Graves病甲状腺表达凋亡相关蛋白Fas，可溶性Fas及Fas—配基mRNA的研究

目的：研究凋亡相关蛋白Fas,可溶性Fas(sFas)及Fas配基（Fas-L)mRNA在正常及Graves病（GD）甲状腺组织和上皮细胞（TEC）中的表达特征。方法：采用细胞培养技术和半定量逆转录聚合酶链反应法检测7例GD患者及3例健康个体甲状腺组织与细胞Fas,sFas和Fas-L mRNA的表达情况。结果：（1）正常及GD甲状腺组织均表达as与sFas mRNA,而Fas-L mRNA仅表达于GD组织。并且,GD组织中Fas及sFas mRNA含量均明显高于正常对照。（2）正常及GD TEC均表面Fas及sFas mRNA,而Fas-L mRNA仅在GD TEC表达,与正常对照组相比,GD TEC Fas mRNA无显著差异,sFas mRNA含量则明显升高。结论：CD甲状腺组织和上皮细胞中存在Fas,sFas及Fas-L mRNA的异常表达,sFas产生增加可能是GD患者甲状腺肿大的重要原因之一。     

地塞米松对急性肺损伤大鼠肺组织细胞凋亡及Fas/FasL系统表达的影响

目的 探讨细胞凋亡与急性肺损伤的发生、发展的关系以及地塞米松在全身炎症反应及急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中的作用机制及意义。方法 通过复制内毒素性大鼠ALI模型、采用TUNEL法、原位杂交、SaRT-PCR以及免疫组化等技术观察ALI肺组织细胞凋亡的变化、Fas/FasL系统mRNA和蛋白表达的改变以及地塞米松对细胞凋亡及Fas、FasL表达的影响。结果 ALI早期肺组织细胞凋亡明显增加:Fas、FasL mRNA和蛋白质表达明显上调,地塞米松可明显抑制大鼠ALI血清TNFα释放、抑制肺部炎症反应;明显抑制LPS诱导的肺组织细胞凋亡,并明显下调Fas、FasL mRNA和蛋白质的表达。结论 肺组织细胞凋亡及Fas/FasL系统表达上调,可能参与大鼠ALI早期的发病机制;地塞米松可通过抑制炎症介质释放,抑制Fas/FasL系统的活化,阻断、调控肺组织靶细胞调亡,而减轻肺组织损伤。     

地塞米松衍生物对K562细胞增殖的抑制作用及机制

目的：研究地塞米松衍生物对K562细胞的增殖抑制作用，并对其作用机制进行初步的探讨。方法：以地塞米松为原料合成并纯化得到新的衍生物。用不同浓度的地塞米松衍生物对K562细胞进行处理，通过MTT比色法检测细胞增殖抑制率，电镜法观察细胞凋亡的形态学变化，免疫细胞化学法测定细胞Bcl-2，Fas表达，比色法检测Caspase-3的活性变化。结果：地基米松衍生物能抑制K562细胞的增殖，使Bcl-2表达降低，Fas表达上调，Caspase-3活性增强，诱导K562细胞凋亡。结论：地塞米松衍生物可能通过诱导K562细胞凋亡而抑制细胞增殖。其诱导细胞凋亡的机制可能与抑制Bcl-2蛋白的表达，上调Fas受体，进而激活细胞内的Caspase-3有关。     

脂多糖对人类风湿性关节炎滑膜细胞白介素-6表达的影响脂多糖对人类风湿性关节炎滑膜细胞白介素-6表达的影响

目的研究脂多糖（LPS）及其刺激的U937细胞培养上清液和地塞米松对人类风湿性关节炎（RA）成纤维状滑膜细胞(FLS)白介素-6（IL-6）表达的影响。方法用放免分析法检测IL-6蛋白的表达；RT-PCR法测定IL-6 mRNA的表达。结果LPS处理对FLS中IL-6表达无显著影响；LPS刺激的U937细胞培养上清液可明显增强FLS中IL-6蛋白分泌及mRNA表达；地塞米松可显著抑制上述变化，且其抑制作用随浓度的增加而增强。结论LPS刺激的U937细胞上清液使FLS中IL-6表达增加；而地塞米松能抑制上述IL-6的变化。     

锰超氧化物歧化酶模拟化合物通过Fas途径诱导白血病K562细胞凋亡

目的：探讨锰超氧化物歧化酶模拟化合物（mi mics of manganese superoxide dismutase,MnSODm）对人白血病K562细胞的凋亡诱导效应及作用机制。方法：应用MTT比色法、An-nexin V/PI双标记和细胞形态学法观察细胞凋亡;流式细胞术（FCM）测定Fas蛋白表达水平;RT-PCR检测Caspase-3mRNA的表达水平,比色法测定Caspase-3活性变化。结果：MnSODm作用后K562细胞的增殖受到抑制,Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增多,透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变。同时,Fas蛋白表达水平显著增高,Caspase-3mRNA表达水平明显升高,活性显著增强。结论：MnSODm可能通过Fas途径诱导白血病K562细胞凋亡。     

