Tiam1基因沉默对胰腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的研究沉默T淋巴瘤侵袭转移诱导因子(Tiam)1基因对胰腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响,并探讨其可能的分子机制。方法通过RNA干扰(RNAi)技术沉默胰腺癌BxPC-3细胞中Tiam1的表达,Western印迹实验检测其沉默效果;将转染处理过的胰腺癌细胞接种于裸鼠皮下,建立胰腺癌皮下移植瘤模型;观察肿瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线,裸鼠处死后,取瘤称重;苏木素-伊红(HE)染色法观察移植瘤组织病理学结构;免疫组织化学染色法(IHC)检测移植瘤组织增殖相关蛋白Ki-67,转移相关蛋白E-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Slug的表达。结果 RNAi技术可有效沉默胰腺癌BxPC细胞中Tiam1的表达,并成功构建胰腺癌裸鼠移植瘤模型;与对照组比较,si-Tiam1组裸鼠肿瘤体积与质量均明显降低(P<0.05);HE染色结果显示,与对照组比较,si-Tiam1组中肿瘤组织出现细胞皱缩、片状坏死等病理性改变;IHC结果显示,与对照组相比,si-Tiam1组移植瘤组织中Ki-67、Vimentin、Slug的表达明显降低,而E-cadherin的表达明显升高。结论沉默Tiam1能有效抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与Ki-67、Vimentin、Slug表达的降低及E-cadherin的表达增强有关,提示Tiam1有可能成为胰腺癌基因治疗的新靶标。     

下调CD44基因表达对人胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的探讨靶向CD44的短发夹RNA(shRNA)对人胃癌裸鼠移植瘤生长抑制作用及其机制。方法利用CD44 shRNA细胞及对照细胞株建立裸鼠原位移植瘤及皮下种植瘤模型,监测肿瘤生长变化,采用RT-PCR及免疫组织化学方法检测瘤体内CD44表达的变化,并进一步检测上皮-间质转化(EMT)相关因子表达的变化。结果成功构建了CD44 shRNA转染荷瘤皮下及原位裸鼠模型。与对照shRNA组、空白对照组分别比较,CD44 shRNA组荷瘤裸鼠肿瘤生长速度减慢,皮下种植瘤及原位移植瘤质量减轻,差异均有统计学意义(P均0.01)。RT-PCR结果发现,CD44 shRNA组CD44mRNA表达在皮下种植瘤及原位移植瘤均显著下调,差异均有统计学意义(P均0.01)。CD44 shRNA组细胞EMT相关基因E-cadherin表达增加,N-cadherin、Vimentin表达降低。结论 CD44 shRNA可以有效抑制人胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤生长,并下调CD44的表达水平,这可能与CD44基因参与EMT相关。     

CIK细胞对裸鼠人胃癌移植瘤生长的抑制作用

目的: 探讨CIK细胞对裸鼠人胃癌移植瘤生长的抑制作用.方法: 用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞, 给予多种细胞因子(rhIFN-γ、CD3mcAb、rhlL-2、rhlL-1), 诱导生成CIK细胞.培养人胃癌细胞株SGC-7901, 接种至40只裸鼠右腋皮下, 10 d后随机分2组, 每组20只, 分别为CIK组和对照组. 连续5 d在接种肿瘤细胞部位处给予CIK细胞和生理盐水注射治疗, 观察CIK细胞对胃癌移植瘤模型的抗肿瘤疗效.结果: CIK组胃癌肿块质量和生存期与对照组相比, 均具有显著性差异(1.21±0.34 g vs2.73±0.45 g, 65.8±6.2 d vs 44.3±4.8 d, 均P<0.01). 裸鼠体内实验表明, CIK细胞能够显著抑制胃癌细胞的生长, 其抑瘤率可达47.6%,明显高于对照组( P<0.01).结论: CIK细胞在裸鼠体内对人胃癌移植瘤有特异性抑瘤作用, 并可以延长裸鼠生存时间.     

