食管鳞状细胞癌及癌前病变组织中p16基因甲基化的研究

目的探讨食管鳞状细胞癌及癌前病变组织p16基因CpG岛的甲基化情况,及其在食管癌发生和早期诊断中的价值。方法采用MSP方法,对食管癌前病变不同阶段、鳞状细胞原位癌和浸润癌的病变组织进行了甲基化检测,并与其相应的正常组织和慢性食管炎组织的甲基化情况进行对比分析。结果轻、中、重度不典型增生、鳞状细胞原位癌和浸润癌的甲基化频率分别为22.73%(5/22)、46.15%(6/13)、77.78%(7/9)、78.57%(11/14)和64.86%(24/37)。67例正常对照组织中3例(4.48%)p16基因甲基化,与病变组织相比,差异有统计学意义,P=0.000。10例慢性食管炎组织中1例(10%)p16基因甲基化。结论p16基因甲基化可能是食管癌发生的最早期事件之一。     

食管癌前病变组织p16及FHIT基因甲基化探讨

目的:探讨食管癌前病变组织p16及FHIT基因启动子区CpG岛的甲基化状况.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法,对食管癌前病变不同阶段及鳞状细胞原位癌的病变组织进行了甲基化检测,并与同一个体相应的病变旁组织及慢性食管炎和浸润性鳞癌组织的甲基化情况进行了时比分析研究.结果:轻度、中重度不典型增生、鳞状细胞原位癌和浸润癌共95例病变组织中p16基因的甲基化频率分别为22.73%、59.09%、78.57%、64.86%:FHIT基因的甲基化频率分别为22.73%、45.45%、64.29%、67.57%.同一个体相应的95例病变旁对照组织中16例未检测成功,余79例中5例(6.33%)p16基因甲基化,3例(3.80%)FHIT基因甲基化,与病变组织相比,均有统计学差异.10例慢性食管炎组织中1例p16基因甲基化,未发现FHIT基因甲基化.结论:p16及FHIT基因甲基化在癌前病变阶段就已经存在,可能是食管癌发生的早期事件之一.     

血浆p16和FHIT基因甲基化在食管癌及癌前病变检测的临床意义

目的:研究食管癌及癌前病变患者血浆中p16和FHIT基因甲基化情况,探讨其对食管早期癌和癌前病变诊断的临床应用价值。方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)方法,对食管癌及癌前病变、慢性食管炎患者组织及血浆标本进行了p16和FHIT基因甲基化检测。结果:在44例癌前病变、14例原位癌、37例浸润癌和10例慢性食管炎共105例患者组织DNA中,分别发现18例、11例、24例和1例p16基因甲基化,15例、9例、25例和0例FHIT基因甲基化。癌前病变和慢性食管炎患者血浆中未发现两基因甲基化。51例食管癌患者血浆中共检出14例p16基因和16例FHIT基因甲基化,其中2例为原位癌。结论:p16及FHIT基因甲基化检测有望将食管癌的筛查提前到原位癌阶段,为食管癌的早期发现提供帮助。     

食管鳞状细胞癌中MGMT和p16基因启动子甲基化关系分析

背景与目的:探讨食管鳞状细胞癌中06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine DNA methyltransferase,MGMT)基因和p16基因启动子的甲基化情况,了解这两个基因启动子甲基化与食管癌发生的关系. 材料与方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)方法分别对44例食管鳞状细胞癌组织进行MGMT基因和p16基因的甲基化检测,并对其甲基化频率分别进行差异性检验和关联性分析.结果:在44例食管鳞癌组织中,有18例(40.9%)出现MGMT基因启动子甲基化,23例(52.3%)出现p16基因启动子甲基化,7例(14.9%)两基因均出现甲基化,10例(22.7%)两基因均未出现甲基化.MGMT和p16基因启动子甲基化率差异无统计学意义(P＞0.05).MGMT和p16基因启动子甲基化无明显相关关系(P＞0.05).结论:MGMT和p16基因启动子甲基化均可能与食管鳞状细胞癌发生、发展过程密切相关,但二者是相互独立进行的.     

