益气通络解毒方和吉非替尼含药血清对H1975细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨不同剂量益气通络解毒方联合吉非替尼（gefitinib）含药血清对人非小细胞肺癌H1975细胞株的增殖抑制和凋亡作用。方法：应用中药血清药理学方法制备益气通络解毒方低、中、高剂量（15.75,31.5,63 g·kg^-1）及益气通络解毒方低、中、高剂量（15.75,31.5,63 g·kg^-1）联合吉gefitinib（22.5 mg·kg^-1）;gefitinib（22.5 mg·kg^-1）,0.9%氯化钠溶液（NS）含药血清;H1975细胞6×10⁴/mL单细胞悬液每孔100 μL接种于96孔板;H1975细胞1×10⁵/mL单细胞悬液每孔2 mL分别接种于6孔板及6孔板内盖玻片上,细胞贴壁后加入含有10%上述含药血清的RMPI-1640培养液分别干预24,48,72 h,CCK-8法检测各组含药血清作用不同时间后对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测各组含药血清作用不同时间后对细胞凋亡的影响;免疫组化法检测不同时间凋亡细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达。结果：除NS组外,各组含药血清对H1975细胞均有抑制增殖作用,益气通络解毒方高剂量含药血清作用72 h抑制率为23.81%,益气通络解毒方高剂量联合gefitinib含药血清抑制率最高为42.86%;与NS对照组比较,各组含药血清对H1975细胞均有诱导其凋亡作用,益气通络解毒方高剂量及其联合gefitinib含药血清作用72 h,H1975细胞凋亡率分别为10.29%,25.77%;凋亡蛋白Caspase-3表达与药物剂量、作用时间呈正相关,益气通络解毒方高剂量联合gefitinib含药血清的作用最强。结论：益气通络解毒方联合gefitinib可有效的抑制肺腺癌H1975细胞增殖并诱导其凋亡,增加Caspase-3蛋白表达可能是其促进H1975细胞凋亡的机制之一。     

皂角刺含药血清诱导直肠癌细胞SW-480凋亡 及其对Bcl-2/Bax mRNA表达的影响

目的: 采用血清药理学方法探讨皂角刺含药血清诱导肠癌细胞凋亡的作用机制。方法: 制备皂角刺药液,50只健康SD大鼠分为皂角刺高中低剂量组(每1 mL分别含有生药2 000,1 000, 500 mg),环磷酰胺阳性对照组(50 mg·kg^-1)和生理盐水空白对照组5个组,按20 mL·kg^-1大鼠体质量给药,以制备含药血清。取含药血清培养液在体外作用于SW-480细胞(密度为1×10⁶/mL),分别在24, 48, 72 h后,采用MTT法检测含药血清对SW-480增殖的影响;加入药物血清培养液处理细胞24 h后,采用流式细胞仪检测SW-480凋亡率,RT-PCR检测各组含药血清对细胞B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)/Bel-2相关x蛋白(Bax)基因表达的影响。结果: 与空白对照组比较,皂角刺含药血清培养液作用细胞的吸光度(A)在20,40,60 h均明显低于空白组(0.370±0.005)%,(0.624±008)%,(1.078±0.038)%( P<0.01);皂角刺高、中、低剂量含药血清培养液诱导SW-480凋亡依次为(37.386±0.163)%,(35.834±0.092 3)%,(27.572±1.193)%显著高于空白对照(5.036±0.378)%(P<0.01);皂角刺含药血清培养液对SW-480细胞的Bcl-2表达(0.258±0.037, 0.442±0.024和0.652±0.072)明显低于空白对照组(0.936±0.047)(P<0.01),随灌胃给药的药物剂量增加Bcl-2表达而增加,而Bax表达(1.946±0.017,1.810±0.023和1.810±0.023)明显高于空白对照组(1.260±0.029)(P<0.01), Bax表达反而减少。结论: 皂角刺含药血清对能抑制SW-480生长和诱导其凋亡,Bcl-2 mRNA基因表达减少与Bax mRNA基因表达增多可能是皂角刺诱导肠癌细胞凋亡的机制之一。     

