Na^＋—D^＋—ATP酶活性在豚鼠内淋巴囊的细胞化学定位

Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶在Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋离子主动性跨上皮转运过程中起重要作用。应用对硝基苯酚磷酸（ｐ－ＮＰＰ）为底物的柠檬酸铅一步法Ｋ＾＋－ＮＰＰ酶电细胞化学技术，观察了反映Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性的Ｋ＾＋－ＮＰＰ酶在豚鼠内淋巴囊的超微结构定位分布。结果：在透射电镜下观察，内淋巴囊超薄切片上的Ｄ＾＋－ＮＰＰ酶活性反应产物仅分布于上皮细胞底侧面胞膜的胞浆一侧，向上一直延续至上皮细胞间的紧密     

庆大霉素对豚鼠内淋巴囊和血管纹Na^＋—K^＋—ATP酶活性的影响

应用酶细胞化学技术和计算机图像分析，对豚鼠连续肌注庆大霉素２－１５ｄ后内淋巴囊上皮细胞和血管纹边缘细胞的Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性变化进行了定量观察。结果发现，与正常对照组相比，用药２ｄ后两类细胞的Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性反应产物没有明显变化，但连续用药５ｄ后二者的产物均明显减少，１０ｄ和１５ｄ仍呈继续轻微减少趋势。表明庆大霉素既可抑制血管纹边缘细胞Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性，降低其     

豚鼠内淋巴囊Na—K—ATP酶亚基异构体的表达

目的 研究豚鼠内淋巴囊组织中Na,K-ATP酶α、 β亚基各个异构体的表达及其意义。方法 分别采用免疫组化汉和原位杂交法观察豚鼠内淋巴囊组织 Na,K-ATP酶α和β亚基异构体的分布。结果 Na,K-ATP酶不同的亚基异构体在豚鼠内淋巴囊上皮细胞和上皮下组织的表达有差异。内淋巴囊上皮细胞的胞膜主要表达α1、β1和β2异构体，且β2表达较β1表达更强，上皮下组织细胞的胞膜则主要表达α1和α2异构体，且α1表达较α2表达强，而上皮细胞和上皮下组织中均未见有α3 异构体表达。结论 内淋巴囊组织的Na,K-ATP酶由不同亚基异构体组成，它们协同作用参与保持内耳内环境的稳定。     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞的免疫组织化学特性

本文应用免疫组织化学技术探索了中间丝和Ｓ－１００蛋白在豚鼠内淋巴囊上皮细胞的表达，结果表明：囊上皮细胞不仅具有上皮细胞特异的中间丝角蛋白阳性反应，还具有间胚叶组织特异的中间丝波形蛋白强阳性反应。两特性的共存可能与该上皮具有吸收和分泌双重功能有关。Ｓ－１００蛋白强阳性反应表明此上皮细胞富含钙结合蛋白，可能与其调钙作用有关。     

豚鼠耳蜗血管纹Na^＋—K＋—ATP酶组织化学一步检查法介绍

介绍一种豚鼠耳蜗血管纹Na~+-K~+-ATP酶的组织化学一步检查法,即:采用多聚甲醛豚鼠耳蜗活体局部灌注固定,肾脏组织夹持螺旋韧带(含血管纹),明胶包埋,冰冻切片,光镜观察,组化反应采用对硝基苯磷酸钠(P-NPP)为底物,柠檬酸铅为捕捉剂的一步法。本法不需复杂实验条件,结果稳定,操作简便,适宜于一般实验室开展。     

Na~＋－K~＋－ATP酶活性在豚鼠内淋巴囊的细胞化学定位

Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶在Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋离子主动性跨上皮转运过程中起重要作用。应用对硝基苯酚磷酸（ｐ－ＮＰＰ）为底物的柠檬酸铅一步法Ｋ￣＋－ＮＰＰ酶电镜细胞化学技术，观察了反映Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶活性的Ｋ￣＋－ＮＰＰ酶在豚鼠内淋巴囊的超微结构定位分布。结果：在透射电镜下观察，内淋巴囊超薄切片上的Ｋ￣＋－ＮＰＰ酶活性反应产物仅分布于上皮细胞底侧面胞膜的胞浆一侧，向上一直延续至上皮细胞间的紧密连接水平，内淋巴腔面胞膜未见反应产物。提示丰富的Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶活性特征性地分布在内淋巴囊上皮细胞底侧面胞膜，表明Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶在内淋巴囊上皮Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋离子交换过程中的重要地位。     

豚鼠内淋巴囊Na-K-ATP酶亚基异构体的表达

目的研究豚鼠内淋巴囊组织中Na,K-ATP酶α、β亚基各个异构体的表达及其意义。方法分别采用免疫组化法和原位杂交法观察豚鼠内淋巴囊组织中Na,K-ATP酶α和β亚基异构体的分布。结果Na,K-ATP酶不同的亚基异构体在豚鼠内淋巴囊上皮细胞和上皮下组织的表达有差异。内淋巴囊上皮细胞的胞膜主要表达α1、β1和β2异构体,且β2表达较β1表达更强,上皮下组织细胞的胞膜则主要表达α1和α2异构体,且α1表达较α2表达强,而上皮细胞和上皮下组织中均未见有α3异构体表达。结论内淋巴囊组织的Na,K-ATP酶由不同亚基异构体组成,它们协同作用参与保持内耳内环境的稳定。     

