哮喘大鼠TGF—β1／Smad3信号通路中黄芪与激素调控的对比研究

目的：观察黄芪、糖皮质激素对哮喘大鼠TGF-β1／Smad3信号通路及哮喘气道重塑的对比调控作用。方法SPF级雄性SD大鼠50只随机分为5组,分别为对照组（A组）、哮喘组（B组）、布地奈德组（C组）、地塞米松组（D组）、黄芪组（F组）,每组10只。用卵白蛋白（OVA）致敏与激发建立大鼠哮喘模型。应用图像分析技术测定肺内支气管壁厚度（Wat）及平滑肌厚度（Wam）等重塑指标;免疫组化法检测肺组织TGF—β1、P—Smad3蛋白的表达;酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中TGF—β1的浓度。结果：干预组大鼠Wat、Warn较哮喘组显著性降低（均P〈0．01）,C组、D组Wat比较无显著性差异,但均低于黄芪组（均P〈0．01）;C组、D组Wam比较无显著性差异,D组Wam较F组有降低;免疫组化染色阳性结果呈棕黄色,TGF-β1蛋白表达于胞浆,P—Smad3蛋白表达于胞浆和胞核,主要表达于支气管上皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞及散在的炎性细胞。干预组TGF-β1的蛋白表达均显著低于哮喘组（P〈0．05或P〈0．01）;C组、D组、F组比较无显著性差异,P—Smad3蛋白表达：各干预组均显著低于哮喘组（均P〈0．01）,C组、F组之间无显著性差异,D组较F组降低（P〈0．01）;干预组血清、BALF中TGF—β1浓度与哮喘组比较有降低（均P〈0．01）,BALF中C组、D组、F组比较无显著性差异,血清中C组、D组无显著性差异,但均低于F组（P〈0．05或P〈0．01）。结论糖皮质激素、黄芪可通过调控TGF-β1／Smad3信号通路而拮抗气道重塑,但黄芪效果比糖皮质激素稍差。     

黄芪在哮喘大鼠气道重塑模型中对TGF-β1/Smad3信号通路的调控

目的：研究转换生长因子β1（TGF-β1）/Smad3信号通路在哮喘气道重塑中的作用,探讨黄芪对TGF-β1/Smad3信号通路及哮喘气道重塑的调控作用。方法：SPF级雄性SD大鼠30只随机分为3组,分别为对照组（A组）、哮喘组（B组）、黄芪组（F组）,每组10只。用卵白蛋白（OVA）致敏与激发建立大鼠哮喘模型。应用图像分析技术测定肺内支气管壁厚度（Wat）及平滑肌厚度（Wam）等重塑指标;免疫组化法及RT-PCR法检测肺组织TGF-β1、P-Smad3蛋白及mRNA的表达。结果：哮喘组大鼠Wat、Wam较对照组显著增加（均P〈0.01）,黄芪组与哮喘组比较有显著降低（均P〈0.01）,但仍高于对照组（P〈0.01）;免疫组化染色阳性结果呈棕黄色,TGF-β1蛋白表达于胞浆,P-Smad3蛋白表达于胞浆和胞核,主要表达于支气管上皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞及散在的炎性细胞。哮喘组TGF-β1和P-Smad3的蛋白表达均显著高于对照组（均P〈0.01）;黄芪组TGF-β1、P-Smad3的蛋白表达均显著低于哮喘组（均P〈0.01）,但仍高于对照组（均P〈0.01）。肺组织中TGF-β1 mRNA及Smad3 mRNA表达：哮喘组TGF-β1和P-Smad3的蛋白表达均显著高于对照组（均P〈0.01）;黄芪组TGF-β1、P-Smad3的蛋白表达均显著低于哮喘组（均P〈0.01）,但仍高于对照组（均P〈0.01）。结论：TGF-β1/Smad3信号通路参与了哮喘气道重塑过程,黄芪可通过调控TGF-β1/Smad3信号通路而拮抗气道重塑。     

