卡马西平增加癫痫模型大鼠脑内P-糖蛋白的表达

目的探讨癫痫发作与抗癫痫药物卡马西平(CBZ)对多药耐药基因编码的P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法给雌性SD大鼠侧脑室注射海人酸(KA)或PBS,成模后再口服CBZ。成模或给药后3、5、7、14、21和28d灌杀大鼠取脑,用免疫组化和双标免疫染色对脑中P-gp进行半定量及定位分析。尼氏染色观察海马神经元的变化。结果模型大鼠脑电图及行为变化与人类癫痫相似,CBZ对癫痫发作没有作用。癫痫发作后第5天脑P-gp表达水平增加,7d时最高,21d后恢复到正常水平。阳性产物主要位于海马的毛细血管内皮细胞,也见于皮层的毛细血管及神经元。CBZ对正常大鼠P-gp的表达没有影响。CBZ KA组动物海马P-gp的表达与KA组动物相似,但7d时其表达明显增强。结论癫痫发作可诱导P-gp的表达;卡马西平在癫痫发作中也参与了P-gp的高表达。     

P-糖蛋白在永久性脑缺血大鼠脑内的表达

目的:研究脑缺血后多药耐药蛋白(P-glycoprotein,P-gp)在脑内血管及细胞中的表达变化,探讨P-gp与脑缺血的关系。方法:应用微创开颅法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,30只大鼠随机分为缺血后1、2、3 d共3个缺血组,以及正常对照组和假手术组(n=6)。用抗P-gp抗体进行免疫组化染色观测血管壁及脑内细胞是否表达P-gp以及缺血后不同时间点的表达变化。结果:缺血后1、2、3 d组中,在缺血坏死区可见大量表达P-gp的阳性细胞,3 d时达高峰;缺血区仅有少量血管表达P-gp,在缺血区周围皮质及纹状体中血管壁上大量表达P-gp,并随缺血时间的延长而显著增多,在3 d组达高峰。结论:脑缺血后大鼠脑内血管壁及细胞中大量表达P-gp,提示脑内受损后多药耐药蛋白合成增加,在自我保护的同时也影响了临床药物的进入。     

地塞米松对海人酸致（癇）大鼠脑P-糖蛋白表达的影响

目的：探讨地塞米松对海人酸致痫大鼠脑P-糖蛋白（P-gp）表达的影响.方法：将SD大鼠随机分为假手术组（Sham组,n=8）、癫痫组（EP组,n=12）、地塞米松干预癫痫组（DEX组,n=12）.后两组采用海马注射海人酸方法制作癫痫模型,DEX组癫痫造模前30 min给予腹腔注射地塞米松0.4 mg/kg.分别记录各组大鼠达到Ⅲ级和Ⅴ级发作时所需的时间（潜伏期）,初次至第6次≥Ⅳ级发作的间隔时间作为评价癫痫发作严重程度的指标;大鼠术后24 h处死,使用HE染色和免疫组织化学方法,比较各组海马CA3区、齿状回、杏仁核复合体区P-gp表达及脑损伤情况.结果：①Sham 组未见癫痫发作;DEX组与EP组达到Ⅲ级发作的潜伏期分别为（87.92±45.80）min和（67.50±22.91）min,达到Ⅴ级发作的潜伏期分别为（103.33±51.27 ）min和（75.60±22.10）min,差异均无统计学意义（P〉0.05）;与EP组相比,DEX组样发作严重程度降低（P=0.004）;②与EP组相比,DEX组于所观察的脑区损伤均减轻,以海马CA3区和杏仁核复合体区较为显著;③与Sham组比较,EP组各观察脑区P-gp表达均明显升高（P〈0.01）;与EP组相比,DEX组海马CA3区和杏仁核复合体区P-gp表达显著减少（P〈0.05）,而在齿状回表达量差异无统计学意义（P=0.078）.结论：地塞米松可降低海人酸致痫大鼠发作严重程度和脑损伤,抑制P-gp表达上调,其中以海马CA3区和杏仁核区较为显著.     

