哇巴因抑制钠泵阻β1亚单位和VE-cadherin减弱血管内皮细胞连接功能

目的 探讨钠泵抑制剂哇巴因对血管内皮细胞连接的影响及机制.方法 以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为靶细胞,Hoechst33342/PI双荧光染色法观察哇巴因作用后细胞凋亡或坏死特征,透射电镜和光镜观察细胞形态结构变化.应用半定量聚合酶链反应检测钠泵α1亚单位、β1亚单位、VE-cadherin和Snail mRNA的表达.结果 0.1μmol·L-1哇巴因作用HuVECs 24～48 h,细胞死亡以凋亡为主,10μmol·L-1哇巴因作用24 h,引起细胞坏死;对照组细胞间的细胞连接数量多,结构清晰,而经哇巴因作用后,细胞连接丧失,细胞脱落.哇巴因作用HuVEcs后,钠泵α1亚单位和Snail表达上调,β1亚单位和VE-cadherin表达下降,其改变均呈剂量和时间依赖性.结论 哇巴因通过下调血管内皮细胞钠泵β1亚单位和VE-cadherin的表达使细胞连接功能减弱.     

哇巴因对血管内皮细胞ECV304细胞凋亡及胞内游离钙离子和活性氧浓度的影响

目的研究哇巴因(毒毛花苷G)对人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡的诱导作用,并探讨其可能的作用机制。方法哇巴因0.01,0.05,0.1,0.5,1和10μmol·L-1与ECV304细胞作用24,48和72h,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33342/碘化丙锭双荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,激光共聚焦显微镜观察细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)和活性氧(ROS)浓度,逆转录PCR和Western印迹法检测胱天蛋白酶3mRNA和蛋白表达。结果哇巴因在0.01～10μmol·L-1浓度范围内与ECV304细胞分别作用24,48和72h,对细胞存活的抑制率明显增加,且呈浓度和时间依赖性,24,48和72h浓度-效应相关系数分别为0.984,0.994和0.997(P<0.05);哇巴因作用24,48和72h的IC50值分别为0.624,0.184和0.041μmol·L-1,时间-效应相关系数为0.974(P<0.05)。哇巴因0.1μmol·L-1与ECV304细胞作用24h,细胞凋亡百分率由正常对照组的(4.2±0.5)%升高到(26.0±3.2)%,作用48h,细胞凋亡率由(4.7±0.5)%升高到(36.5±5.3)%,差异有统计学意义(n=3,P<0.01);同时细胞出现染色质凝集。哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1分别与ECV304细胞作用12,24和36h,[Ca2+]i和ROS浓度呈浓度和时间依赖性增加,在哇巴因0.5μmol·L-1时[Ca2+]i和ROS浓度的时间-效应相关系数分别为0.912和0.924,作用36h时[Ca2+]i和ROS浓度的浓度-效应相关系数分别为0.889和0.907(P<0.05)。逆转录PCR和Western印迹法分析显示,哇巴因0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24h后,胱天蛋白酶3mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24h,胱天蛋白酶3蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论哇巴因可诱导人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡,其机制可能与增加[Ca2+]i和ROS浓度及胱天蛋白酶3表达有关。     

哇巴因与地高辛对大鼠垂体钠泵α亚单位基因表达影响的对比研究

目的　对比研究哇巴因与地高辛对大鼠垂体钠泵(Na+,K+ ATP酶 )α亚单位基因表达的影响 ,探讨内源性哇巴因 (EO)的生物学效应以及洋地黄类药物药理作用的分子机制。方法　长期给予大鼠注射小剂量哇巴因 (2 0 μg·kg-1·d-1)与地高辛 (32 μg·kg-1·d-1) ,动态观察大鼠血压变化 ;分别应用分子生物学RT PCR及免疫组织化学技术 ,探讨各组大鼠垂体钠泵α1、α2 及α3 亚单位mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果　哇巴因与地高辛对大鼠血压的影响存在着明显差别 ,长期给予大鼠注射小剂量哇巴因可使大鼠血压升高 ,而地高辛对大鼠血压无影响。哇巴因与地高辛对垂体钠泵α亚单位表达的影响存在明显不同 :在mRNA水平 ,哇巴因使α1、α2 及α3 亚单位的表达均明显减弱 ,而地高辛仅使α3 亚单位表达减弱 ;在蛋白水平 ,哇巴因使α2 及α3 亚单位表达减弱 ,α1亚单位无改变 ,而地高辛使α1及α3 亚单位表达减弱 ,α2 亚单位无改变。结论　哇巴因在高血压发病中可能起着重要作用 ;哇巴因与地高辛可导致不同的钠泵基因表达改变 ,为进一步揭示EO生理与病理作用以及洋地黄类药物药理与毒理作用的分子机制提供了理论及实验依据。     