宣肺健脾法对哮喘大鼠转化生长因子-β1及其受体表达的影响

目的:观察宣肺健脾法中药哮逐平对支气管哮喘大鼠的治疗作用,探讨其可能的作用机制。方法:SPF级雄性Wistar大鼠32只随机分为正常对照组(A组)8只、哮喘模型组(B组)8只、地塞米松组(C组)8只、哮逐平组(D组)8只。除A组外,余组动物建立哮喘模型。HE染色,观察支气管-肺组织病理学改变,以医学图像分析软件测量支气管基底膜周径(Pbm)、支气管壁厚度(Wat)和平滑肌厚度(Wam),支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞分类计数。免疫组化PV二步法染色,应用上述图像分析软件检测支气管-肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体Ⅰ(TβRⅠ)、受体Ⅱ(TβRⅡ)水平的积分光密度(IOD)。结果:与A组相比,B组EOS百分比、Wat、Wam和支气管-肺组织TGF-β1、TβRⅠ表达明显增加,具有非常显著性意义(P0.01)。经药物干预后,C和D组EOS百分比、Wat、Wam减少,支气管-肺组织TGF-β1、TβRⅠ表达显著降低(P0.05)。D组EOS百分比、Wat、Wam、TGF-β1和TβRⅠ减少尤为明显,与B组相比,均有显著差异(P0.05),其中Wat、Wam与A组相比,无显著性差异(P0.05)。与C组相比,D组EOS百分比、TGF-β1和TβRⅠ表达明显减少,具有非常显著性意义(P0.01)。结论:宣肺健脾法中药可能通过抑制哮喘大鼠支气管-肺组织TGF-β1及其受体的过度表达而影响平滑肌增殖、减轻气道壁增厚,干预气道重塑。     

宣肺健脾中药对哮喘大鼠支气管-肺组织病理学和转化生长因子-β_1的影响

目的观察宣肺健脾中药哮逐平对支气管哮喘大鼠的治疗作用,探讨其可能的作用机制。方法 SPF级雄性Wistar大鼠32只,随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、地塞米松组(C组)、哮逐平组(D组),每组8只。除A组外,其余组动物建立哮喘模型。HE染色,观察支气管-肺组织病理学改变,以医学图像分析软件测量支气管基底膜周径(Pbm)、支气管壁厚度(Wat)和平滑肌厚度(Wam)。免疫组化PV二步法染色,应用上述图像分析软件检测支气管-肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)的积分光密度(IOD)。结果与A组相比,B组Wat、Wam和支气管-肺组织TGF-β1含量明显增加,差异有统计学意义(P0.01)。经药物干预后,C、D组Wat、Wam减少及支气管-肺组织TGF-β1含量显著降低(P0.05)。D组Wat、Wam和TGF-β1减少尤为明显,与B组相比,差异有统计学意义(P0.05),其中Wat、Wam与A组相比,差异无统计学意义(P0.05)。与C组相比,D组TGF-β1含量明显下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论宣肺健脾中药可能通过抑制哮喘大鼠支气管-肺组织TGF-β1的过度表达而影响平滑肌增殖、减轻气道壁增厚,干预气道重塑。     

布地奈德对哮喘气道重塑大鼠尾加压素-Ⅱ及mRNA表达的影响

 目的 探讨布地奈德对哮喘气道重塑大鼠尾加压素-Ⅱ（U-Ⅱ）及其mRNA表达的影响。方法 24只清洁级雄性SD大鼠分为3组：对照组、哮喘组和布地奈德组。以卵清白蛋白(OVA)致敏激发法制备哮喘大鼠气道重塑模型,应用图像分析技术测定支气管壁厚度(Wat)和平滑肌厚度(Wam),酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中U-Ⅱ的浓度,免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法分别检测U-Ⅱ蛋白和U-Ⅱ mRNA在肺组织中的表达。结果 ①哮喘组Wat和Wam均显著高于对照组,布地奈德组Wat和Wam均显著低于哮喘组（均P <0.01）;②哮喘组血清和BALF中U-Ⅱ的浓度均显著高于对照组,布地奈德组上述指标均显著低于哮喘组（均P <0.01）;③免疫组化及RT-PCR结果显示,肺组织中U-Ⅱ蛋白及其mRNA的表达,哮喘组显著高于对照组,布地奈德组较哮喘组显著减弱（均P <0.01）;④相关性分析显示,大鼠肺组织Wat与U-Ⅱ蛋白、U-Ⅱ mRNA表达呈正相关（均P <0.01）,Wam与U-Ⅱ蛋白、U-Ⅱ mRNA表达呈正相关（均P<0.01）。结论 布地奈德对哮喘气道重塑的拮抗作用,可能通过抑制U-Ⅱ的表达起作用。
     

