鸡冠花黄酮类对成骨细胞增殖和TGFβ1的作用

目的 探讨鸡冠花黄酮类化合物对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化和转化生长因子β1(TGFβ1)表达的影响作用，为临床骨质疏松症的预防和治疗提供参考。方法 提取新生大鼠颅骨成骨细胞制作体外培养模型．然后用噻唑盐(MTT)法测定鸡冠花黄酮类化合物对体外培养成骨细胞的增殖作用，氨基安替吡啉测酚法测成骨细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性，SP免疫组化法研究鸡冠花黄酮类化合物对成骨细胞TGFB。表达的影响。结果 鸡冠花黄酮类化合物可以促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖，并显性促进成骨细胞分化。对第3代成骨细胞TGFβ1。表达进行图像分析，培养3d，鸡冠花黄酮类化合物剂量在0．5以上组TGFβ1表达阳性，培养5d，所有实验TGFβ1均表达阳性促使成骨细跑合成TGFβ1的免疫组化阳性表达。结论 鸡冠花黄酮类化合物可以提高成骨细胞的增殖和分化，并有促进分泌TGFβ1的功能．对于预防骨质疏松症的发生有重要的参考价值。     

大豆异黄酮对成骨细胞生长因子表达的影响

目的　探讨大豆异黄酮对成骨细胞胰岛素样生长因子 -1(IGF -1)表达的影响。方法　体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞 ,然后用塞唑盐 (MTT)法测定大豆异黄酮对成骨细胞的增殖作用 ,过氧化物酶标记的链霉卵白素(SP)免疫组织化学染色试剂盒检测IGF -1抗体表达 ,用原位杂交方法检测IGF -1mRNA基因表达 ,用HPIAS -10 0 0图象分析仪对各组表达进行定量分析。结果　大豆异黄酮培养的大鼠第 3代成骨细胞的IGF -1抗体和IGF -1mRNA呈阳性表达 ,并显著高于阴性对照组 (P <0 0 5) ,阳性细胞胞浆呈棕黄色阳性表达。结论　大豆异黄酮可通过促进大鼠成骨细胞IGF -1分泌而影响成骨细胞形成。     

大豆异黄酮和钙对大鼠成骨细胞增殖分化和矿化的作用

为探讨大豆异黄酮和钙对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化和矿化的作用 ,体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞 ,然后用噻唑盐 (MTT)法测定大豆异黄酮和葡萄糖酸钙对体外培养成骨细胞的增殖作用 ,氨基安替比林测酚法测成骨细胞内碱性磷酸酶 (ALP)活性 ,茜素红染色方法 (ARS)研究对成骨细胞矿化的影响。结果单纯补钙组大鼠成骨细胞增殖、分化和矿化无显著促进作用。大豆异黄酮可显著地促进成骨细胞的增殖和分化 ,并促使成骨细胞形成矿化结节 ,而补充大豆异黄酮同时补钙可使矿化结节团块增大。大豆异黄酮可以提高成骨细胞的增殖和分化 ,补大豆异黄酮并补钙更有利成骨细胞的矿化     

全反式视黄酸对新生鼠头盖骨成骨细胞的影响

目的 :　探讨全反式视黄酸 ( ATRA)对体外培养的新生大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法 :　从新生大鼠颅骨分离出成骨细胞 ,细胞增殖实验采用噻唑盐 ( MTT)比色试验法 ;细胞分化实验采用氨基安替比林法 (金氏法 )测定碱性磷酸酶 ( ALP)的活性 ,并用免疫细胞化学法检测细胞周期调控蛋白 Cyclin D1表达的影响 ,研究 ATRA对成骨细胞代谢的影响及部分作用机制。结果 :　培养液中加入 1 0 -5、1 0 -6、1 0 -7、1 0 -8和 1 0 -9mol/L ATRA培养 72 h对成骨细胞有促细胞增殖作用 ,而 1 0 -5、1 0 -6、1 0 -7mol/L的 ATRA在 2 4、48、72 h均能显著促进成骨细胞分化 ,免疫细胞化学染色 Cyclin D1蛋白表达降低。结论 :　ATRA对成骨细胞具有促增殖和诱导分化作用 ,细胞周期调控蛋白可能在 ATRA诱导成骨细胞增殖和分化过程中发挥重要作用。     