苦参碱抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖作用研究

目的: 观察苦参碱对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。 方法: 取对数生长期SK-N-SH细胞,用磺酰罗丹明B（SRB）法检测苦参碱（0.5,1.0,2.0 g·L^-1）作用24,48,72 h后 SK-N-SH细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期,Western blot 检测半胱天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-9和Caspase-3蛋白的表达。 结果: 苦参碱对 SK-N-SH细胞增殖具有明显抑制作用,且表现出剂量和时间依赖性。0.5,1.0,2.0 g·L^-1苦参碱作用24,48,72 h后SK-N-SH细胞的抑制率分别为（19.06±3.17）%,（30.18±3.02）%,（38.55±6.12）%;（45.12±4.02）%,（60.45±5.51）%,（71.38±7.91）%;（58.91±4.36）%,（73.44±8.17）%,（88.37±4.57）%。流式细胞仪检测对照组及各浓度组凋亡率分别为（2.45±0.49）%,（12.56±2.21）%,（19.44±4.32）%,（30.12±3.35）%,与对照组比较,苦参碱组的凋亡率均显著性增高（P<0.001）;细胞周期结果显示苦参碱作用SK-N-SH细胞48 h后G₀/G₁期细胞明显增多（P<0.01）,S期细胞明显减少（P<0.01）。苦参碱可显著上调Caspase-9和Caspase-3蛋白表达（P<0.01,P<0.01）。 结论: 苦参碱对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的增殖具有抑制作用,这种作用与其阻滞细胞周期和激活Caspase-9和Caspase-3表达进而诱导产生细胞凋亡有关。     

基于NLRP3/Caspase-1信号通路探讨黄连温胆汤改善HepG2细胞胰岛素抵抗的作用机制

目的 探究黄连温胆汤含药血清对胰岛素抵抗体外模型细胞焦亡的作用及机制。方法 设置黄连温胆汤含药血清组和空白血清组，将SD大鼠随机分为2组，按照体表面积换算分别予7.8 g·kg^-1·d^-1的黄连温胆汤药液和同体积的生理盐水灌胃，提取并配制空白血清及不同浓度的含药血清；采用棕榈酸钠处理HepG2细胞构建胰岛素抵抗模型，随机分为空白组、模型组、盐酸二甲双胍组、空白血清组、黄连温胆汤含药血清高剂量组、黄连温胆汤含药血清中剂量组、黄连温胆汤含药血清低剂量组，培养24 h后应用1×10^-7 mol·L^-1胰岛素处理各组细胞15 min，收集细胞上清，采用葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法测定各组细胞葡萄糖的含量，并计算葡萄糖消耗量及抑制率，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况，筛选黄连温胆汤含药血清最佳剂量。将HepG2细胞随机分为空白组、模型组、黄连温胆汤含药血清组，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）的含量，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组NOD样受体蛋白3（NLRP3） mRNA和蛋白的表达情况。机制部分将HepG2细胞随机分为空白组、空载体组、NLRP3过表达组、空载体+IR组、空载体+IR+黄连温胆汤含药血清组、NLRP3过表达+IR组、NLRP3过表达+IR+黄连温胆汤含药血清组，GOD-POD法测定各组细胞葡萄糖的含量，并计算葡萄糖消耗量。ELISA检测各组细胞IL-1β、IL-18释放水平；Real-time PCR、Western blot技术检测各组细胞胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、消皮素D（GSDMD）及NLRP3 mRNA及蛋白的表达；免疫荧光技术检测NLRP3、GSDMD和Caspase-1的表达。结果 与空白组比较，模型组葡萄糖消耗量显著下降（P<0.01）；与模型组比较，黄连温胆汤含药血清高剂量组葡萄糖消耗量升高最为显著（P<0.01）。与空白组比较，IR-HepG2细胞IL-1β、IL-18释放水平和NLRP3 mRNA与蛋白表达明显升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，黄连温胆汤含药血清可明显降低IR-HepG2细胞上清IL-1β、IL-18、NLRP3 mRNA与蛋白的表达（P<0.05，P<0.01）。与空白组、空载体组比较，NLRP3过表达可显著降低细胞葡萄糖消耗量（P<0.01）；与空载体+IR组比较，NLRP3过表达可明显上调IL-1β、IL-18水平和NLRP3、Caspase-1、GSDMD的mRNA及蛋白水平（P<0.05，P<0.01）；与NLRP3+IR组比较，黄连温胆汤含药血清可明显逆转上述指标（P<0.05，P<0.01）。结论 高脂诱导IR-HepG2细胞的胰岛素敏感性与炎症及NLRP3表达密切相关。黄连温胆汤含药血清通过靶向抑制NLRP3/Caspase-1信号通路改善IR-HepG2细胞焦亡，为胰岛素抵抗及2型糖尿病的预防与治疗提供新靶点。     