糖皮质激素、香菇多糖对哮喘气道重塑大鼠肺组织c-Jun氨基末端激酶表达的影响

 目的 研究糖皮质激素、香菇多糖（lentinan,LNT）对哮喘气道重塑大鼠肺组织c-Jun氨基末端激酶（JNK）表达的影响。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘组、布地奈德（BUD）组、地塞米松（DXM）组、LNT组,以卵白蛋白致敏和激发复制哮喘气道重塑模型,干预组分别于每次雾化激发前以BUD雾化或DXM、LNT腹腔注射干预,正常对照组以生理盐水代替卵清白蛋白致敏和激发。留取支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞分类计数。采用图像分析技术测定支气管壁厚度（Wat）和平滑肌厚度（Wam）,免疫组化（IHC）检测肺内磷酸化JNK（p-JNK）蛋白表达,WESTERN BLOT检测肺匀浆p-JNK表达,直线相关分析肺组织p-JNK蛋白平均吸光度（A_m）与BALF中嗜酸性粒细胞百分比（EOS%）的相关性以及Wat、Wam与p-JNK蛋白的相关性。 结果 哮喘组BALF中EOS%显著高于正常对照组（P＜0.01）,各干预组EOS%均显著低于哮喘组（均P＜0.01）,但仍高于正常对照组（P＜0.05或P＜0.01）;哮喘组气道壁厚度较正常对照组显著增加,各干预组可抑制气道壁增厚;BUD、DXM组Wam比较,无显著性差异（P＞0.05）,二者均低于LNT组（均P＜0.01）;BUD、LNT组Wat比较无显著性差异（P＞0.05）,但均比DXM组高（P＜0.05或P＜0.01）;IHC显示p-JNK蛋白主要表达于支气管上皮细胞、平滑肌细胞及散在炎性细胞的胞浆和胞核;IHC、WESTERN BLOT检测均显示哮喘组肺组织p-JNK蛋白表达增高;BUD、DXM、LNT均可抑制JNK磷酸化;BUD、DXM组p-JNK表达均较LNT组低（均P＜0.01）;肺组织p-JNK A_m与BALF中EOS%呈显著正相关（P＜0.01）,Wat、Wam与p-JNK A_m均呈显著正相关（均P＜0.01）。结论 BUD、DXM、LNT有减轻哮喘气道EOS炎症,抑制哮喘气道重塑的作用,其机制可能与其下调JNK表达有关;LNT抑制气道重塑的作用较糖皮质激素弱。     

宣肺健脾法对哮喘大鼠转化生长因子-β1及其抑制型Smad的影响

目的:观察宣肺健脾法对哮喘大鼠的治疗作用,探讨其可能的作用机制。方法:建立哮喘大鼠模型,观察支气管-肺组织病理学改变,检测支气管壁厚度(Wat)、平滑肌厚度(Wam)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体和Smad7的表达。结果:造模后Wat、Wam、TGF-β1及其受体Ⅰ(TβRⅠ)表达明显增加(P<0.01),Smad7 mRNA显著下调(P<0.01)。药物干预后,Wat、TGF-β1、TβRⅠ显著降低(P<0.05),Smad7 mRNA显著上调(P<0.01),中药组尤为明显。结论:宣肺健脾法可能通过抑制哮喘大鼠TGF-β1、TβRⅠ的过度表达,上调抑制型Smad,影响TGF-β/Smads通路的转导,减轻气道重塑。     

