乌鳖颗粒对免疫性卵巢早衰小鼠CD4^＋／CD8^及Fas、FasL蛋白表达的实验研究

目的：观察乌鳖颗粒对免疫性卵巢早衰小鼠CD4^＋／CD8^及Fas、FasL蛋白表达的影响。方法：采用雌性BALB／c小鼠皮下多点注射小鼠透明带多肽,建立免疫性卵巢早衰模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组、己烯雌酚组、六味地黄丸组、乌鳖颗粒大、中、小剂量组。另设正常组和佐剂组,共灌胃给药4周。实验末应用免疫组化法测定脾脏CD4^＋、CD8^,计算CD4^＋／CD8^的比值。应用免疫组化法测定卵巢Fas、FasL蛋白的表达。结果：模型组小鼠脾脏CD4^＋／CD8^比值明显高于正常组和佐剂组（P〈0．05）。乌鳖颗粒各剂量组小鼠脾脏CD4^＋／CD8^比值明显低于模型组（P〈0．05,P〈0．01）。模型组小鼠卵巢Fas蛋白表达低于正常组,Fas—L蛋白表达明显高于正常组,卵巢Fas、Fas—L蛋白表达和Fas／Fas—L比值与正常组比较具有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）。乌鳖颗粒大剂量组和中剂量组小鼠Fas蛋白表达明显高于模型组,（P〈0．05,P〈0．01）。乌鳖颗粒各剂量组Fas—L蛋白表达明显低于模型组（P〈0．05,P〈0．01）。乌鳖颗粒大剂量组、中剂量组小鼠Fas／Fas—L比值与模型组比较具有显著性差异（P〈0．01）。结论：乌鳖颗粒对免疫性卵巢早衰小鼠具有调节CD4^＋／CD8^比值和Fas／FasL系统的作用。     

乌鳖颗粒拮抗D半乳糖致小鼠卵巢早衰的实验研究

目的:探讨D半乳糖致雌性小鼠卵巢早衰动物模型的可行性和乌鳖颗粒的作用机理。方法:选取有正常动情周期的雌性小鼠,随机分为7组,每组10只,分别为正常组、模型组、己烯雌酚组、六味地黄丸组、乌鳖颗粒大、中、小剂量组。除正常组外,其余各组按每天0.5mL/只的剂量颈背部皮下注射5%D半乳糖溶液。第11天开始,灌胃给予治疗药,连续给药32天。每天定时观察阴道细胞,确定动情周期变化。实验末取血清测E2血清水平,取子宫和卵巢称湿重,计算子宫指数和卵巢指数,卵巢、子宫作组织形态学观察。结果:模型组小鼠动情周期紊乱,动情间期延长,乌鳖颗粒各剂量组小鼠在给药2周左右出现动情期延长。乌鳖颗粒各剂量组的卵巢指数、子宫指数与模型组小鼠比较具有显著性差异(P<0.01)。模型组小鼠的血清E2水平明显下降,与正常组比较具有显著性差异(P<0.01)。乌鳖颗粒大、中剂量组血清E2水平比模型组有明显的升高,与模型组比较具有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。乌鳖颗粒各剂量组的卵巢、子宫组织形态学明显改善。结论:乌鳖颗粒能促进子宫、卵巢的生长发育,改善卵巢、子宫的组织形态,调节卵巢内分泌的激素水平。     

坤泰胶囊对卵巢早衰大鼠Fas、FasL蛋白及mRNA表达的影响

目的:探讨坤泰胶囊对卵巢早衰大鼠的作用机制。方法:将12周龄SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、坤泰胶囊0.3、0.6、1.2g/kg组、结合雌激素片0.075mg/kg组。用75mg/kg雷公藤灌胃法建立卵巢早衰大鼠模型,于造模14天后各组分别灌胃给予相应药物,连续36天,实验过程中观察大鼠行为学改变及动情周期的变化。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清性激素水平;光镜下观察大鼠卵巢组织结构的变化;免疫组化法和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法分别检测大鼠卵巢组织相关因子Fas、FasL蛋白及mRNA表达水平的变化。结果:治疗组与模型组相比,大鼠体质量显著增加,血清性激素水平明显改善,Fas蛋白及mRNA表达明显升高、FasL蛋白及mRNA表达明显降低。结论:坤泰胶囊可纠正卵巢早衰大鼠紊乱的动情周期,调节大鼠体内的性激素水平,上调Fas蛋白及mRNA的表达,下调FasL蛋白及mRNA的表达,促进受损卵巢功能的修复,保护和改善卵巢功能。     