抗端粒酶核酶抑制肝癌细胞裸鼠移植瘤生长的研究

设计针对端粒酶RNA组分的特异性核酶，研究该核酶对肝癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响。构建含针对端粒酶RNA组分锤头状核酶基因的重组真核表达质粒pBBS212-RZ，以及建立人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤模型。将不同剂量的pBBS212-RZ用脂质体包裹后进行瘤体内多点注射，对照组注射生理盐水或空质粒载体pBBS212。连续注射2l天后，测量移植瘤体积和重量，检测瘤组织端粒酶活性。抗端粒酶特异性核酶使瘤组织端粒酶活性下降(抑制率为72％)，明显地抑制了肝癌细胞裸鼠移植瘤生长(抑制率为68％)，且存在剂量依赖性。抗端粒酶特异性核酶作为一种有效的端粒酶抑制剂，可抑制肝癌细胞的生长，有望在肝癌基因治疗中发挥作用。     

RNA干扰沉默Livin基因对裸鼠移植瘤生长的影响

目的 利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默凋亡抑制蛋白基因Livin基因在人肺腺癌细胞株SPC-A-1中的表达,探讨Livin基因表达沉默对SPC-A-1裸鼠移植瘤生长的影响.方法 以慢病毒为载体,将携带针对Livin基因短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)及无关序列片段的shRNA转染SPC-A-1细胞,转染成功后将转染Livin shRNA的SPC-A-1细胞(实验组)、转染无关序列的SPC-A-1细胞(阴性对照组)及未转染任何序列的SPC-A-1细胞(空白对照组)分别接种于BALB/C裸鼠右腋皮下,复制SPC-A-1裸鼠皮下移植瘤模型,观察各组细胞在裸鼠体内的成瘤时间、成瘤率、瘤体体积及重量,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率;RT-PCR、免疫组织化学法分别检测Livin mRNA及蛋白的表达情况,原位末端转移酶标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测移植瘤组织凋亡情况.结果 与空白对照组、阴性对照组比较,实验组裸鼠移植瘤成瘤时间晚,瘤体生长缓慢(F=70.509,P＜0.01),体积抑瘤率达(59.5±3.4)%;瘤体重量明显减轻(F=12.821,P＜0.01),瘤重抑瘤率达(71.1±5.6)%.实验组Livinα mRNA表达水平为(37.2±1.6)%,Livinβ mRNA表达水平为(29.4±1.1)%,明显低于空白对照组[(63.3±3.8)%,(53.2±3.4)%]及阴性对照组[(66.1±2.6)%,(52.3±3.1)%],差异有统计学意义(Fα=45.309,Fβ=30.076,均P＜0.01).实验组Livin蛋白表达水平为(15.3±2.8)%,明显低于空白组的(51.3±2.1)%和阴性对照组的(52.5±2.5)%(F=78.92,P＜0.01).实验组瘤组织细胞凋亡明显增多,凋亡率为(35.4±3.2)%,明显高于空白对照组的(5.4±1.3)%和阴性对照组的(8.6±1.5)%,差异有统计学意义(F=14.509,P＜0.01).结论 沉默SPC-A-1细胞中Livin基因表达可有效抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长,Livin基因有望成为肺癌治疗的靶点之一.

Abstract：

Objective To explore the in vivo inhibitory effect of Livin gene silencing by RNA interference on xenograft of lung adenocarcinoma SPC-A-1 cells in BALB/C nude mice. Methods Three different BALB/C nude mice models were established by subcutaneously inoculating differently treated SPC-A-1 cells into 3 nude mice groups: the blank control group was inoculated with blank SPC-A-1 cells,while the negative group was inoculated with cells transfected with lentivirus-delivered negative shRNA, the experimental group was inoculated with cells with lentivirus-delivered Livin shRNA. Then the growth of tumors was observed, and the volume and weight of the tumors were measured at different time points. The curve of tumor growth was then described, and the inhibition rate was calculated. Livin gene expression in the tumor tissues was determined by RT-PCR and Inmunohistochemistry. Cell apoptosis of tumor tissues was detected by TUNEL. Results Slower tumor growth, smaller tumor volume and lighter tumor weight were observed in the experimental group as compared to the blank and negative groups ( F = 70. 509, P ＜ 0. 01; F = 12. 821, P ＜ 0. 01 ). The inhibition rate of tumor volume was ( 59. 5 ± 3.4 ) % , and the inhibition rate of tumor weight was (71. 1 ±5.6)%. Livinα mRNA and Livinβ mRNA expressions in the experimental group were significantly lower than the 2 control groups [ ( 37. 2 ± 1.6 ) % versus ( 63.3 ± 3.8 ) % , ( 66. 1 ±2.6)% ;(29.4±1.1)% versus (53.2 ±3.4)% ,(52.3 ±3. 1)% (Fα =45.309, P ＜0.01 ;Fβ =30.076,P ＜ 0. 01 ) ] . Livin protein expression level was also significantly lower than the blank and the negative groups [ ( 15.3 ± 2. 8 ) % versus(51.3 ± 2. 1 ) %, ( 52. 5 ± 2. 5 ) %, F = 78. 92, P ＜ 0. 01 ]. The apoptosis rate in the experimental group was significantly higher than that in the 2 control groups [ ( 35.4 ± 3.2 ) %versus(5.4±1.3)%,(8.6 ± 1.5)%,F= 14.509, P＜0.01]. Conclusion The lentivirus-delivered Livin shRNA was shown to inhibit the proliferation of transplantation tumor of lung carcinoma effectively, and Livin may be a target for gene therapy in lung cancer.     