地塞米松对哮喘豚鼠气道白介素-5、白介素-10mRNA表达及嗜酸性粒细胞凋亡的影响

目的：检测地塞米松对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中白介素-5（IL-5）mRNA及IL-10 mRNA表达水平及嗜酸性粒细胞（EOS）凋亡率。方法：健康雄性Hartley系豚鼠随机分为地塞米松组、哮喘组和正常对照组。采用原位细胞凋亡（TUNEL）、RTPCR技术检测BALF中EOS凋亡、IL-5 mRNA及IL-10 mRNA表达水平。结果：地塞米松组BALF中的EOS较哮喘组明显下降，EOS凋亡明显上升（P〈0．01）；IL-5 mRNA水平较哮喘组明显下降，IL-10 mRNA水平较哮喘组明显升高（P〈0.05）。结论：地塞米松可以通过减少IL-5 mRNA的表达，增加IL-10 mRNA的表达有效抑制哮喘豚鼠气道EOS的上升，增加EOS的凋亡。     

脂多糖对人类风湿性关节炎滑膜细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的 研究脂多糖（LPS）对人类风湿性关节炎（RA）成纤维状滑膜细胞(FLS)基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响。方法 明胶酶谱法测定MMP-9酶活性；Western blot法测定MMP-9蛋白的表达；RT-PCR法测定MMP-9 mRNA的表达。结果 LPS处理对FLS中MMP-9表达无显著影响；LPS刺激的U937细胞培养上清液可明显增强FLS 中MMP-9酶活性、蛋白分泌及mRNA表达；地塞米松可显著抑制上述变化，且其抑制作用随浓度的增加而增强。结论 LPS对FLS中MMP-9表达无直接影响，LPS刺激的U937细胞上清液使FLS中MMP-9表达增加，而地塞米松能抑制MMP-9的变化。     

辣椒素对培养的人角质形成细胞Fas/Fasl表达及凋亡的研究

目的：通过研究辣椒素（CAP）对培养的正常人角质形成细胞（KC）的作用前后Fas／Fasl的表达及其与凋亡的关系，进一步探讨其对银屑病的作用机制。方法：不同浓度的CAP作用于培养的正常人KC后，进行免疫细胞化学研究，观察其对KC增殖及KC Fas／Fasl蛋白表达的影响。结果：辣椒素对体外培养的KC的生长具有明显的抑制作用，并且促使KC凋亡；CAP作用KC后Fas／Fasl均有较强表达。结论：CAP抑制KC的过度生长，上调培养的正常人KC Fas／Fasl蛋白表达，并促进KC凋亡。     

死亡受体Fas在人胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的应用

目的 了解维生素E琥珀酸酯（VES）诱导胃癌细胞凋亡的信号转导途径，方法 以人胃癌SGC－7901细胞作为靶细胞，采用细胞免疫化学法、反义寡核苷酸酸转染法探讨Fas在VES诱导SGC－7901细胞凋亡过程中的作用。结果 经不同剂量VES处理后，细胞中蛋白表达增加；有剂量－效应关系；用Fas反义寡核苷酸转染SGC－7901细胞后，降低了VES抑制细胞生长的能力。结论 在VES诱导SGC－7901细胞凋亡过程中启动了Fas信号途径。     

基因转移FasL诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的体外实验研究

目的：探讨体外基因转移Fas配体（Fas-Ligand,FasL)对恶性人脑胶质瘤细胞凋亡的影响，方法：用携带人FasL cDNA的缺陷型重组腺病毒载体（Ad-FL)，在体外转导5株人脑胶质瘤细胞，并使其表达，通过流式细胞仪，RT－PCR，TUNEL法及荧光显微镜分别进行Fas/FasL表达检测和相关凋亡检测，分析，结果：RT－PCR和流式细胞仪检测5株胶质瘤细胞表达均表达Fas，不表达FasL,而Ad-FL转导的5株胶质瘤细胞均能表达FasL,Fas表达水平与抗Fas抗体诱导胶质瘤细胞凋亡敏感性无相关性，Ad-FL能显著诱导5株胶质细胞瘤在体外凋亡或抑制其生长，结论：重组腺病毒FasL在体外诱导人脑胶质瘤凋亡效果显著。     