基于MEK/ERK信号通路探讨阳和汤含药血清对乳腺癌4T1细胞的影响

目的 通过阳和汤含药血清干预小鼠乳腺癌4T1细胞,探索阳和汤对乳腺癌4T1细胞及其内丝裂原活化蛋白激酶（MEK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路的影响。方法 制备阳和汤SD大鼠含药血清。将其随机分组为空白组、阳和汤低、中、高剂量组（5.8、11.6、23.2 g·kg^-1）,空白组用生理盐水代替。各组按10%含药血清和90% RMPI 1640完全培养基均匀混合,干预细胞。采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法分别在24、48、72 h检测阳和汤含药血清对4T1细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测4T1细胞的凋亡情况;采用划痕实验检测4T1细胞迁移情况;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测MEK1/2、磷酸化（p）-MEK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2、大鼠肉瘤病毒（RAS）蛋白的表达水平。结果 与空白组比较,阳和汤干预24、48、72 h,阳和汤含药血清低、中、高剂量组对4T1细胞增殖具有明显抑制作用（P<0.05,P<0.01）;阳和汤干预48 h,阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组在24、48 h的细胞划痕愈合能力显著降低（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞侵袭能力显著降低（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞内MEK1/2、ERK1/2表达差异无统计学意义,p-MEK1/2、p-ERK1/2、RAS蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 阳和汤可抑制乳腺癌细胞4T1增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡。其凋亡机制与MEK/ERK信号通路受抑制,p-MEK1/2、p-ERK1/2、RAS蛋白表达下调有关。     

回回甘松饮含药血清对大鼠肾小球系膜细胞增殖、周期及FN, Col1α1, Col4α1基因表达的影响

目的：探讨回回甘松饮（HGY）含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖、细胞周期、纤维连接蛋白（FN）、Ⅰ型胶原α1多肽链（Col1α1）、Ⅳ型胶原α1多肽链（Col4α1）基因表达的影响。方法：采用中药血清药理学方法制备含药血清,将大鼠随机分为空白对照组（给予蒸馏水10 mL·kg^-1）、格列喹酮（10 mg·kg^-1）组、HGY（10,5 g·kg^-1）组,每组各10只,每日灌胃给药2次,连续3 d后取大鼠血清。选取HBZY-1细胞株进行实验,共分为5组：10%空白血清组、高糖+10%空白血清组、高糖+10%格列喹酮含药血清组（10 mg·kg^-1）、高糖+10%HGY含药血清组（10,5 g·kg^-1）。细胞以2×10⁴/mL接种于96孔细胞培养板上,分别于药物处理后24,48,72 h时,采用CCK-8法检测MCs增殖情况;细胞以2×10⁴/mL接种于25 cm²细胞培养瓶中,于药物干预48 h时收集细胞,分别采用流式细胞术检测细胞周期变化,real-time PCR方法检测FN、Col1α1及Col4α1 mRNA的表达。结果：与10%空白血清组比较,高糖（30 mmol·L^-1）能够诱导MCs增殖（P<0.01）,并能使G₀/G₁期细胞比例减少（P<0.01）,S期比例增加（P<0.01）,能够使MCs中FN,Col1α1,Col4α1 mRNA表达量明显升高（P<0.01）。在上述含药血清干预的48,72 h时,各含药血清组MCs均受到一定程度抑制,发生G₁/S期阻滞,并可降低高糖条件下MCs中FN,Col1α1,Col4α1 mRNA表达量,与高糖+10%空白血清组比较,具有显著性差异（P<0.01或P<0.05）。结论：HGY含药血清可使大鼠MCs在高糖环境下发生G₁/S期阻滞,抑制其增殖,其机制可能与调控FN,Col1α1及Col4α1 mRNA表达有关。     

