化痰通络方对急性脑梗死大鼠rt-PA溶栓后不同脑区星形胶质细胞特异性蛋白表达的影响

目的：观察化痰通络方对急性脑梗死大鼠重组组织纤溶酶原激活剂（rt-PA）溶栓后不同脑组织中星形胶质细胞相关特异性蛋白水通道蛋白4（AQP-4）及血清中S100β蛋白表达的影响。方法：将240只健康SD大鼠随机分为6组：假手术组、模型组、rt-PA组、化痰通络方联合rt-PA组（中药低、中、高剂量组,剂量分别为3.6,7.2,14.4 g·kg^-1）,采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型（MCAO）,rt-PA组与化痰通络方联合rt-PA组于血栓注入后3 h一次性予以 5.67 mg·kg^-1 rt-PA溶栓治疗,后者联合给予低、中、高剂量化痰通络方中药灌胃治疗,6 h组于造模成功后给予中药1次;24 h组于造摸成功后及处死前2 h各给中药1次,共2次;72 h组于造模成功后开始给药,每日给中药2次,持续3 d,共6次;7 d组于造模成功后开始给药,每日给中药2次,持续7 d,共14次。分别于4个时相应用Western blot法观察不同时相大鼠皮质及海马AQP-4蛋白的表达,ELISA法检测血清中S100β蛋白的含量。结果：各实验组不同脑组织AQP-4相对丰度值及血清S100β含量自6 h起逐渐升高,24 h最高,随后逐渐降低,7 d时接近6 h水平;同一时相与假手术组比较,各实验组AQP-4及S100β蛋白均显著升高,说明造模成功。与模型组相比,中药中、高剂量组AQP-4蛋白于24 h或72 h或7 d时分别出现显著下降（P<0.05）,研究结果并无明显集中现象,但整体趋势表明中药中、高剂量组能明显减少AQP-4的表达;rt-PA组、中药低、中、高剂量组S100β虽未出现明显差异,但均有不同程度降低,且以中药组下降趋势明显。结论：①溶栓治疗后,血脑屏障结构及功能损害于24 h时最为严重;②化痰通络方联合rt-PA溶栓可降低不同脑组织中AQP-4表达及血清中S100β含量进而防治急性脑梗死溶栓后出血转化的发生与发展。     

安肠愈疡汤对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障的修复作用及机制研究

[目的] 观察中药安肠愈疡汤对溃疡性结肠炎（UC）大鼠咬合蛋白（Occludin）、紧密连接蛋白1（Claudin-1）基因、蛋白及白细胞介素-13（IL-13）/酪氨酸激酶1（JAK1）/信号转导与转录激活因子6（STAT6）信号通路的调控作用,探讨其修复肠黏膜屏障的机制。[方法] 将36只SD大鼠随机分为6组,分别为空白组、模型组、美沙拉嗪对照组、安肠愈疡汤低、中、高剂量组,经4.5%葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液造模及药液灌胃后处死大鼠,留取标本,苏木精-伊红（HE）染色检测各组大鼠结肠黏膜组织病理情况,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法、蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测结肠组织Occludin、Claudin-1基因、蛋白的表达,RT-PCR法检测IL-13、JAK1、STAT6基因的表达。[结果] 各用药组均明显降低组织病理学评分,差异均具有统计学意义（P<0.01）,镜下表现为结肠组织结构好转,炎细胞浸润减轻,均可上调Occludin、Claudin-1基因及蛋白表达（P<0.01）,差异均具有统计学意义;除低剂量组外,余用药组不同程度激活IL-13/JAK1/STAT6通路的基因表达（P<0.05或P<0.01）;以中药高剂量组和美沙拉嗪组的作用最为显著,差异均具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。相关性分析发现,Occludin、Claudin-1表达水平与JAK1、STAT6表达水平呈负相关（r=-0.664,r=-0.654,r=-0.629,r=-0.637,P<0.05）,与IL-13表达水平呈正相关（r=0.888,r=0.983,P<0.05）,差异均具有统计学意义。[结论] 中药安肠愈疡汤能够明显促进UC大鼠肠黏膜修复,其作用机制可能与激活IL-13/JAK1/STAT6信号通路,上调Occludin和Claudin-1的表达水平有关。     

