缬沙坦对血管平滑肌细胞增殖与迁移及丝裂原活化蛋白激酶的影响

目的:观察缬沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激下大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)的增殖与迁移及磷酸化P42/44丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达的影响。方法:组织贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,应用丝裂原活化蛋白激酶(MTT)分析检测细胞的增殖能力,transwell小室检测细胞的迁移能力,Western blot检测磷酸化P42/44MAPK蛋白表达的水平。结果:(1)AngII能明显促进血管平滑肌细胞的增殖与迁移,该作用可被缬沙坦和MAPK激酶的特异性抑制剂PD98059所抑制。(2)AngⅡ刺激血管平滑肌细胞5min时,磷酸化P42/44MAPK的表达量最大,该作用也可被缬沙坦和P     

缺血性脑血管病与丝裂原活化蛋白激酶

丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）是信号从细胞表面转导到细胞内部的重要传递者，参与细胞生长、增殖、分化、凋亡和细胞间功能的同步等多种生理学过程。脑缺血早期MAPK可被激活，在缺血区胶质细胞和神经元表达增加，并呈现为时间相关性，提示MAPK信号通路在脑缺血神经元凋亡过程中起重要的调控作用，在信号通路水平阻断和凋控MAPK表达和活性有望成为治疗缺血性卒中的一条新的途径。     

丝裂原蛋白激酶在糖尿病慢性血管并发症中的作用

目的 研究在高糖条件下人血管平滑肌细胞丝裂原蛋白激酶(MAPK)活性、c-fos表达与糖尿病慢性血管并发症的发病机制的关系.方法 新生儿脐动脉原代培养获得人血管平滑肌细胞.高糖为刺激因素,PD98059为MAPK特异性抑制剂,甘露醇作渗透压对照.同位素示踪法测定MAPK活性,免疫细胞化学方法检测c-fos表达.结果 高糖条件培养下人血管平滑肌细胞内MAPK活性升高(77358±1822)、与对照组(47830±1946)相比差异有统计学意义(P＜0.05).高糖条件培养下人血管平滑肌细胞c-fos表达增加(0.314±0.058),与对照组(0.245±0.049)相比差异有统计学意义(P＜0.05).PD98059可阻止高糖诱导的c-fos表达.结论 高糖可增加人血管平滑肌细胞MAPK活性及c-fos的表达,MAPK活性的增高与c-fos表达呈正相关.     

血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞凋亡及p38丝裂素活化蛋白激酶表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响以及p38丝裂素活化蛋白激酶表达的变化.方法 制备血管紧张素ⅡRPMI1640培养液培养人脐静脉内皮细胞,通过吖啶橙荧光染色观察细胞形态学的变化、流式细胞仪检测细胞凋亡率,利用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法分析凋亡调控基因Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平,通过特异性磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶抗体采用免疫印迹法检测p38丝裂素活化蛋白激酶活性.结果 血管紧张素Ⅱ能诱导内皮细胞凋亡,荧光显微镜可见明显的细胞凋亡(32.76%±2.98%比2.14%±0.36%,P<0.01);流式细胞仪检测AnnexinV-FITC/PI双染色的血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞中,早中期凋亡细胞明显增加,其细胞凋亡率为37.4%±1.6%(对照组为10.2%±1.8%).与对照组相比,6 h、12 h、18 h及24 h Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),p38丝裂素活化蛋白激酶磷酸化水平于18 h达到最高峰(P<0.01).结论 血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞的凋亡可能与p38丝裂素活化蛋白激酶对Bcl-2 mRNA及蛋白表达影响有关.     

血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞骨架的损伤作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ对内皮细胞肌动蛋白骨架的影响及其作用机制。方法血管紧张素Ⅱ(10-6mol/L)处理人脐静脉内皮细胞不同时间(0、5、15、30及60 min)。激光共聚焦显微镜下观察细胞纤维状肌动蛋白骨架的形态学变化。Western blotting检测丝裂原活化蛋白激酶磷酸化水平。结果正常组内皮细胞的纤维状肌动蛋白主要富集于细胞膜周边,分布均匀。血管紧张素Ⅱ处理组细胞膜周边的纤维状肌动蛋白消失,胞浆中出现密集的应力纤维,细胞间隙形成,且呈明显的时间依赖性。血管紧张素Ⅱ上调p38丝裂原活化蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和热休克蛋白27的磷酸化水平,但对细胞外信号调节激酶无明显影响。p38丝裂原活化蛋白激酶特异性抑制剂SB203580阻断血管紧张素Ⅱ引起的纤维状肌动蛋白重排和细胞间隙形成。c-Jun氨基末端激酶特异性抑制剂SP600125则无明显作用。结论血管紧张素Ⅱ通过激活p38丝裂原活化蛋白激酶/热休克蛋白27信号通路引起内皮细胞的纤维状肌动蛋白重排,导致细胞骨架损伤。     