不同引经药配伍二妙方对大鼠实验性骨关节炎作用的比较研究

目的：比较不同引经药配伍二妙方（二妙）对骨关节炎（osteoarthritis,OA）大鼠的治疗作用,并探讨相关机制。方法：健康雄性SD大鼠60只,随机分成5组,即假手术、模型、二妙（1.6 g·kg^-1·d^-1）、二妙+细辛（1.6 g·kg^-1·d^-1+0.3 g·kg^-1·d^-1） 和二妙+独活（1.6 g·kg^-1·d^-1+0.3 g·kg^-1·d^-1）。除假手术外,其余各组前交叉韧带切断及部分半月板切除建立OA模型,造模同时分别给予相应药物灌胃,假手术组和模型组给予等体积的蒸馏水,连续给药3周和6周后分批取材。观察对膝关节软骨和滑膜的组织病理学改变,软骨细胞凋亡,以及对关节金属蛋白酶（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）、金属蛋白酶抑制剂（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）的表达,血清白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）含量的影响。结果：与假手术组比,模型组关节软骨、滑膜炎症病理积分和软骨细胞凋亡率明显增加（P<0.01）,关节MMP-13表达增高而TIMP-1表达下降,血清IL-1β,TNF-α,NO,iNOS水平提高。与模型组比较,二妙组3周起能明显改善关节软骨和滑膜病变,减少软骨细胞凋亡,降低血清TNF-α水平,6周时能抑制MMP-13并提高TIMP-1在软骨的表达,减少血清IL-1β,NO,iNOS的水平。与二妙组比较,加引经药后能进一步改善关节组织病理学,降低软骨细胞凋亡（P<0.01）,抑制MMP-13和提高TIMP-1的表达（P<0.05）,降低血清各炎性因子的水平;尤其加独活后,在3周时便能明显降低Makin积分（P<0.05）,6周时能显著提高二妙组对滑膜和IL-1β,TNF-α的抑制水平（P<0.05）。结论：二妙方能减缓OA大鼠的病理进程,配伍引经药细辛或独活后可不同程度提高疗效,其中独活相对作用更明显;其机制可能与减少软骨细胞凋亡、调节MMP-13和TIMP-1平衡及减少炎症细胞因子有关。     

壮骨1号方对大鼠骨性关节炎的抗损伤作用研究

目的：观察壮骨1号方对骨性关节炎的抗损伤作用。方法：选SD大鼠,以泊洛沙姆载药体加载木瓜蛋白酶制成温敏型原位凝胶控释剂,按照0.05 mL（1.6 U）/关节剂量,双侧膝关节注射,50 ℃环境下作用2 h复制大鼠骨性关节炎模型。实验分为正常对照、模型对照组（等容蒸馏水）、壮骨关节丸（1.10 g·kg^-1）组与壮骨1号方（2.20,1.10,0.55 g·kg^-1）治疗组,氨基葡糖（0.03 g·kg^-1）阳性药对照组,ig每天1次,连续治疗8周。用酶联免疫吸附（ELISA）法测定关节液中基质金属蛋白酶-3（MMP-3）及其组织金属蛋白酶抑制因子-１（TIMP-1）含量,计算MMP-3/TIMP-1;观察关节软骨病理组织学变化并进行图像分析。结果：治疗8周后,模型组大鼠关节液中MMP-3/TIMP-1为0.092±0.010,与正常组0.062±0.011差异有统计学意义（P<0.05）,用壮骨1号方2.20,1.10,0.55 g·kg^-1剂量治疗8周后,MMP-3/TIMP-1明显降低,分别为0.060±0.016,0.060±0.028,0.057±0.027,与模型组比差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。病理图像分析显示模型组大鼠软骨坏死面积为（37 734±11 504）μm²,与正常组（0.00±0.00）μm²比较差异有统计学意义（P<0.01）,壮骨1号方2.20,1.10 g·kg^-1治疗8周后,关节软骨坏死面积为（26 601±6 506）,（27 061±10 425）μm²,与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：壮骨1号方具有一定的抗软骨损伤作用,能延缓骨性关节炎的病程进展。     