前胡甲素通过PPARα抑制LPS诱导的内皮细胞的炎症反应

目的探讨前胡甲素(Pd-Ia)对脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)诱导的内皮细胞中细胞因子表达的影响及其作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),用1mg·L-1LPS和不同浓度的Pd-Ia(10,20,40μmol·L-1)孵育24 h,采用荧光实时定量PCR检测TNF-α、IL-1β、PPARs(过氧化物酶体增殖激活受体)的表达。进一步在HUVECs中采用siRNA干扰PPARα后观察Pd-Ia的抗炎效应的变化。结果①Pd-Ia可以抑制LPS诱导的内皮细胞中TNF-α、IL-1β的表达。②Pd-Ia选择性上调LPS诱导的内皮细胞中PPAR-α的表达,而对PPAR-β、PPAR-γ的表达没有影响。③采用了siRNA特异性沉默PPARα后,Pd-Ia对TNF-α、IL-1β的下调作用被一定程度的逆转。结论 Pd-Ia对LPS诱导的内皮炎症反应有抑制作用,其机制与激活PPARα有关。     

甘肃黄芪黄酮对AngⅡ致内皮细胞凋亡的保护作用

目的探讨甘肃黄芪黄酮化合物芒柄花素与毛蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法将不同浓度上述两种黄酮单体(0.01、0.1、1.0、10mg.L-1)分别与AngⅡ(10-6mol.L-1)和HUVECs作用24h后,MTT比色法检测细胞存活率,Hoechst33258荧光染色法观察细胞核形态变化,流式细胞仪及激光共聚焦仪检测细胞凋亡,并观察凋亡基因Fas表达的变化。结果甘肃黄芪黄酮化合物芒柄花素与毛蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖呈剂量依赖性地抑制AngⅡ引起的细胞存活率下降(P<0.05),AngⅡ(10-6mol.L-1)孵育24h后,内皮细胞凋亡率明显多于对照组(P<0.01);芒柄花素(1.0mg.L-1)与毛蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖(1.0mg.L-1)可抑制AngⅡ(10-6mol.L-1)诱导的内皮细胞凋亡(P<0.01),并减少Fas的表达(P<0.05);以上实验芒柄花素与毛蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖两化合物间比较无差异(P>0.05)。结论甘肃黄芪黄酮化合物可减轻AngⅡ诱导的HUVECs凋亡,其机制之一可能与其降低Fas的表达有关。     

非诺贝特对溶血卵磷脂诱导的血管内皮细胞增生及凋亡的影响

目的:观察非诺贝特对溶血卵磷脂(LPC)诱导的血管内皮细胞增生、凋亡的影响并探讨其机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为正常对照组、LPC组、非诺贝特低浓度组(10μmol·L-1)、非诺贝特中浓度组(50μmol·L-1)及非诺贝特高浓度组(100μmol·L-1)。分别观测LPC对血管内皮细胞增生、凋亡及凋亡调控蛋白抑制X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的影响,及非诺贝特干预后的变化。结果:与正常对照组比较,LPC抑制内皮细胞增生,促进内皮细胞凋亡,XIAP表达减弱。非诺贝特可干预LPC对内皮细胞的作用,使内皮细胞增生增强,凋亡减少,XIAP表达增强。结论:非诺贝特可通过促进XIAP表达干预LPC对HUVECs增生及凋亡的影响。     