缺血性脑血管病与丝裂原活化蛋白激酶

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是信号从细胞表面转导到细胞内部的重要传递者,参与细胞生长、增殖、分化、凋亡和细胞间功能的同步等多种生理学过程。脑缺血早期MAPK可被激活,在缺血区胶质细胞和神经元表达增加,并呈现为时间相关性,提示MAPK信号通路在脑缺血神经元凋亡过程中起重要的调控作用,在信号通路水平阻断和调控MAPK表达和活性有望成为治疗缺血性卒中的一条新的途径。     

丝裂原活化蛋白激酶在急性肝损伤发病机制中的作用

<正>肝脏是体内最大的消化器官,在机体代谢和内环境稳态维持过程中起着重要作用。但由于肝脏是一个高度血管化的器官,因此也是创伤失血性休克及内毒素性休克后最易受损器官之一,急性肝损伤也成为重症监护室病死率较高的一种危重病。研究表明,丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路参与多种病理及生理过程的调节,是失血性休克及内毒素性休克致急     

丝裂原活化蛋白激酶选择性抑制剂对葡聚糖硫酸钠结肠炎的影响

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）选择性抑制剂SB203580对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠结肠炎的影响。方法24只雌性BALB／C小鼠均分为三组：正常对照组、DSS结肠炎组和SB203580干预组。结肠炎组小鼠每日自由摄取5％DSS溶液．干预组小鼠在摄取5％DSS溶液72h后，每日腹腔注射SB2035801mg／kg体质量。各组小鼠每日记录疾病活动指数（DAI）评分，H-E染色观察小鼠结肠黏膜组织学改变。ELISA法测定结肠组织巾肿瘤坏死因子（TNF）-a含量。免疫组化染色观察磷酸化的活化转录因子2（P-ATF2）在结肠组织炎性细胞内的表达情况。结果正常对照组和DSS结肠炎组小鼠的DAI评分为0．224-0．09和4．81±1．08（P〈0．05），组织学评分为1．03±0．38和11．0±0．75（P〈0．05），经SB203580干预后分别为1．96±0．89和7．16±1．46，与结肠炎组小鼠比较差异有统计学意义（P00．05）。正常对照组与DSS结肠炎组小鼠的结肠匀浆TNF-a含量分别为（42．98±17．31）和（128．34±33．76）pg／ml（P〈0．05），SB203580于预后下降为（81．86±25．11）pg／ml，与结肠炎组小鼠比较差异有统计学意义（P〈0．05）。正常对照组与结肠炎组小鼠结肠组织炎性细胞P-ATF2的表达分别为（6．91±1．83）％和（81．02±12．35）％（P〈0．05），经SB203580处理后为（38．59±8．12）％，与结肠炎组小鼠比较差异有统计学意义（P00．05）。结论阻断p38MAPK信号转导通路可明显缓解DSS诱导的结肠炎。预示此信号转导通路可为溃疡性结肠炎新药研究提供有价值的靶标。     

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与骨质疏松

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是信号从细胞表面传导到细胞核内部的重要传递者，包括细胞外信号调节激酶(ERK)、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和ERK5。某些与骨质疏松相关的因子如核因子．xB受体活化因子配体(RANKL)、白介素(IL)-1、IL-6、转化生长因子．B、骨形态形成蛋白等通过与MAPK信号转导通路相互作用，参与了成骨细胞和破骨细胞的分化、增殖和凋亡的信号转导，在骨质疏松症的发生中发挥了重要作用。     

沥水调脂胶囊对轻度修饰低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞丝裂原活化蛋白激酶信号转导的影响