系统性红斑狼疮患者CD4+、CD8+T淋巴细胞与中医辨证分型的关系

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是一种自身免疫性疾病,其致病机制目前尚未完全阐明,可能涉及复制的细胞因子网络［1］。在发病过程中,T细胞和B细胞均发生功能异常［2］。为探讨SLE患者T淋巴细胞与中医辨证分型的关系,我们对58例不同证型SLE患者外周血中的CD+4、CD+8两大T淋巴细胞亚群进行了检测,现报道如下。     

补肾健脾复方对流产大鼠蜕膜Fas/FasL表达干预的实验研究

目的:研究补肾健脾复方对肾虚黄体抑制流产大鼠子宫蜕膜组织Fas/FasL表达的影响,进一步探讨中药保胎的免疫学机制.方法:将大鼠分为正常妊娠组、补肾健脾方组、黄体酮组、模型对照组4组.正常妊娠组从妊娠第1天起给予生理盐水8 mL/(kg·d)灌胃,连续11d;其余大鼠均于妊娠第1到第10天灌服羟基脲(450μg/g),第11天灌服米非司酮(3.75μg/g).在造模的同时,补肾健脾方组从妊娠第1天起给予补肾健脾方药8 mL/(kg·d)灌胃,连续10 d;黄体酮组从妊娠第1天起肌注黄体酮针8 mL/(kg·d),隔天1次,连续10 d;模型组从妊娠第1天起给予生理盐水8 mL/(kg·d)灌胃,连续10 d.于大鼠妊娠第12天,处死大鼠,解剖子宫取蜕膜组织,用免疫组织化学S-P法检测Fas和FasL表达.结果:与正常妊娠组对比,模型组蜕膜组织Fas表达增高,FasL表达降低,差别有统计学意义(P＜0.01).与模型组对比,补肾健脾方组Fas表达降低,FasL表达的强度增高,差别有统计学意义(P＜0.05).结论:补肾健脾复方可能一方面通过增加FasL的表达,使受异体抗原刺激增生的Fas阳性T淋巴细胞及时凋亡,使滋养细胞免受淋巴细胞的攻击;另一方面通过降低Fas表达,使Fas/FasL介导的AICD机制恢复平衡协调,从而起到安胎的作用.     

乌鳖口服液对自身免疫性卵巢早衰小鼠CD_4~+、CD_8~+和卵巢Fas、FasL蛋白表达的影响

目的:探讨乌鳖口服液对自身免疫性卵巢早衰小鼠的影响。方法:通过皮下多点注射小鼠透明带建立自身免疫性卵巢早衰小鼠模型。然后连续4周给予乌鳖口服液进行治疗,每天剂量为(16.5 g/kg)。通过酶联免疫法检测小鼠抗透明带抗体,用免疫组化法测定脾脏T细胞CD_4~+、CD_8~+的含量。同时用免疫组化法测定卵巢Fas、Fas L蛋白的表达。卵巢和脾脏做病理组织学的分析。结果:模型组小鼠抗透明带抗体的浓度(8.74±0.99)U/m L和CD_4~+/CD_8~+比值(1.74±0.31)增加,同时,模型组小鼠卵巢组织的Fas蛋白表达(0.54±0.29)减少,Fas-L蛋白表达(2.25±0.0)增加。与模型组比较,乌鳖口服液组小鼠抗透明带抗体的浓度(7.34±1.21)U/m L明显低于模型组(P0.05)。脾脏CD_4~+/CD_8~+比值(1.07±0.14)明显低于模型组(P0.01)。乌鳖口服液组FasL蛋白表达(1.29±0.86)明显低于模型组(P0.05)。结论:乌鳖口服液具有降低免疫性卵巢早衰小鼠外周血抗透明带抗体浓度的升高,调节CD_4~+/CD_8~+比值和Fas/FasL系统的作用。     

