MRP1介导肿瘤的多药耐药

目的:探讨多药耐药相关蛋白基因MRP1介导肿瘤耐药机制,寻找逆转耐药的方法.方法:建立肝细胞癌单基因耐药细胞株HepG2/MRP1,体外转录合成目的siRNA片断,脂质体介导转染单基因肝细胞癌耐药细胞株,MTT法检测细胞对化疗药的敏感性,流式细胞仪检测药物浓度及细胞表面MRP1蛋白表达.结果:成功建立多药耐药细胞株,并筛选出靶向MRP1基因高效的siRNA分子.转染HepG2/MRP1细胞后,MRP1 mRNA及MRP1表达水平明显下调,细胞内DNR蓄积量增加,对ADM的IC50下调,相对逆转率达90％.转染前后细胞对化疗药敏感性、细胞内药物浓度、细胞表面MRP1蛋白质表达均有显著差异.结论:肿瘤多药耐药与MRP1高表达密切相关,RNAi技术能有效逆转由MRP1介导的肿瘤细胞的多药耐药.     

以MRP为靶标的siRNA增加鼻咽癌细胞放疗敏感性的研究

目的:研究以MRP为靶标的siRNA抑制相应基因表达后,对鼻咽癌细胞株CNE2和耐药CNE2/DDP细胞放疗敏感性的增加。方法:通过脂质体将以MRP基因为靶标的siRNA(终浓度100μmol/L)处理CNE2和CNE2/DDP细胞,6 h后分别给予照射剂量1、2、4和6 Gy,另设相同剂量的单纯照射组,以未作任何处理的对数生长期细胞为空白对照。于照射后24、48和72 h,用MTT法检测各组细胞生长抑制率。倒置显微镜下观察细胞生长状况,胰酶消化后透射电镜下检测细胞超微结构。RT-PCR检测各组细胞MRP基因mRNA表达水平,荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞MRP蛋白表达率和细胞凋亡率。结果:细胞分别转染以MRP为靶标的siRNA后,MRP基因的mRNA及蛋白表达明显减低,细胞对放疗敏感性明显增高,差异有统计学意义,P<0.01;细胞凋亡率也显著升高,P<0.05;倒置显微镜和透射电子显微镜下见细胞出现凋亡改变。结论:MRP与肿瘤细胞对放疗敏感性密切相关,以其为靶标的siRNA,通过降低靶基因蛋白和mRNA表达,明显增加耐药和亲本肿瘤细胞对放疗的敏感性。     

磁性纳米颗粒载ABCG2-siRNA逆转乳腺癌细胞对阿霉素耐药性的研究

目的：研究抑制乳腺癌耐药蛋白（ABCG2）表达对乳腺癌细胞耐药性的逆转作用,为乳腺癌基因靶向治疗提供新思路。方法：通过透射电镜和纳米粒度电位分析仪对磁性纳米颗粒（polyMAG）的粒径、电位进行表征,利用凝胶电泳阻滞实验检测polyMAG 与siRNA的结合情况,并用polyMAG携载不同浓度（5、10、20、50、100 nmol/L）ABCG2-siRNA,将其转染入乳腺癌细胞耐药株（MCF-7/ADR）后,采用CCK-8检测siRNA转染后细胞的存活率,荧光定量PCR和Western blotting分别检测ABCG2 mRNA和蛋白表达水平,Calcein-AM/PI染色观察细胞凋亡。结果：polyMAG粒径约100 nm,呈正电荷,表面电位29.6 mV。当polyMAG与ABCG2-siRNA的比为1：1和1：2时ABCG2-siRNA可完全结合。当20~100 nmol/L polyMAG-siRNA干扰ABCG2表达后,细胞存活率较未转染组明显降低（P < 0.05）。20 nmol/L polyMAG-siRNA转染组ABCG2 mRNA表达显著下调,约为未转染组的1/8（P < 0.05）,且凋亡细胞较其他组明显增多;50 nmol/L polyMAG-siRNA转染后可明显干扰ABCG2蛋白表达（P < 0.05）。结论：polyMAG-siRNA能高效干扰ABCG2表达,增加MCF-7/ADR细胞对阿霉素敏感性,逆转细胞耐药。     