轻度修饰低密度脂蛋白 ;　血管平滑肌细胞[摘　要 ]　为了探讨健脾祛痰化瘀方———沥水调脂胶囊对轻度修饰低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞丝裂原活化蛋白激酶信号转导的影响 ,采用血清药理学通法制备含药血清 ,以甲醇除蛋白预处理 ;以Cu2 + 氧化制备轻度修饰低密度脂蛋白 ;用磷酸化抗体以WesternBlot方法分析c junN端激酶 1、细胞外信号调节激酶 1和 2的磷酸化。结果发现 ,2 0 %含药血清可明显降低 0 .5h和 1h轻度修饰低密度脂蛋白诱导的c junN端激酶 1磷酸化 (P <0 .0 5 ) ,而对细胞外信号调节激酶 1和 2无明显影响。结果提示 ,降低c junN端激酶 应激活化蛋白激酶信号可能是沥水调脂胶囊抑制血管平滑肌细胞增殖的机制之一。     

PD098059及N-乙酰半胱氨酸在缓激肽引起血管平滑肌细胞增殖反应中的调节作用

目的 :研究丝裂原活化蛋白激酶 （MAPK ）信号途径在缓激肽 （BK）介导的大鼠血管平滑肌细胞 （VSMC）增殖中的作用。方法 :通过 3H -胸苷 （3H- Td R）掺入率与 SMC3H-亮氨酸掺入率分别反映 VSMC的 DNA代谢与蛋白质合成代谢速率 ;并通过给予 PD0 980 5 9及 N-乙酰半胱氨酸预处理 ,观察其对细胞增殖的影响。结果 :1BK（10 nm ol/L ）处理 30 min,VSMC3H-胸苷掺入率和 3H-亮氨酸掺入率均明显增高 ;2 BK增高 3H -胸苷掺入的作用可明显被PD0 980 5 9所抑制 ,对 3H -亮氨酸掺入的作用可部分被 PD0 980 5 9所抑制 ;3BK增高 3H -胸苷掺入和 3H -亮氨酸掺入的作用均可部分被 N-乙酰所抑制 ,完全被 N-乙酰 +PD0 980 5 9所抑制。结论 :细胞外信号调节激酶 （ERKs）激活在缓激肽介导的 VSMC增殖中具有重要作用 ,并可通过 ERKs信号途径的特异性抑制剂影响血管平滑肌细胞的增殖效应。     

Insulin induces PKC-dependent proliferation of mesenteric vascular smooth muscle cells from hypertensive patients

Background and objectives Proliferation of human vascular smooth muscle cells (VSMCs) induced by hyperinsulinemia is a very common clinical pathology. Extensive research has focused on PKC (Protein kinase C)-MAPK (mitogen-activated protein kinase) intracellular signal transduction and the phenotypic modulation accompanied by reorganization of intracellular F-actins in VSMCs. Methods DNA synthesis, signaling of ERK1/2 MAPKs, and changes in a-smooth muscle (SM) actin and F-actin were studied in hypertensive and normotensive human arterial VSMCs exposed to insulin and PMA with and without the PKC inhibitor, GF109203X. Results Differences among cell types in MAPK signaling, a-SM actin, and F-actin isoforms in VSMCs harvested from the arteries of patients with essential hypertension (EH) and normotension (NT) were identified in response to insulin treatment. Proliferation and activation of MAPK were more pronounced in EH VSMCs than in NEH VSMCs. Insulin exposure decreased expression of a-SM actin and was accompanied by rearrangement of intracellular F-actins in VSMCs, especially in the EH group. These effects were reversed by treatment with the PKC inhibitor. Conclusions Human mesenteric VSMCs of EH and NT patients differed in proliferation, MAPK signaling, and degree of changes in a-SM actin and F-actin isoforms immediately following insulin exposure in vitro.     

阻断p38信号转导通路对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究老年大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和凋亡与p38信号转导通路的关系,明确以p38为靶向的信号转导在VSMCs中的分子调控机制。方法: 将p38特异性抑制剂SB203580(25 μmol/L)作用于大鼠VSMCs,运用MTT比色法检测细胞增殖状态,流式细胞术检测SB203580对细胞凋亡的影响,Western blot法检测药物作用前后p38通路相关蛋白p38α、MKK3、GADD153和c-myc的表达及相关蛋白磷酸化活性。结果: SB203580可以时间、剂量依赖的方式抑制VSMCs增殖促进其凋亡。加入SB203580的VSMCs中p-p38α、GADD153和c-myc表达的水平,随作用时间的延长而下降（P<0.01）。结论: 阻断p38信号转导通路可能通过下调其下游靶基因GADD153和C-myc的表达,抑制血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡。     

