内皮祖细胞移植对肺动脉高压大鼠血流动力学及肺血管结构的影响

目的探讨大鼠内皮祖细胞(EPC)移植对野百合碱(MCT)所致大鼠肺动脉高压(PAH)的血流动力学及肺血管结构的影响。方法体外培养,鉴定 EPCs。用 MCT 诱发的 PAH 模型组(n=11)大鼠,由尾静脉注入标记的 EPC,移植第21天测定肺血流动力学参数,计算平均肺动脉压(MPAP),右心指数。观察 EPCs 移植后分化为血管内皮细胞的能力及肺血管结构变化。结果移植 EPC 3周后,荧光显微镜观察部分标记的 EPCs 分化为血管内皮细胞。与模型组相比,EPC 治疗组(n=10)MPAP 明显下降[(25.9±0.7)比(29.3±2.2)mmHg,P<0.05],右心指数明显下降(0.43±0.04比0.49±0.05,P<0.05),肺小动脉厚度指数[WT%:(17.7±3.8)%比(29.8±4.3)%]和面积指数[WA%:(54.6±3.9)%比(74.8±4.5)%]明显下降(P 均<0.05)。结论同种异体 EPC 移植可有效降低肺动脉压力,肺动脉血管壁厚度指标和面积指数,改善右心肥厚。作用机制尚需进一步研究。     

人源性脐带间充质干细胞治疗实验性肺动脉高压所致右心衰竭的疗效观察

目的 拟通过建立MCT诱导的PAH大鼠模型,观察人脐带间充质干细胞（UC-MSCs）干预对大鼠PAH和右心衰竭的治疗效应。方法 实验动物分为3组（空白对照组、PAH组和UC-MSCs组）,在MCT腹腔注射1周后进行干预,UC-MSCs组舌下静脉注射UC-MSCs悬液,空白对照组和PAH组舌下静脉注射等量生理盐水。第4周大鼠行右心超声心动图、右心导管测压、右心肥厚指数以及肺组织病理等检测。结果 与对照组相比,PAH组大鼠右心室游离壁厚度(RVWT)和右心室内径(RVID)显著增大,肺动脉血流加速时间与射血时间比值（PAT/PET）显著下降,右心收缩压（RVSP）和右心肥厚指数(RVHI)显著增高,肺小动脉血管壁厚度（WT）明显增厚。与PAH组相比,UC-MSCs组RVWT和RVID显著减小,PAT/PET明显升高,RVSP和RVHI明显降低,WT明显变薄。结论 利用MCT腹腔注射成功制备PAH大鼠模型,经舌下静脉注射UC-MSCs可以显著降低肺动脉压力,改善右心功能,逆转肺血管重构。     

大鼠肺小动脉重构发生在肺动脉压增高之前

目的 探讨野百合碱(MCT)所致大鼠肺小动脉重构与肺动脉压力增高的关系.方法 雄性SD大鼠32只,体质量200～230 g,随机均分为肺动脉高压(PAH)组和对照组.PAH组一次性腹腔注射MCT 40 mg/kg,对照组一次性腹腔注射相同体积的生理盐水.于注射MCT后2周及4周,分别从以上两组大鼠中随机选择8只,测定肺动脉平均压(MPAP)和右心室肥厚指数(RVHI),并运用ipp6.0图像分析软件分析肺组织切片,测定肺小动脉管壁厚度(WT)占动脉外径(ED)的百分比(WT%)及管壁面积(WA)占血管总面积的百分比(WA%).结果 腹腔注射MCT 2周后MPAP和RVHI在对照组与PAH间差异无统计学意义[(23.6±2.1)vs(26.0±2.8)mm Hg,(23.4±4.6)vs(24.7±3.9)%,P均＞0.05],但是与对照组相比,PAH的WT%、WA%均明显增高[WT:(39.1±2.8)vs(50.8±3.1)%,WA:(51.2±3.0)vs(74.5±2.9)%,P均＜0.05];4周后与对照组相比,PAH的MPAP、RVHI、WT%、WA%都明显增高[MPAP:(24.0±3.0)vs(35.7±3.1)mm Hg,RVHI:(24.2±3.7)vs(44.6±4.3)%,P均＜0.01;WT:(40.1±3.1)vs(57.5±2.0)%,WA:(51.1±2.0)vs(78.3±2.0)%,P均＜0.05].结论 MCT所致大鼠肺小动脉的重构先于肺动脉压力的增高.     