SiRNA逆转T24/ADM细胞耐药性的研究

目的探讨siRNA（small interfering RNA）对膀胱癌多药耐药性的逆转作用。方法设计针对MDR1基因的siRNA,转染膀胱癌T24/ADM细胞,应用RT-PCR分析MDR1 mRNA的表达,免疫印迹检测MDR1蛋白表达,流式细胞仪检测细胞内阿霉素积累量。MTT法检测阿霉素对T24/ADM细胞的半数抑制浓度（IC50）。结果 3条siRNA均能不同程度地逆转T24/ADM细胞的多药耐药性,使MDR1基因的mRNA及蛋白表达水平下调,细胞内阿霉素积累量显著增加（P〈0.05）。结论 siRNA可逆转膀胱癌的多药耐药性。     

载体表达小干扰RNA逆转卵巢癌的多药耐药

目的:探讨载体表达的小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)逆转卵巢癌细胞多药耐药的可行性。方法:浓度梯度诱导法建立人卵巢癌阿霉素耐药细胞株OVCAR/AR;脂质体介导将MDR1特异性siRNA的表达载体(pSN/mdr1a和pSN/mdr1b)转染OVCAR/AR细胞;实时定量RT-PCR检测MDRlmRNA的表达;流式细胞术检测P-gp的表达,罗丹明试验检测P-gp的药物转运功能;MTT法检测OVCAR/AR细胞对化疗药的抵抗性。结果:转染pSN/mdr1a和pSN/mdr1b后,OVCAR/AR细胞的MDR1mRNA和P-gp的表达均显著下降,P-gp的转运功能减少,OVCAR/AR细胞对阿霉素、泰素的耐药性逆转。结论:载体表达的siRNA可持久有效地抑制卵巢癌耐药细胞MDR1mRNA和P-gp的表达,并逆转其多药耐药。     

凋亡抑制蛋白XIAP基因对A549细胞凋亡和化疗敏感性的影响

背景与目的X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)是新发现的一个IAP家族中的主要成员,是IAP家族中最强的凋亡抑制因子,它可直接抑制caspases并可多途径调节细胞凋亡。XIAP基因在大多数的肿瘤细胞株中过表达,其表达与肿瘤的进展、复发、预后以及肿瘤化疗的耐药密切相关。研究通过RNAi方法下调非小细胞肺癌(NSCLC)细胞NIC-A549的XIAP基因表达后,研究XIAP siRNA特异序列在NSCLC细胞凋亡和化疗敏感性方面的作用。方法应用半定量RT-PCR法检测A549细胞中XIAP mRNA基因的表达,设计并构建XIAP干扰性小RNA(small interfering RNA,siRNA)序列的表达载体,转染siRNA载体至A549中。荧光纤维镜确定转染效率,MTT法测定细胞增殖率及化疗药物对细胞杀伤率,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果酶切和DNA测序证实XIAP siRNA构建成功。荧光纤维镜显示阳性转染组及阴性转染组的细胞转染效率无差异。半定量RT-PCR法示阳性转染组较阴性转染组、未转染组细胞XIAP mRNA表达明显降低;与对照组相比,顺铂对阳性转染组XIAP mRNA表达的抑制作用明显增强、阳性转染组细胞增殖在24h、48h、72h、96h明显受抑制;细胞杀伤率、凋亡率明显增加。结论XIAP基因在NSCLC中表达增高,可抑制NSCLC细胞凋亡,导致NSCLC化疗耐药。XIAP siRNA序列可特异性地抑制NSCLC细胞增长,下调XIAP基因的表达,促进细胞凋亡,增加NSCLC化疗敏感性。XIAP siRNA序列有可能成为NSCLC治疗的靶标。     