黄连粗多糖协同小檗碱改善溃疡性结肠炎肠黏膜屏障损伤的作用

目的 考察黄连粗多糖与小檗碱在溃疡性结肠炎小鼠治疗中的协同作用。方法 采用雄性BALB/c小鼠30只随机分为5组,除正常组6只外,其余在小鼠日常饮水中给予5%葡聚糖硫酸钠建立结肠炎模型。建模成功后,每组分别进行灌胃给药4 d,每日1次,小檗碱组（100 mg·kg^-1 BBR）、小檗碱+低剂量粗多糖组（100 mg·kg^-1 BBR+22.8 mg·kg^-1 CCP）、小檗碱+高剂量粗多糖组（100 mg·kg^-1 BBR+45.6 mg·kg^-1 CCP）,模型组和正常组灌胃同体积生理盐水。实验结束后处死小鼠提取结肠,通过蛋白免疫印迹法检测小鼠结肠组织紧密连接闭锁连接蛋白-1（ZO-1）、紧密连接蛋白-1（Claudin-1）和闭合蛋白（Occludin）蛋白的表达。以正常组为对照,评价各治疗组模型小鼠疾病活动指数（DAI）评分、结肠长度、结肠组织形态和结肠紧密连接蛋白的表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠ZO-1、Claudin-1和Occludin蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,小檗碱组Claudin-1蛋白表达无明显差异,ZO-1和Occludin蛋白表达显著升高（P<0.01）,黄连粗多糖联合小檗碱组Claudin-1、ZO-1和Occludin蛋白表达显著升高（P<0.01）;与小檗碱组比较,黄连粗多糖联合小檗碱组紧密连接蛋白表达明显强于小檗碱单独给药（P<0.05）。结论 黄连粗多糖协同小檗碱给药能有效改善溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜屏障损伤。     

基于“逆流挽舟”法探索人参败毒散对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障的干预作用＊

目的 观察人参败毒散对TNBS诱导的溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障的影响及其可能机制。方法 将60只雄性SD大鼠随机分组，采用TNBS诱导法造模，人参败毒散各剂量（31.2、15.6、8 g·kg^-1）连续7天灌胃。检测各组血清白介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、干扰素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）含量；结肠组织咬合蛋白（Occludin）、闭合蛋白（Claudin-5）与闭锁蛋白（ZO-1）mRNA和蛋白水平。结果 与空白（Control）组比较，模型（Model）组的血清IL-1β、IL-6、TNF-α、以及IFN-γ含量明显增高（P < 0.05），结肠组织Occludin、Claudin-5与ZO-1 mRNA和蛋白水平明显下调（P < 0.05）。经治疗后，人参败毒散高、中、低剂量（RH、RM、RL）组血清中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ含量均有降低，RH组干预结果存在统计学意义（P < 0.05）；结肠组织Occludin、Claudin-5以及ZO-1 mRNA表达和蛋白表达均有上调，且RH组干预效应明显优于其他给药组，具有统计学意义（P < 0.05）。结论 “逆流挽舟法”代表方人参败毒散能有效改善UC大鼠症状，其作用机制可能与抑制炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ释放，上调结肠黏膜Occludin、Claudin-5与ZO-1 mRNA和蛋白表达，促进肠上皮紧密连接修复，改善肠黏膜通透性有关。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞密度的干预作用

[目的] 分析化瘀通络中药对糖尿病肾病（DN）大肾脏整合素α3β1表达及足细胞密度的影响。[方法] 糖尿病大鼠模型采用高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立,大鼠分为正常组、模型组、厄贝沙坦组和中药组,各组相应药物剂量灌胃。灌胃20周后检测各组大鼠空腹血糖（FBG）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、24h尿蛋白定量（24h UTP）,肾组织行光镜观察,分别采用实时聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组化（IHC）检测肾脏整合素α3（ITGA3）、整合素β1（ITGB1）、WT1 mRNA及蛋白的表达,计算足细胞密度。[结果] 与正常组比较,模型组各项指标差异均有统计学意义（P＜0.05）;与模型组比较,两治疗组BUN、24hUTP明显下降（P＜0.05）,ITGA3、ITGB1、WT1 mRNA表达水平及足细胞密度明显上升（P＜0.05）,干预组病理损伤明显减轻,主要表现为肾小球内细胞基质及系膜细胞明显减少;与厄贝沙坦组比较,中药组24h UTP明显降低（P＜0.05）,ITGB1 mRNA及足细胞密度明显上升。[结论] 化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与调节整合素α3β1表达从而减少足细胞脱落相关。     