p38MAPK信号途径与血管损伤后平滑肌细胞增殖关系的研究

目的检测大鼠颈动脉球囊损伤后平滑肌细胞增殖及p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)的表达,探讨血管损伤后平滑肌细胞增殖的信号途径.方法雄性Sprague-dawley大鼠30只,体重250～300 g.随机分为假手术组、手术后7 d组、手术后14d组,每组10只大鼠,进行球囊血管损伤术,术后7、14 d分别取15 mm颈动脉作为实验标本.血管组织行苏木精-伊红染色、免疫组化和免疫印迹,检测血管壁增生、增殖细胞核抗原(PCNA)和p38MAPK表达情况.结果术后7、14d组有动脉壁增厚、新生内膜形成和中膜平滑肌胶原化,PCNA细胞阳性率分别是(39.5±7.9)%和(44.8±9.9)%,与假手术组[(1.3±0.4)%]相比明显增加(P＜0.01);p38MAPK表达明显高于假手术组(P＜0.05).p38MAPK表达与血管平滑肌细胞增殖率呈正相关(r=0.714,P＜0.05).结论球囊损伤血管能促进血管平滑肌细胞增殖和血管内膜增生;血管损伤后p38MAPK表达明显增强,与平滑肌细胞增殖呈正相关;p38MAPK信号途径参与了血管平滑肌细胞的增殖.     

雷帕霉素脂质体对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞迁移的抑制作用

目的]探讨雷帕霉素脂质体(RL)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)迁移的影响及其与S100钙结合白蛋白A4(S100A4)相关的作用机制。 [方法]使用敲低S100A4基因的慢病毒转染HA-VSMC,随后加入嘌呤霉素筛选S100A4基因敲低的稳定株。50 mg/L ox-LDL处理HA-VSMC,加入不同剂量的RL(3、6及12 mg/L),观察处理前后对细胞迁移的影响。采用细胞划痕法、Transwell实验检测细胞迁移,Western blot检测S100A4、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、波形蛋白的表达。 [结果]ox-LDL处理细胞48 h后,与空白对照组相比,S100A4、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、COLⅠ及波形蛋白的表达明显升高(P＜0.05),细胞迁移速度明显加快(P＜0.05)。与ox-LDL组相比,不同剂量的RL处理48 h后显著抑制S100A4、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、COLⅠ及波形蛋白的表达并显著抑制细胞迁移(P＜0.05),其中6 mg/L、12 mg/L RL的抑制作用更明显(P＜0.05)。敲低S100A4基因后细胞迁移率显著降低(P＜0.05)。 [结论]RL能显著抑制ox-LDL诱导的HA-VSMC迁移,可能与RL下调S100A4、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、COLⅠ及波形蛋白的表达相关。     

溶血磷脂酸受体3介导溶血磷脂酸诱导的血管平滑肌细胞表型转化

目的探讨溶血磷脂酸(LPA)受体在LPA诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用及相关信号传导通路。方法培养SD大鼠分化表型VSMC,培养液加胰岛素样生长因子(IGF-1)为IGF-1组,加溶剂载体为空白组,以不同浓度水平LPA(0.1～10μmol/L)刺激,依次为LPA 0.1组、LPA 1组和LPA 10组,并在LPA(1μmol/L)条件下,以LPA受体1,3拮抗剂二辛烷甘油焦磷酸盐(DGPP 8:0)为DGPP 1组,RT-PCR法检测平滑肌肌动蛋白α(SMA-α)和骨桥蛋白mRNA表达,Western blot法检测p38分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK),细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化蛋白水平。结果与空白组和IGF-1组比较,LPA 0.1组、LPA 1组和LPA 10组呈剂量依赖促进骨桥蛋白mRNA表达上升,SMA-αmR NA表达下降(P<0.01);与空白组比较,LPA 1组p38MAPK和ERK激活(P<0.01),DGPP 1组p38MAPK和ERK无明显变化(P>0.05)。结论与Gq蛋白偶联的LPA受体3介导了LPA诱导的VSMC表型转化,阻滞上述通路有可能成为控制与动脉粥样硬化和再狭窄等血管疾病相关的VSMC表型转化潜在的治疗干预靶点。     