宣肺健脾中药对哮喘大鼠肺组织TGF-β1、TβR Ⅰ、TβRⅡ表达的影响

目的:观察宣肺健脾方对哮喘大鼠的治疗作用,探讨其可能的作用机制.方法:将Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组和宣肺健脾方组.除正常对照组外,其余各组动物建立哮喘模型.观察支气管一肺组织病理学改变,测量支气管基底膜周径、支气管壁厚度(Wat)和平滑肌厚度( Wam),支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞分类计数.免疫组化PV二步法检测TGF-β/Smads信号通路中配体(TGF-β)及其受体Ⅰ(TβR Ⅰ)、受体Ⅱ(TβRⅡ)水平.结果:模型对照组大鼠支气管肺组织有大量炎性细胞浸润,支气管腔内可见黏液栓和炎性细胞,支气管平滑肌层明显增厚;地塞米松组炎性细胞浸润减少,气管壁和平滑肌增厚明显减轻,黏膜结构较完整;宣肺健脾方组支气管黏膜上皮无明显增厚,管壁及其周围少量炎性细胞浸润.地塞米松组和宣肺健脾方组的Wat、Wam减少,宣肺健脾方组Wat、Wam较模型对照组低,差别有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01),但与正常对照组对比,差别无统计学意义(P＞0.05).与模型对照组对比,两药物组BALF中的嗜酸性粒细胞(EOS)、中性粒细胞(WEU)降低,巨噬细胞(MAC)升高,差别有统计学意义(P＜0.01).与正常对照组相比,模型对照组支气管一肺组织TGF-β1、TβR Ⅰ表达增加,差别有统计学意义(P＜0.01);2药物组TGF-β1、TβR Ⅰ表达降低,与模型对照组对比,差别有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01);宣肺健脾方组TGF-1β1、TβRⅠ表达较地塞米松组低,差别有统计学意义(P＜0.01).结论:宣肺健脾法可能通过抑制哮喘大鼠TGF-β1及其受体的过度表达而干预气道重塑.     

射干麻黄汤对慢性哮喘小鼠气道重塑和TGF-β_1的影响

目的:探讨射干麻黄汤对慢性哮喘小鼠气道重塑和转化生长因子-β_1(TGF-β_1)的影响。方法:健康清洁级BALB/c小鼠40只,每组10只,随机分为A组:正常对照组;B组:哮喘模型组;C组:地塞米松组;D组:射干麻黄汤组。建立慢性哮喘小鼠模型后,分别予以不同干预,取材后采用HE染色、病理图像分析、ABC-ELISA法、免疫组化、实时定量PCR技术等方法检测气道重塑及TGF-β_1的变化情况。结果:与A组比较,B、C、D组小鼠血管管壁厚度、气管平滑肌层厚度、气道旁和血管旁胶原纤维含量、BALF中TGF-β_1含量、肺组织TGF-β_1及TGF-β_1mRNA表达强度均明显增加,具有显著性差异(P0.05);与B组比较,C组、D组上述指标均明显降低,具有显著性差异(P0.05);C组与D组比较无显著性差异。结论:射干麻黄汤可抑制BALB/c哮喘小鼠气道重塑的发生,其机制有可能是通过降低TGF-β_1的表达而实现的。     

小青龙汤对0505大鼠TGF-β1／Smad3信号通路的影响

目的：探讨小青龙汤对哮喘大鼠TGF-β1／Smad3信号通路的影响。方法：将24只SPF级sD雄性大鼠随机分为正常对照组（A组）,支气管哮喘组（B组）和小青龙汤组（c组）,每组各8只。以卵清白蛋白（OVA）致敏与激发建立哮喘大鼠气道重塑模型。小青龙汤干预支气管哮喘大鼠后,HE染色观察各组气道壁嗜酸性粒细胞浸润及气道平滑肌增生情况;应用图像分析技术测定各组肺内支气管Wat、Wam等重塑指标;免疫组织化学法检测各组肺组织TGF-β1、Smad3蛋白的表达;酶联免疫吸附（ELISA）法测定各组血清中TGF-β1的浓度。结果：B组、C组大鼠Wat、warn较A组明显增加,差异均有统计学意义（P〈0．01）,C组Wat、Warn较B组低,差异具有统计学（P〈0．01）;免疫组织化学显示B组和C组TGF-β1及Smad3蛋白的表达明显高于A组,差异具有统计学（P〈0．01）,B组高于c组,差异具有统计学（P〈0．01）;血清中TGF-β1的浓度比较,B组和c组明显高于A组,差异具有统计学（P〈0．01）,B组高于c组,差异具有统计学（P〈0．01）。结论：小青龙汤可能通过影响支气管哮喘大鼠TGF-β1／Smad3信号通路来拮抗气道重塑,从而起到治疗作用。     