反义MRP3寡核苷酸对卵巢癌拓普替康耐药性的逆转作用

目的:探讨MRP3反义寡核苷酸对人卵巢癌拓普替康(TPT)耐药株SKOV3/TPT细胞的耐药逆转作用。方法:人工合成MRP3反义寡核苷酸(ASODN)及相应的正义寡核苷酸(SODN)片段,用脂质体(LF)构建成ASODN/LF、SODN/LF,分别转染SKOV3/TPT细胞,用MTT法、流式细胞仪(FCM)及半定量RT-PCR检测体外转染后细胞内TPT的荧光强度、耐药指数及MRP3mRNA表达的改变。结果:将MRP3反义及正义寡核苷酸片段分别转染进SKOV3/TPT细胞后,反义组细胞内TPT的荧光强度及耐药指数明显降低(P<0.05),细胞内MRP3mRNA的表达较未转染细胞下降了60.16%(P<0.05);正义组上述指标无明显变化。结论:转染MRP3ASODN/LF可部分逆转MRP3介导的人卵巢癌细胞对TPT耐药。     

Bcl-XL小分子干扰RNA逆转人结肠癌获得性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的耐药

目的 探讨Bcl-XL小分子干扰RNA(siRNA)在逆转人结肠癌细胞获得性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)耐药中的作用.方法 以Bcl-XL siRNA转染获得性TRAIL耐药的人结肠癌DLD1-TRAIL/R细胞24 h,并用TRAIL蛋白处理,通过细胞计数和流式细胞仪检测细胞的存活率,并通过Western blot法检测各种凋亡相关蛋白的活化情况.结果Bcl-XL siRNA能有效下调DLD1-TRAIL/R细胞中Bcl-XL蛋白的表达水平,并且能够有效地逆转其对TRAIL蛋白的耐药.DLD1-TRAIL/R细胞经过Bcl-XL siRNA和TRAIL蛋白共同处理2 h后,其细胞凋亡率＞50%;共同处理4 h后,其细胞存活率＜40%;而对照组和TRAIL蛋白处理组的细胞凋亡率和生存率无明显变化(P＜0·05).Western blot法检测结果表明,经Bcl-XL siRNA与TRAIL蛋白联合处理后,DLD1TRAIL/R细胞中caspase-8、caspase-9、Bid、caspase-3以及多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP)均明显活化,细胞色素C的释放显著增加.结论 Bcl-XL siRNA能够有效逆转结肠癌细胞获得性TRAIL耐药,这将为治疗肿瘤耐药提供一种新的思路.     

非小细胞肺癌细胞MRP1表达及其与耐顺铂关系的研究

目的:研究多药耐药相关蛋白1(MRP1)是否在耐顺铂(DDP)的非小细胞肺癌(NSCLC)A549/DDP中高表达,探讨MRP1与NSCLC耐DDP的关系。方法:培养来源于同一母系的2株细胞系A549细胞系和A549/DDP细胞系,采用MTT法绘制A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线,分别计算A549细胞和A549/DDP细胞的耐药指数;应用RT-PCR检测A549细胞和A549/DDP细胞中MRP1 mRNA的表达水平。结果:A549及A549/DDP的半数抑制浓度分别为0.65μg/mL和3.7μg/mL,得出A549/DDP对DDP的耐药性是A549的5.5倍。A549/DDP中MRP1的在转录水平的表达显著高于A549中MRP1的表达,P<0.05。结论:MRP1在耐DDP的NSCLC中高表达,而在不耐DDP的NSCLC中低表达,甚至不表达,说明MRP1的高表达与肺癌耐DDP有关,为以后研究通过抑制MRP1的表达从而逆转肺癌耐DDP提供理论依据。     

RNA干扰抑制人结肠癌SW480细胞EGFR的表达及其对体外生长情况影响的研究

目的研究利用RNA干扰技术抑制人结肠癌SW480细胞表皮生长因子受体(EGFR)基因的表达,并观察受抑制后SW480细胞体外生长情况的改变。方法利用脂质体将siRNA转染进入SW480细胞(野生型K-ras基因表达阳性),在细胞内形成双链siRNA,识别并降解EGFR mRNA。通过荧光定量RT-PCR检测EGFR mRNA的表达水平,Western blot检测EGFR蛋白的表达,MTT法检测SW480细胞的增殖抑制情况,流式细胞学检测细胞凋亡情况。结果转染EGFR395-siRNA和EGFR1499-siRNA的SW480细胞其EGFRmRNA及蛋白表达均较对照组明显降低(P<0.05);转染EGFR395-siRNA和EGFR1499-siRNA的SW480细胞增殖率较对照组降低(P<0.05),凋亡率增高(P<0.05)。结论 siRNA能有效抑制SW480细胞EGFR基因的表达,具有抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用。     