抗癫痫药耐药性鼠模型的建立及其P-gp的表达

目的：建立抗癫痫药（AED）耐药性大鼠模型,并观察其P-糖蛋白（P—gp）的表达。方法：首先应用氯化锂一匹罗卡品诱导癫痫鼠模型,然后在此基础上进一步用苯妥英钠药物筛选的方法获得AED的耐药性大鼠模型。通过RT-PCR、蛋白印迹法（Western Blot）和免疫组化等方法研究P—gP在该动物模型脑内不同部位的表达。结果：应用氯化锂一匹罗卡品诱导的癫痫鼠模型进行药物筛选的方法成功获得了AED耐药性癫痫动物模型,并经临床评分和脑电图证实。耐药性癫痫模型大鼠海马、小脑及大脑皮层的P—gP表达水平均显著高于非耐药性癫痫大鼠及正常对照大鼠。结论：对氯化锂一匹罗卡品诱导的鼠模型进行药物筛选的方法可建立AED耐药性癫痫动物模型;P—gP在AED耐药性癫痫大鼠脑内表达水平显著升高。     

拉莫三嗪及丙戊酸钠对锂-匹罗卡品致痫大鼠的神经保护作用及其对癫痫的治疗作用

目的：观察拉莫三嗪（LTG）及丙戊酸钠（VPA）对锂-匹罗卡品癫痫持续状态（SE）大鼠海马锥体细胞、齿状回门区神经元的保护作用及对癫痫的治疗作用。方法：用大鼠制作锂-匹罗卡品SE动物模型,分三组：SE对照组,LTG治疗组和VPA治疗组。此三组在SE后2h给予安定阻断痫性发作,再分别给予适量生理盐水（NS）、LTG、VPA治疗15d,比较各组海马锥体细胞、门区神经元计数、继发癫痫的发生率及苔藓纤维出芽的评分。另设有正常对照组（NS组）,不制模只给予NS“治疗”。结果：SE对照组、LTG组及VPA组齿状回门区均出现神经元丢失,VPA组及SE对照组均存在海马CA1神经元丢失,但LTG组海马CA1锥体神经元无丢失;三个模型组继发癫痫的发生率及苔藓纤维出芽的评分比较差异无统计学意义。结论：锂-匹罗卡品SE模型中,SE2h后给药,LTG能够对大鼠海马锥体细胞起到神经保护作用,VPA无明显保护作用,但两种抗癫痫药物均不能够阻断癫痫的发生及齿状回苔藓出芽。     

丙戊酸钠处理对于癫痫大鼠模型海马内细胞自噬的影响

目的:研究丙戊酸钠(VPA)对癫痫模型大鼠海马内细胞自噬、动物脑电图和行为学的影响。方法:制作癫痫大鼠模型并随机分为癫痫组、3甲基腺嘌呤(3MA)组、VPA组及VPA联合3MA组四组,设正常大鼠为对照组。观察各组行为学及脑电图变化,HE及Nissl染色显示神经元的损伤情况,免疫组织化学染色、Western Blot、Real-time PCR检测自噬标记物微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达。结果:行为学观察及脑电图检测显示,丙戊酸钠组及丙戊酸钠联合3MA组均可降低癫痫发作等级,3MA组无抗癫痫效果。HE及Nissl染色显示,对照组未见明显异常,癫痫组神经元损伤严重,丙戊酸钠组与癫痫组相比,神经元损伤明显减轻;3MA组与癫痫组相比,神经元损伤明显减轻;丙戊酸钠联合3MA组与丙戊酸钠组相比,神经元损伤明显减轻。免疫组织化学染色、Western Blot、Real-time PCR检测显示,对照组LC3呈低表达,癫痫组LC3表达明显高于对照组;丙戊酸钠组LC3表达明显高于癫痫组;3MA组LC3表达明显低于癫痫组;丙戊酸钠联合3MA组LC3表达明显低于丙戊酸钠组。结论:VPA处理能够诱导癫痫大鼠海马内细胞自噬增加和导致神经元损伤。     

白藜芦醇对戊四氮慢性点燃大鼠行为及脑电图的影响

目的：探讨白藜芦醇（resveratrol,RV）对戊四氮（pentylenetetrazole,PTZ）慢性点燃大鼠行为及脑电图（EEG）的影响。方法：将60只Wistar大鼠随机分为空白对照组（A组）、PTZ致癎组（B组）、RV干预组（C组）,每组20只。B组和C组通过腹腔注射PTZ建立慢性癫癎动物模型,观察大鼠行为、脑电图及海马组织学变化情况。结果：腹腔注射RV可明显抑制大鼠的癎样放电,延长发作潜伏期、缩短发作时间,与PTZ致痂组相比重型发作率降低（P〈0．05）;同时在病理学上还能减轻海马神经元的损伤程度。结论：RV可明显抑制PTZ诱导的大鼠癫癎发作,对致癎海马神经元有一定的保护作用。     