益气养阴活血通络方抑制JAK2/STAT3信号通路减轻糖尿病肾病大鼠肾组织细胞凋亡

目的 观察益气养阴活血通络方对糖尿病肾病（DN）大鼠Janus酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）/信号传导及转录激活因子3（STAT3）信号通路及细胞凋亡的影响，探讨其干预DN的作用机制。方法 SD大鼠100只随机分为造模组80只，正常组20只，高糖高脂饮食联合一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病肾病大鼠模型。造模结束后每组随机处死3只大鼠，光镜和电镜下观察肾脏组织病理学变化确认造模成功。将造模成功的大鼠随机分为模型组（生理盐水，等体积）、益气养阴活血通络方低中高剂量组（益气养阴活血通络方，5.775，11.550，23.100 g·kg^-1）和厄贝沙坦组（厄贝沙坦片，0.016 g·kg^-1），各组分别给予相应剂量药物灌胃，每日1次，连续干预16周。给药结束后检测大鼠24 h尿蛋白（UTP）水平，血清总胆固醇（TC），甘油三酯（TG），肌酐（SCr），尿素氮（BUN）水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测JAK2/STAT3信号通路关键蛋白的表达水平；免疫组化法（IHC）检测大鼠肾组织中B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax），B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2），紧密连接相关蛋白-1（ZO-1），肌动蛋白4（actinin-4）蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠UTP，血清中TC，TG，BUN，SCr水平均有明显升高（P<0.05）；大鼠肾组织病理损伤严重；磷酸化JAK2（p-JAK2），磷酸化STAT3（p-STAT3），Bax蛋白表达水平明显上调；肾组织细胞凋亡明显增多；Bcl-2，ZO-1，actinin-4蛋白表达水平下调（P<0.05）。与模型组比较，益气养阴活血通络方和厄贝沙坦组大鼠UTP，血清中TC，TG，BUN，SCr水平均有不同程度的下降（P<0.05）；大鼠肾组织病理损伤有所减轻；p-JAK2，p-STAT3，Bax蛋白表达水平不同程度的下降；肾组织细胞凋亡减轻；Bcl-2，ZO-1，actinin-4蛋白表达水平不同程度的升高（P<0.05）。结论 益气养阴活血通络方药可通过抑制JAK2/STAT3信号通路的激活，减轻肾脏细胞凋亡，改善DN的预后。     

基于肠道菌群探讨补脾益肾方改善5/6肾切除大鼠肠道屏障延缓慢性肾脏病进展的作用机制

目的 探讨补脾益肾方延缓5/6肾切除大鼠慢性肾脏病进展的作用机制。方法 雄性SD大鼠随机分为4组：假手术组、5/6肾切除模型组、补脾益肾方低剂量组、补脾益肾方高剂量组。假手术组和5/6肾切除模型组予蒸馏水灌胃，补脾益肾方低剂量组和高剂量组分别给予低剂量和高剂量补脾益肾方治疗，灌胃为期4周。检测各组大鼠血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量、硫酸吲哚酚、二胺氧化酶；肾脏组织采用PAS和Masson染色；结肠组织采用HE染色；Western-blot检测ZO-1、Occludin、Claudin-1三种紧密连接蛋白及IL-22在结肠组织的表达水平；采用16S rDNA高通量测序并进行生物信息学分析。结果 与假手术组相比，5/6肾切除组大鼠的血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量、血清硫酸吲哚酚和二胺氧化酶水平明显升高；与5/6肾切除组相比，补脾益肾方高剂量组大鼠的血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量、血清硫酸吲哚酚和二胺氧化酶水平明显下降，肾脏病理损伤缓解；补脾益肾方亦可调整肠道菌群，提高益生菌Prevotella（普氏菌属）、Phascolarctobacterium（考拉杆菌属）和Megamonas（巨单胞菌属）的相对丰度，降低Clostridiaceae（梭菌科）、Haloplasmataceae（盐扁菌科）、Micrococcaceae（微球菌科）、Pseudomonadaceae（假单胞菌科）和Ruminococcus（瘤胃球菌）的相对丰度；促进紧密连接蛋白（ZO-1、Occludin和Claudin-1）及IL-22的表达，减轻结肠固有层和粘膜层水肿及炎症细胞浸润；减少毒素入血，血清中的硫酸吲哚酚水平下降，进而延缓CKD进程。结论 补脾益肾方延缓5/6肾切除大鼠的CKD进展可能是通过调节肠道菌群，修复肠道屏障功能，降低血清尿毒症毒素水平，以实现肾保护作用。     