姜酮对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

摘要：目的:探究姜酮对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的影响。方法:HUVECs经不同浓度的姜酮(0,5,25,50,125,250μmol·L-1)处理24 h后再用LPS(100 ng·ml-1)刺激12 h,之后利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力并选定合适的姜酮浓度进行后续实验;将HUVECs随机分为4组:对照组;姜酮组(50μmol·L-1);LPS组(100 ngl·ml-1);LPS+姜酮组(100 ng·ml-1+50μmol·L-1)。通过实时荧光定量PCR检测各组细胞的炎症细胞因子[肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1（IL-1）、白细胞介素6（IL-6）]的m RNA表达水平;利用2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）探针对细胞活性氧类（ROS）水平进行检测;采用原位末端缺口标记法（Tunel）对细胞凋亡水平进行检测。结果:不同浓度的姜酮对HUVECs的存活率无明显差异（P>0.05）,而姜酮预处理可逆转LPS刺激导致的存活率下降,其中50,125,250μmol·L-1浓度组差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,LPS组的IL-1、IL-6、TNF-αm RNA水平、ROS水平、细胞凋亡数目显著升高（P<0.05）。姜酮预处理后可以抑制LPS诱导的HUVECs炎性反应,改善氧化应激水平,减少细胞凋亡数目（P<0.05）。结论:姜酮对LPS诱导的HUVECs损伤具有保护作用,且其保护作用可能与减少炎性因子表达、抑制氧化应激、减少细胞凋亡数目有关。     

RNA干扰高迁移率族蛋白1对Aβ_(25-35)刺激HT22细胞中晚期糖基化终末产物受体/Toll样受体4信号通路相关蛋白表达的影响

目的研究RNA干扰高迁移率族蛋白1(HMGB1)对β淀粉样蛋白片段25-35(Aβ25-35)刺激HT22细胞HMGB1、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、Tol样受体4(TLR4)、NF-κB、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等蛋白表达的影响。方法 Aβ25-350,2.5,5,10,20和40μmol·L-1作用HT22细胞24 h后,MTT法检测细胞存活,计算半数抑制浓度(IC50)。将对数生长期的HT22细胞分为5组:正常细胞对照组、Aβ25-3540μmol·L-1组、小干扰RNA(siRNA)50μmol·L-1组、siRNA或scramble siRNA+Aβ25-35组(HT22细胞转染si RNA或scramble si RNA 50μmol·L-1作用24 h后,再加入终浓度为40μmol·L-1人工合成的Aβ25-35处理24 h),显微镜观察细胞形态变化,免疫荧光检测HMGB1在细胞中位置的改变,Western印迹法检测细胞内HMGB1,RAGE,TLR4和NF-κB P65的表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-1β和TNF-α的水平。结果Aβ25-35作用HT22细胞24 h,IC50为41.17μmol·L-1。后续采用Aβ25-3540μmol·L-1进行实验。Aβ25-3540μmol·L-1作用24 h后,细胞大量死亡,聚集成团,突起减少,细胞间隙增大,且HMGB1从核内转移至核外。细胞内的HMGB1,RAGE,TLR4和NF-κB P65表达均显著升高(P<0.05),细胞上清液中IL-1β和TNF-α的水平显著升高(P<0.05);经siRNA 50μmol·L-1处理24 h,可显著降低细胞内HMGB1,RAGE,TLR4和NF-κB P65的表达(P<0.05)及细胞上清液中IL-1β和TNF-α的水平(P<0.05)。结论 RNA干扰HMGB1可减少Aβ25-35刺激HT22细胞HMGB1,RAGE,TLR4和NF-κB P65的表达。     