参芪花粉片对大鼠运动性疲劳模型的影响

目的：探讨参芪花粉片抗疲劳的作用特点。方法：将70 只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、参芪花粉片高、中、低剂量组（2.5,1.25,0.625 g·kg^-1）、硝苯地平片组（0.01 g·kg^-1）、刺五加片组（0.25 g·kg^-1）。连续 ig 给药 9 d。采用 负重游泳实验造大鼠力竭模型。测定体重、肝脏中三磷酸腺苷酶（ATP）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、肾脏中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、血乳酸（LD）等指标。结果：与空白组比较,模型组ATP,CAT,GSH-Px,MDA,SOD,血LD等指标显著降低（P<0.01）。高、中剂量参芪花粉片组体重均大于模型组（P<0.01）。与模型组相比,高剂量参芪花粉片组可明显改善肝脏Na⁺-K⁺-ATP酶、Mg²⁺-ATP酶和Ca²⁺-ATP酶活性（P<0.05）,显著提高肝脏GSH-Px活性（928.4±150.1）U·mL^-1（P<0.01）和肾脏SOD活性（289.0±4.2）UN·mL^-1（P<0.01）;高、中剂量参芪花粉片组均可显著提高肝匀浆CAT活性（399.2±78.1）,（372.0±139.9）U·g^-1（P<0.01）,显著降低肾脏MDA水平（1.93±0.33）,（2.18±0.47）nmol·mg^-1（P<0.01）,明显降低血LD水平（7.84±1.18）,（9.69±1.36）mmol·L^-1（P<0.05）。结论：参芪花粉片可显著增强大鼠的抗疲劳能力,其作用可能与抗氧化和加速乳酸代谢有关。     

季德胜蛇药抗四氯化碳致小鼠肝纤维化的作用及机制研究

目的: 观察季德胜蛇药对四氯化碳(CCl₄)致小鼠肝纤维化的拮抗作用,探讨其抗纤维化的作用机制。方法: ICR小鼠48只随机分为正常对照组、模型组、季德胜蛇药(0.25,0.37 汪g·kg^-1)2组。除正常组外各组小鼠均以40%CCl₄ sc共5周。自造模日起,各治疗组小鼠每日分别给予季德胜蛇药ig,正常对照组及模型组小鼠每天灌胃等量容积蒸馏水。5周后,放射免疫法检测小鼠血清透明质酸(HA)和层黏蛋白(LN)水平;Masson三色染色法观察肝组织病变。制备季德胜含药兔血清,不同体积分数的含药血清培养肝星状细胞(HSC),CCK-8法检测HSC的增殖,流式细胞仪检测HSC凋亡。结果: 季德胜蛇药0.25,0.37 g·kg^-1组小鼠肝组织纤维化程度及计分均较模型组明显减轻(P<0.05);季德胜蛇药0.25 g·kg^-1组血清HA,LN水平均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01),且0.37 g·kg^-1组均低于0.25 g·kg^-1组(P<0.01);与对照组比较,以10%和12.5%季德胜蛇药含药血清培养的HSC细胞的增殖率明显降低(P<0.05,P<0.01),而细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论: 季德胜蛇药能抑制HSC的增殖和促进HSC凋亡,具有一定的抗肝纤维化作用。     

抗纤灵药物血清对人肝癌细胞（HepG2）的体外生长抑制作用

目的研究抗纤灵的抑癌作用及分子机制.方法运用血清药理学及免疫组织化学等方法,观察抗纤灵药物血清对人肝癌细胞(HepG2)的体外生长抑制作用及对P21WAF1/CIP1蛋白表达的影响.结果含抗纤灵血清18,9,3g/kg对体外培养的HepG2细胞的细胞生长抑制率(%)分别为63.63±5.08,55.09士4.09,48.08士4.08,细胞毒活性(%)分别为48.06士4.08,38.09士5.01,25.00±4.13,其细胞毒活性均高于空白血清(P＜0.01).含抗纤灵血清各组细胞生长抑制率和细胞毒活性与环磷酰胺血清组比较,差异有显著性或无显著性.含抗纤灵血清18,9,3 g/kg各组HepG2p21WAF1/CIP1蛋白表达高于环磷酰胺血清组及空白血清组(P＜0.01).结论抗纤灵具有抑制人肝癌细胞体外生长的作用,其分子机制与该方提高HepG2p21WAF1/CIP1蛋白表达有关.     

藤茶总黄酮和二氢杨梅素含药血清对肝癌 HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨藤茶总黄酮和二氢杨梅素含药血清对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制及凋亡的影响.方法:采用血清药理学方法制备藤茶总黄酮、二氢杨梅素、环磷酰胺(CTX)含药血清以及对照血清,作用于肝癌HepG2细胞,MTT法检测各种血清对HepG2细胞增殖的影响;倒置相差显微镜观察各种含药血清作用后肝癌HepG2细胞的形态学变化;AnnexinV/7AAD双标记法流式细胞术检测早期细胞凋亡的情况.结果:MTT法和显微镜观察显示藤茶总黄酮和二氢杨梅素20%含药血清能不同程度抑制HepG2细胞增殖,可致细胞形态学改变;AnnexinV/7AAD双标记法检测显示藤茶总黄酮20%含药血清可促肝癌HepG2细胞早期凋亡,但二氢杨梅素20%含药血清对肝癌HepG2细胞早期凋亡没有影响.结论:藤茶总黄酮能抑制肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其产生早期凋亡.     

