火把花根片对EAE大鼠治疗作用及VCAM-1影响的实验研究

目的:探讨火把化根片对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的治疗作用及VCAM-1的影响。方法:模型组采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福氏完全佐剂诱发大鼠急性EAE;治疗组在模型组基础上予以火把化根片(600mg.kg-1.d-1,日2次口服),观察临床表现并评分;HE染色和Loyez氏髓鞘染色观察病理和髓鞘改变;免疫组化技术测定脑和脊髓的VCAM-1水平。结果:治疗组未出现临床症状;VCAM-1为(2.13±0.99),与模型组比较P<0.05;脑和脊髓小血管周围炎症细胞浸润明显减少;髓鞘结构完整。结论:火把化根片对EAE有治疗作用,其作用机制与抑制VCAM-1表达有关。     

火把花根片对Lewis大鼠佐剂性关节炎影响及机制研究

目的:通过研究火把花根片对Lewis大鼠佐剂性关节炎模型关节肿胀度、血清中炎症因子浓度含量及调节性T细胞(Treg)比例等的影响,探讨火把花根片对佐剂性关节炎模型大鼠的治疗作用及可能的作用机制,为临床合理用药提供试验依据。方法:采用卡介苗联合弗氏不完全佐剂的方法诱导雄性Lewis大鼠建立佐剂性关节炎模型,观察不同给药剂量和不同给药时间对大鼠体重、左踝关节肿胀度及四肢关节指数的影响,酶联法测血清中IL-1α、IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10、MMP3浓度的变化,以及第21天时全血中Treg细胞比例变化和关节滑膜的病理变化。结果:火把花根片15g生药/kg和10g生药/kg剂量组踝关节肿胀度以及关节指数在治疗后7天、14天、21天均较模型组有明显下降;血清细胞因子IL-1α、IL-1β以及MMP3蛋白的浓度在治疗后14天、21天均较模型组有明显下降,IL-4、IL-10的浓度在治疗后14天、21天均较模型组有明显上升。给药后第21天,正常对照组以及火把花根片15g生药/kg和10g生药/kg剂量组的Treg细胞占T淋巴细胞比率较模型组明显为高;火把花根片15g生药/kg、10g生药/kg和5g生药/kg剂量组均能不同程度抑制足跖关节滑膜内炎性细胞浸润和巨噬细胞增生、抑制滑膜组织内滑膜与纤维组织增生。结论:火把花根片15g生药/kg和10g生药/kg连续给药3周均对大鼠佐剂性关节炎继发关节肿胀有明显的治疗作用,作用机制可能与其降低血清中促炎因子IL-1α、IL-1β及功能蛋白MMP3的浓度,升高血清中的抑炎因子IL-4、IL-10的浓度,增加调节性T细胞占T淋巴细胞的比例,抑制关节滑膜内炎细胞浸润与纤维增生有关。     

姜黄素对EAE大鼠脊髓中MMP-2、MMP-9表达的影响

目的:探讨姜黄素对EAE大鼠脊髓中MMP-2、MMP-9活性的影响。方法:采用豚鼠脊髓匀浆诱导EAE模型,治疗组给予姜黄素进行干预,观察行为学变化,HE染色观察脑组织病理改变,real—time PCR检测颈髓组织MMP-2、MMP-9mRNA表达。结果:与EAE组相比,姜黄素治疗组临床评分明显下降,病程缩短,而且恢复较快;中枢炎性细胞浸润明显减少;MMP-9的转录水平明显下降,两组之间差异具有显著性,而MMP-2的水平两者无明显差异。结论:姜黄素对EAE具有一定的治疗作用,可能与抑制炎症细胞浸润及降低MMP-9的水平有关。     