尼莫地平对杏仁核点燃鼠模型脑内谷氨酸及海马细胞单位放电的影响

目的：观察尼莫地平对杏仁核电点燃癫癎鼠模型脑内谷氨酸（glutamate,Glu）表达及海马单位细胞放电（unit cell discharge,UCD）的影响。方法：选择健康雄性Wistar大鼠30只制作动物模型,造模成功后随机分为单纯对照组、癫癎模型组和尼莫地平组,各组10只大鼠,均进行海马UCD的记录,然后分别取脑组织,采用免疫组化的方法检测大鼠脑内Glu的表达并进行方差检验分析。结果：①癫癎模型组Glu灰度值在杏仁核、海马、颞叶分别为（92．5582±13．9345）、（94．0579±12．8117）和（100．5922±16．1048）,与对照组的相应值（113,1562±36．7147）、（124．4130±29．6738）和（126．5704±35.8527）比较有明显降低（注：灰度值越高Glu的表达越少;灰度值越低Glu的表达越多）（P〈0．05）;尼莫地平组中,Glu灰度值与模型组的比较无明显差异（P〉0．05）,②海马UCD频率癫癎模型组（164．55±74．708）较单纯对照组（70．925±44．125）明显增快,尼莫地平组（82．175±35．046）与模型组比较,海马UCD频率明显降低。差异有显著意义（P〈0．05）。结论：尼莫地平不能抑制Glu的表达,但可抑制海马UCD频率。     

Pentylenetetrazole-induced seizures affect binding site densities for GABA, glutamate and adenosine receptors in the rat brain

Pentylenetetrazole (PTZ) is a convulsant used to model epileptic seizures in rats. In the PTZ-model, altered heat shock protein 27 (HSP-27) expression highlights seizure-affected astrocytes, which play an important role in glutamate and GABA metabolism. This raises the question whether impaired neurotransmitter metabolism leads to an imbalance in neurotransmitter receptor expression. Consequently, we investigated the effects of seizures on the densities of seven different neurotransmitter receptors in rats which were repeatedly treated with PTZ (40 mg/kg) over a period of 14 days. Quantitative in vitro receptor autoradiography was used to measure the regional binding site densities of the glutamate α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid (AMPA), kainate and N-methyl-d-aspartate (NMDA) receptors, the adenosine receptor type 1 (A₁), which is part of the system controlling glutamate release, and the γ-aminobutyric acid (GABA) receptors GABA_A and GABA_B as well as the GABA_A-associated benzodiazepine (BZ) binding sites in each rat. Our results demonstrate altered receptor densities in brain regions of PTZ-treated animals, including the HSP-27 expressing foci (i.e. amygdala, piriform and entorhinal cortex, dentate gyrus). A general decrease of kainate receptor densities was observed together with an increase of NMDA binding sites in the hippocampus, the somatosensory, piriform and the entorhinal cortices. Furthermore, A₁ binding sites were decreased in the amygdala and hippocampal CA1 region (CA1), while BZ binding sites were increased in the dentate gyrus and CA1. Our data demonstrate the impact of PTZ induced seizures on the densities of kainate, NMDA, A₁ and BZ binding sites in epileptic brain. These changes are not restricted to regions showing glial impairment. Thus, an altered balance between different excitatory (NMDA) and modulatory receptors (A₁, BZ binding sites, kainate) shows a much wider regional distribution than that of glial HSP-27 expression, indicating that receptor changes are not following the glial stress responses, but may precede the HSP-27 expression.     