微囊化人胰腺癌细胞建立裸鼠胰腺癌模型研究

目的研究微囊化人胰腺癌细胞建立裸鼠胰腺癌模型效果,以期建立稳定的更为理想的胰腺癌动物模型.方法 分别以人胰腺癌细胞悬液和微囊化人胰腺癌细胞悬液建立皮下移植瘤模型,定期监测皮下肿瘤大小,绘制生长曲线并进行比较.分别以人胰腺癌细胞悬液和微囊化人胰腺癌细胞建立原位移植瘤模型,分别于模型建立后第4周和第8周进行正电子发射计算机...     

重组人白细胞介素-24对裸鼠人胃癌移植瘤生长的抑制作用

白细胞介素（IL）-24对多种人肿瘤细胞的生长均有抑制作用，可诱导肿瘤凋亡、抑制肿瘤细胞生长和血管生成，对正常细胞没有影响，还具有抑制裸鼠人移植瘤生长的作用。苏州大学医学院细胞和分子生物学教研室成功构建了真核表达载体pcDNA3．0-IL-24和原核表达载体PET21a（＋）IL-24，并分别在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞和大肠杆菌BL-21中稳定表达。我们在此研究基础上，将两种质粒的表达产物重组人白细胞介素（rhIL）-24蛋白直接注入裸鼠人胃癌皮下移植瘤瘤体内，观察对裸鼠胃癌移植瘤生长的影响，并初步探讨其可能的作用机制。     

STAT3基因沉默对人胰腺癌SW1990细胞的裸鼠移植瘤生长的影响

目的 观察信号转导与转录激活因子3（STAT3）基因表达沉默后对人胰腺癌SW1990细胞的裸鼠移植瘤生长的影响,探讨其机制.方法 构建靶向STAT3短发卡RNA（shRNA）表达载体,稳定转染胰腺癌SW1990细胞（SW1990-RNAi组）,以转染阴性对照shRNA表达载体细胞（SW1990-Con组）及亲本SW1990细胞（SW1990组）作为对照.应用蛋白质印迹法检测各组细胞STAT3、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白的表达.建立各组细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,观察移植瘤的生长,应用免疫组化法检测移植瘤的CD34表达,计算肿瘤的微血管密度（MVD）.结果 SW1990组、SW1990-Con组、SW1990-RNAi组细胞的STAT3蛋白表达量分别为84.69±9.31、82.00±7.76、7.93±1.24,VEGF蛋白表达量分别为82.94±8.97、80.86±10.28、39.04±6.23,MMP-2蛋白表达量分别为40.88±5.09、38.26±5.71、12.54±2.15,SW1990-RNAi组均显著低于其他两组（P值均＜0.05）,而SW1990-Con组与SW1990组细胞的3种蛋白表达量差异均无统计学意义.SW1990组、SW1990-Con组、SW1990-RNAi组裸鼠移植瘤的重量分别为（2.2±0.4）、（2.2±0.3）、（0.5±0.3）g,瘤组织的MVD分别为每高倍视野（20.35±2.41）、（18.79±1.94）、（9.62±1.06）个,SW1990-RNAi组均显著低于其他两组（P值＜0.05或＜0.01）,而SW1990组与SW1990-Con组间的差异均无统计学意义.结论 STAT3基因表达被抑制后SW1990细胞的裸鼠移植瘤生长减缓,其机制可能是通过下调VEGF及MMP-2的表达、抑制肿瘤血管形成所致.     

转染GKLF基因对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究转染GKLF基因对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠皮下移植瘤的作用,探讨GKLF在胃癌中可能的作用机制.方法:将外源性重组真核质粒pcDNA3.1-GKLF转染到人胃癌细胞株SGC-7901内,经G418筛选并建立高表达GKLF的稳定转染细胞株.稳定表达该基因的细胞为SGC7901-peDNA3.1-GKLF组...     