左归丸和右归丸对自身免疫性脑脊髓炎大鼠中枢神经系统淋巴细胞亚群免疫组化表达的影响

目的通过观察左归丸与右归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型大鼠脑、脊髓组织淋巴细胞亚群免疫组化表达的影响,探讨滋阴补肾法与温阳补肾法治疗EAE作用机制。方法应用髓鞘碱性蛋白与完全福氏佐剂,按体积比1：1制成抗原并于Lewis大鼠双后足垫下注射,建立EAE模型。120只Lewis大鼠随机分为正常组、模型组、激素组、左归丸组及右归丸组,每组24只,正常组和模型组给予生理盐水灌胃,3mL／（只·d）;激素组免疫后给予生理盐水灌胃,3mL／（只·d）,发病后改为醋酸泼尼松混悬液灌胃,5mg／（kg·d）;左归丸组免疫后给予左归丸混悬液,2g／（kg·d）;右归丸组免疫后给予右归丸混悬液,3g／（kg·d）。直至处死。分别于急性期（免疫后15d）和缓解期（免疫后27d）随机选取各组大鼠,取脑和脊髓组织切片进行CD4^＋、CD8^＋、CD3^＋、CD19^＋免疫组化染色。结果造模后第15日及第27日,模型组脑和脊髓组织中CD4^＋免疫组化表达均较正常组升高（P〈0．01）,CD8^＋表达降低（P〈0．05）,CD4^＋／CD8^＋比值升高（P〈0．01）;同模型组比较,左归丸组、右归丸组、激素组CD4^＋免疫组化表达均降低（P〈0．01）,且在造模后第27日,左归丸组和右归丸组脊髓组织CD4^＋表达较激素组显著降低（P〈0．01）;造模后第15日,右归丸组和激素组CD8^＋表达较模型组升高（P〈0．01）,造模后第27日,左归丸组和激素组CD8^＋表达较模型组升高（P〈0．01）;不同时点激素组、左归丸组及右归丸组CD4^＋／CD8^＋比值均显著低于模型组（P〈0．05）;造模后第15日及第27日,模型组中枢神经系统CD19^＋免疫组化表达均较正常组升高（P〈0．01）,急性期左归丸组、右归丸组、激素组脊髓组织CD19^＋表达较模型组降低（P〈0．01）,缓解期则见左归丸组和右归丸组CD19^＋表达减少（P〈0．01）。结论EAE大鼠CD4^＋／CO8^＋比值升高,这在EAE发病中发挥重要作用。滋阴补肾法和温阳补肾法可下调CD4^＋表达,下调CD4^＋／CD8^＋比值来治疗EAE。     

升降散对EAE大鼠免疫炎性因子的影响

目的探讨升降散对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠免疫炎性因子水平的影响及其抗炎效果和神经保护作用。方法将32只Wistar雌性大鼠随机分为正常对照组、模型组、醋酸泼尼松组、升降散组,通过皮下注射豚鼠脊髓匀浆诱导制备EAE大鼠模型。记录大鼠一般情况与神经功能评分;ELISA法检测血清白介素33(IL-33)及白介素35(IL-35)含量;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测组织中Toll样受体4(TLR4)的表达;组织切片HE染色观察炎性浸润程度。结果升降散能明显降低EAE大鼠的神经功能评分、延长其潜伏期并减轻疾病对体质量的消耗,但对疾病高峰期却没明显影响。在实验指标方面,升降散可明显减少EAE大鼠体内IL-33及TLR4的表达,并提升IL-35的水平。同时还能减轻大鼠神经组织的炎性损伤程度。结论升降散可以通过调节大鼠体内炎性因子的表达来减轻EAE大鼠神经损伤,一定程度上减轻EAE大鼠病变程度。     

火把花根片对SD大鼠围产期毒性的试验研究

目的:观察火把花根片对孕期、哺乳期的SD大鼠及子代生长发育和生殖功能的影响。方法:试验设4组,即火把花根片7.5、15.0、30.0 g生药/kg和溶媒对照组(纯化水),各组雌鼠从妊娠D15至子代(F1代)大鼠离乳(出生后D21)灌胃给药,每天1次;对亲代的生殖能力和子代的生长发育、生殖能力进行观察。结果:给药后亲代雌鼠和子代大鼠一般状况良好,体重、摄食量无异常变化;亲代雌鼠生殖功能、哺乳、胚胎发育,子代大鼠生理发育、反射机能、行为学习、生殖功能等指标均未见异常(P>0.05)。结论:火把花根片7.5 g生药/kg～30.0 g生药/kg对亲代大鼠的妊娠、哺乳、胚胎和子代大鼠生长发育、生殖能力未见明显毒性。     