Increased sensitivity to gemcitabine of P-glycoprotein and multidrug resistance-associated protein-overexpressing human cancer cell lines

Gemcitabine (2',2'-difluorodeoxycytidine) is a deoxycytidine analogue that is activated by deoxycytidine kinase (dCK) to its monophosphate and subsequently to its triphosphate dFdCTP, which is incorporated into both RNA and DNA, leading to DNA damage. Multidrug resistance (MDR) is characterised by an overexpression of the membrane efflux pumps P-glycoprotein (P-gP) or multidrug resistance-associated protein (MRP). Gemcitabine was tested against human melanoma, non-small-cell lung cancer, small-cell lung cancer, epidermoid carcinoma and ovarian cancer cells with an MDR phenotype as a result of selection by drug exposure or by transfection with the mdr1 gene. These cell lines were nine- to 72-fold more sensitive to gemcitabine than their parental cell lines. The doxorubicin-resistant cells 2R120 (MRP1) and 2R160 (P-gP) were nine- and 28-fold more sensitive to gemcitabine than their parental SW1573 cells, respectively (P<0.01), which was completely reverted by 25 micro M verapamil. In 2R120 and 2R160 cells, dCK activities were seven- and four-fold higher than in SW1573, respectively, which was associated with an increased dCK mRNA and dCK protein. Inactivation by deoxycytidine deaminase was 2.9- and 2.2-fold decreased in 2R120 and 2R160, respectively. dFdCTP accumulation was similar in SW1573 and its MDR variants after 24 h exposure to 0.1 micro M gemcitabine, but dFdCTP was retained longer in 2R120 (P<0.001) and 2R160 (P<0.003) cells. 2R120 and 2R160 cells also incorporated four- and six-fold more [(3)H]gemcitabine into DNA (P<0.05), respectively. P-glycoprotein and MRP1 overexpression possibly caused a cellular stress resulting in increased gemcitabine metabolism and sensitivity, while reversal of collateral gemcitabine sensitivity by verapamil also suggests a direct relation between the presence of membrane efflux pumps and gemcitabine sensitivity.     

XIAP siRNA对TRAIL诱导结肠癌细胞SW620凋亡能力的影响

 目的
研究XIAP siRNA对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(Tumor Necrosis Factor-related Apoptosis-Inducing Ligand,TRAIL)诱导结
肠癌细胞SW620凋亡的影响。方法SW620细胞分为转染XIAP siRNA组、空转染对照组或者siRNA阴性对照组,然后给予TRAIL处理。XIAP
表达水平的变化、细胞增殖抑制、Caspase-3活性分别由Western blot、MTT法和Caspase-3荧光测定来检测。切割PARP的表达水平由
Western blot来测定。结果XIAP siRNA转染以后显著下调XIAP蛋白表达水平。和空转染对照组、siRNA阴性对照组相比,XIAP siRNA
显著增强10、100、1 000 ng/ml等浓度的TRAIL作用以后SW620细胞的增殖抑制、Caspase-3活性和激活PARP。结论 XIAP siRNA能显
著增强TRAIL诱导结肠癌细胞SW620的凋亡。     