白蔹药效成分没食子酸抑制人肝癌HepG2细胞生长及作用机制研究

目的:探讨从白蔹抗肿瘤活性部位分离得到的没食子酸对人肝癌HepG2细胞生长的影响及其作用机制。方法:用不同浓度的没食子酸处理HepG2细胞,MTT法测定没食子酸对HepG2细胞生长增殖的抑制活性;采用Hochest染色、荧光显微镜、Annexin V-FITC/PI双标记法和流式细胞术观察凋亡细胞的形态结构变化以及定性、定量检测细胞凋亡;采用JC-1染色检测HepG2细胞线粒体膜电位变化情况。结果:没食子酸在12.5～200 mg·L-1对HepG2细胞生长有明显抑制作用,且呈一定的浓度依赖性;没食子酸能诱导HepG2细胞凋亡,降低细胞线粒体的膜电位。结论:没食子酸为白蔹抗肿瘤主要活性成分之一,通过降低细胞线粒体的膜电位而诱导细胞凋亡为其抗肿瘤作用机制之一。     

寿胎丸含药血清对人早孕滋养层细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响

  目的：探讨寿胎丸含药血清对人早孕滋养层细胞增殖、侵袭、迁移能力的调节作用。  方法：体外分离培养人早孕滋养层细胞,采用高、中、低剂量寿胎丸含药血清进行干预,以空白血清、地屈孕酮含药血清为对照。采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术(FCM)及Transwell 侵袭移动实验测定滋养层细胞的增殖活性、周期分布及侵袭迁移能力。  结果：与空白组比较,滋养层细胞经寿胎丸含药血清干预后,细胞的增殖活性、侵袭迁移能力明显增强,S期细胞比例增高,G2/M期细胞比例降低(P<0.05)。与寿胎丸低剂量组比较,寿胎丸中、高剂量组滋养层细胞的增殖活性、侵袭迁移能力明显增强,细胞周期分布变化更加明显(P<0.05)。  结论：寿胎丸含药血清可促进人早孕滋养层细胞的增殖活性及侵袭迁移能力,减少细胞凋亡。     

补肾疏肝方对人肺癌A549细胞及其相关干性因子的影响

目的:探讨补肾疏肝方对人肺癌A549细胞及其相关干性因子的影响。方法:SD雄性大鼠随机分为6组,每组10只,分别为补肾疏肝方低、高剂量组(15,30 g·kg-1),顺铂组(8 g·kg-1),低剂量联合顺铂组(联合低剂量组),高剂量联合顺铂组(联合高剂量组),正常组,顺铂组ip给予相应药物,补肾疏肝方ig给予相应药物,正常组给予等体积的生理盐水,制备大鼠含药血清;分别配制10%含补肾疏肝方低、高剂量、顺铂、低剂量联合顺铂、高剂量联合顺铂,分别与肺癌A549细胞共同培养,CCK8法检测补肾疏肝方含药血清对A549增殖的影响;流式细胞术检测含药血清对A549细胞周期的影响;Annexin V/PI双染流式细胞术观察含药血清对A549细胞凋亡的影响;荧光定量PCR检测含药血清对相关m RNA表达的影响;流式细胞术检测含药血清对CD133蛋白表达的影响。结果:补肾疏肝方以时间、剂量依赖方式抑制A549细胞增殖,与顺铂联合有协同增效作用,24,48,72 h高剂量联合顺铂组的抑制率分别为45.39%,54.76%及59.94%;与正常组比较,补肾疏肝方、联合、顺铂含药血清可促进A549细胞凋亡,随着浓度增加,G2/M期细胞的百分比明显增加,明显下调CD133,SOX-2,OCT-4 m RNA的表达,明显降低CD133蛋白表达量,均具有明显统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:补肾疏肝方可抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡,与顺铂联合可下调CD133,SOX-2,OCT-4等干性因子的表达。     