鸡冠花黄酮对去卵巢大鼠预防骨质疏松作用

目的探讨鸡冠花黄酮化合物对去卵巢大鼠尿无机盐、骨形成蛋白(BMP2)以及对单核吞噬细胞吞噬功能的影响。方法雌性SD大鼠21只,随机分为假手术组(Sham),去卵巢组(OVX),去卵巢加鸡冠花黄酮组(cristataL,CRIST)100 mg/(kg.d),10周后测骨密度和尿液钙、钠、钾含量。免疫组化法测骨骼中BMP2的表达,单核巨噬细胞体外吞噬试验和碳廊清法测定巨噬细胞的吞噬功能。结果OVX组大鼠尿钙、钠显著增高,而尿钾及骨BMP2表达降低。CRIST组与OVX组比大鼠尿钙、钠显著降低,骨BMP2显著升高。OVX组与假手术组比大鼠单核巨噬细胞体外吞噬鸡红细胞的能力显著降低(P<0.05或<0.01);CRIST有提高单核巨噬细胞吞噬功能的作用。结论鸡冠花黄酮类化合物可调节去卵巢大鼠无机盐代谢表达,增加BMP2表达,提高巨噬细胞吞噬功能的作用,预防骨质疏松。     

大豆异黄酮与大鼠成骨细胞BMP2PCR产物表达

目的探讨大豆异黄酮对体外培养大鼠成骨细胞骨形态发生蛋白2（BMP2）表达的影响.方法制作新生大鼠颅骨成骨细胞体外培养模型,用不同浓度的大豆异黄酮刺激分离培养的大鼠成骨细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR扩增BMP2基因cDNA,同时扩增β-actin cDNA作为内对照,扫描RCR产物电泳照片,计算BMP-2/β-actin cDNA的积分吸光度比值,推算BMP2基因相对表达水平;并通过免疫组化方法观察成骨细胞BMP2的表达,用HPIAS-2000图象分析仪对各组表达进行定量分析.结果大豆异黄酮增加体外培养成骨细胞BMP2的水平,并且在基因转录水平促进大鼠成骨细胞BMP2表达,呈剂量-效应关系（P〈0.01）.结论大豆异黄酮对成骨细胞形成BMP2表达有显著促进作用.提示大豆异黄酮促进成骨细胞增殖、分化的作用可能与通过增加BMP2基因的表达有关.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小鼠成骨细胞Pax1表达的影响

目的探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对小鼠成骨细胞骨骼发育相关基因Pax1表达的影响。方法麻醉后取胎鼠的顶骨,采用改良的组织块培养法体外培养小鼠成骨细胞,碱性磷酸酶法鉴定成骨细胞,将浓度为100、200、500、1000和1500mg/L的DON分别作用于对数生长期的成骨细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测DON对成骨细胞增殖的作用。半定量RT-PCR和Western blotting检测不同剂量DON对体外培养小鼠成骨细胞Pax1 mRNA和蛋白质表达的影响。结果培养的细胞鉴定为成骨细胞,不同浓度DON能降低小鼠成骨细胞的增殖速度,并可增加小鼠成骨细胞Pax1 mRNA和蛋白质表达,随着DON浓度增加,小鼠成骨细胞Pax1基因表达增多越显著。结论 DON促进小鼠成骨细胞Pax1基因的表达,进而影响骨骼的发育。     

辛伐他汀对人骨髓基质细胞成骨、成脂分化的作用及其机制

[目的]研究辛伐他汀对体外培养的成人骨髓基质细胞成骨分化和成脂分化的影响,并探讨其作用机制。[方法]分离健康成人骨髓基质细胞进行培养,传代后骨分化诱导组和脂肪分化诱导组分别添加10-7mol/L的辛伐他汀,同时进行空白对照。实时荧光定量PCR检测转录因子Cbfa1在成骨细胞中的分化,PPARγ2和LPL在脂肪细胞分化过程中的表达;碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测成骨细胞ALP比活性;流式细胞仪、油红O(oilredO)染色检测细胞成脂分化能力。[结果]骨分化诱导组Cbfa1表达(P﹤0.01)、ALP比活性(P﹤0.05)均高于对照组,脂肪分化诱导组PPARγ2(P﹤0.01)、LPL(P﹤0.05)表达均低于对照组;流式细胞仪脂肪细胞计数及脂肪细胞形成脂滴能力实验组均低于对照组。[结论]10-7mol/L辛伐他汀能促进Cbfa1的表达,增强成骨细胞ALP比活性和细胞外基质矿化;抑制PPARγ2、LPL的表达及脂肪细胞分化。     