益气扶正中药对肺癌耐药调控的线粒体相关分子效应*

目的：既往研究表明益气扶正中药（YQF Z）联合化疗对非小细胞肺癌有较好的协同作用,本研究进一步从线粒体相关分子调控效应揭示益气扶正中药（YQFZ）干预肺癌耐药的机制。方法：通过流式细胞仪观察肺癌耐药细胞SW1573/2R120,分别给予YQFZ和阿霉素（Dox）处理后细胞凋亡改变,原子力显微镜观察细胞超微结构变化,生物氧耗电极检测器测定线粒体氧化磷酸化功能,流式细胞仪检测多药耐药相关蛋白MRP蛋白表达,共聚焦显微镜测定线粒体膜电位MMP、ROS 和胞内Ca2 +浓度,酶标法测定Caspase- 3 和Caspase- 8 活性。结果：YQFZ中药明显增加Dox 对肺癌耐药细胞的体外诱导凋亡作用,YQFZ/Dox组细胞早期杀伤的超微结构变化明显,YQFZ显著增加Dox 所致的线粒体氧化磷酸化功能损伤作用,YQFZ/Dox组S3 值、RCI 值和ADP/O 值分别明显下降57.1% 、53.8% 和48.3% ,YQFZ/Dox组MRP蛋白表达降低,线粒体膜电位水平减低,ROS 和胞内Ca2 +浓度减少,Caspase-3 和Caspase- 8 活性明显增高1.64倍和1.13倍。结论：益气扶正中药具有显著干预肺癌耐药的作用,并通过线粒体相关分子效应协同Dox,参与对肺癌耐药细胞的体外诱导凋亡作用。     

miR-490-3p逆转MCF-7／ADM细胞对阿霉素耐药性的影响

【摘 要】目的 探讨miR-490-3p在阿霉素（ADM）耐药乳腺癌细胞系MCF-7／ADM中的表达情况及其对MCF-7／ADM细胞增殖、凋亡和ADM耐药的影响。方法 以野生型人乳腺癌细胞系MCF-7及其耐药型细胞系MCF-7／ADM为研究对象,用实时荧光定量PCR（qPCR）比较两种细胞中miR-490-3p的表达水平,将miR-490-3p的过表达载体pcDNA1（+）miR-490-3p瞬时转染至MCF-7／ADM细胞（过表达组）后采用qPCR检测转染效果,同时设pcDNA3.1（-）空载体对照组和空白对照组;采用MTT法测定转染pcDNA3.1（+）miR-490-3p对各组MCF-7/ADM细胞增殖能力的影响,测定ADM对MCF-7／ADM细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度（IC50）及逆转倍数以评价对ADM敏感性的变化;分别于瞬时转染48 h后用Annexin V／FITC流式细胞术检测各组MCF-7/ADM细胞的凋亡率,Western blotting检测耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）,乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达,荧光分光光度计检测胞内ADM药物浓度,流式细胞仪检测P-gp活性。结果 MCF-7／ADM细胞中miR-490-3p的表达水平为0.24±0.07,显著低于野生型MCF-7细胞的1.02±0.03（P＜0.05）;过表达组瞬时转染24～96 h的miR-490-3p水平持续升高,均高于空载体对照组和空白对照组（P＜0.05）;过表达组的增殖抑制率随转染时间的延长而增加,转染24、48、72和96 h的增殖抑制率依次为（17.52±1.87）％、（31.67±2.79）％、（45.09±1.88）％和（61.82±2.52）％,高于空载体对照组（P＜0.05）;ADM对过表达组的IC50值为（11.27±2.34）μg／ml,低于空白对照组的和空载体对照组（P＜0.05）,且过表达组相对于空白对照组和空载体对照组的逆转倍数分别为3.35倍和3.39倍;与其余两组相比,过表达组的MCF-7/ADM细胞早、晚期凋亡率和细胞内药物浓度均升高,P-gp、BCRP和MRP1表达及P-gp活性均降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 上调miR-490-3p可逆转MCF-7／ADM细胞对ADM的耐药性,可能通过降低耐药蛋白表达及抑制P-gp活性有关,且升高其水平可抑制细胞增殖并诱导凋亡。     