斑蝥酸钠维生素B6诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞

目的: 研究斑蝥酸钠维生素B6（艾易舒）注射液对人肝癌HepG2细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响,探讨其分子机制。 方法: 将不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6注射液（0,1,5,10 mg·L^-1）作用于人肝癌HepG2细胞12,24,48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞学技术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,Western blot检测蛋白激酶B（Akt）,磷酸化蛋白激酶B（pAkt）,B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白（Bax）,B细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）及细胞周期依赖性激酶抑制因子p21蛋白表达变化,RT-PCR检测Bax,Bcl-2及p21 mRNA表达变化。 结果: 斑蝥酸钠维生素B6可显著抑制HepG2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,具有显著的时间和浓度效应（P<0.05）;同时G₀/G₁期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著降低（P<0.05）。Western blot结果显示斑蝥酸钠维生素B6可下调HepG2细胞中pAkt和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax和p21蛋白的表达（P<0.05）。RT-PCR结果显示Bax,p21 mRNA的表达水平明显升高,而Bcl-2 mRNA的表达水平下降（P<0.05）。 结论: 斑蝥酸钠维生素B6可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡并引发G₀/G₁期阻滞,其机制可能与斑蝥酸钠维生素B6参与调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路有关。     

姜黄素纳米递药系统的构建及性能表征

目的构建姜黄素纳米递药系统(H-PtNP-Cur),旨在解决姜黄素水溶性差、生物利用度低的难题,使其发挥更好的抗肿瘤作用。方法通过粒度电位分析仪和透射电子显微镜考察载体的粒度、电位和形态;稳定性实验考察了载体的稳定性;紫外可见分光光度法验证姜黄素对铂颗粒的吸附;透析法分析载药量及释放率;流式细胞仪分析HepG2细胞对纳米载体的摄取;MTT法考察纳米载体对HepG2细胞的毒性;细胞成像实验考察纳米载体对HepG2细胞的抑制情况。结果成功合成了H-PtNP-Cur载体,其形态规整、大小均匀,测得粒径为(146.2±1.5)nm,电位(-10.5±0.6)mV,载药量为(12.4±2.7)%,包封率为(81.4±1.3)%,制备的载体稳定性较好,体外释放表明该载体可以控制姜黄素缓慢释放;细胞摄取结果表明纳米载体的构建有利于HepG2细胞的摄取;MTT实验说明纳米载体能够抑制HepG2细胞的生长;细胞成像实验证明H-Pt NP-Cur对HepG2细胞的抑制率是最高的。结论 H-Pt NP-Cur纳米递药系统可以有效抑制HepG2细胞生长,为肝癌的治疗提供新的思路。     

阴阳攻积丸含药血清抑制HepG2细胞增殖、侵袭及促进其凋亡的作用

目的:探讨阴阳攻积丸(Yingyang Gongji Wan,YYGJ)对肝癌细胞株HepG2的体外作用,为临床应用提供依据。方法:制备YYGJ大鼠含药血清;四唑化合物(MTS)比色法检测YYGJ含药血清组和空白组抑制率;原位末端凋亡法(TUNEL)检测空白组,YYGJ含药血清和5-氟尿嘧啶(5-FU)组凋亡;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HepG2细胞上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin),基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和Smad4 mRNA和蛋白表达;细胞迁移分析(transwell)检测HepG2细胞侵袭能力。结果:YYGJ含药血清呈浓度时间依赖性抑制HepG2细胞增殖,与空白组比较,第3天YYGJ 5%,10%,20%含药血清抑制率均明显升高(P 0. 05); YYGJ含药血清组凋亡率显著升高(P 0. 05),YYGJ 50%含药血清组凋亡率与5-FU组比较差异不显著。与空白组比较,YYGJ含药血清组E-cadherin,Smad4 mRNA和蛋白表达均明显升高,Vimentin,MMP-2 mRNA和蛋白均明显降低(P 0. 05),与5-FU作用一致;与空白组比较,YYGJ含药血清组HepG2细胞侵袭能力明显降低(P 0. 05),其中YYGJ 50%含药血清组与5-FU组细胞侵袭数目无显著差异。结论:阴阳攻积丸含药血清可抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,调节肿瘤细胞上皮间质转换(EMT)相关的E-cadherin,Vimentin,MMP-2,Smad4 mRNA和蛋白表达,并降低肿瘤侵袭能力,与化疗药物5-FU作用特点类似。该方可作为治疗肝癌寒湿证型的代表方,应深入研究其抗癌机制。