CD4+CD25+调节性T细胞对糖尿病小鼠细胞活化的影响

目的:探讨CD4+CD2+5调节性T细胞对糖尿病小鼠细胞活化的影响。方法:选取BALB/c小鼠,每日腹腔注射链脲佐菌素(STZ)40mg/kg,连续5天,建立1型糖尿病模型;从小鼠内眦静脉采血,检测血糖;取小鼠尿液,检测尿糖;流式细胞术检测BALB/c小鼠脾细胞悬液CD4+T细胞中CD28分子的表达水平及凋亡细胞的数量。结果:在注射STZ第2周和4周,BALB/c小鼠CD4+T细胞中的CD28水平未见明显变化;凋亡细胞的数量在注射STZ第2周明显升高(P<0.05),第4周进一步明显升高(P<0.01)。结论:CD4+CD25+调节性T细胞可能通过抑制CD28共刺激抑制BALB/c小鼠CD4+T细胞活化,从而影响细胞免疫功能。诱导免疫细胞凋亡可能是CD4+CD2+5调节性T细胞发挥抑制作用的又一表现形式。     

中药狼疮静颗粒对狼疮性BXSB小鼠脾脏CD4+T、CD19+B细胞凋亡的影响

目的：研究中药狼疮静颗粒对BXSB狼疮性小鼠脾脏CD4^+T、CD19^+B细胞凋亡的影响,并探讨其作用机理。方法：运用流式细胞术、免疫双荧光染色法检测脾脏CD4^+T、CD19^+B细胞凋亡。结果：雄性BXSB小鼠脾脏CD4^+T、CD19^+B细胞凋亡加速,中药狼疮静颗粒可明显抑制BXSB小鼠脾脏CD4^+T、CD19^+B细胞凋亡率。结论：中药狼疮静颗粒通过抑制T、B淋巴细胞过度凋亡,可能阻抑了过量核酸抗原释放,从而抑制了B细胞的异常增生活化,使自身抗体产生减少而达到治疗系统性红斑狼疮目的。     

上感颗粒对病毒性上呼吸道感染小鼠肺组织CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群的影响

目的:观察上感颗粒对病毒性上呼吸道感染小鼠肺组织CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的影响,探讨其治疗病毒性上呼吸道感染的免疫调节作用。方法:ICR小鼠随机分为正常组、模型组、抗病毒口服液组、利巴韦林组和上感颗粒高、中、低剂量组,分别造模、给药后,观察小鼠肺组织CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平。结果:抗病毒口服液组、利巴韦林组小鼠CD4+/CD8+水平降低,与模型组比较具有显著性差异;利巴韦林组CD4+和上感颗粒大剂量组CD4+、CD4+/CD8+水平明显降低,与模型组比较具有高度显著性差异。结论:上感颗粒可抑制病毒性上呼吸道感染小鼠肺组织中CD4+含量,提示其具有免疫调节作用。     

归肾育宫汤对免疫性卵巢早衰小鼠卵泡颗粒细胞Fas/FasL蛋白表达影响的实验研究

目的:观察归肾育宫汤对卵巢早衰小鼠卵泡细胞Fas/FasL蛋白表达的影响,揭示该方治疗卵巢早衰的作用机制。方法:60只雌性昆明小鼠,随机分成正常组、模型组、阳性对照组、归肾育宫汤大、中、小剂量组,每组10只;采用免疫法复制小鼠卵巢早衰模型,给药4周后,HE染色观察病理组织学变化,免疫组化法检测卵泡颗粒细胞Fas/FasL蛋白表达。结果:各组大鼠卵泡颗粒细胞Fas/FasL的表达比较,归肾育宫汤大、中剂量组、阳性对照组与模型组有显著性差异(P<0.01);组间比较,归肾育宫汤大、中剂量组优于雌激素组(P<0.01)。结论:归肾育宫汤能有效抑制卵泡颗粒细胞Fas/FasL蛋白的表达,对卵巢早衰小鼠的卵巢颗粒细胞过度凋亡有抑制作用。     