地塞米松和淀粉样β蛋白片段25-35对PC12细胞损伤和凋亡的影响

目的探讨地塞米松(DEX)和淀粉样β蛋白片段25-35(Aβ25-35)联合作用对PC12细胞损伤和凋亡的影响。方法采用单独或联合应用DEX 0.1～10μmol.L-1和Aβ25-35 1～5μmol.L-1作用PC12细胞24 h,MTT法测定细胞活力;膜联蛋白-Ⅴ,PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,PI单染流式细胞仪检测细胞凋亡峰;逆转录-PCR检测胱天蛋白酶3 mRNA的表达水平。结果 MTT结果显示,与正常对照组相比,DEX 5和10μmol.L-1,Aβ25-35 1,5和10μmol.L-1,DEX 5+Aβ25-35 1,5和10μmol.L-1及DEX 10+Aβ25-35 5,10μmol.L-1组均可明显降低PC12细胞存活率,而DEX联合Aβ25-35能明显减少PC12细胞数(P<0.01)。流式细胞仪结果显示,DEX 5μmol.L-1和Aβ25-35 1μmol.L-1单独作用对PC12细胞凋亡率和亚二倍体凋亡峰有一定的增加作用(P<0.05),两者联合作用能明显增加PC12细胞早期和中晚期凋亡率,增加亚二倍体凋亡峰(P<0.01);RT-PCR结果显示,DEX 5μmol.L-1和Aβ25-35 1μmol.L-1单独作用对PC12细胞胱天蛋白酶3 mRNA的表达水平没有明显影响,它们联合作用能明显增加PC12细胞胱天蛋白酶3mRNA的表达水平(P<0.05)。结论 DEX和Aβ25-35联合作用能明显增加对PC12细胞的损伤,促进胱天蛋白酶3 mRNA表达,诱导PC12细胞凋亡。     

六味地黄方含药血清对H_2O_2致HUVECs损伤的保护作用

目的研究六味地黄方(LWDHF)含药血清对过氧化氢(H2O2)损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的保护作用,并阐明其可能的机制。方法采用400μmol·L-1H2O2复制HUVECs损伤模型,LWDHF含药血清分为3个剂量干预组(体积分数为5%、10%、20%);MTT法测定细胞活力,Hoechst染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态,Annexin VFITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况,RT-PCR法检测Bax、Caspase-3等基因mRNA表达,Western blot法检测Caspase-3、Bax等蛋白表达。结果 LWDHF含药血清能明显促进H2O2损伤后的HUVECs增殖;Hoechst染色和Annexin V-FITC/PI双染法结果均显示LWDHF含药血清抑制血管内皮细胞凋亡;RT-PCR和Western blot结果提示LWDHF抑制H2O2所致的血管内皮细胞凋亡可能是通过降低Caspase-3、Bax mRNA和蛋白的表达,升高Bcl-2 mRNA和蛋白表达实现的。结论 LWDHF含药血清可以抑制H2O2诱导的细胞凋亡,对血管内皮细胞具有一定的保护作用。     

通心络对Aβ_(1-42)损伤人脑微血管内皮细胞HIF-1α、VEGF表达的干预作用

目的通心络对β淀粉样蛋白片段(Aβ1-42)诱导的人脑微血管内皮细胞中VEGF的分泌及VEGF和HIF-1α蛋白表达的干预作用。方法采用人脑微血管内皮细胞,给予不同剂量的通心络预处理,并用20μmol·L-1的Aβ1-42干预24h诱导细胞损伤,经处理后检测细胞形态的变化、VEGF分泌及VEGF和HIF-1α蛋白的表达。结果Aβ1-42可诱导人脑微血管内皮细胞损伤,VEGF分泌减少及VEGF蛋白表达降低,HIF-1α蛋白表达增强,通心络可升高Aβ1-42诱导的VEGF分泌、增强其蛋白的表达,增强HIF-1α蛋白表达,保护内皮细胞。结论通心络可通过HIF-1α途径增强VEGF蛋白的表达,增加上清液中VEGF蛋白的分泌,从而对Aβ1-42损伤的脑微血管内皮细胞起到保护作用。     

三氧化二砷对肺癌A549细胞及人脐静脉内皮细胞Notch通路的影响

目的探索三氧化二砷(As2O3)对肺癌A549细胞和血管内皮细胞Notch通路相关分子表达的影响。方法体外培养人肺癌A549细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分别用0(空白对照)、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0μmol·L-1的As2O3进行干预,24 h后收集细胞,定量PCR检测A549细胞Dll4 m RNA的水平、HUVECs Dll4和Notch-1 m RNA的水平。结果 A549细胞的Dll4 m RNA水平在0~2.0μmol·L-1组逐渐升高,2.0~8.0μmol·L-1组逐渐降低,且8.0μmol·L-1组的表达水平显著低于空白对照组(P<0.01);HUVECs的Dll4 m RNA水平在0~1.0μmol·L-1组逐渐升高,1.0~8.0μmol·L-1组逐渐降低,且4.0和8.0μmol·L-1组的表达水平显著低于空白对照组(P<0.01);HUVECs的Notch-1 m RNA水平随给药浓度的增加而升高,各浓度组均高于空白对照组(P<0.01)。结论在体外条件下,As2O3在较低浓度能促进A549细胞和HUVECs Dll4 m RNA表达,而在较高浓度则抑制其表达;As2O3能浓度依赖性提高HUVECs的Notch-1 m RNA表达水平。     