扶肾颗粒改善肠上皮细胞屏障损伤的作用机制研究

目的 探讨扶肾颗粒对脂多糖（LPS）诱导的肠上皮（IEC-6）细胞屏障损伤的保护机制。方法 IEC-6细胞分为对照组、模型组、扶肾颗粒组、p38MAPK抑制剂组,除对照组外,其余各组加入1 μg/mL LPS,给药组分别加入10%含药血清、10 μmol/L p38MAPK抑制剂（SB203580）。流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Transwell法检测细胞屏障通透性、跨膜电阻;Real-time PCR法检测细胞ICAM-1、IL-1β mRNA水平;免疫印迹检测胞质内细胞紧密连接蛋白Occludin、ZO-1和磷酸化p38MAPK、DUSP1蛋白表达的变化。结果 与对照组比较,模型组IEC-6细胞凋亡、炎症因子ICAM-1和IL-1β水平显著增加（P<0.01）,紧密连接蛋白Occludin、ZO-1表达显著降低（P<0.01）,肠黏膜通透性显著增加（P<0.05）。与模型组比较,扶肾颗粒能明显抑制IEC-6细胞内炎症因子ICAM-1、IL-1β mRNA水平,降低肠黏膜屏障通透性（P<0.05）,上调DUSP1、Occludin、ZO-1水平（P<0.05、0.01）,抑制p38MAPK表达（P<0.01）,与p38MAPK抑制剂作用一致。结论 扶肾颗粒可能通过调控DUSP1,抑制p38MAPK信号通路的激活,上调Occludin和ZO-1,改善IEC-6细胞紧密连接,从而改善LPS引起的细胞屏障功能破坏。     

基于“肺肠同治”的清肺化痰逐瘀汤治疗COPD的作用机制

目的 观察清肺化痰逐瘀汤对慢性阻塞性肺病（COPD）大鼠肺肠功能的影响并进一步探讨其体现肺肠同治的深层次机制。方法 将60只Wistar大鼠随机分为6组，每组10只，组别为正常组、模型组、急支糖浆组（10 g·kg^-1·d^-1）、清肺化痰逐瘀汤低、中、高剂量组（10、15、20 g·kg^-1·d^-1）。以脂多糖气管滴注合并烟雾吸入法建立COPD大鼠模型，急支糖浆组与清肺化痰逐瘀汤组分别以相应剂量浓度药液灌胃给药，其余组采用生理盐水灌胃对照，末次给药后监测大鼠肺功能和血气指标。镜下观察大鼠肺、肠组织病理学变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定大鼠血清白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与结肠组织分泌型免疫球蛋白A（IgA）表达；测定大鼠血清二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸、丙二醛（MDA）等生化指标变化；免疫组化检测大鼠结肠组织紧密连接蛋白（Occludin）表达，采用免疫荧光测定大鼠肺组织F4/80阳性肺泡巨噬细胞、α-肌动蛋白（α-SMA）、结肠闭锁小带蛋白-1（ZO-1）表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肺组织磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）、NF-κB p65和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）、p38 MAPK蛋白表达，以及结肠组织Occludin和ZO-1表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠肺功能障碍，用力肺活量（FVC）、动脉血氧分压（PaO2）、动脉血氧饱和度（SaO₂）、肺动态顺应性（Cdyn）降低（P<0.01），肺、肠病理学改变明显，血清IL-6、TNF-α、DAO、D-乳酸、MDA表达增高（P<0.05，P<0.01），肺组织p-NF-κB p65/NF-κB p65和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值升高，肺组织F4/80阳性巨噬细胞表达增强，结肠组织IgA、Occludin、ZO-1表达减少（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，急支糖浆和清肺化痰逐瘀汤各剂量组大鼠肺功能明显改善，FVC、PaO₂、SaO₂、Cdyn升高（P<0.05，P<0.01），肺、肠组织病理学改善明显，血清IL-6、TNF-α、DAO、D-乳酸、MDA表达降低（P<0.05，P<0.01），肺组织F4/80阳性巨噬细胞表达减少，肺组织p-NF-κB p65/NF-κB p65和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值降低（P<0.01），结肠组织IgA、Occludin、ZO-1表达增高（P<0.01）。结论 清肺化痰逐瘀汤可以有效减轻COPD大鼠症状，其作用机制与抑制肺组织炎症反应，改善肠黏膜屏障功能有关。     