红景天苷通过NF-κB/TGF-β1信号通路抑制哮喘小鼠气道重塑的实验研究

目的探讨红景天苷对支气管哮喘小鼠气道重塑及核因子-κB(NF-κB)和转化生长因子-β1(TGF-β1)信号通路的影响。方法 40只清洁级雌性BABL/c小鼠,随机分为4组,每组10只,分别为对照组、模型组、红景天苷低剂量组、红景天苷高剂量组。以卵蛋白(OVA)致敏、激发制备小鼠哮喘模型,在末次激发24 h后取小鼠左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色、PAS染色、Masson染色;取右肺组织分别用酶联免疫吸附法(ELISA)、RT-PCR和Western blotting检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13水平以及TGF-β1 mRNA、蛋白和NF-κB p65蛋白表达。结果模型组与对照组比较,小鼠BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平增高;肺组织TGF-β1 mRNA、蛋白和NF-κB p65蛋白表达水平均显著升高(P<0.05、0.01)。红景天苷组与模型组比较,小鼠BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平,TGF-β1 mRNA、蛋白和NF-κB p65蛋白表达水平均显著降低(P<0.05、0.01),不同剂量红景天苷组间上述各指标间差异无统计学意义(P>0.05)。结论红景天苷可抑制哮喘小鼠气道重塑的发生,其部分机制可能是通过抑制NF-κB/TGF-β1信号通路而实现的。     

哮喘大鼠IKK/NF-kB信号通道及银杏叶提取物的调控作用

 目的探讨IkB激酶mRNA(IKKβmRNA)、核转录因子(NF-kB)、IL-5与气道炎症的关系及银杏叶提取物(Egb)对支气管哮喘(简称哮喘)炎症影响的机制。方法36只SD雄性大鼠随机分为正常组(C组)、哮喘组(A组)、Egb治疗组(E组)。复制哮喘大鼠模型,光镜观察病理形态学改变;分类计数法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞计数;分别以原位杂交法和免疫组化检测肺组织IKKβmRNA和NF-kB p65蛋白活性;ELISA法检测血清及BALF中IL-5的浓度。结果A组IKKβmRNA及NF- kB p65表达量均显著高于C组(均为P＜0.01);E组IKKβmRNA和NF-kB p65表达均显著低于A组(均为P＜0.01);A组血清及BALF中的IL-5的浓度均显著高于C组;E组血清及BALF中的IL-5的浓度均显著低于A组(均为P＜0.01);A组BLAF中的嗜酸细胞(EOS)显著高于C组(P＜0.01);E组BLAF中的EOS显著低于A组(P＜0.01)。结论哮喘组肺组织IKKβmRNA,NF-kB p65表达显著增强,Egb能有效抑制哮喘大鼠肺组织IKKβmRNA表达及NF-kB p65的活性,提示Egb能抑制IKK/NF-kB信号通道的活性,从而减轻气道炎症。     

从肺论治法和从肠论治法对克罗恩病大鼠肺与结肠TGF-β1含量的影响比较

目的:观察从肺论治法和从肠论治法对克罗恩病(CD)大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)含量的影响。方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)水溶液+无水乙醇一次灌肠法建立大鼠克罗恩病模型后分别灌喂从肺论治方(黄芪桔梗汤)、从肠论治方(黄芪黄连汤)和西药柳氮磺胺吡啶(SASP)进行实验性治疗,然后于0周、第3周两个时间点测定肺和结肠TGF-β1蛋白表达、TGF-β1 mRNA转录水平变化及血清中TGF-β1水平。结果:模型组大鼠0周时,结肠及肺组织中TGF-β1蛋白和TGF-β1 mRNA转录水平均较正常组显著升高(P<0.01),血清TGF-β1水平显著性高于正常组(P<0.01);3周后,模型组仍较正常组显著性性升高,各治疗组均较模型组显著性下调(P<0.01,P<0.05)。在下调结肠组织TGF-β1蛋白水平上,西药组虽然较模型组降低(P<0.05),但与正常组之间亦存在差异(P<0.01);且效果低于与中药从肠论治组(P<0.05)。而中药从肺论治组和从肠论治组与正常组之间没有明显差异。在下调肺组织TGF-β1 mRNA转录水平上,西药组与从肠论治组虽然较模型组降低(P<0.01),但与正常组之间亦存在差异(P<0.01)。而从肺论治组与正常组之间没有明显差异,但与从肠论治与西药组间存在差异(P<0.05)。在下调血清TGF-β1水平上,各治疗组虽较模型组下降但与正常组亦存在差异(P<0.01,P<0.05),而且从肠论治组较从肺论治组显著性降低(P<0.01)。结论:中西药物均能下调CD肺、肠组织、及血清中过度表达的TGF-β1,起到抗炎、促进修复、预防纤维化的作用;从肠论治方在减轻CD结肠组织的炎症反应、预防和减轻结肠组织纤维化方面效果突出;从肺论治方减轻肺内炎症和损伤,防止肺纤维化形成方面效果突出。     