乌司他丁对脂多糖诱发的单层人脐静脉内皮细胞高通透性的影响及其机制

目的 探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱发的单层人脐静脉内皮细胞(HUVECs)高通透性的影响及其可能机制.方法 体外培养的单层 HUVECs被分为对照组、LPS组(LPS 1μg/ml刺激4 h)、乌司他丁复合LPS组(乌司他丁3000 U/ml孵育1 h+LPS 1μg/ml刺激4 h)和血管内皮钙黏蛋白单克隆抗体(VE-cadherin mAb)组(VE-cadherin mAb 50μg/ml孵育6 h+乌司他丁3000 U/ml孵育1 h+LPS 1μg/ml刺激4 h).采用双腔系统Transwell法检测单层 HUVECs的通透性 , Western blot法检测HUVECs中VE-cadherin的表达水平.结果 与对照组相比,LPS组单层HUVECs渗透性增高 ,VE-cadherin表达降低(P＜0 .01).与LPS组相比 ,乌司他丁复合LPS组单层HUVECs渗透性降低 ,VE-cadherin表达增高(P＜0 .01).与乌司他丁复合LPS组相比 ,VE-cadherin mAb组单层HUVECs渗透性增高 ,VE-cadherin表达降低(P＜0 .01).结论 乌司他丁预处理可改善LPS引起的单层HUVECs高通透性状况 ;其可能机制与VE-cadherin表达增多有关.     

正常成人肺部钠泵亚单位分布及其意义

目的研究正常成人钠泵亚单位在肺组织不同部位的表达,并探讨其可能的意义。方法对手术获取的39例正常肺组织标本切片,采用免疫组织化学法进行染色,半定量分析钠泵α1、α3、β1、β2 4个亚单位在小气道上皮及肺泡上皮的表达。结果①小气道及肺泡上皮均有不同强度的钠泵4个亚单位的表达,表达的部位不尽相同;②小气道上皮中以α3、β1亚单位表达最强,与α1、β2亚单位相比有显著性差异(P分别<0.001、0.01和0.05);③在肺泡上皮中以α3、β2亚单位表达最强,与α1、β1亚单位相比有显著性差异(P分别<0.001、0.005和0.001),α1亚单位表达最弱,与其余各亚单位相比均有统计学意义。α3与β2相比表达强度无显著性差异(P>0.05)。结论钠泵4个亚单位在小气道及肺泡上皮均有不同强度的表达,其分布的不同可能与其钠泵在组织局部不同的功能特征有关。     

瓜蒌皮提取物对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨瓜蒌皮提取物(extractive pericarpium trichosanthes,EPT)对体外高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(HUVECs),观察不同浓度瓜蒌皮提取物干预高糖处理的HUVECs凋亡的变化。MTT法检测HUVECs的存活率、采用Hoechst染色法检测细胞凋亡、采用比色法测定细胞内Caspase-3的活性、Western blot法以及免疫荧光染色法检测核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的蛋白表达和p65核移位情况。结果 30 mmol·L-1葡萄糖处理内皮细胞48h能引起细胞活性明显降低,细胞凋亡率及caspase-3的活性明显增加,细胞中NF-κB蛋白表达升高及p65核移位增加。用瓜蒌皮提取物(12.5、25、50 mg·L-1)预处理细胞1 h,可以增加细胞活性;降低细胞凋亡率、caspase-3的活性及NF-κB蛋白表达,呈浓度依赖性,且对高糖诱导的p65核移位有抑制作用。结论瓜蒌皮提取物对体外高糖诱导的HUVECs凋亡有抑制作用,其作用机制与下调NF-κB表达和降低caspase-3活性有关。     