粒细胞集落刺激因子对大鼠肺动脉高压模型的影响

目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对野百合碱(MCT)诱导的大鼠肺动脉高压(PAH)的治疗作用。方法:动物随机分为3组:正常对照组(CON组)、MCT组和MCT/G-CSF组,腹腔注射MCT诱导大鼠PAH模型,采用G-CSF腹腔注射动员自体骨髓干细胞(BMSC),动员结束后行肺组织CD34免疫组化染色,第5周分别对3组大鼠进行血流动力学检测,处死大鼠,取肺、右心组织行苏木素-伊红(HE)染色。结果:1.动员结束后第2天,CD34+细胞浸润至肺血管平滑肌层和血管内皮细胞周围,以及肺泡间隔内;2.实验第35天,MCT组大鼠肺小动脉管壁增厚、管腔明显狭窄,血流动力学指标明显高于CON组(P<0.01);3.MCT/G-CSF组肺血管病变明显改善、肺泡结构完整,血流动力学指标明显低于MCT组(P<0.05)。结论:G-CSF可以动员骨髓干细胞并归巢致受损肺组织内,部分逆转PAH的血流动力学和病理学改变、减缓PAH的进展,用于PAH的研究和治疗。     

大鼠肺小动脉重构发生在肺动脉压增高之前

目的探讨野百合碱(MCT)所致大鼠肺小动脉重构与肺动脉压力增高的关系。方法雄性SD大鼠32只,体质量200~230g,随机均分为肺动脉高压(PAH)组和对照组。PAH组一次性腹腔注射MCT40mg/kg,对照组一次性腹腔注射相同体积的生理盐水。于注射MCT后2周及4周,分别从以上两组大鼠中随机选择8只,测定肺动脉平均压(MPAP)和右心室肥厚指数(RVHI),并运用ipp6.0图像分析软件分析肺组织切片,测定肺小动脉管壁厚度(WT)占动脉外径(ED)的百分比(WT%)及管壁面积(WA)占血管总面积的百分比(WA%)。结果腹腔注射MCT2周后MPAP和RVHI在对照组与PAH间差异无统计学意义[(23.6±2.1)vs(26.0±2.8)mmHg,(23.4±4.6)vs(24.7±3.9)%,P均>0.05],但是与对照组相比,PAH的WT%、WA%均明显增高[WT:(39.1±2.8)vs(50.8±3.1)%,WA:(51.2±3.0)vs(74.5±2.9)%,P均<0.05];4周后与对照组相比,PAH的MPAP、RVHI、WT%、WA%都明显增高[MPAP:(24.0±3.0)vs(35.7±3.1)mmHg,RVHI:(24.2±3.7)vs(44.6±4.3)%,P均<0.01;WT:(40.1±3.1)vs(57.5±2.0)%,WA:(51.1±2.0)vs(78.3±2.0)%,P均<0.05]。结论MCT所致大鼠肺小动脉的重构先于肺动脉压力的增高。     