左归丸与右归丸对EAE大鼠淋巴细胞亚群和NK细胞的影响

目的:通过观察左归丸与右归丸对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型(EAE)的影响,了解两者作用机制的异同。方法:应用髓鞘碱性蛋白与完全福氏佐剂按体积比1 1制成抗原并于Lewis大鼠双后足垫下注射,建立EAE模型。通过流式细胞仪技术观察淋巴细胞亚群及NK细胞水平。结果:造模后第15天,左归丸组CD4+细胞显著升高(P<0.05);模型组CD4+/CD8+比值高于正常组(P=0.052)。造模后第27天,模型组CD4+/CD8+比值明显升高(P<0.05);左归丸组CD4+/CD8+比值明显降低(P<0.05);左归丸组和右归丸组NK细胞明显升高(P<0.05)。结论:EAE大鼠CD4+/CD8+比值升高,这在EAE发病中发挥重要作用。滋阴补肾法可上调急性期CD4+细胞水平,下调缓解期CD4+/CD8+比值来治疗EAE。左归丸与右归丸可下调急性期NK细胞水平,上调缓解期NK细胞水平治疗EAE。     

苦参素注射液对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠NO/iNOS表达的影响

目的:观察苦参素注射液对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探讨苦参素苦参素对EAE大鼠的防治机制。方法:采用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂复制EAE模型,动物随机分为正常组,模型组,苦参素高、低剂量组(150,200 mg/kg),连续给药16天,并每天对各组大鼠进行神经功能学评分、苏木素-伊红(HE)和变色酸2R-亮绿(C-2R-BG)染色观察病理改变、硝酸还原酶法测定EAE大鼠血清中NO含量的变化、免疫组织化学法和RT-PCR法分别检测脊髓中iNOS及其mRNA的表达。结果:苦参素注射液150mg/kg能明显降低EAE大鼠的神经功能学评分,减轻模型组大鼠中枢神经系统炎症浸润和脱髓鞘,减少血清中NO的含量,抑制脊髓中iNOS及其mRNA的表达;与低剂量组相比,高剂量组(200mg/kg)对NO/iNOS系统的表达并没有显著差异。结论:苦参素注射液对EAE大鼠具有防治作用,其机制可能与抑制大鼠血清和脊髓中NO和iNOS的表达有关。     

火把花根片抑制溶血素抗体的量-时-效关系研究

目的:观察火把花根片抑制溶血素抗体的生成作用,考察量效关系与时效关系,为确定药物的最佳给药剂量和给药时间提供参考。方法:通过给小鼠腹腔注射鸡红细胞产生溶血素抗体的模型,观察不同给药剂量和不同给药时间对小鼠溶血素抗体生成的影响,同时进行了火把花根片对首次免疫和二次免疫后溶血素抗体生成抑制作用的比较研究。结果:量效关系实验结果表明:5g生药/kg、10g生药/kg及15g生药/kg对溶血素抗体生成的抑制率分别为0%、43.6%及71.8%。时效关系实验结果表明:火把花根片15g生药/kg给药3天、5天、7天的抑制率分别为24.0%、41.7%和61.1%;给药7天后停药,第7天、第14天、第21天及第28天的抑制率分别为27.3%、34.8%、41.4%及58.8%。首次和二次免疫实验结果表明:15g生药/kg连续给药14天,第7天和第14天(二次免疫)的抑制率分别为61.1%及6.3%。结论:火把花根片对小鼠溶血素抗体的生成有明显的抑制作用,半数有效量为:9.69g生药/kg,最佳给药剂量是15g生药/kg,最佳给药时间是7天,给药7天后的维持时间不低于4周。15g生药/kg连续给药14天对第二次免疫后溶血素抗体的生成没有明显的抑制作用。该研究为火把花根片的质量控制及该药物在临床更合理的使用提供有益的试验依据。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎Wistar大鼠模型建立