线粒体凋亡通路在棕榈酸诱导的血管内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨线粒体凋亡通路在棕榈酸诱导的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)凋亡中的作用。方法不同浓度棕榈酸(0.1、0.2、0.4、0.8 mmol·L~(-1))作用HUVECs(0、12、24、48 h),MTT法检测HUVECs增殖能力;免疫荧光法检测HUVECs细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的表达水平;免疫印迹法检测HUVECs中AIF、Cyt-C、cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax等线粒体凋亡通路蛋白的表达水平;TUNEL法检测细胞内凋亡水平。结果 0.4 mmol·L~(-1)棕榈酸作用HUVECs 24 h时,细胞增殖率明显降低;AIF、Cyt-C、cleaved caspase-3、Bax/Bcl-2的水平明显升高(P<0.05),细胞凋亡水平明显增高(P<0.05);线粒体通透性抑制剂环孢素A (ciclosporine A, CsA)预处理组HUVECs凋亡水平明显下调(P<0.05)。结论棕榈酸所致血管内皮细胞损伤的发病机制可能与线粒体凋亡相关通路密切关联,此研究对脂毒性心肌损伤的防治有重要意义。     

阿托伐他汀对内皮细胞微粒诱导人脐静脉内皮细胞VCAM-1和ICAM-1表达的影响

目的:探讨阿托伐他汀对内皮细胞微粒(EMPs)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达血管细胞粘附分子(VCAM)-1和细胞间粘附分子(ICAM)-1的影响。方法:取生长良好的第4,5代人脐静脉内皮细胞,将细胞分为3大组:对照组、EMPs组、EMPs+阿托伐他汀组。对照组加入培养基,EMPs组以不同浓度的EMPs(0/mL,1×102/mL,1×103/mL,1×104/mL,1×105/mL)与HUVECs共同孵育24 h,EMPs+阿托伐他汀组以不同浓度的阿托伐他汀(0.05,0.1,1.0,10μmol.L-1)与HUVECs作用1 h后,加入105/mL EMPs共同孵育24 h。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测VCAM-1和ICAM-1 mRNA和蛋白的表达。结果:HUVECs受EMPs刺激后,VCAM-1和ICAM-1 mRNA及蛋白表达呈浓度依赖性增加,阿托伐他汀可不同程度上抑制EMPs的作用。结论:阿托伐他汀抗动脉粥样硬化作用可能部分与抑制EMPs诱导的内皮细胞VCAM-1和ICAM-1的表达有关。     

知母皂苷对淀粉样β蛋白片段25~35引起的神经细胞凋亡的保护作用(英文)

目的研究知母皂苷(SAaB)对淀粉样β蛋白片段25~35(Aβ25~35)激活巨噬细胞引起神经细胞凋亡的保护作用及有关的机制。方法体外培养小鼠腹腔巨噬细胞24 h,加入Aβ25~35(20μmol.L-1),分别在加入Aβ25~350.5,1,2和6 h取巨噬细胞,应用Western印迹方法检测不同时间点的胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)的蛋白表达改变,确定ERK1/2和p38 MAPK蛋白表达达峰时间。然后,在加入Aβ25~35前10 min,加入SAaB(10,30和100μmol.L-1)或在加入Aβ25~35前30 min,分别加入p38MAPK的特异性阻断剂SB203580和ERK上游激酶MEK的特异性阻断剂PD98059,分别在Aβ25~35作用0.5和2 h后,取细胞进行Western印迹实验。Aβ25~35作用48 h后,取培养的巨噬细胞上清液测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及一氧化氮(NO)生成量的改变,应用免疫细胞化学染色观察巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。为了观察SAaB对Aβ25~35激活巨噬细胞所介导的神经细胞凋亡的保护作用,在巨噬细胞培养液内加入SAaB(10,30和100μmol.L-1)作用10 min,然后加入Aβ25~35(20μmo.lL-1)作用48 h后,将培养的上清液转移到体外培养8 d的小脑颗粒细胞内作用72 h,对照组将未被Aβ25~35刺激的巨噬细胞上清液加入到神经细胞内。应用Hoechst 33258染色观察小脑颗粒细胞凋亡改变。结果Aβ25~35(20μmol.L-1)可使巨噬细胞磷酸化ERK1/2和磷酸化p38 MAPK表达明显增加,分别在加入Aβ25~35后0.5 h和2 h作用达高峰。另外,Aβ25~35也可使巨噬细胞的TNF-α和NO产生增加以及iNOS表达增加,Aβ25~35引起的巨噬细胞TNF-α产生增加是通过ERK1/2信号通路激活介导的,因为MEK的特异性阻断剂PD98059可明显抑制Aβ25~35引起的巨噬细胞TNF-α产生增加。将Aβ25~35刺激48 h的巨噬细胞上清液加入到培养的小脑颗粒细胞内,可使神经细胞凋亡百分比较对照组明显增加。SAaB(30和100μmol.L-1)能明显抑制Aβ25~35引起的巨噬细胞磷酸化ERK1/2、磷酸化p38 MAPK和iNOS表达增加,SAaB(10,30和100μmol.L-1)也能对抗Aβ25~35引起的TNF-α和NO的生成增加及明显降低由Aβ25~35激活巨噬细胞所介导的神经细胞凋亡。结论SAaB对Aβ25~35激活巨噬细胞引起神经细胞凋亡具有对抗作用,该作用与其抑制巨噬细胞的ERK1/2信号转导通路,进而抑制巨噬细胞TNF-α和NO的产生有关。     