多廿烷醇对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺动脉重构的影响

目的观察多廿烷醇对野百合碱诱导的肺动脉高压(PAH)大鼠的平均肺动脉压(MPAP)与肺动脉重构的影响及可能的机制。方法雄性SD大鼠60只随机数字法分为正常对照组、PAH组、多廿烷醇组,每组20只。野百合碱(40mg/kg)一次性腹腔注射建立大鼠PAH模型,多廿烷醇组以多廿烷醇[10 mg/(kg·d)]灌胃,对照组和PAH组给予等量的生理盐水灌胃4周。肺动脉导管法测定大鼠MPAP;称重法测右心室肥厚指数(RVHI);HE染色观察肺小动脉病理形态改变,测定肺小动脉管壁厚度占血管外径的百分比(WT%)、肺小动脉管壁总面积占血管总面积的百分比(WA%);TUNEL染色法观察肺小动脉内皮细胞凋亡情况;Western blot法测肺组织凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达;酶联免疫吸附试验测定血清白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果与正常对照组相比,PAH组MPAP[(33.91±4.72)比(17.57±3.44)mm Hg]、RVHI[(69.25±8.42)%比(24.91±2.82)%]、肺小动脉WT%[(66.53±10.01)%比(32.08±4.98)%]和WA%[(86.52±4.97)%比(52.96±6.65)%]增加(均P0.01);与PAH组相比,多廿烷醇组MPAP[(26.94±6.02)比(33.91±4.72)mm Hg]、RVHI[(55.27±9.89)%比(69.25±8.42)%]、肺小动脉WT%[(41.66±10.47)%比(66.53±10.01)%]和WA%[(64.10±12.80)%比(86.52±4.97)%]减少(均P0.01)。与正常对照组相比,PAH组大鼠肺小动脉内皮细胞凋亡增多,PAH组肺组织凋亡蛋白Bax表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,Bax与Bcl-2比值增加;与PAH组相比,多廿烷醇组大鼠肺小动脉内皮细胞凋亡减少,肺组织Bax表达减少,Bcl-2表达增加,Bax与Bcl-2比值减少(均P0.01)。与正常对照组相比,PAH组大鼠血清细胞因子IL-6、TNF-α水平升高;与PAH组相比,多廿烷醇组血清IL-6、TNF-α水平降低(均P0.01)。结论多廿烷醇改善野百合碱诱导的PAH大鼠的MPAP及肺血管重构,可能与其减少细胞凋亡、抑制炎症反应有关。     

脐血间充质干细胞移植对大鼠肺动脉高压的治疗作用研究

目的:观察脐血间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对SD大鼠肺动脉高压(PAH)的治疗作用。方法:将60只健康雄性SD大鼠随机分为4组,每组15只(n=15),即①正常对照组:不做任何处理;②模型组:以腹主动脉-腔静脉瘘分流术(abdominal aortocaval fistula shuning,A-VF)+单野百合碱(monocrotaline,MCT)注射建立大鼠PAH模型,故也可称为A-VF+MCT组;③干细胞移植组:在建立PAH模型后4周,经尾静脉注射Ho-echst 33342荧光染料标记的脐血MSCs,故此组也可称A-VF+MCT+MSCs组;④培养液对照组:在建立PAH模型后4周,经尾静脉注射培养脐血MSCs的培养液,故此组也可称为A-VF+MCT+培养液组。4周后以右心导管法测定平均肺动脉压(mPAP)、右心室肥厚指数[RVHI=RV/(LV+S)]、肺小动脉中层厚度占血管外径的百分比[MA(%)]和血管壁中层横截面积占血管总横截面积的百分比[MA(%)],观察肺小动脉重构情况。检测血流动力学、肺小动脉重塑及脐血MSCs的定植情况。结果:与正常对照组比较,造模实验证实,4周后A-VF+MCT组大鼠可形成典型的PAH,8周后mPAP明显增高,动脉中膜明显增厚,右心室出现明显肥厚;而A-VF+MCT+MSCs组大鼠mPAP、RV/(LV+S)、MT%和MA%均显著下降(P<0.01)。PAH大鼠死亡率从66.7%下降到13.3%。荧光显微镜观察显示脐血MSCs已成功定植到肺血管内膜。结论:以A-VF+MCT建立的大鼠PAH模型可形成重度PAH。脐血MSCs移植能显著降低肺动脉压力,减轻肺小动脉重构及右心室肥厚,显著降低PAH大鼠的死亡率。     