鸟苷酸环化酶C基因沉默对人胃癌裸鼠皮下种植瘤的影响

目的:探讨鸟苷酸环化酶C(GC-C)基因沉默对人胃癌裸鼠皮下种植瘤的影响及其机制.方法:将SGC-7901细胞(SGC-7901组)、空质粒转染的细胞(PRNA组)、GC-C基因稳定沉默的细胞(GC-C-shRNA组)悬液先在裸鼠皮下接种成瘤,再取瘤组织块分别接种到裸鼠皮下,建立3种胃癌裸鼠皮下种植瘤模型.观察裸鼠一般情况、肿瘤的成瘤率、生长速度,描绘肿瘤的生长曲线,计算肿瘤的抑瘤率;采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR),Western blot和免疫组织化学法检测GC-C和趋化因子受体4(CXCR4)在各组移植瘤组织中的表达.结果:与SGC-7901组和PRNA组比较,GC-C-shRNA组裸鼠移植瘤生长速度明显减慢、体积明显变小(抑制率分别为33.7%、33.2%),肿瘤异型性、坏死程度明显降低,差异具有统计学意义(均P<0.05),且移植瘤组织中GC-C和CXCR4 mRNA和蛋白均明显下调(GC-CmRNA:7.47±1.70 vs 11.18±0.60,11.28±0.85;GC-C蛋白:0.52±0.15 vs 1.04±0.19,1.03±0.24;CXCR4蛋白:0.67±0.13 vs 1.02±0.21,1.03±0.23,均P<0.05).结论:GC-C基因稳定沉默在体内能保持稳定,且能抑制裸鼠移植瘤生长,该过程可能与CXCR4下调有关.     

转染kiss-1基因对人食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究转染kiss-1基因对人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤的作用,探讨其在食管癌基因治疗中的可行性和特异性.方法:在食管癌细胞系EC9706中转染kiss-1基因,经G418筛选,建立稳定高表达Kiss-1蛋白的细胞系.稳定表达该基因的细胞为转染kiss-1基因组,转染空质粒细胞及未处理细胞为对照组,建立裸鼠荷瘤模型;监测肿瘤生长变化,HE染色观察肿瘤病理学变化,RT-PCR、Western blot方法检测kiaa-1 mRNA和蛋白变化.结果:转染kiss-1基因组肿瘤生长受到显著抑制:HE染色显示转染kiss-1基因组及转染空质粒纽肿瘤组织内坏死均较空白对照组多;RT-PCR、Western blot结果表明转染kiss-1基因组裸鼠肿瘤组织kiss-1 mRNA和蛋白表达均显著升高,三组间比较差异具有统计学意义(F=72.685,24.807,均P<0.05).结论:转染kiss-1基因能抑制人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,且能有效上调kiss-1 mRNA和蛋白的表达,可为食管癌的基因治疗提供新的靶点、开辟新的思路.     

VEGFR-3小干扰RNA对结肠癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:研究血管内皮生长因子受体3(vascularendothelial growth factor receptor 3,VEGFR-3)小干扰RNA对结肠癌细胞移植瘤模型生长的影响.方法:构建VEGFR-3小干扰RNA表达载体.将结肠癌LoVo细胞注射入裸鼠皮下建造裸鼠移植瘤模型.将15只裸鼠结肠癌模型随机分成3组:实验组(pG-siRNA/VEGFR-3重组质粒)、阴性对照组(pG-HK重组质粒)与空白对照组.分别瘤体内注射相应的siRNA混合物或转染剂混合液,每3 d注射1次,共注射3次,观察肿瘤体积的变化;6 wk后处死裸鼠,肿瘤称取质量,并进行qRT-PCR和Western blot测定VEGFR-3 mRNA和蛋白的变化,通过免疫组织化学进行微淋巴管计数.结果:实验组移植瘤体积和质量明显小于阴性对照组和空白对照组,有显著的统计学意义(P<0.001).实验组抑制率为52.75%,与对照组相比,差异有显著(P<0.001).qRT-PCR和Western blot测定VEGFR-3 mRNA和蛋白的变化比较,实验组有明显降低(P<0.001).实验组淋巴管计数较对照组差异显著(P<0.05).结论:VEGFR-3 siRNA可以抑制裸鼠结肠癌细胞移植瘤的生长,并减少裸鼠移植瘤淋巴管生成,能有效抑制结肠癌细胞的生长.     