罗格列酮对血管内皮细胞胰岛素抵抗及ROS/IKK的影响

目的：探讨罗格列酮对高糖诱导胰岛素抵抗（ IR）血管内皮细胞的保护作用及可能机制。方法将人脐静脉内皮细胞（ HUVECs）分为3组：正常对照组（ DMEM培养液,葡萄糖浓度为5.5 mmol·L-1）;高糖组（建立高糖诱导内皮细胞IR模型后,葡萄糖浓度为33 mmol·L-1的DMEM中培养24 h）;罗格列酮组（建立高糖诱导内皮细胞IR模型后,葡萄糖浓度为33 mmol·L-1的DMEM中加入10μmol·L-1罗格列酮干预24 h）。检测细胞存活率、细胞上清液一氧化氮（NO）和内皮素（ET-1）水平、线粒体膜电位和活性氧（ROS）变化,以及磷酸化I-κB 激酶（p-IKK）和 NF-κB 抑制蛋白（ IKBA）表达水平。结果与正常对照组比较,高糖组细胞存活率和NO水平下降,ET-1水平上升;线粒体膜电位下降, ROS含量升高;IKK磷酸化水平增加,IκBα蛋白表达下调（P〈0.01）,罗格列酮可显著逆转上述变化（P〈0.05）。结论罗格列酮可改善高糖诱导血管内皮细胞IR,其机制与抑制ROS/ IKK 通路有关。     

迷迭香酸抗过氧化氢诱导血管平滑肌细胞凋亡作用的研究

目的探讨迷迭香酸对过氧化氢(H2O2)诱导血管平滑肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法流式细胞术检测细胞凋亡率;吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察细胞形态学变化;MTT法检测细胞活性;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Fas和FasL蛋白的表达。结果经500μmol·L-1H2O2处理24h后,细胞凋亡率为34.9%±2.55%,出现核固缩、核碎裂等典型的凋亡形态学改变,所以随后实验选择500μmol·L-1H2O2为诱导血管平滑肌细胞凋亡的最佳浓度。①500μmol·L-1的H2O2处理血管平滑肌细胞24h能引起细胞活性明显降低;细胞凋亡率明显增加,达35.7%±1.33%;细胞中Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax蛋白比值减少,Fas和FasL蛋白表达升高。②用迷迭香酸(10、20、40μmol·L-1)预处理细胞30min,可以增加细胞活性;降低细胞凋亡率,呈浓度依赖性;细胞中Bcl-2/Bax蛋白比值升高,Fas和FasL蛋白表达降低。结论迷迭香酸能拮抗H2O2诱导血管平滑肌细胞凋亡;其作用机制可能与升高细胞中Bcl-2/Bax蛋白比值,减少Fas、FasL蛋白表达有关。