戊四氮点燃大鼠癫痫发作和癫痫形成过程中海马5-HT水平的变化

目的：研究戊四氮（PTZ）点燃大鼠癫痫形成过程中行为、脑电及海马5-羟色胺（5-HT）水平的变化。方法：对大鼠腹腔注射PTZ35mg／（kg·d）,观察行为变化,在不同时间点（第7、14、21、28天）,进行脑电记录,微透析取海马组织间液,活体观察24只自由活动大鼠在点燃过程和诱发发作前后脑电、海马5-HT及其代谢产物5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）水平及其5-HT转化率（5-HIAA／5-HT）的变化。结果：开始PTZ注射后,发作潜伏期逐日缩短,发作程度逐日加重,点燃时间在10～14d。在制模过程中有一只鼠死亡。海马脑电随着发作的加重而出现癫痫波潜伏期缩短,癫痫波量增加,发作间期出现自发放电。点燃早期（第7天）,发作间期大鼠的海马5-HT水平略有升高,随着点燃时间延长,5-HT水平逐渐降低,在点燃后（第14天）维持点燃（第21、28天）5-HT水平持续下降,与点燃前5-HT水平比较,差异无显著意义（P〉0．05）;5-HT转化率在点燃过程变化差异无统计学意义;5-HIAA水平在点燃时期和维持点燃时期呈逐步降低,点燃期、维持点燃期与对照组比较差异有显著意义（P〈0．05）。结论：PTZ点燃大鼠癫痼形成过程中,在点燃前,发作间期的海马5-HT水平呈阶段性升高,点燃后,发作间期的海马5-HT水平逐渐降低;点燃后,发作间期的海马5-HT水平明显低于正常水平;随着维持点燃时间延长,发作间期的海马5一HT水平呈进行性下降。     

皮质发育障碍大鼠模型学习记忆行为和海马长时程增强的研究

目的：研究皮质发育障碍（DCD）大鼠模型空间学习记忆及离体海马长时程增强（LTP）变化,探讨DCD大鼠模型认知功能损伤的机制。方法：建立DCD大鼠模型,采用Morris水迷宫实验对DCD大鼠模型和正常对照组进行空间学习、记忆的行为学检测,应用膜片钳技术研究DCD大鼠模型海马脑片CA1区LTP的改变。结果：Morris水迷宫实验中DCD大鼠与正常对照组相比逃避潜伏期延长,穿过原平台位置次数和在原平台象限探索时间百分率下降;DCD大鼠模型海马脑片CA1区LTP诱出率、幅值增加百分率与正常对照组相比均明显降低[（40％vs100％,P〈0．05;（108±5．6）％vs（132±15．4）％,P〈0．05）]。结论：DCD大鼠模型的空间学习记忆能力降低,海马突触可塑性也发生降低。     

脑发育期甲状腺功能低下大鼠听觉中潜伏期反应的变化

目的：探讨脑发育期甲状腺功能低下（甲低）大鼠听觉中潜伏期反应（MLR）的变化。方法：孕鼠从孕第17天起及其仔鼠出生后起30天内饮含0．03％甲巯咪唑的自来水诱发脑发育期甲低仔鼠;甲低仔鼠生后1～30天腹腔注射左旋甲状腺素[20μg／（kg·d）]进行替代治疗;放射免疫法测定大鼠血清FT3和FT4;计算机平均叠加技术颅表记录大鼠MLR,连续3个月动态观察甲低大鼠波峰潜伏期（PL）、波峰间潜伏期（IPL）和波幅的变化。结果：甲低组大鼠生后第20天时未能引出听觉MLR,生后30～90天的听觉MLR各波PL均明显长于对照组;替代治疗组大鼠MLR除生后20天和生后70天的P。波PL明显短于对照组及生后70天的P“波PL明显长于对照组外,各波PL在生后20-90天与对照组比较差异无显著意义。甲低组大鼠生后30～90天MLR的P0-Pa和Pa—Pb IPL均明显长于对照组;替代治疗组大鼠MLR除生后70天的P0-Pb IPL明显长于对照组外,其余IPL在生后20-90天与对照组比较差异无显著意义。甲低组大鼠生后30～90天MLR各波波幅明显小于对照组;替代治疗组大鼠除生后20天P0和Na波、生后30天P0波的波幅明显大于对照组外,其余各波波幅在生后20～90天与对照组比较差异无显著意义。结论：脑发育期甲低大鼠听觉MLR的发育明显延缓,及早补充甲状腺素能显著改善其脑发育障碍。     

Pharmacological and electrographic properties of epileptiform activity induced by elevated K2+ and lowered Ca2+ and Mg2+ concentration in rat hippocampal slices