化痰通络汤对脑缺血/再灌注大鼠“肠-脑”轴的干预作用

目的 基于“肠-脑”轴探讨化痰通络汤（HTTLD）对大鼠脑缺血再灌注后脑组织和肠道形态和功能的影响。方法 将60只SPF级雄性大鼠随机分为假手术组，模型组，HTTLD高、中、低剂量组（28.66，14.33，7.16 g·kg^-1），依达拉奉（4 g·kg^-1）+丁酸梭菌（5.0×10⁸ cfu·mL^-1）组，采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，灌胃给药HTTLD，神经功能缺损评分和2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC）染色法测定脑组织损伤，小肠推进率观察脑缺血再灌注对肠道动力的影响，十二指肠黏膜的病理形态学检测评价肠黏膜细胞损伤，酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血清D-乳酸（D-LAC），二胺氧化酶（DAO），细菌内毒素（LPS）含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测十二指肠的闭合蛋白（Occludin），紧密连接蛋白-5（Claudin-5），闭锁小带蛋白-1（ZO-1）蛋白的表达。结果 脑缺血再灌注后，大鼠出现神经功能缺损症状，与假手术组比较，模型组神经功能缺损评分显著升高（P<0.01）；与模型组比较，HTTLD中、高剂量组能显著减少神经功能缺损症状，降低神经功能缺损评分（P<0.01）。与假手术组比较，模型组大鼠脑组织出现明显梗死灶，脑梗死率显著升高（P<0.01）；与模型组比较，各给药组脑梗死体积明显减少（P<0.01），以HTTLD高剂量组的效应最佳，且效应具有剂量依赖性。小肠推进率结果显示，与假手术组比较，模型组小肠推进率显著降低（P<0.01）；与模型组比较，各给药组能显著升高小肠推进率（P<0.01），以HTTLD高剂量效应最佳，且效应具有剂量依赖性。十二指肠黏膜组织病理学检测显示，脑缺血再灌注后十二指肠黏膜可见明显损伤，各给药组黏膜损伤情况明显减轻。与假手术组比较，模型组ZO-1，Occludin，Claudin-5蛋白表达均显著降低（P<0.01）；与模型组比较，HTTLD低、中、高剂量组能不同程度上调ZO-1，Occludin，Claudin-5蛋白表达（P<0.05，P<0.01），以高剂量组的效应最为显著。与假手术组比较，模型组血清D-LAC，DAO，LPS蛋白含量均显著升高（P<0.01）；与模型组比较，各给药组D-LAC，DAO含量均明显降低（P<0.05，P<0.01），HTTLD中、高剂量组明显降低LPS含量（P<0.05，P<0.01），且HTTLD高剂量组的作用最明显。结论 脑缺血再灌注后，大鼠脑组织受损、出现神经功能障碍，同时肠道黏膜损伤、肠道蠕动减弱和肠道黏膜屏障破坏。HTTLD能减少脑组织和胃肠道黏膜损伤，减轻神经功能缺损症状，提高胃肠道动力、改善肠道屏障功能、减少肠道细菌代谢产物和毒物的释放，从而发挥对脑缺血再灌注后“脑-肠”轴损伤的保护作用。     

化痰通络方对急性脑梗死大鼠rt-PA溶栓后神经细胞凋亡途径中内质网应激相关基因GADD153/CHOP与JNK1表达的影响

目的:观察化痰通络方对急性脑梗死大鼠重组组织纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓后内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)后期神经细胞凋亡途径中生长抑制DNA损伤基因153(C/EBP homologous protein,GADD153/CHOP)和c-Jun氨基末端激酶-1(c-Jun NH2-terminal kinases-1,JNK1)基因表达的影响。方法:将160只健康SD大鼠随机分为假手术组,模型组,rt-PA组,化痰通络方联合rt-PA组(简称中药组)。采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),rt-PA组与中药组分别给予尾静脉注入rt-PA(5.67 mg·kg-1)及联合化痰通络中药(7.2 g·kg-1)干预,2次/d。于6 h,1,3,7 d 4个时相分别采用RT-PCR检测各组大鼠大脑皮质梗死区组织中GADD153/CHOP与JNK1 mRNA的表达,采用TUNEL法检测各组大鼠大脑神经元细胞的凋亡。结果:与假手术组比较,模型组在4个时相中GADD153/CHOP与JNK1基因表达均明显增高(P0.05),同一时相内与假手术组比较,模型组神经元凋亡显著升高(P0.05);与模型组比较,rt-PA组和中药组在4个时相中均可降低JNK1 mRNA的表达量(P0.05),同时rt-PA组在1 d时可降低GADD153/CHOP mRNA的表达,而中药组可在6 h和1 d时同时降低其表达,差异显著(P0.05),rt-PA组在1 d和7 d时相神经元凋亡明显低于模型组(P0.05),中药组各个时相神经元凋亡均显著降低(P0.05),但rt-PA组与中药组之间无明显差异。结论:化痰通络方可通过降低内质网应激后期神经细胞凋亡途径中GADD153/CHOP与JNK1 mRNA的表达,部分抑制神经细胞的凋亡,从而防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注的发生与发展。     