急性心肌梗死患者血清可溶性Fas和Hcy的水平及相关分析

目的：探讨急性心肌梗死患者血清可溶性Fas（sFas）水平的变化和Hcy水平的相关性。方法：应用酶联免疫吸附法对42例急性心梗患者进行了血清sFas和血清Hcy检测并与40例正常健康人做比较。结果：急性心肌梗死患者血清sFas与Hcy水平非常显著地高于正常对照组（P〈0.01）,血清sFas水平与Hcy水平呈明显正相关（r=0.586,P〈0.01）。结论：急性心肌梗死患者血清sFas与Hcy水平密切相关。     

慢性阻塞性肺疾病患者血清sFas与TNF-α水平的检测和意义

目的探讨血清可溶性Fas蛋白（sFas）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在慢性阻塞性肺疾病（COPD）发病中的作用及临床意义。方法符合COPD诊断标准的急性加重期与稳定期患者各68例,健康对照组20例,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清sFas与TNF-α的水平。结果①COPD急性加重期血清sFas及TNF-α水平与稳定期及对照组比较显著升高（P〈0.01） ②急性加重期重度COPD血清sFas及TNF-α水平较中度COPD显著升高（P〈0.05） ③COPD急性加重期血清sFas及TNF-α水平与气流受限指标第一秒用力呼气容积（FEV1）呈负相关（r值分别是-0.256、-0.364,P均〈0.05）。结论sFas及TNF-α通过抑制细胞凋亡参与COPD病理损伤,sFas及TNF-α可作为判定COPD严重程度的参考指标。     

Fas、Bcl-2蛋白在重度子痫前期胎盘滋养叶细胞凋亡的实验研究

目的探讨凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在胎盘滋养叶细胞中的表达及其意义,滋养叶细胞凋亡与Fas、Bcl-2两种蛋白的关系,从而于细胞凋亡的角度探讨重度子痫前期的发病机制。方法用免疫组织化学SP法检测重度子痫前期患者54例（试验组）,同时选择同期正常晚孕妇女20例（对照组）做胎盘组织中Fas、Bcl-2蛋白的表达及滋养叶细胞凋亡检测。结果细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Fas在重度子痫前期及正常孕妇胎盘组织中均有表达。其中Bcl-2蛋白的表达在试验组低于对照组（P〈0.05）;而Fas蛋白的表达在试验组明显高于对照组（P〈0.05）;在试验组及对照组均可观察到细胞凋亡现象,在滋养层细胞（合体细胞滋养层及细胞滋养层）、间质细胞、血管内皮细胞胞浆及细胞核内均有表达,尤以合体细胞最多见。试验组细胞凋亡较对照组明显增多（P〈0.05）。重度子痫前期时,Bcl-2与Fas蛋白的表达呈负性相关;Bcl-2蛋白表达与胎盘细胞凋亡呈负性相关,而Fas蛋白的表达与胎盘细胞凋亡呈正性相关（P〈0.01）。结论重度子痫前期的发病原因可能与胎盘滋养叶细胞凋亡及Bcl-2、Fas基因异常表达有关。     

白英乙醇提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的:研究白英乙醇提取物对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及凋亡相关基因Fas和caspase-3表达的影响。方法:体外培养人胃癌SGC-7901细胞;实验分正常对照、顺铂及白英乙醇提取物高、中、低剂量(10、5、2.5mg·mL-1)组。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察SGC-7901细胞凋亡及形态变化,半定量RT-PCR法分析基因Fas和caspase-3 mRNA的表达情况。结果:与正常对照组比较,白英乙醇提取物高、中、低剂量组对SGC-7901细胞增殖抑制均有促进作用(P<0.01),且呈明显的时效和量效关系,细胞凋亡显著增多,表现为细胞核固缩、染色质凝集、边聚等;基因Fas和caspase-3 mRNA表达显著升高(P<0.01或P<0.05),并随白英乙醇提取物浓度增加而加强。结论:白英乙醇提取物能剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖和诱导细胞凋亡,其作用可能与调控Fas和caspase-3 mRNA表达相关。     

重度子痫前期胎盘滋养叶细胞凋亡与胎儿脐血流阻力指数关系的临床观察

目的探讨凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在胎盘滋养叶细胞中的表达和意义以及滋养叶细胞凋亡与胎儿脐血流阻力指数（脚）的关系。方法用免疫组织化学法检测重度子痫前期患者共54例（实验组）,同时选择同期正常晚孕女性20例作为对照组,检测入选者胎盘组织中Fas、Bcl-2蛋白的表达及滋养叶细胞凋亡,并于产前超声检测胎儿脐血流RI。结果细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Fas在2组胎盘织中均有表达。其中Bcl-2蛋白的表达在实验组低于对照组（P〈0．05）;Fas蛋白的表达在实验组明显高于对照组（P〈0．05）。在2组均可观察到细胞凋亡现象,在滋养层细胞（合体细胞滋养层及细胞滋养层）、间质细胞、血管内皮细胞胞浆及细胞核内均有表达,合体细胞尤多见。实验组细胞凋亡较对照组明显增多（P〈0．05）。重度子痫前期时,Bcl-2与Fas蛋白的表达呈负性相关（P〈0．05）;Bcl-2蛋白表达与胎盘细胞凋亡呈负性相关（P〈0．05）,而Fas蛋白的表达与胎盘细胞凋亡呈正性相关（P〈0．05）。细胞凋亡指数（AI）与胎儿脐血流RI呈正相关（P〈0．05）。结论重度子痫前期的发病原因与胎盘滋养叶细胞凋亡、Bcl-2和Fas基因异常表达以及脐血流RI相关。     