骨髓间充质干细胞治疗野百合碱诱导肺动脉高压大鼠肥大细胞的效果

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植治疗野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压(PAH)大鼠肥大细胞的效果。方法:雄性SD大鼠24只,随机均分为空白对照组、PAH组和BM-MSCs移植组。PAH组和BMMSCs移植组大鼠一次性腹腔注射MCT(60mg/kg)诱导PAH。采用SD大鼠的骨髓,经贴壁筛选法体外培养并纯化BM-MSCs。3周后,BM-MSCs移植组大鼠经右侧颈外静脉注射5×10~6个MSCs细胞悬液1ml,PAH组和空白对照组大鼠予等量L-DMEM液。移植后14d,观察比较三组大鼠的肺动脉收缩压(PASP)、右室肥厚指数(RVHI)、肺动脉的结构及肥大细胞数量的改变。结果:与空白对照组比较,PAH组和BM-MSCs组PASP[(23.75±0.83)mmHg比(46.73±1.28)mmHg比(35.54±1.20)mmHg]、RVHI[(0.2387±0.0048)比(0.4764±0.0155)比(0.3729±0.0087)]显著升高,肥大细胞计数[(0.63±0.26)个/10mm~2比(12.50±1.41)个/10mm~2比(7.13±0.64)个/10mm~2]显著增多,P均0.01;但与PAH组比较,BM-MSCs组上述三项指标有显著降低,P均0.01。肺组织病理切片显示PAH组肺血管重构明显,而BM-MSCs移植组肺血管重构明显减轻。结论:肥大细胞参与了肺动脉高压的形成,揭示了肺动脉高压发生的相关机制。     

槲皮素对肺动脉高压大鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的:观察槲皮素对肺动脉高压肺组织细胞凋亡的影响。方法:将成年雄性SD大鼠30只,随机分为三组:正常对照组(对照组)、野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压组(MCT组)和槲皮素预防组(预防组),每组10只。MCT组及预防组给予野百碱造模,对照组仅以等量0.9%氯化钠液注射,预防组在造模同时每天给予槲皮素100mg/(kg.d)灌胃,21d后测肺动脉压力并计算右心肥大指数,肺组织切片用免疫组化法和免疫印迹法观察大鼠肺组织细胞凋亡(Bcl-2)情况。结果:MCT组大鼠肺动脉平均压力[MCT组(42.13±6.28)vs.对照组(14.57±1.59),P0.05;MCT组(42.13±6.28)vs.预防组(20.32±3.85),P0.05]、右心肥大指数[MCT组(0.593±0.100)vs.对照组(0.241士0.050),P0.05;MCT组(0.593±0.100)vs.预防组(0.290±0.065),P0.05]、肺组织细胞的Bcl-2蛋白相对表达量[MCT组(0.964±0.009)vs.对照组(0.684±0.014),P0.05;MCT组(0.964士0.009)vs.预防组(0.849±0.009),P0.05]显著高于对照组及预防组;同时预防组大鼠肺动脉压力[预防组(20.32士3.85)vs.对照组(14.57±1.59),P0.05]、右心肥大指数[预防组(0.290±0.065)vs.对照组(0.241±0.050),P0.05]、肺组织细胞的Bcl-2蛋白相对表达量[预防组(0.849±0.009)vs.对照组(0.684士0.014),P0.05]高于对照组。结论:槲皮素具有减缓MCT诱导肺动脉高压大鼠肺组织细胞凋亡的作用。     

TG2抑制剂对大鼠肺动脉高压肺血管重构的影响

正肺动脉高压(PAH)是一类以肺血管重构为主要病理改变,肺血管阻力持续性升高为特征的恶性肺血管疾病,严重者因右心衰竭而死亡,现已成为严重威胁人类身心健康的常见疾病~([1])。本课题采用左肺切除加野百合碱(MCT)诱导大鼠梗阻性肺动脉高压模型,并使用TG2抑制剂对大鼠PAH模型进行干预,观察大鼠肺组织中TG2 mRNA和蛋白水平变化,探讨TG2在PAH肺血管重构中的作用机制,为防治PAH肺血