化痰通络方对急性脑梗死大鼠rt-PA溶栓后神经细胞自噬途径中Beclin1与LC3蛋白表达的影响

[目的]观察化痰通络方对急性脑梗死大鼠重组组织纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓后神经细胞自噬途径中自噬相关蛋白(Beclin1)及微管相关蛋白轻链3(LC3)蛋白表达的影响。[方法]选择160只健康SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、rt-PA组、化痰通络方联合rt-PA组(简称中药组),每组采用6 h、1 d、3 d和7 d 4个时相。采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),rt-PA组与中药组分别给予尾静脉注入rt-PA(浓度为5.67 mg/kg)及联合化痰通络中药(浓度为7.2 g/kg)干预,每日2次。于相应时间点采用Western blot检测各组大鼠大脑皮质梗死区组织中Beclin1及LC3蛋白的表达。[结果]Western blot结果显示:与假手术组相比,模型组在4个时相中Beclin1和LC3蛋白的相对丰度值均明显增高(P0.05);采用rt-PA和rt-PA联合化痰通络法干预后,4个时相内Beclin1与LC3蛋白的相对丰度值均明显下降(P0.05);且rt-PA联合化痰通络组下降更加显著,与rt-PA组比较差异有统计学意义(P0.05)。[结论]化痰通络方可通过降低神经细胞自噬途径中Beclin1与LC3蛋白的表达,部分抑制神经细胞的过度自噬,进而保护神经细胞损伤,从而更好的防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注的发生与发展。     

化痰通络法对rt-PA溶栓后急性脑梗死大鼠神经细胞凋亡及Caspase-12表达的影响

[目的]观察化痰通络方对急性脑梗死大鼠经重组组织纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓治疗后内质网应激(ERS)神经细胞凋亡途径中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)蛋白和基因表达及神经元凋亡的影响。[方法]选择160只健康的SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、rt-PA组和实验组共4组。采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),实验组与rt-PA组大鼠经尾静脉注入rt-PA(浓度:5.67 mg/kg)溶栓治疗,并联合化痰通络法中药灌胃(浓度:7.2 g/kg),每日2次。每组分别于为6 h、24 h、3 d和7 d 4个时相,观察梗死区域脑组织神经细胞Caspase-12蛋白和基因的表达,及神经元细胞凋亡的情况。[结果]与假手术组相比,模型组各时相Caspase-12蛋白与基因的表达量均明显增加(P0.05)。与模型组相比,除7 d时rt-PA组Caspase-12蛋白表达减少,差异无统计学意义(P0.05)外,rt-PA组和实验组在其他各时相Caspase-12蛋白与基因的表达均明显减少(P0.05)。与rt-PA组相比,实验组Caspase-12基因在1 d、7 d时表达量明显减少(P0.05),而Caspase-12蛋白表达差异无统计学意义(P0.05),但有下降趋势。[结论]化痰通络法中药可降低急性脑梗死大鼠溶栓治疗后梗死区域Caspase-12蛋白和基因的表达,该法可能通过影响该环节,进而部分抑制内质网应激后期神经细胞的凋亡,从而防治急性脑梗死溶栓后缺血/再灌注的发生与发展。     

益脑康胶囊对脑梗死大鼠溶栓后血脑屏障的保护作用及对ZO-1蛋白表达的影响

目的:观察益脑康胶囊(YC)配伍对急性脑梗死大鼠重组组织型纤溶酶原激活剂rt-PA溶栓后血脑屏障通透性及紧密连接的附着蛋白(ZO-1)蛋白表达的影响.方法:将SD大鼠随机等分为假手术组、溶栓组、益脑康胶囊低剂量组(1 g·kg-1)、益脑康胶囊高剂量组(3 g·kg-1),连续口服3d.建立大鼠自体血栓栓塞大脑中动脉闭塞模型,采用分光光度计法及Western blot法分别检测大鼠脑组织伊文思蓝含量及ZO-1蛋白的表达.结果:与假手术组相比,各组脑内EB含量均显著增高,ZO-1蛋白水平明显降低;与溶栓组相比,YC低剂量组脑内EB含量差异不显著,高剂量组脑内EB含量显著下降,高、低剂量组ZO-1蛋白表达水平均显著增加;与YC低剂量组相比,高剂量组脑内EB含量显著下降,ZO-1蛋白表达水平显著增加.结论:益脑康胶囊可以减轻溶栓后血脑屏障破坏,可能与其上调ZO-1蛋白的表达有关.     