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TGF-β1的影响

目的:探讨壮肝逐瘀煎在抗肝纤维化中的治疗作用机理。方法:Wistar大鼠120只,随机取16只为正常对照组(A),其余采用四氯化碳复合因素诱导大鼠肝纤维化,造模四周证实肝纤维化形成后随机分为病理模型组(B),壮肝逐瘀煎大、中、小剂量组(C、D、E),秋水仙碱组(F),大黄虫丸组(G),分别灌胃给药,A、B组予等容积生理盐水灌胃。于治疗12周后每组各取8只大鼠处死并取血清及肝组织,HE染色观察肝纤维化的形成,酶联免疫吸附实验法检测血清中TGF-β1因子的表达差异。结果:与病理模型组比较,C、D、E、F、G组肝纤维化程度均明显减轻(P<0.05或P<0.01),其中D组与F组比较有显著性差异(P<0.05);各治疗组血清中TGF-β1水平显著下降(P<0.01),C、D组降低血清TGF-β1水平均优于F、G组(P均<0.01)。结论:壮肝逐瘀煎能有效地改善实验大鼠肝纤维化程度,其机理可能与降低肝纤维化大鼠血清中TGF-β1水平有关。     

补肾温阳中药对哮喘小鼠Foxp3-mRNA表达及CD4~+CD25~+调节性T细胞水平的影响研究

目的建立哮喘样气道炎症小鼠动物模型。观察补肾温阳中药对哮喘小鼠Foxp3-mRNA表达与活化以及对CD4+CD25+调节性T细胞的数量、分化与功能的影响,探讨补肾温阳法在防治过敏性哮喘气道炎症的作用机制。方法 100只BALB/c小鼠随机分成4组:正常对照组、哮喘模型组、中药干预组及中药+抗体干预组,除正常对照组外,其余各组均以卵白蛋白(OVA)致敏激发方法建立小鼠哮喘模型,中药+抗体干预组小鼠于激发前30min事先给予抗IL-10&抗TGF-β抗体滴鼻。同时,中药干预组组、中药+抗体干预组于实验的第1天至第21天,每只小鼠给予补肾温阳中药(用淫羊藿、巴戟天、补骨脂免煎颗粒配制500μl)灌胃qod,哮喘模型组、正常对照组予等量的生理盐水作对照。观察各组支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数结果;取小鼠左肺组织作病理切片观察炎症改变;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组BALF上清细胞因子IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度及血清IgE水平;分离小鼠脾脏细胞,以流式细胞仪方法检测CD4+CD25+Treg细胞比例;用RT-PCR方法检测转录因子Foxp3-mRNA的表达。结果哮喘模型组、中药+抗体干预组小鼠BALF中细胞总数以及淋巴细胞、中性粒细胞和EOS百分比分别均高于正常对照组、中药干预组(分别为P<0.01、P<0.05、P<0.05和P<0.01),而巨噬细胞百分比与正常对照组、中药干预组相比较,则分别有所降低(P<0.05)。正常对照组、中药干预组BALF中IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度分别高于哮喘模型组(P<0.01)和中药+抗体干预组(P<0.05);中药干预组BALF中IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度低于正常对照组(P<0.05);哮喘模型组BALF上清细胞因子(IL-10、IFN-γ、TGF-β1)浓度高于中药+抗体干预组(P<0.05)。血清IgE水平正常对照组、中药干预组均分别低于哮喘模型组(均为P<0.01)及中药+抗体干预组(均为P<0.05);中药干预组血清IgE水平低于正常对照组(P<0.05)。哮喘模型组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、FoxP3-mRNA表达水平较正常对照组、中药干预组均明显减低,差异有统计学意义(分别为P<0.01,P<0.05);与哮喘模型组、中药+抗体干预组比较,中药干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、FoxP3-mRNA表达水平显著增高,差异有统计学意义(均为P<0.05);与正常对照组比较,中药干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、FoxP3-mRNA表达水平较低,差异有统计学意义(P<0.01);与哮喘模型组比较,中药+抗体干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、FoxP3-mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(均为P<0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞、FoxP3-mRNA、细胞因子(IL-10、IFN-γ、TGF-β1)均参与了支气管哮喘的发病过程,补肾温阳中药可通过上调CD4+CD25+调节性T细胞数量、诱导FoxP3-mRNA的表达与活化、降低血清IgE水平及增加IL-10、IFN-γ、TGF-β1含量等机制来达到减轻哮喘炎症的作用。     