目的:用豚鼠脑脊髓匀浆(GPSCH)和百日咳杆菌诱导Wistar大鼠,建立实验性自身免疫性/过敏性/变态反应性脑脊髓炎(experi mental autoi mmune/allergic encephalomyelitis,EAE)模型。方法:将大鼠随机分为实验组A,阳性对照组B,阳性对照组C,正常对照组D。观察免疫后20天内各组动物EAE的发生率及临床神经功能评分。免疫后第20天处死全部动物,取脑、脊髓组织标本,在光镜下作病灶计数后相加,进行显著性检验。结果:A组动物从第12天起出现EAE症状,在随后的5~6天内发病数急速增加、严重程度加重,甚至死亡,组织学检查出现典型的急性EAE病理表现;B组动物从免疫后第15天起出现EAE症状,在随后的2~3天内发病数及严重程度轻度增加,但症状在免疫后第16天开始恢复。A组发病率、临床神经功能评分和病理改变都较B组明显,P<0.05。C、D组没有出现EAE症状。结论:本研究用豚鼠脑脊髓匀浆和百日咳杆菌免疫Wistar大鼠,诱导EAE模型的方法是稳定有效的,且可重复性高。     

雷公藤内酯醇对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠外周血SIL-2R表达的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠外周血清SIL-2R表达的影响。方法:模型组采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福氏完全佐剂诱发大鼠急性EAE,治疗组在模型组基础上予以不同剂量雷公藤内酯醇[0.2mg/(kg.d),0.4mg/(kg.d)],观察临床表现并评分;HE染色和Loyez氏髓鞘染色观察病理和髓鞘改变;ELISA法测定血清的SIL-2R水平。结果:高剂量组未出现临床症状;低剂量组EAE临床症状较模型组轻。高剂量组SIL-2R浓度为(36.43±5.43)mg/mL,与模型组和低剂量Tri组比较P<0.01和P<0.05;脑和脊髓小血管周围炎症细胞浸润明显减少;髓鞘结构完整。结论:雷公藤内酯醇对EAE的治疗有剂量相关性,其作用机制与抑制SIL-2R表达有关。     

雷公藤内酯醇对Wistar大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的治疗作用

目的：探讨雷公藤内酯醇对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）的治疗作用。方法：模型组采用豚鼠髓鞘蛋白和福氏完全佐刺及左旋咪唑诱发大鼠EAE；治疗组在模型组的基础上予以不同剂量雷公藤内酯醇。观察各组的发病情况；HE染色观察病理变化；Loyez氏髓鞘染色法观察髓鞘改变。结果：低剂量组EAE临床症状较模型组轻；高刺量组未出现临床症状；脑和脊髓炎症细胞浸润明显减少。结论：雷公藤内酯醇对EAE有治疗作用并与剂量相关。     

雷公藤内酯醇对Wistar大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的治疗作用

目的:探讨雷公藤内酯醇对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用。方法:模型组采用豚鼠髓鞘蛋白和福氏完全佐剂及左旋咪唑诱发大鼠EAE;治疗组在模型组的基础上予以不同剂量雷公藤内酯醇。观察各组的发病情况;HE染色观察病理变化;Loyez氏髓鞘染色法观察髓鞘改变。结果:低剂量组EAE临床症状较模型组轻;高剂量组未出现临床症状;脑和脊髓炎症细胞浸润明显减少。结论:雷公藤内酯醇对EAE有治疗作用并与剂量相关。     

独活对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠的神经保护作用研究

目的探讨独活对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠的神经保护作用。方法采用人工合成MOG35-55肽段诱发C57BL/6小鼠EAE模型,分组给药后观察神经功能变化;光镜观察组织学切片染色;ELISA检测IL-17和IL-23的含量。结果高剂量独活能明显改善EAE小鼠的临床症状,减轻脱髓鞘损伤,显著抑制其脾淋巴细胞分泌促炎细胞因子的能力。结论独活对实验性变态反应性脑脊髓炎具有神经保护作用。     