成束蛋白和膜联蛋白I在食管鳞状细胞癌癌前病变中的表达

背景与目的：研究食管鳞状细胞癌癌变早期异常改变的蛋白质以发现与食管癌早期病变相关的特征性标志分子。探讨了成束蛋白和膜联蛋白Ⅰ在食管癌癌前病变中的表达情况。方法：应用免疫组化方法分析食管癌高发现场癌前病变样本中成束蛋白和膜联蛋白Ⅰ的表达水平，用X^2检验对比成束蛋白和膜联蛋白Ⅰ在不同程度癌前病变和食管癌中的表达差异。其中包括，食管鳞状细胞癌癌前病变54例、正常食管上皮8例和中晚期食管癌9例成束蛋白的表达水平；以及食管鳞状细胞癌前病变52例、正常食管上皮11例和中晚期食管癌7例的膜联蛋白Ⅰ表达水平。结果：与正常食管鳞状上皮相比，成束蛋白在食管癌及其癌前病变中表达增强，其表达阳性率为低度癌前病变（轻度和中度不典型增生）85．7％（24／28）、高度癌前病变（重度不典型增生和原位癌）84．6％（22／26）和中晚期食管癌88．9％（8／9）。然而，膜联蛋白Ⅰ在食管癌及其癌前病变中表达降低或丢失，其表达阳性率分别为低度癌前病变14．3％（4／28）、高度癌前病变8．3％（2／24）和中晚期食管癌0％（0／7）。与正常食管上皮相比，成束蛋白和膜联蛋白Ⅰ在食管低度癌前病变中表达程度的异常均具有显著意义，P值分别为0．003和0．000。结论：成束蛋白异常增强和膜联蛋白Ⅰ的丢失与食管癌癌前病变相关。     

食管鳞癌中p16基因启动子区甲基化及其表达

 目的探讨食管鳞癌（ESCC）p16基因甲基化的状况及其表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法（MSP）分别检测75例食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因启动子区域CpG岛甲基化状态。采用Envision免疫组化法检测食管癌组织及癌旁组织的p16蛋白的表达。结果75例标本中，食管癌组织、癌旁组织和切缘细织p16基因甲基化率分别为41．3％（31／75）、13．3％（10／75）和6．67％（5／75）。癌组织和癌旁组织P16蛋白的阳性表达率分别为29．3％（22／75）和56．7％0（17／30）。31例癌组织p16基因甲基化阳性标本中有2例（6．4％）检测到P16蛋白的表达，而44例癌组织p16基因甲基化阴性标本中有20例（45．5％）检测到P16蛋白的表达。食管癌组织p16基因甲基化率显著高于癌旁组织和切缘组织（P〈0.01），P16蛋白表达与p16基因甲基化呈负相关。p16基因启动子区甲基化与食管癌的组织学分级、肿瘤部位无明显相关，与临床分期、淋巴转移密切相关。结论p16基因甲基化在食管癌发生发展中起着重要作用，食管鳞癌的分期和淋巴结转移与p16基因甲基化之间有密切关系。     

巢式甲基化特异性PCR 检测食管癌病人血清中p16 基因启动子区过甲基化

 目的 检测食管鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）患者外周血血清中p16基因启动子区的甲基化状态，探讨p16基因启动子的过甲基化在食管鳞状细胞癌筛查及早期诊断中的意义。方法 利用巢式甲基化特异性PCR（nMSP）法检测食管鳞状细胞癌患者外周血血清与正常人血清中p16基因启动子的甲基化状态，并与普通甲基化特异性PCR（MSP）法进行了比较。结果 56例SCC血清样品中nMSP法发现34例p16基因启动子的过甲基化，MSP法只检出15例，而22例正常人血清中都未检测到p16基因启动子的过甲基化。测序结果进一步验证了方法的可靠性。结论 利用巢式MSP（nMSP）法检测外周血血清中p16基因启动子的甲基化，可为食管癌的筛查、早期诊断及预后判断提供有价值的信息。     

hMLH1蛋白在食管鳞状细胞癌和不典型增生组织中的表达

目的：探讨同一食管癌患者食管的鳞状细胞癌组织、不典型增生组织、正常鳞状上皮组织中错配修复基因1（human mutl homolog 1，hMLH1）的蛋白表达情况，深入研究它与食管鳞状细胞癌发生发展的关系。方法：取92例食管鳞状细胞癌患者的病变组织，其病理切片中鳞状细胞癌组织、不典型增生组织和正常鳞状上皮组织均存在，采用免疫组织化学的方法，检测hMLH1蛋白在3种不同组织中的表达，并分析其与性别、年龄、分化程度、浸润深度、肿瘤分期、淋巴结转移等临床病理参数之间的关系。结果：hMLH1蛋白在食管鳞状细胞癌组织、不典型增生组织、正常鳞状上皮组织细胞核中的阳性表达率分别为36．96％、56．52％、84．78％，鳞状细胞癌组织和不典型增生组织均显著低于正常食管鳞状上皮组织（P〈0．01）。鳞状细胞癌组织中hMLH1蛋白表达阴性者，年龄较阳性者大（P〈0．05）；hMLH1蛋白表达与肿瘤分期、淋巴结转移等有明显相关性（P〈0．05）。结论：hMLH1基因缺失可能在早期就参与了食管鳞状细胞癌的发生过程，hMLH1蛋白可能抑制或延缓食管鳞状细胞癌的发生和发展。     