Bcl-XL siRNA在TRAIL杀伤卵巢癌细胞中的增敏作用

目的:探讨Bcl-XL siRNA在肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)杀伤卵巢癌细胞中的增敏作用。方法:用Bcl-XL siRNA转染卵巢癌SKOV3细胞,然后联合应用TRAIL蛋白处理该细胞;通过流式细胞术检测细胞的凋亡率,通过锥虫蓝染色细胞计数检测细胞存活情况,通过Western blotting检测细胞中各种凋亡相关蛋白的活化情况。结果:与对照组相比,经Bcl-XL siRNA处理后,SKOV3细胞中Bcl-XL蛋白的表达显著降低;该细胞的增殖受到明显抑制,在处理96 h后最为明显,仅为对照组的43.9%(P<0.05)。当Bcl-XL siRNA和TRAIL蛋白联合处理后,SKOV3细胞的凋亡率明显增加,达到32%以上(P<0.05),而细胞计数结果显示联合处理后SKOV3细胞的存活率显著下降,仅为对照组的37.8%(P<0.05)。Western blotting结果显示,Bcl-XL siRNA和TRAIL蛋白联合处理后凋亡相关蛋白Caspase-8、Caspase-9、Bid、Caspase-3和PARP明显活化,细胞色素C的释放也显著增加。结论:Bcl-XL siRNA能显著加强TRAIL蛋白对卵巢癌细胞的杀伤作用,其作用机制可能与激活多种凋亡信号蛋白有关。Bcl-XL siRNA可能成为逆转卵巢癌TRAIL耐药的治疗措施。     

人参皂苷Rg3对小鼠肺腺癌多耐药的逆转作用

目的观察人参皂苷Rg3对小鼠肺腺癌多耐药的逆转作用并探讨其机制。方法 将32只接种获得性多药耐药Lewis肺癌细胞的小鼠随机分成4组:荷瘤对照组、多柔比星(ADM)组、人参皂苷Rg3组和人参皂苷Rg3联合多柔比星(ADM)组。各组予以相应干预,观察肿瘤生长情况,肿瘤接种24天处死全部小鼠,剥取皮下移植肿瘤,称瘤重,计算抑瘤率,收集移植瘤标本行免疫组织化学检测P-糖蛋白(P-glycaprotein,p-Gp)和多药耐药相关蛋白1的表达,并行RT-PCR半定量检测多药耐药基因(multidrug resistance,MDR1)mRNA、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)mRNA表达。结果 (1)各用药组肿瘤的生长受到不同程度抑制,瘤重低于对照组,其抑瘤率分别为10.5%、36.3%、56.2%,联合用药组抗瘤作用进一步增强。(2)免疫组织化学:p-Gp及MRPl蛋白质的表达具有一致性,对照组和ADM组表达较高,而人参皂苷Rg3组和联合组表达明显降低,其中对照组和ADM组比较,人参皂苷Rg3组和联合组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而人参皂苷Rg3组和联合组与对照组和ADM组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)RT-PCR:与对照组和ADM组比较,人参皂苷Rg3组和联合组MDR1 mRNA荧光强度降低,人参皂苷Rg3组、联合组同对照组及ADM组比较MDR1 mRNA相对量减小,差异均有统计学意义(P<0.01),而对照组同ADM组比较,人参皂苷Rg3组同联合组比较差异未见统计学意义,MRP1 mRNA的表达与MDR1 mRNA类似。结论 人参皂苷Rg3对小鼠肺腺癌多药耐药有逆转作用,其作用机制可能是下调MDR1 mRNA、MRP1 mRNA及其蛋白的表达。     

低表达DJ-1调控PI3K/AKT通路对肺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨低表达DJ-1对肺癌细胞增殖凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:采用Western blot检测肺癌细胞系中DJ-1蛋白的表达;以脂质体法转染干扰SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的表达后,MTT法检测细胞的增殖变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western blot检测细胞中p-AKT和AKT蛋白的表达水平;将PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理SK-MES-1细胞48 h后,MTT法和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡情况,Western blot检测细胞中p-AKT和AKT蛋白的表达。结果:与正常肺上皮BEAS-2B细胞相比,肺腺癌A549细胞和肺鳞癌SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的相对表达量均显著升高,且SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的表达量高于A549细胞,差异均有统计学意义（P＜0.05）。转染后siRNA DJ-1组细胞中DJ-1蛋白的表达量明显低于对照组（P＜0.05）;与对照组相比,转染24 h后siRNA DJ-1组细胞的吸光值（OD值）变化不显著（P＞0.05）,而转染48 h和72 h后细胞的OD值明显降低（P＜0.05）;转染48 h后,与对照组相比,siRNA DJ-1组细胞的凋亡率显著升高（P＜0.05）,p-AKT/AKT值显著降低（P＜0.05）。SK-MES-1细胞经抑制剂LY294002处理48 h后,细胞的增殖凋亡趋势与下调DJ-1表达的结果相一致。结论:DJ-1在肺癌细胞中高表达,下调其表达能够抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