血管平滑肌细胞表型的成骨转换与血管钙化

血管钙化是血管壁中钙盐沉积的过程,导致血管硬化和失去弹性。它通常发生在中老年人,尤其是患有动脉粥样硬化、高血压、糖尿病和慢性肾脏疾病等疾病患者。血管钙化是一个主动的过程,其中平滑肌细胞的成骨转换是重要事件之一。这些细胞在钙化过程中释放钙离子,导致钙盐的沉积,形成钙化斑块。血管钙化受多种因素调节,包括高磷、高钙水平及氧化应激、机械应力等。此外,中医药研究在减轻血管钙化方面显示出潜力,例如灵芝孢子粉和其衍生物,三七、黄芩素、根皮素、雷公藤甲素等。这些研究为进一步理解和干预血管钙化提供了重要的证据,并揭示了一些潜在的抑制因子,可以作为未来治疗血管钙化的研究方向。     

线粒体融合素2突变体对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究大鼠线粒体融合素2(mitofusin 2,Mfn2)基因蛋白激酶A(PKA)磷酸化位点的2种突变体对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡及其相关的信号通路的影响。方法构建4种重组腺病毒,分别携带磷酸化位点突变为丙氨酸(重组1组)、Mfn2基因(重组2组)、突变为天冬酰胺(重组3组)和半乳糖苷酶基因(对照组),感染培养的VSMCs,另设未感染腺病毒的空白组。流式细胞术比较各组细胞的凋亡率,JC-1染色法检测线粒体膜电位变化,Western blot分析各组Mfn2蛋白的表达以及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和活性半胱天冬酶9(caspase-9)表达。结果与空白组和对照组比较,重组1组、重组2组和重组3组Mfn蛋白显著增加(P0.01);重组1组和重组2组细胞凋亡率显著增强(P0.01);线粒体膜电位显著降低(P0.01);p-Akt表达水平显著降低(P0.01),活性caspase-9表达水平显著增高(P0.01);且重组1组作用较重组2组更明显(P0.01);而重组3组上述指标无显著差异(P0.05)。结论 Mfn2突变为丙氨酸的位点PKA通过Akt信号及线粒体途径诱导VSMCs凋亡的作用较Mfn2更明显,表明PKA磷酸化位点是调控Mfn2诱导VSMCs凋亡的重要功能位点。     

Nalp3 inflammasome is activated and required for vascular smooth muscle cell calcification

Background

The calcification of blood vessels correlates with increased morbidity and mortality in patients with atherosclerosis, diabetes, and end-stage kidney disease. Increased inflammasome activation has been shown to play an important role in the pathogenesis of atherosclerosis. However, the contribution of inflammasome activation on the development of vascular calcification has not been investigated.

Methods

β-Glycerophosphate (β-GP) was used as a procedure to induce extensive artery calcification in primary vascular smooth muscle cells (VSMCs). Analysis of the levels of Nalp3 inflammasome complex was performed by quantitative real-time PCR and western blotting. The effect of Nalp3 deficiency on VSMC calcification was examined after transfecting Nalp3 siRNA into cultured VSMCs.

Results

We demonstrated for the first time that the mRNA levels of Nalp3 inflammasome complex including Nalp3, ASC and caspase1 were upregulated in calcifying VSMCs, resulting in increased IL-1β secretion. Inhibition of inflammasome activation by Nalp3 RNA interference reduced IL-1β secretion and inhibited VSMC calcification. Further analysis of clinical popliteal artery specimens showed an upregulation of inflammasome complex mRNA levels (4/5) and caspase1 activity (5/5) compared with their non-calcified adjacent tissues, indicating that Nalp3 inflammasome was tightly correlated with arterial calcification disease.

Conclusion

Our findings indicate that activation of the Nalp3-mediated inflammatory response pathway is an important venue associated with host response and pathogenesis of VSMC calcification.     

血管平滑肌细胞内质网应激与血管钙化的研究进展

血管钙化是指羟基磷灰石沉积于血管壁,由多因素参与及调控,类似于骨、软骨形成的主动生物学过程。内质网应激是机体内适应性调节反应,适当的内质网应激帮助维持内质网稳态,但过度的内质网应激会促进血管钙化的发生与发展。本文综述内质网应激尤其是未折叠蛋白反应在血管钙化中的潜在作用和分子机制,希望为血管钙化的防治提供新的思路。