地塞米松对变应性哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子及mRNA表达的影响

 目的探讨地塞米松对哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子(TARC)及其mRNA表达的影响。方法30只清洁级雄性BALB/C小鼠分为3组:正常对照组、哮喘组和地塞米松组。以卵清白蛋白(OVA)致敏激发法制备小鼠哮喘模型,末次激发24h后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。BALF行嗜酸性粒细胞(EOS)计数及分类;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测BALF中TARC和IL-4水平;免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测TARC蛋白和TARC mRNA在肺组织中的表达。结果①哮喘组BALF中细胞总数,EOS绝对数和EOS占细胞总数的百分数(EOS%)均显著高于正常对照组,地塞米松组上述指标均显著低于哮喘组(均P<0.01);②哮喘组BALF中TARC,IL-4浓度均显著高于对照组,地塞米松干预后BALF中TARC,IL-4浓度均显著低于哮喘组(均P<0.01)。③免疫组化及RT-PCR结果显示,肺组织中TARC蛋白及其mR-NA的表达,哮喘组显著高于对照组,地塞米松组较哮喘组显著减弱(均P<0.01),免疫组化显示,TARC蛋白主要表达于支气管上皮细胞。④相关性分析显示,小鼠BALF中TARC浓度与EOS绝对值、IL-4浓度均呈显著正相关(均P<0.01)。结论糖皮质激素(地塞米松)可抑制TARC在哮喘小鼠气道上皮中的表达,可能是其治疗哮喘气道炎症的部分作用机制。     

芪卫颗粒对KK-Ay小鼠肾组织TGF-β1/Smads信号转导通路的影响

目的 探讨芪卫颗粒延缓糖尿病肾病(DN)肾间质纤维化的分子作用机制.方法 自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠45只,采用高脂饲料喂养制备DN模型.将造模成功小鼠随机分为模型组、中药组[芪卫颗粒20 g/(kg·d)灌胃]、西药组[缬沙坦胶囊10mg/(kg ·d)灌胃],每组15只,另设C57BL/6J小鼠15只作为正常组,连续给药12周.采用免疫组织化学法检测各组小鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)表达,免疫印迹法检测磷酸化Smad2(P-Smad2)、磷酸化Smad3(P-Smad3)、Smad7及整合素连接激酶(ILK)的表达,实时荧光定量PCR法检测ILK mRNA表达. 结果 模型组小鼠肾组织中TGF-β、P-Smad2、P-Smad3、ILK及ILK mRNA表达较正常组明显增加(P＜0.01),Smad7表达明显下降(P＜0.01).中药组及西药组TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3、ILK及ILK mRNA表达较模型组显著减少(P＜0.05或P＜0.01),Smad7表达明显增加(P＜0.01).中药组P-Smad3表达较西药组增加(P＜0.05),其余指标两组比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 芪卫颗粒通过下调TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3、ILK的表达,上调Smad7的表达,影响TGF-β1/Smads信号通路,从而延缓了DN肾脏纤维化的发生发展.     