中风防治灵丸对脑缺血大鼠神经功能及脑水肿的影响

目的:观察中风防治灵丸对脑缺血大鼠神经功能、脑含水量、脑梗死范围及脑组织病理形态学的影响.方法:60只键康雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血模型组、中风防治灵丸高、中、低剂量组(5.184,2.592,1.296 g·kg-1)、步长脑心通对照组(0.691 g·kg-1),每组10只,从术前7d开始灌胃,第8天造模,至处死前每天给药,手术前后疗程11d,分别于造模术后6,24,72 h对大鼠神经功能缺损情况评分;于术后72 h进行氯化三苯四氮唑(TTC)染色测量脑梗死范围,干湿重法测量脑含水量,常规HE染色观察脑组织病理形态变化.结果:与模型组比较,中风防治灵丸高、中剂量组动物的神经功能缺损程度显著改善,并能显著降低大鼠局灶性脑缺血后的脑梗死范围,均有显著性差异(P ＜0.05,P＜0.01);中风防治灵丸高、中、低剂量均可显著降低大鼠局灶性脑缺血后的脑含水量,减轻脑水肿,与模型组相比均有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01);中风防治灵丸高、中剂量能明显改善脑缺血造成的大鼠脑组织损伤,减轻神经细胞的继发性损害.结论:中风防治灵丸对大鼠局灶性脑缺血损伤具有良好的保护作用.     

通络化痰胶囊对脑缺血损伤大鼠神经细胞凋亡及Bcl-2,Bax的影响

目的:探讨通络化痰胶囊对脑缺血损伤大鼠神经细胞凋亡的影响和机制.方法:98只SD大鼠通过永久性大脑中动脉闭塞(pMCAO)制备脑缺血损伤模型,待大鼠清醒后,根据Longa评分(≥2分)随机分为7组,分别为正常对照组、假手术组、模型组、尼莫地平组、通络化痰高、中、低剂量组.于术后第1天开始分别给予蒸馏水(正常对照组、假手术组、模型组)、尼莫地平(32.4 mg·kg-1)和通络化痰胶囊高、中、低剂量组(648,324,162 mg·kg-1)灌胃治疗,并于术后第1,2,3,5,7天行Narrow-Alley Corner Test检测脑缺血损伤大鼠神经功能的改变,术后第8天行4％多聚甲醛(pH 7.0)灌注固定后断头取脑,观察脑组织病理学的改变,利用TUNEL法检测缺血半暗带神经细胞凋亡水平的变化,利用免疫组化技术测定缺血半暗带Bcl-2相关x蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达水平的改变.结果:模型组大鼠Narrow-Alley Corner Test得分较正常对照组和假手术组显著增加(P＜0.01),尼莫地平组和通络化痰胶囊组得分较模型组降低(P＜0.01,P＜0.05).缺血后大鼠脑组织损伤明显,尼莫地平组和通络化痰胶囊组的损伤减轻.模型组较正常对照组和假手术组神经细胞凋亡增多、缺血半暗带Bax和Bcl-2表达增加(P＜0.01).尼莫地平组和通络化痰胶囊组较模型组神经细胞凋亡减轻、缺血半暗带Bax表达减少,Bcl-2表达增强(P＜0.01).结论:通络化痰胶囊可促进脑缺血损伤大鼠损伤后神经功能障碍的恢复,减轻神经元病理损害,其机制可能与其促进缺血半暗带Bcl-2表达,抑制Bax表达,从而减少细胞凋亡水平有关.     

三化汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织胞质附着蛋白表达的影响

目的:观察三化汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织胞质附着蛋白(ZO-1)表达的影响.方法:将大鼠随机分为假手术、组、模型组、三化汤低、高剂量组(7.2,14.4g·kg-1)、尼莫地平组(8.1 mg·kg-1).大鼠常规饲养3d后灌胃给药,每日1次,连续7d后采用线栓法制备脑缺血再灌注大鼠模型.脑缺血2h再灌注24 h后,取脑组织采用免疫组织化学法检测各组大鼠ZO-1的表达.结果:与假手术组比,模型组脑组织ZO-1表达显著降低(P＜0.01);与模型组比,三化汤高剂量组脑组织ZO-1表达显著升高(P＜0.01),尼莫地平组脑组织ZO-1表达也明显升高(P＜0.05),三化汤低剂量组脑组织ZO-1表达升高不明显,无显著性差异;三化汤高剂量组升高脑组织ZO-1表达较尼莫地平组明显(P＜0.05).结论:三化汤对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用.     