哮喘儿童外周血T淋巴细胞Fas/FasL的表达及其意义

目的探讨哮喘儿童外周血T淋巴细胞Fas、FasL表达及其意义。方法21例哮喘发作期患儿、15例哮喘缓解期患驰及25例正常儿童作为研究对象；密度梯度法分离外周血淋巴细胞；免疫荧光抗体法检测淋巴细胞Fas、FasL表达阳性率；用t检验和直线相关分析进行资料统计处理。结果发作期患儿淋巴细胞Fas表达明显下降，与正常对照组和缓解期患儿组比较差异均有非常显著意义（t=5．9142，3．1084，P〈0．01）；缓解期患儿淋巴细胞Fas表达比发作期患儿有明显提高，但与正常组相比仍有显著降低（t=2．3388，P〈0．05）；淋巴细胞FasL表达总体均较低，但在发作期患儿仍明显高于正常对照组（t=2．1861，P〈0．05），在缓解期患儿FasL表达虽高于正常对照组，但无统计学意义（t=1．7724，P〉0．05）；发作期患儿外周血中表达Fas的淋巴细胞阳性率与淋巴细胞比率呈明显的负相关（r=-0．632，P〈0．05），而表达FasL的淋巴细胞阳性率与淋巴细胞比率间无明显相关性。结论哮喘发作期和缓解期儿童存在淋巴细胞凋亡下降，这可能是哮喘患儿气道慢性炎症持续存在的原因；同时提示在缓解期患儿仍需继续维持治疗。     

浅谈卵巢早衰的中医护理

卵巢早衰病因复杂,近年发病呈逐年上升的趋势,用药治疗的同时,采用情志调护、饮食调护、用药外敷、针灸火罐等中医特色护理方法,辨证施护,可使患者体质改善,阴阳调和,不适减退,生活质量提高,进而逐渐恢复卵巢功能。     

心肌康对慢性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及Fas/FasL蛋白表达影响的实验研究

目的:观察心肌康对慢性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及Fas/FasL蛋白表达的影响,探讨心肌康的作用机制。方法:给Balb/c小鼠多次接种嗜鼠心肌柯萨奇B3病毒制作慢性VMC模型,首次感染病毒50天后将存活小鼠分为模型组、心肌康组及氯沙坦组,同时设正常对照组,分别予以相应药物干预30天,采用原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡及免疫组化方法检测Fas/FasL蛋白表达。结果:正常组未见到心肌细胞凋亡,模型组心肌细胞凋亡,凋亡率较正常组显著增加(P<0.05),心肌康组和氯沙坦组凋亡率较模型组显著降低(P<0.05)。模型组Fas/FasL蛋白表达较正常组显著增多(P<0.01),心肌康组和氯沙坦组较模型组显著降低(P<0.01)。结论:心肌细胞凋亡参与了慢性病毒性心肌炎的发病,心肌康能够抑制VMC心肌细胞的凋亡,通过下调Fas/FasL蛋白表达,对心肌细胞起到保护作用。     

补肾养血方对卵巢早衰小鼠凋亡调控蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的：探讨补肾养血方对免疫性卵巢早衰（POF）小鼠卵巢凋亡调节基因B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响。方法：以小鼠透明带3（Zp3）为抗原,皮下多点注射免疫 BALB/c雌性小鼠,14 d后强化免疫,建立免疫性卵巢早衰模型。设补肾养血方低、中、高剂量（5.1,10.2,20.4 g·kg^-1）进行治疗,以补佳乐（戊酸雌二醇0.6 mg·kg^-1）为阳性对照,于造模后15 d开始灌胃给药1次/d,连续6周（每1周休息1 d）。放射免疫法检测小鼠血清激素水平,Western法检测卵巢组织 Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果：与空白对照组相比,模型组小鼠卵巢Bcl-2蛋白的表达减少,Bax蛋白表达增加,（P<0.05）,模型组小鼠卵巢Bcl-2/Bax下降（P<0.01）,提示模型组卵泡Bcl-2蛋白的低表达、Bax蛋白的高表达可能加速了卵泡的凋亡,导致卵巢早衰;与模型组相比,补肾养血方高、中、低剂量组及西药组小鼠卵巢Bcl-2蛋白的表达明显增加（P<0.01,P<0.05）,卵巢Bax蛋白的表达均减少（P<0.05）,Bcl-2/Bax明显降低（P<0.05）。结论：卵泡凋亡过快可能导致卵巢早衰,补肾养血方可能通过上调卵泡及卵巢间质Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,抑制卵泡的过快凋亡,从而改善卵巢功能。     