大豆异黄酮类对体外培养大鼠成骨细胞的影响

目的 :　探讨大豆异黄酮类提取物预防骨质疏松症在细胞水平的作用机制。方法 :　以经口给予大鼠大豆异黄酮类提取物后分离的血清作为干预物 ,加入新生 SD大鼠颅骨分离培养的成骨细胞 (OB)中。以噻唑蓝 (MTT)比色法检测细胞增殖情况 ;用对硝基酚磷酸盐法测定 OB碱性磷酸酶 (ALP)活性、用放免法测定 OB骨钙素 (BGP)含量 ,以反映 OB的分化状况 ;酶联免疫(ELISA)法检测 OB分泌细胞因子 IL-6的水平。。结果 :　以大豆异黄酮类提取物灌胃的大鼠血清可使体外培养大鼠成骨细胞 MTT吸光值明显增加 ,成骨细胞 ALP活性显著升高 ,成骨细胞BGP分泌显著增加 ,而其对 IL-6的分泌无明显影响。结论 :　大豆异黄酮类提取物可明显促进体外培养的大鼠成骨细胞增殖和分化 ;对骨吸收似无明显影响。推测大豆异黄酮类对骨质疏松的预防作用机制是促进骨细胞的增殖和分化     

人骨髓间充质干细胞诱导成骨分化

目的探讨人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在体外诱导培养分化为成骨细胞的方法,并研究其生物学特性。方法采用成年人hMSCs传代培养2～3代,经条件培养液诱导培养后,进行形态学观察及MTT实验,RT-PCR分析,蛋白质印迹实验,茜素红染色方法分析细胞矿化作用,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,骨钙素(osteocalcin,OCN)、RUNX2和BMPR2的检测。结果 hMSCs细胞,在诱导培养条件下,细胞碱性磷酸酶ALP活性明显增高,并出现了矿化结节。经过体外成骨诱导的hMSCs表现出增殖、聚集、结节和矿化期的阶段性形态特征。在矿化期骨钙素mRNA OCN表达升高,RUNX2和BMPR2蛋白表达增高。结论 hMSCs易于体外分离培养及扩增,体外成骨定向诱导的hMSCs具有典型的成骨细胞的形态和功能性特征,可以定向分化为成骨细胞。     

成骨生长肽联合胰岛素样生长因子对成骨细胞增值的影响

目的探讨成骨生长肽（OGP）联合胰岛素样生长因子（IGF）对体外培养成骨细胞增值分化的影响。方法：将鼠成骨细胞分别与OGP（10-10mmol／L）、IGF-1（100ng／ml）、OGP（10-10mmol／L）＋IGF-1（100ng／ml）共同培养,于1、3、5d分别进行3H—TdR、3H-Tproline的掺入量与单独使用因子组、对照组相比,在各个时段都存在显著性差异（P〈0．01）;OGP联合IGF组对碱性磷酸酶合成量与对照组、OGP、IGF组相比有显著性差异（P〈0．01）。结论：OGP联合IGF可显著促进成骨细胞DNA、胶原蛋白、碱性磷酸酶的合成,对促进成骨细胞增值分化有协同作用。     