谷胱甘肽含量对肿瘤多药耐药相关蛋白1的影响

目的 研究应用丁硫氨酸亚砜胺（BSO）降低谷胱甘肽（GSH）含量后,三氧化二砷（As2O3）对K562/ADM细胞的诱导凋亡效应,及其对多药耐药相关蛋白1（MRP1）的抑制作用.方法 As2O3组（0.5、2.0、5.0 μmol/L）单独及联合100 μmol/L BSO作用于K562/ADM细胞,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测K562/ADM细胞的增殖活性;Annexin V/PI标记法观察K562/ADM细胞的凋亡效应;分光光度法检测K562/ADM细胞内GSH含量变化;流式细胞术（FCM）检测的MRP1蛋白水平表达变化;反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测MRP1的编码基因mRNA的表达变化.结果 降低GSH含量后,临床剂量As2O3（0.5、2.0 μmol/L）联合BSO 24 h内即可抑制K562/ADM细胞的增殖活性,诱导K562/ADM细胞发生凋亡,72 h单用As2O3（0.5、2.0 μmol/L）凋亡率为（8.32±2.11）％、（16.75±3.56）％,GSH含量降低后,两剂量组细胞的凋亡率分别为（82.15±9.28）％和（92.72±9.41）％.72 h后,临床剂量As2O3联合BSO抑制MRP1的荧光强度分别为8.20±0.92和10.40±2.33,明显低于单用高剂量As2O3组的荧光强度（21.30±3.09）;两药联合对于MRP1 mRNA的作用效果也明显强于单用高剂量As2O3组.结论 GSH的含量变化与As2O3的作用效果密切相关,As2O3联合BSO可有效诱导K562/ADM细胞发生凋亡,可有效抑制MRP1及其编码基因mRNA的表达.     

化学合成siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中STAT3基因表达的抑制作用

目的:观察小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对卵巢癌SKOV3细胞STAT3表达的抑制作用及其诱导凋亡作用的机制。方法:将STAT3 siRNA经LipofectamineTM2000脂质体介导的方法将其转染到卵巢癌细胞株SKOV3。实验分为以下3组:空白对照组(未经转染的人卵巢癌SKOV3细胞)、阴性对照转染组(阴性干扰STAT3)及特异性转染组(干扰STAT3)。用MTT法检测siRNA转染后SKOV3细胞增殖活性;流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响,免疫荧光法检测STAT3蛋白水平的变化,qRT-PCR和Western blot方法分别检测STAT3 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:成功转染STAT3干扰片段,转染率达90%。siRNA干扰STAT3组明显抑制卵巢癌细胞增殖活性,细胞凋亡率33.7%,并且下调STAT3蛋白在SKOV3细胞中的表达。RT-PCR和Western blot结果显示:siRNA STAT3组明显抑制人卵巢癌细胞SKOV3中STAT3 mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:特异性转染组48h后能有效地抑制SK-OV3细胞内STAT3的表达、抑制细胞增殖,其抑制卵巢癌细胞的机制可能与抑制了STAT3信号通路,促进细胞凋亡有关,为卵巢癌的生物治疗提供了一定的依据。     

非小细胞肺癌中多药耐药基因的表达及意义

探讨多药耐药基因(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MRP)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达、意义及相关关系。方法:采用原位分子杂交对113例NSCLC组织中MDR1和MRP基因mRNA的表达进行检测。结果:MDR1和MRP基因mRNA在NSCLC组织中的阳性表达率分别为51.3%(58/113)、80.5%(91/113),二者与NSCLC肿瘤组织类型、分化程度、淋巴结转移、TNM分期等无关(P>0.05)。MDR1和MRP的协同阳性(MDR1⁺/MRP⁺)表达率为48.7%(55/113),二者在NSCLC中的表达之间存在明显相关(P<0.01)。结论:MDR1和MRP是NSCLC原发性多药耐药的重要参与因素,二者联合检测对临床NSCLC的化疗具有指导意义。