We studied some of the physiological and pharmacological properties of an in vitro model of epileptic seizures induced by elevation of [K⁺]₀ (to 8 mM and 10 mM) in combination with lowering of [Mg²⁺]₀ (to 1.4 mM and 1.6 mM) and [Ca²⁺]₀ (to 0.7 mM and 1 mM) in rat hippocampal slices. These concentrations correspond to the ionic constitution of the extracellular microenvironment during seizures in vivo. The resulting activity was rather variable in appearance. In area CA3 recurrent discharges were observed which resulted in seizure-like events with either clonic-like or tonic-cloniclike ictaform events in area CA1. With ion-sensitive electrodes, we measured the field potential and the changes in extracellular ion concentrations which accompany this activity. The recurrent discharges in area CA3 were accompanied by small fluctuations in [K⁺]₀ and [Ca²⁺]₀. The grouped clonic-like discharges in area CA1 were associated with moderate increases in [K⁺]₀ and small decreases in [Ca²⁺]₀ in the order of 2 mM and 0.2 mM, respectively. Large, negative field-potential shifts and increases in [K⁺]₀ to 13 mM, as well as decreases in [Ca²⁺]₀ by up to 0.4 mM, accompanied the tonic phase of ictaform events. The ictaform events were not blocked by D-2-aminophosphonovalerate (2-APV) but were sensitive to 6-cyano-7-nitroquinoxaline-2,3-dione (CNQX) alone and in combination with 2-APV and ketamine. In order to determine the pharmacological characteristics of the ictaform events we bath-applied most clinically employed anticonvulsants (carbamazepine, phenytoin, valproate, phenobarbital, ethosuximide, trimethadione) and some experimental anticonvulsants (losigamone, vinpocetine, and apovincaminic acid). Carbamazepine, phenytoin, valproate, and phenobarbital were effective at clinically relevant doses. The data suggest that the high-K⁺ model of epileptiform activity is a good model of focal convulsant activity.     

NMDA受体介导的eEPSC在皮质发育障碍动物模型海马CA1区的改变

目的：研究皮质发育障碍（DCD）大鼠模型海马CA1区N-甲基-D-门冬氨酸（NMDA）受体及α-氨基-3-羧基5甲基异恶唑-4-丙酸（AmPA）受体介导的兴奋性突触后电流（eEPSC）的变化,探讨DCD大鼠模型的致痫机制。方法：选取出生10～20dDCD幼鼠模型和正常对照组,应用可视法脑片膜片钳记录方法,记录大鼠海马CA1区锥体神经元的NMDA受体及AmPA受体介导的eEPSC幅度及衰减时间常数。结果：DCD模型组与正常对照组相比,NMDA受体介导的eEPSC的幅度有明显增高r（119．54±10．97）pAVS（83．69±10．23）pA;P〈0．053;衰减时间常数明显延长[（154．59±3．92）VS（117．18±4．04）;P〈0．05]。而AmPA受体介导的eEPSC的幅度[（139．99±23．41）pAVS（135．50±26．44）pA;P〉0．05]及衰减时间常数[（47．23±2．28）VS（48．68±2．20）;P〉0．053无明显改变。结论：NMDA受体介导的异常突触后反应在DCD的致痫机制方面起到重要的作用。     

大脑皮质发育不良模型鼠行为和脑电表现及致痫敏感性研究

目的：探讨皮质发育不良（CD）大鼠行为和脑电变化及其致痫敏感性。方法：建立大脑CD大鼠模型,用视频录像,Morris水迷宫法检测空间学习记忆能力,并进行颅内脑电图记录及匹罗卡品诱发试验。结果：CD模型鼠20％达Racine标准3级以上有自发性抽搐发作,表现为面部痉挛、节律点头样动作活动和兴奋躁动频繁等;Racine标准仅达1、2级,但CD大鼠30％表现为精神发育迟滞。常态下60％CD鼠额叶皮质及海马脑电图示频繁自发的棘波、尖波、棘慢波等发放,其中90％皮质异常电活动出现在躯体感觉皮质。Pilo诱发试验表明80％CD鼠有3级以上的发作形式和痫样放电。X射线母鼠组与正常对照组大鼠未见异常。结论：CD大鼠行为、脑电异常,致痫阈值降低,致痫敏感性升高。