt-1水平,并将检测结果与子痫前期的发病进行相关性分析.结果 子痫前期组孕妇血清sEng、sFlt-1水平分别为（10.4±1.5）ng/mL、（1 020.3±115.1）ng/L,高于对照组[分别为（2.3±0.6） ng/mL、（289.4±142.3）ng/L],差异有统计学意义（P〈0.01）.sEng与sFlt-1联合检测的敏感性、特异性分别为95.7%、90.9%.结论 血清sEng、sFlt-1的联合检测可有效预测子痫前期的发生.     

肝硬化腹水患者血浆降钙素原水平的临床研究

目的观察肝硬化自发性细菌性腹膜炎(SBP)患者血浆降钙素原(PCT)的水平。方法采用半定量免疫色谱法检测30例肝硬化腹水患者[包括单纯腹水16例(非SBP组)、合并SBP者14例(SBP组)]及20名健康体检者血浆PCT和血清CRP水平。以患者第1次测定值作为基线值。结果 SBP组血浆PCT和血清CRP水平在SBP发生后3、6、12 h均明显高于基线值(P<0.01),并明显高于非SBP组及对照组(P<0.01)。治疗后SBP组和非SBP组中存活的患者血浆PCT水平分别为0.48±0.25和(0.49±0.14)ng/mL,二者比较差异无统计学意义(P>0.05),且均低于基线值(P<0.01)。死亡患者的血浆PCT水平治疗后反而继续升高,SBP组[4例,(37.67±15.48)ng/mL]明显高于非SBP组[4例,(14.75±7.89)ng/mL]。结论血浆PCT水平检测有助于诊断肝硬化腹水患者SBP的发生,若持续升高可能提示有细菌感染和预后不良。