牛乳骨桥蛋白对大鼠成骨细胞的影响

目的观察乳中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对体外培养大鼠成骨细胞的影响。方法采用二次酶消化法体外培养成骨细胞,MTT比色法测定骨桥蛋白对成骨细胞的增殖影响,ALP检测试剂盒测定细胞的ALP活性,RT-PCR法检测细胞中OPG/RANKL mRNA的表达。结果在细胞增殖实验中,OPN2.5μg/ml与对照组比较,成骨细胞的增殖不显著(P>0.05),5.0μg/ml组和10.0μg/ml组增殖显著(P<0.05),20μg/ml组和40μg/ml组增殖作用极显著差异(P<0.01);在成骨细胞ALP活性检测中,OPN10μg/ml组和20μg/ml组在第3、5、7和9d可提高ALP的活性(P<0.05),40μg/ml组在各个时期均能提高ALP的活性(P<0.01),2.5μg/ml组和5.0μg/ml组提高ALP的活性不显著;OPN能提高OPG/RANKL mRNA的表达。结论骨桥蛋白能够促进成骨细胞增殖、ALP活性和OPG/RANKL mRNA的表达。     

健骨二仙提取物对大鼠体外培养成骨细胞作用的研究

目的探讨健骨二仙提取物对大鼠体外培养成骨细胞的作用效果及对成骨细胞增殖的作用机理。方法采用新生大鼠颅骨进行成骨细胞分离,并在含10%的胎牛血清DMEM中进行体外培养,分别加入高、低剂量的健骨二仙提取物并与高、低剂量Premarin组、阴性组、Tamoxifen对照组、Tamoxifen阻断对照组进行对照,用MTT法进行成骨细胞增殖和活性检测。结果在培养24h后,健骨二仙提取物对培养成骨细胞增殖有明显的促进作用,培养到48h促进作用更为明显,表现出一定的时间相关性,且其作用不能被Tamoxifen阻断或完全阻断。结论健骨二仙提取物可促进成骨细胞增殖,且其对骨代谢的影响不通过或者主要不是通过雌激素样作用生效。     

胰岛素样生长因子-1对脓毒症大鼠血浆应激激素和胰岛素样生长因子-1受体表达的影响

目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对脓毒症大鼠血浆应激激素及骨骼肌IGF-1受体（IGF-1R）蛋白质和mRNA表达的影响。方法选择71只SD大鼠采用盲肠结扎穿孔法建立腹腔感染及颈静脉置管肠外营养（PN）模型后，将存活的30只大鼠随机分为脓毒症组（n=10）、PN组（n=10）及IGF-1组（n=10），另设正常组（n=10）。正常组和脓毒症组给予生理盐水，PN组给予营养支持，IGF-1组为PN＋IGF-1静脉注射，连续5天。第6天行颈动脉置管，开腹取门静脉血测定胰岛素、胰高血糖素、肾上腺素、皮质醇和IGF-1水平；免疫组织化学法及实时定量PCR法测定肝脏和骨骼肌IGF-1R蛋白质和mRNA的表达。结果与对照组相比，脓毒症组大鼠血浆胰岛素、胰高血糖素、肾上腺素、皮质醇水平显著升高，IGF-1显著下降（P〈0．01）；IGF-1组前5项指标较脓毒症组和PN组显著降低，IGF-1则显著升高（P〈0．05，P〈0．01）。脓毒症组肝脏和骨骼肌IGF-1R蛋白质及mRNA表达较对照组显著增强（P〈0．05，P〈0．01）；IGF-1组的IGF-1R蛋白质及mRNA表达较脓毒症组和PN组显著降低（P〈0．01）。结论IGF-1可改善应激激素之间的平衡，降低脓毒血症大鼠IGF-1R在蛋白质和mRNA水平的表达，从而有利于血糖的控制。     

胃腺癌组织中IGF-1R和VEGF的表达及其临床意义

目的探讨胃腺癌组织中胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其临床意义,分析二者的相关性。方法应用免疫组化SP技术,对56例胃腺癌组织、40例癌旁不典型增生组织和56例正常胃组织中IGF-1R和VEGF的表达情况进行检测分析。结果胃腺癌组织、癌旁不典型增生组织中IGF-1R和VEGF的阳性表达率显著高于正常胃组织(P<0.05);有淋巴结转移的胃癌组织中IGF-1R和VEGF的阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(P<0.05);IGF-1R和VEGF的阳性表达率随胃癌浸润深度的增加而增高(P<0.05);IGF-1R与VEGF的表达呈正相关(P<0.01)。结论IGF-1R和VEGF在胃腺癌组织中的高表达与胃腺癌的发生、发展、浸润及转移有关;二者可能在胃腺癌的发生发展中起了协同作用。     