补骨脂素加长波紫外线诱导NB4细胞凋亡及对Fas/FasL基因表达影响的研究

目的探讨自中药补骨脂中提取的补骨脂素(psoralen,PSO)加长波紫外线(ultraviolet A,UVA)诱导人白血病细胞NB4凋亡及对Fas/FasL基因表达的影响。方法以NB4细胞为研究对象,采用流式细胞术、透射电镜、定量PCR等方法观察不同浓度的PSO,在不同时间的波长为360 nm的UVA照射下,细胞凋亡率、细胞超微结构以及细胞Fas/FasL基因、蛋白表达水平的变化。结果(1)补骨脂素加长波紫外线(PUVA)可诱导NB4细胞凋亡,当PSO浓度为10、20、40、80μg/mL时,UVA照射5 min的细胞凋亡率分别为(26.57±0.42)%、(30.67±0.11)%、(34.90±0.30)%、(24.63±0.38)%,凋亡率呈剂量-时间依赖性,两因素间有交互作用。(2)电镜下观察经PUVA处理后的NB4细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变特征。(3)PUVA可上调NB4细胞Fas基因、蛋白的表达水平,并呈剂量-时间依赖性,在基因水平两因素间有交互作用,在蛋白水平两因素无交互作用。(4)PUVA可下调NB4细胞FasL基因、蛋白的表达水平,并呈剂量-时间依赖性,且两因素间有交互作用。结论PUVA可诱导白血病细胞NB4发生凋亡,Fas/FasL系统是PUVA诱导NB4细胞发生凋亡的作用途径之一。     

青蒿琥酯对人慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡及Fas/FasL蛋白表达的影响

目的研究中药青蒿琥酯体外诱导K562细胞凋亡的作用及其Fas/FasL蛋白的表达。方法采用MTT法、光学显微镜、透射电镜技术、流式细胞术对青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡进行了系统观察,并应用流式细胞术检测了Fas/FasL蛋白表达水平的改变。结果青蒿琥酯抑制K562细胞的增殖,IC50值为12.41μg/ml,其有时间、剂量-效应关系;50μg/ml的青蒿琥酯可诱导K562细胞凋亡,且具有时间-效应关系,同时上调K562细胞Fas蛋白的表达,下调FasL的表达。结论青蒿琥酯可诱导K562细胞凋亡,Fas/FasL表达的改变可能是青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡的机制之一。     

3种不同中医证型艾滋病患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的表达

目的:观察不同中医证型艾滋病患者CD4+CD2+5调节性T细胞(以下简称CD4+CD2+5 T细胞)的表达水平,探讨不同证型艾滋病免疫负调节能力。方法:根据艾滋病患者的症状、体征、舌象、脉象,按照中医辨证论治思路,分为肺肾不足、气虚血瘀、脾肾亏虚3种证型,设正常对照组30名,收集病例97例,观察不同证型艾滋病患者及正常对照组外周血CD4+CD2+5 T细胞的表达水平。结果:正常对照组、脾肾亏虚、肺肾不足、气虚血瘀各组患者CD4+CD2+5 T细胞的表达水平有统计学差异(P<0.001),脾肾亏虚型CD4+CD2+5 T细胞的表达水平最高,依次分别为肺肾不足型、气虚血瘀型。结论:不同证型艾滋病患者从病变初期的脾肾亏虚组,中期肺肾不足组,到疾病后期气虚血瘀组,CD4+CD2+5 T细胞的表达水平逐渐降低。