庆大霉素对豚鼠内淋巴囊和血管纹Na~＋－K~＋－ATP酶活性的影响

应用酶细胞化学技术和计算机图像分析，对豚鼠连续肌注庆大霉素（１００ｍｇ·ｋｇ－１／ｄ）２～１５ｄ后内淋巴囊上皮细胞和血管纹边缘细胞的Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性变化进行了定量观察。结果发现，与正常对照组相比，用药２ｄ后两类细胞的Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性反应产物没有明显变化，但连续用药５ｄ后二者的产物均明显减少，１０ｄ和１５ｄ仍呈继续轻微减少趋势。表明庆大霉素既可抑制血管纹边缘细胞Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性，降低其分泌功能；同时也能抑制内淋巴囊上皮细胞的该酶活性，减弱其液体重吸收功能。     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞G蛋白的表达及其意义

目的：检测刺激性G蛋白(Gs)和抑制性G蛋白(Gi)在内淋巴囊上皮的表达,为深入研究G蛋白的功能奠定基础。方法：查阅Gs和Gi的基因序列，自行设计并委托Gibco公司合成引物，应用RT—PCR和原位杂交法检测Gas和GαimRNA在内淋巴囊上皮细胞的表达。结果：扩增的Gas和Gai片段长度分别为340bp和431bp；正常内淋巴囊上皮细胞内可见Gs和Gi的阳性颗粒。结论：正常豚鼠内淋巴囊上皮细胞存在Gas和GaimRNA的表达；G蛋白在内淋巴囊的信号转导和离子通道调节中可能起重要作用。     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞Na+,K+-ATP酶不同β亚基的mRNA表达

目的　进一步研究内淋巴囊上皮细胞Na ,K -ATP酶不同 β亚基的表达。方法　采用豚鼠内淋巴囊冰冻切片、原位杂交的方法检测Na ,K -ATP酶不同 β亚基mRNA在内淋巴囊上皮细胞中的表达。结果　在内淋巴囊上皮细胞胞浆内可见Na ,K -ATP酶不同 β亚基的阳性颗粒 ,β1亚基表达较弱 ,β2 亚基表达较强。结论　结合其他报道 ,内淋巴囊上皮细胞具有多种亚基异构体组成的Na ,K -ATP酶的表达 ,而结肠上皮、肾小管上皮的Na ,K -ATP酶几乎仅有α1β1型 ,提示其离子转运过程可能不同。     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞G蛋白的表达及其意义

目的:检测刺激性G蛋白(GS)和抑制性G蛋白(Gi)在内淋巴囊上皮的表达,为深入研究G蛋白的功能奠定基础。方法:查阅Gs和Gi的基因序列,自行设计并委托Gibco公司合成引物,应用RT-PCR和原位杂交法检测Gas和Gai mRNA在内淋巴囊上皮细胞的表达。结果:扩增的Gas和Gai片段长度分别为340bp和431bp;正常内淋巴囊上皮细胞内可见Gs和Gi的阳性颗粒。结论:正常豚鼠内淋巴囊上皮细胞存在Gas和Gai mRNA的表达;G蛋白在内淋巴囊的信号转导和离子通道调节中可能起重要作用。     

豚鼠内淋巴囊的缺血病理改变

为了阐明内淋巴囊（ＥｎｄｏｌｙｍｐｈａｔｉｃＳａｃ，ＥＳ）的缺血病变，本文将１６只豚鼠ＥＳ供血动脉阻断，并在不同缺血时相对其病理损伤作光镜观察。结果：缺血早期ＥＳ上皮细胞混浊肿胀，气球样变，部分细胞崩解坏死，上皮下组织水肿出血；缺血中期上皮细胞萎缩变性，中间部皱褶带消失；缺血晚期上皮坏死区出现新生结缔组织及新骨，囊周缺血病变与Ｍｅｎｉｅｒｅ病囊周病理改变相似     