补肾固髓片对实验性变态反应性脑脊髓炎动物发病和血中IL-2、IL-6、TNF和MBP的影响

目的：观察中药补肾固髓片对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的发病及血中IL-2、IL-6、TNF和MBP的影响。方法：本实验采用兔脊髓匀浆和完全福氏佐剂制成的抗原-佐剂乳化液诱导豚鼠EAE动物模型,应用补肾固髓片作为治疗药物,以醋酸泼尼松作为对照药物,采用放射免疫分析法测定血中IL-2、IL-6、TNF和MBP的水平。结果：大剂量补肾固髓片能明显抑制EAE发病,并且能减轻其病情,同时对血清IL-2、IL-6、TNF和MBP活性有明显抑制作用;醋酸泼尼松组、中剂量补肾固髓片组部分指标与模型组比较有统计学差异,小剂量补肾固髓片组各项指标与模型组比较无显著性差异。结论：大剂量补肾固髓片能抑制IL-2、IL-6、TNF和MBP的活性,调节免疫功能,从而抑制EAE发病,疗效与醋酸泼尼松组无显著性盖异,提示中药补肾固髓片治疗MS有临床应用价值。     

白芍总苷对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠血清Th1型细胞因子的影响

目的:探讨白芍总苷(TGP)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)发病的治疗作用及其免疫学机制.方法:将50只大鼠随机分为正常对照组,EAE对照组及低,中,高剂量TGP治疗组,低,中,高剂量TGP治疗组大鼠造模后分别ig TGP 50,100,200 mg·kg -1·d-1,EAE对照组大鼠造模后ig等量生理盐水,观察各组的发病情况及血清中Th1型细胞因子γ干扰素(IFN-γ),肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平的变化.结果:TGP各剂量治疗组的症状均较EAE对照组轻,发病潜伏期均较EAE对照组明显延长,高峰期症状评分均较EAE对照组明显降低;各TGP治疗组治疗后血清IFN-γ,TNF-α水平均显著低于EAE对照组.上述改变呈剂量依赖性.结论:TGP对EAE具有治疗作用,其治疗效果呈剂量依赖性;其治疗机制与抑制Th1型细胞因子( IFN-γ,TNF-α)产生有关.     

补肾固髓片治疗多发性硬化的临床与实验研究

目的：观察补肾固髓片对多发性硬化（MS）的疗效及对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）豚鼠的影响。方法；应用补肾固髓片治疗MS患者43例，观察其治疗前后临床症状，神经功能体征，复发次数及诱发电位，磁共振（MRI）等变化；采用兔脊髓匀浆和完全福氏佐剂诱导豚鼠EAE动物模型，应用补肾固髓片治疗，以醋酸党委书记尼松作为对照药物，观察其发病，神经组织病理变化及其血清白细胞介素－2（IL－2），白细胞介素－6（IL－6），肿瘤坏死因子（TNF）和髓鞘碱性蛋白（MBP）水平。结果：补肾固髓片可改善MS患者的病情，减少复发，总有效率88．37％；实验研究发现大剂量补髓片能明显抑制AE发病，抑制脑和脊的炎症反应和脱髓鞘改变，抑制血清IL－2，IL－6，TNF和MBP的活性（与模型组比较，P＜0．01），与醋酸泼尼松组比较差异无显著性（P＞0．05），结论：补肾固髓片治疗MS疗效较好，提示其有临床研究与应用价值。     

左归丸和右归丸对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠髓鞘及轴突再生的影响

目的研究左归丸和右归丸对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠神经髓鞘和轴突再生的影响.方法应用髓鞘碱性蛋白(MBP)与完全福氏佐剂(CFA)按11(体积比)制成抗原,给动物两后足皮下注射MBP抗原免疫,建立大鼠EAE模型.以醋酸泼尼松作对照,利用髓鞘染色及免疫组织化学染色观察各组大鼠造模后14,28 d大脑和脊髓髓鞘和轴突损伤及再生的变化.结果左归丸成右归丸干预后大鼠髓鞘脱失程度均较模型组明显减轻,MBP及神经丝蛋白(NF200)表达显著高于模型组(P＜0.05或0.01).结论左归丸和右归丸能够修复EAE大鼠神经髓鞘和轴突的损伤,可能是其促进神经康复的分子机制之一.     

薯蓣皂苷对实验性变态反应性脑脊髓炎模型小鼠损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨薯蓣皂苷治疗实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的效果及其可能机制.方法:40只成年雌性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和薯蓣皂苷低、高剂量组,以髓鞘碱性蛋白+完全弗氏佐剂构建EAE小鼠模型.LFB和HE染色观察髓鞘和浸润细胞;免疫荧光染色检测T细胞活化标志物(CD4)、巨噬细胞活化标志物(F4/80)...