全蝎-蜈蚣药对对哮喘模型大鼠气道炎症及气道重塑的影响

目的:观察全蝎-蜈蚣药对对哮喘模型大鼠气道炎症及气道重塑的影响,初探全蝎-蜈蚣治疗哮喘的作用机制。方法:30只雄性SD大鼠随机分为3组:正常组(A组)、模型组(B组)、全蝎-蜈蚣组(C组),每组10只。以卵白蛋白致敏并长期吸入激发,制备大鼠支气管哮喘模型。C组予以全蝎-蜈蚣(0.625 g·kg-1·d-1)ig,每天1次,A组、B组则同时予以等量生理盐水ig,治疗3周。检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞(WBC)、嗜酸粒细胞(E)、吞噬细胞(M)、淋巴细胞(L)、中性粒细胞(N)计数及百分比,取支气管肺组织制作病理切片,HE染色、Masson染色观察各组大鼠支气管肺组织病理改变,医学图像分析软件检测支气管壁厚度(Wat/Pbm)、平滑肌厚度(Wam/Pbm)、胶原纤维厚度(Wac/Pbm),反映气道重塑的程度。结果:与正常组比较,模型组大鼠BALF中细胞数量、中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸粒细胞比例明显增加(P<0.01),模型组Wat/Pbm,Wam/Pbm,Wac/Pbm分别为(155.32±39.92),(22.11±3.42),(8.47±3.01)μm2/μm,正常组分别为(71.01±11.02),(5.51±1.76),(2.37±1.03)μm2/μm,模型组支气管壁、平滑肌层厚度明显增加(P<0.01)、胶原纤维明显增生(P<0.01);与模型组比较,全蝎-蜈蚣组大鼠BALF中细胞数量、中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸粒细胞比例明显减少(P<0.01),Wat/Pbm,Wam/Pbm,Wac/Pbm分别为(100.67±15.04),(17.08±4.92),(4.07±1.08)μm2/μm,支气管壁、平滑肌层厚度明显减轻(P<0.01)、胶原纤维增生程度明显减轻(P<0.01)。结论:"全蝎-蜈蚣"可改善哮喘模型大鼠气道炎症,同时减少支气管壁和平滑肌厚度,减轻胶原纤维增生,对气道重塑有一定的改善或延缓作用。     

黄芪对卵蛋白致敏大鼠肺组织中信号转导子和转录激活子6及mRNA表达的影响

 目的观察黄芪(Radix Astragali,RA)对支气管哮喘大鼠支气管信号转导子和转录激活子6(STAT6)及其mRNA表达的影响。方法用卵清白蛋白建立哮喘模型,SD大鼠随机分成4组:正常对照组、模型组、低剂量RA组和高剂量RA组。留取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行嗜酸性粒细胞(EOS)和分类计数;采用免疫组化法和原位杂交法分别检测STAT6蛋白和STAT6 mRNA的表达。结果①模型组BALF中EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比(EOS％)均显著高于正常对照组(P<0.01), 黄芪组上述指标均显著低于模型组(P<0.01);②免疫组化和原位杂交显示,模型组支气管STAT6蛋白和STAT6 mRNA表达均显著高于正常对照组,黄芪组较模型组均明显减弱(均为P<0.01),其主要表达细胞是上皮细胞;③支气管STAT6蛋白、STAT6 mRNA分别与BALF中的EOS绝对值呈显著正相关。结论黄芪有抑制哮喘气道EOS性炎症的作用,其机制可能与其下调 STAT6及其mRNA的表达有关。     

宣肺化痰活血法对哮喘大鼠气道重塑及TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的:观察宣肺化痰活血法对哮喘大鼠气道重塑和TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法:将72只SPF级SD大鼠随机分为A组(空白组)、B组(模型组)、C组(中药高剂量组)、D组(中药中剂量组)、E组(中药低剂量组)、F组(地塞米松组),每组12只。以卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘气道重塑大鼠模型,A组不造模。除B组外,C、D、E组每次激发前半小时分别给予高、中、低剂量宣肺活血化痰中药灌胃,F组给予地塞米松灌胃,连续8周。大鼠肺组织HE染色评定肺组织病理形态学改变,免疫组化法检测肺组织TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达,荧光定量PCR检测TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA相对表达。结果:与B组相比,C、D组TGF-β1、Smad3的蛋白和mRNA的表达都明显减少(P<0.05),C、D组Smad7的蛋白和mRNA的表达明显增加(P<0.05)。结论:宣肺化痰活血法可改善哮喘大鼠气道重塑,其机制可能与通过调节TGF-β1/Smad信号通路有关。