IGF-1对体外培养囊胚细胞抗凋亡的作用

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对体外培养囊胚细胞抗凋亡的作用。方法:获取妊娠3.5天小鼠囊胚,分别移入3个培养皿中,为A、B、C 3组,A组(基础培养液)、B组(基础培养液+30 mmol/L的葡萄糖溶液)、C组(基础培养液+30 mmol/L的葡萄糖溶液+100 ng/ml的人重组IGF-1)。连续培养72 h后,采用免疫组化S-P法检测各组囊胚细胞中Bax和Bcl-2的表达,利用计算机图像分析技术测量各组囊胚细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达的平均光密度和平均阳性面积。结果:B组囊胚细胞中Bax的表达明显高于A组和C组(P<0.05),而B组囊胚细胞中Bcl-2的表达却低于A组和C组(P<0.05)。结论:IGF-1对高糖诱导的小鼠着床前早期胚胎凋亡起了抑制作用。     

IGF-1在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义

目的:探讨胰岛素生长因子(insulin-likegrowthfactor-1,IGF-1)在卵巢浆液性肿瘤中的表达及与卵巢浆液性腺癌生物学行为、预后的关系,以期为该肿瘤早期诊断、治疗及判断预后提供依据。方法:应用免疫组化ELIVISON二步法,检测IGF-1在37例卵巢浆液性腺癌、16例卵巢交界性浆液性肿瘤、12例良性卵巢浆液性肿瘤组织中的表达,并对37例卵巢浆液性腺癌患者进行随访。结果:①卵巢浆液性腺癌、交界性浆液性肿瘤、良性卵巢浆液性肿瘤组织中IGF-1的阳性表达率分别为64.86%(24/37)、43.75%(7/16)、8.33%(1/12),卵巢浆液性腺癌组织中IGF-1的表达高于卵巢交界性浆液性肿瘤和良性卵巢浆液性肿瘤,卵巢交界性浆液性肿瘤又高于良性卵巢浆液性肿瘤,差异均有统计学意义(P<0.05)。②卵巢浆液性腺癌组织中IGF-1蛋白表达与病理分级、淋巴结转移相关(P<0.01),而与临床分期无关(P>0.05)。③卵巢浆液性腺癌组织中IGF-1蛋白表达的阳性率在3年以上生存组中均显著低于3年内死亡组(P<0.01)。结论:①IGF-1蛋白在卵巢良性浆液性肿瘤、交界性浆液性肿瘤、卵巢浆液性腺癌组织中阳性表达率呈逐渐升高的趋势,其表达差异有统计学意义,提示IGF-1参与了肿瘤由良性向恶性转化、发展,有望成为卵巢癌早期的诊断辅助标记。②卵巢浆液性腺癌中IGF-1蛋白表达促进癌演进,并与癌细胞转移、患者预后密切相关。     

辛伐他汀对骨质疏松大鼠血清细胞因子IL-6、IGF-I水平的影响

目的:观察辛伐他汀对去卵巢大鼠血清细胞因子IL-6和IGF-I水平的影响。方法:选择健康雌性Wistar大鼠27只,3月龄,体重(200±30)g,随机分为A、B、C3组,每组9只。A组行开关术,其余两组行双侧卵巢切除术。术后1周A、B两组均灌服生理盐水1.5ml/只/d,C组给予辛伐他汀5mg/kg/d,共10周。双能X线骨密度仪测量股骨和胫骨骨密度(BMD);ELISA定量测定血清细胞因子IL-6、IGF-I水平。结果:B组血清IL-6水平明显高于A、C组(P<0.001)。C组血清IGF-I水平与B组比较差异无显著性(P>0.05);A组血清IGF-I水平明显高于B组(P<0.001)。股骨BMD和胫骨BMD与血清IL-6水平均呈显著负相关(P<0.001),而与血清IGF-I水平均呈显著正相关(P<0.05)。结论:他汀类药物能够下调IL-6的表达水平;但对IGF-I影响作用不大。