西咪替丁抑制人肠癌裸鼠移植瘤

目的：研究西咪替丁对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及机制。方法：建立人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型。随机分2组,每组5只实验鼠。肿瘤种植前3 d开始分别皮下注射生理盐水(对照组)或西咪替丁(治疗组),每天1次,观察成瘤时间及瘤体成长情况。肿瘤种植后第7周处死实验鼠,测定瘤体大小,并用免疫组化方法测定肿瘤组织内微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果：治疗组肿瘤体积明显小于对照组;治疗组肿瘤组织中的VEGF表达程度和MVD计数亦明显低于对照组。结论：西咪替丁通过抑制VEGF表达,减少血管生成,从而抑制肿瘤生长。     

RNA干扰DNMT1基因对胰腺癌细胞BxPC-3增殖的影响及相关机制

目的:探讨RNA干扰DNMT1基因对胰腺癌细胞BxPC-3增殖的影响及相关机制.方法:利用Lipofectamine TM2000转染DNMT1-siRNA至胰腺癌细胞BxPC-3.实验共分为3组:实验组(转染DNMT1-siRNA)、阴性对照组(转染negative-siRNA)和空白对照组(转染脂质体).转染48h后,应用荧光定量PCR法和Western blot法分别检测细胞中DNMT1 mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测细胞体外增殖活力;FCM法检测细胞凋亡;甲基化特异性PCR法(MSP)检测抑癌基因p16、RASSF1A和ppENK的启动子甲基化状态.结果:与空白对照组和阴性对照组相比,实验组的DNMT1 mRNA及蛋白表达量均显著降低(P<0.01);实验组细胞增殖明显受到抑制(P<0.05),细胞凋亡率明显增加(44.46%±5.98%vs3.74%±1.02%vs5.07%±1.16%,P<0.01).空白对照组与阴性对照组的p16、RASSF1A和ppENK基因甲基化阳性,而实验组的p16和ppENK基因甲基化阴性,RASSF1A基因部分甲基化.结论:DNMT1基因表达下调后,能抑制胰腺...     

Bombesin inhibits growth of human pancreatic adenocarcinoma in nude mice

Bombesin, a 14-amino acid peptide, exhibits direct and indirect effects on the gastrointestinal tract, including release of hormones, stimulation of pancreatic, gastric, and intestinal secretion and intestinal motility. Cholecystokinin (CCK) and gastrin, two of the hormones released by bombesin, have been shown to play a role in maintaining the growth of normal gastrointestinal mucosa as well as in eliciting trophic responses in normal and neoplastic tissue. We studied the effects of chronic bombesin treatment on the growth of a human ductal pancreatic adenocarcinoma (SKI) xenografted into nude mice, and on the growth of the normal nude mouse pancreas. Thirteen nude mice were implanted with SKI tumor and divided into two groups. Mice received 0.1 ml intraperitoneal injections of either bombesin (20 micrograms/kg) or the vehicle alone three times per day. Tumor areas were measured twice weekly until death (week 8), at which time the tumors and the host pancreas were excised, weighed, and assayed for protein, RNA, and DNA content. Significant inhibition of tumor growth was found in the bombesin-treated group at weeks 4, 5, 6, 7, and 8. Tumor area and weight at death (day 57) were significantly less in the bombesin-treated group (48 and 46%) as compared with control. We observed similar inhibition of tumor DNA (39%), RNA (38%), and protein (43%) content compared with controls. In contrast, bombesin significantly increased the weight (64%), protein (81%), and DNA (73%) content of the mouse pancreas compared with controls. We conclude that bombesin acts concurrently as both a trophic agent for normal host pancreas and a growth inhibitory agent in xenografted pancreatic cancer tissue.     

siRNA沉默USP22基因对胃癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)沉默泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase22,USP22)对胃癌细胞增殖的影响.方法:针对USP22基因设计3条siRNA及阴性siRNA,用脂质体Lipofectamine 2000转染胃癌AGS细胞,通过实时定量PCR和Western blot检测转染后AGS细胞USP22基因中mRNA和蛋白表达水平的变化情况,流式细胞术检测细胞周期分布变化情况,CCK8法检测细胞增殖率及抑制率.结果:转染48h后,3条siRNA均能显著抑制USP22 mRNA和蛋白的表达.其中,以转染USP22 siRNA3后效果最明显,mRNA和蛋白表达分别下降80.47%±2.99%和79.40%±3.58%.细胞增殖明显受到抑制,USP22 siR-NA3组细胞增殖抑制率为27.33%±3.49%.细胞周期中G0/G1期细胞增多,S期细胞减少.结论:采用RNA干扰技术能够有效地沉默USP22基因的表达,并显著抑制胃癌细胞的增殖.