红景天苷对经紫外线辐射的成纤维细胞中Fas和Bcl-2mRNA表达的影响

目的观察红景天苷对经紫外线A／B（UVA／UVB）辐射的体外培养人皮肤成纤维细胞中Fas和Bcl-2mRNA表达的影响,探讨红景天苷抑制细胞凋亡与凋亡相关细胞因子的关系。方法在体外培养人皮肤成纤维细胞并随机分为正常对照组、红景天苷组、UVB组、UVB＋红景天苷组、UVA组、UVA＋红景天苷组6组,通过反转录聚合酶链反应法检测Fas和Bcl-2的mRNA表达。结果UVB、UVA辐射体外培养的成纤维细胞后,FasmRNA表达增加[（0．45±0．04）,（0．44±0．04）比（0．13±0．03）],Bcl-2mRNA表达减弱[0．17±O．01,0．17±0．03比（0．13±O．03）];加入红景天苷后Fas和Bcl-2的mRNA表达分别降低[（0．17±0．04）比（0．45±0．04）,0．18±0．03比0．44±0．04;（0．31±0．02）比（0．17±0．01）,（0．28±0．04）比（0．17±O．03）]。结论红景天苷对紫外线引起的Fas和Bcl-2的mRNA表达具有抑制作用,延缓UVB、UVA辐射造成的细胞凋亡过程。     

No association between Fas A/G polymorphism and therapeutic effects induced by methimazole treatment for Graves' disease in Northern Chinese

Fas gene, which is related to apoptosis, influences the clinical remission of Graves' disease (GD). This study was performed to determine whether the Fas gene promoter polymorphism at position-670 is associated with different efficacy in GD patients treated with methimazole (MMI). Serum levels of thyroid hormone, sFas and thyrotropic-stimulating hormone receptor antibodies (TRAb) were evaluated as therapeutic efficacy parameters before and after 18-month treatment with MMI in a total of 115 subjects of North China. At the end of the follow-up study, patients were categorized into an effective group (group A) and an ineffective group (group B) according the level of thyroid hormone. Similar to the changes of thyroid hormone, the reductions of sFas and TRAb were significantly different in the two groups (P < 0.05). Meanwhile, we detected that Fas promoter-670 A/G polymorphism existed in the GD patients of North China. We studied the frequencies of genotypes and alleles of the A/G polymorphism in different groups. However, there was no association between different efficacy and Fas promoter polymorphism in patients with GD.     

糖皮质激素联合环磷酰胺对人脐静脉内皮细胞增殖及其细胞间黏附分子-1和单核细胞趋化因子-1表达水平的影响

目的：探讨地塞米松、环磷酰胺对人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）细胞增殖及其细胞间粘附分子-1（ICAM-1）和单核细胞趋化因子-1（MCP-1）基因表达的影响。方法：对培养的人脐静脉内皮细胞,在不同时间以不同药物浓度分别加入地塞米松和环磷酰胺进行干预。以MTT法检测药物对脐静脉内皮细胞增殖的影响。计算出两种药物的半数抑制浓度（IC50）。以地塞米松和环磷酰胺半数抑制浓度分别及联合作用血管内皮细胞48h,以RT-PCR的方法比较三组间血管内皮细胞ICAM-1和MCP-1的mRNA表达差异。结果：1、地塞米松、环磷酰胺均呈时间、剂量依赖性地抑制HUVECs细胞的增殖,地塞米松和环磷酰胺IC50分别为0.74 mg/ml、1.87mg/ml。2、脐静脉内皮细胞在地塞米松和环磷酰胺分别及联合孵育下,人脐静脉内皮细胞ICAM-1和MCP-1 mRNA表达水平较对照组显著下降（p〈0.05）,且联合作用组显著低于单个药物组（p〈0.05）。结论：糖皮质激素和环磷酰胺抑制血管内皮细胞增生,并抑制血管内皮细胞ICAM-1和MCP-1 mRNA表达,从而对血管起到保护作用。为临床治疗血管炎提供理论支持。