豚鼠耳蜗和内淋巴囊上皮钠通道的表达

目的 研究豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中上皮钠通道(epithelial sodium channel,ENaC)α、β、γ亚基的表达及其意义.方法 用兔抗大鼠ENaC α、β和γ亚基的多克隆抗体,采用免疫组化SP法观察豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中α、β、γ-ENaC的表达模式.另用α-ENaC cDNA质粒合成探针,原位杂交法检测豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中α-ENaC mRNA的表达.结果 免疫组化显示,在豚鼠耳蜗中,α-ENaC蛋白强烈表达于螺旋缘,而螺旋韧带、Corti器、Reissner膜等处的表达较弱;β-ENaC蛋白在螺旋韧带、螺旋缘和螺旋神经节、Corti器、Reissner膜等处的表达均呈弱阳性;γ-ENaC蛋白则在螺旋韧带的上半部、螺旋缘和螺旋神经节等处的表达呈强阳性,Corti器、Reissner膜等处也有阳性表达.三个亚基在血管纹中均呈阴性表达.在内淋巴囊中,α、β和γ亚基均较明显地表达于上皮细胞和上皮下纤维组织.原位杂交显示,α-ENaC mRNA除了表达于螺旋缘、螺旋韧带下部外,还表达于血管纹,而在内淋巴囊的上皮细胞和上皮下纤维组织也均呈阳性表达.结论 ENaC的各个亚基以不同的模式分布于豚鼠耳蜗和内淋巴囊的各个区域,形成功能性通道参与内淋巴的调节,从而保持内耳内环境的稳定.     

豚鼠内淋巴管和内淋巴囊的扫描电镜观察

目的 探讨豚鼠内淋巴管和内淋巴囊的表面超微结构特点。方法 用扫描电子显微镜观察正常豚鼠内淋巴管和内淋巴囊的表面超微结构。结果 内淋巴管的管腔面光滑、平整，上皮细胞表面的微绒毛少且短。细胞间隐窝小而少。内淋巴囊近端部上皮细胞表面的微绒毛明显增多、变长，细胞间隐窝明显．偶尔可见细胞顶部的胞饮小泡。内淋巴囊的中间部腔面上皮突起，复合折叠形成褶皱，细胞间隐窝多而大，突向囊腔的细胞多，囊腔内充满细胞和细胞碎片。根据电子密度上皮细胞可分为亮细胞和暗细胞两型，其中暗细胞较多，两型细胞表面均有大量长的微绒毛。细胞顶部可见到较多的胞饮小泡。内淋巴囊远端部的结构与内淋巴管近似，腔面光滑，上皮褶皱小，无细胞间隐窝，上皮细胞以亮细胞为主，表面微绒毛少而短，几乎没有胞饮小泡。结论 内淋巴管及内淋巴囊各部分的结构存在明显的不同，各有特点，这种结构特点可能与其在内淋巴代谢中的不同作用有关。     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞的免疫组织化学特性

本文应用免疫组织化学技术探索了中间丝和Ｓ－１００蛋白在豚鼠内淋巴囊上皮细胞的表达，结果表明：囊上皮细胞不仅具有上皮组织特异的中间丝角蛋白阳性反应，还具有间胚叶组织特异的中间丝波形蛋白强阳性反应。两特性的共存可能与该上皮具有吸收和分泌双重功能有关。Ｓ－１００蛋白强阳性反应表明此上皮细胞富含钙结合蛋白，可能与其调钙作用有关。     

豚鼠内淋巴管与内淋巴囊微血管模式及解剖差异

为研究内淋巴管及内淋巴囊微血管分布模式，通过墨汁血管灌流技术和图像分析方法对１０只豚鼠的颞骨（２０侧）内淋巴管和内淋巴囊做全面观察分析。结果：①２０侧颞骨中有１７侧（８５％）内淋巴管、内淋巴囊有脑膜后动脉和前庭后动脉两条供血来源，其余３侧（１５％）则发现前庭后动脉缺如；②脑膜后动脉在内淋巴囊的分布频率明显高于前庭后动脉（Ｐ＜０．０１），但两者在内淋巴管的分布频率差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论：内淋巴管、内淋巴囊的血供来源及微血管分布模式存在一定的解剖差异，脑膜后动脉是内淋巴囊血管网的主体     

豚鼠内淋巴管与内淋巴囊微血管模式及解剖差异

为研究内淋巴管及内淋巴囊微血管分布模式，通过墨汁血管灌流技术和图像分析方法对１０只豚鼠的颞骨（２０侧）内淋巴管和内淋巴囊做全面观察分析。结果：①２０侧颞骨中有１７侧（８５％）内淋巴管、内淋巴囊有脑膜后动脉和前庭后动脉两条供血来源，其余３例（１５％）则发现前庭后动脉缺如；②脑膜后动脉在内淋巴囊的分布频率明显高于前庭后动脉（Ｐ〈０．０１），但两者在内淋巴管的分布频率无显著性（Ｐ〉０．０５）。结论：内淋     

内淋巴囊上皮细胞透明质酸合成酶mRNA的表达

目的 研究内淋巴囊上皮细胞透明质酸合成酶（ｈｙａｌｕｒｏｎａｎｓｙｎｔｈａｓｅ）ｍＲＮＡ的表达及其意义。方法 在查阅核酸序列数据库基础上,采用Ｍｏｔｉｆ程序分析各物种（大鼠,小鼠,爪蟾,人类）透明质酸合成酶的保守序列,应用原位杂交技术检测透明质酸合成酶ｍＲＮＡ在内淋巴囊上皮细胞的表达。结果 内淋巴囊近侧端,中间部均有部分上皮细胞胞浆显示透明质酸合成酶ｍＲＮＡ的阳性表达。结论 在分子生物学水平证实了