加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织Occludin，ZO-1，Claudin-1蛋白及其mRNA表达的影响

目的:探讨加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织闭合蛋白(Occludin),密封蛋白-1(Claudin-1),闭锁连接蛋白-1(ZO-1)表达的影响,并探讨相关的作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,依达拉奉组(3.2×10~(-3)g·kg~(-1)),加味四君子汤加减低、中、高剂量组(4.77,9.54,19.08 g·kg~(-1))。采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,治疗7 d后处死,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1蛋白的表达,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白显著减少(P0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白均显著增高(P0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达下调(P0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达上升(P0.01)。结论:加味四君子汤可能通过增加紧密连接蛋白Occludin,ZO-1,Claudin-1的表达,保护血脑屏障,减轻缺血性脑卒中大鼠脑水肿。     

芪仙通络方对脑缺血大鼠内源性神经干细胞再生的影响及机制

目的:探讨芪仙通络方对脑缺血大鼠内源性神经干细胞再生的影响及可能机制。方法:采用线栓法复制大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血模型;将160只大鼠随机分为正常组,假手术组,模型组,吡拉西坦组(吡拉西坦片灌胃),芪仙通络方组(芪仙通络方灌胃);5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxy uridine,Brd U)腹腔注射标记脑内增殖细胞,造模后3,7,14,28 d,分别采用免疫荧光Brd U/神经元核抗原(neuronal nuclei antigen,Neu N),Brd U/胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)双标法检测缺血海马区新生的神经元及星形胶质细胞,并计算其双标阳性细胞率,免疫组化法检测缺血侧脑内脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达。结果:术后7,14,28 d,芪仙通络方组、吡拉西坦组Brd U/Neu N,Brd U/GFAP双标阳性细胞率均高于模型组(P0.01),且各时间点芪仙通络方组Brd U/Neu N阳性细胞均高于吡拉西坦组(P0.05),而仅在术后7 d,芪仙通络方组Brd U/GFAP双标阳性细胞率高于吡拉西坦组(P0.05),随后均呈下降趋势;与模型组比较,术后各时间点芪仙通络方组、吡拉西坦组缺血脑内BDNF表达均升高(P0.01),芪仙通络方组BDNF表达于术后3 d达到高峰,之后水平虽有所下降,但仍高于吡拉西坦组(P0.05)。结论:芪仙通络方可促进脑缺血大鼠内源性神经干细胞再生,以恢复期和后遗症期明显,而早期活化星形胶质细胞及上调BDNF的表达可能是其作用机制之一。     

针刺调控大鼠脑缺血再灌注损伤Cx43半通道的机制研究

[目的]基于连接蛋白43(Cx43)半通道探讨蛋白激酶基因表达在大鼠脑缺血再灌注过程中的动态变化规律以及针刺干预的影响。[方法]根据随机数字表将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、非穴位针刺组及针刺组。采用改良的线栓法制备大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注模型,模型组及两个针刺组内分设4个亚组:缺血再灌注30 min组、缺血再灌注60 min组、缺血再灌注180 min组、缺血再灌注360 min组,每组10只大鼠。穴位组电针刺激大鼠的"顶中线"、"顶旁线";非穴位组取患侧肋下髂嵴上10 mm的固定点作为针刺点;模型组不予任何处理。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术从基因方面检测海马区蛋白激酶C(PKC)、酪蛋白激酶1(CK1)、蛋白磷酸酶(PP2B)的表达。[结果]与正常组相比,模型组PKC m RNA、CK1 m RNA及PP2B m RNA时间的推移表达量呈增高趋势;与模型组同一时间点比较,非穴位针刺组PKCm RNA表达无显著变化(P0.05);调神通络针刺组可显著降低其在各时间点表达,与模型组及非穴位针刺组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。[结论]调神通络针刺组可抑制大鼠脑缺血再灌注过程中PKC m RNA、CK1 m RNA及PP2B m RNA表达,通过调节Cx43磷酸化或去磷酸化途径中的关键因子,来调控半通道的开放,在缺血性脑损伤中发挥神经保护作用。