河南食管癌高发区居民食管癌变过程中微卫星LOH的特征

目的微卫星（microsatellite）是广泛分布于生物基因组中的DNA重复序列，与许多重要基因紧密连锁。本研究旨在探讨食管癌变多阶段演进过程中微卫星DNA杂合缺失（loss of heterozygosity，LOH）的特征及其意义。方法采用微卫星DNA多态分析法，选取染色体3p、5q、6p、9p、13q、17p、17q和18q的15个多态微卫星位点，对32例食管癌前病变和癌组织进行LOH分析。结果食管各级癌前病变组织和癌组织均出现不同程度的微卫星DNALOH，其频率随病变程度加重而明显升高（除D9S1752位点外，P均〈0．05）；其中D9S171、D13S260和TP53位点在癌阶段，LOH频率均超过60％。各级癌前病变组织和癌组织中发生LOH的位点不尽相同，同一个体从基底细胞过度增生→间变→原位癌→鳞状细胞癌，均发生LOH的位点是：D3S1234和TP53。结论基因水平的改变发生在食管癌变的早期阶段，随病变程度加重，基因组不稳定性增强，可能是导致食管癌前病变持续向癌的方向发展的重要机制之一。     

膜联蛋白-1在食管鳞状细胞癌发生发展中的表达差异

目的　检测膜联蛋白 -1(annexin -1)在食管鳞状细胞癌及癌前病变中的表达差异。方法　应用免疫组化S -P方法检测 13 5例食管鳞状细胞癌及其癌旁正常鳞状上皮、原位癌及其不典型增生病变中annexin -1的表达情况。结果　annexin -1在 12 9例 (95 .6% )癌旁正常食管鳞状上皮呈强阳性表达 ;在 3 5例 (2 5 .9% )鳞状细胞癌呈阳性表达 ,60例 (4 4 .4% )为弱阳性 ,40例(2 9.6% )为阴性 ,统计学处理有极显著性差异 (P <0 .0 1)。食管鳞状细胞癌annexin -1表达下降与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度及淋巴结转移无关 (P >0 .0 5 )。annexin -1在原位癌和不典型增生病变的表达亦呈下降趋势 ,与正常鳞状上皮比较有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　annexin -1蛋白在食管鳞状细胞癌和癌前病变中有不同程度的丢失 ,它很可能成为食管癌早期诊断以及预测食管癌前病变癌变风险的具有重要应用价值的指标     

维甲酸受体-β等肿瘤分子标志物在食管正常及异常组织中的表达及意义

目的 研究食管癌高发区人群的正常食管上皮、癌前病变及癌组织活检标本中,维甲酸受体-β(RAR-β)mRNA、p16、p53和Ki67蛋白的异常表达及其与食管癌发生的关系。方法 全组397例标本,其中食管正常黏膜组织25例,轻度不典型增生69例,中度不典型增生106例,重度不典型增生51例,原位癌78例,鳞状细胞癌68例。应用RNA原位杂交技术检测RAP-β mRNA的水平,应用免疫组织化学技术检测p16、p53和Ki67蛋白的表达情况。结果 在正常黏膜、轻度、中度、重度不典型增生、原位癌及鳞状细胞癌组织中,RAR-β mRNA表达检出率分别为96．0%、89．9%、67．9％、68．6％、62．8％和63．2％;p16表达检出率分别为88．0％、71．0％、64．2％、51．0%、53．8％和52．9%;p53异常表达检出率分别为4．0％、39．1％、57．5%、52．9％、67．9％和69．1％;Ki67异常表达检出率为0、40．6％、61．3％、58．8%、59．0％和75．0%。结论 4种肿瘤生物学标志物在食管上皮中、重度不典型增生和原位癌组织中的表达,未出现明显差异,而只表现为形态学上的差异。     

食管鳞状细胞癌中nm23-H1和p53蛋白表达及其相互关系

目的:探讨食管鳞癌组织中p53和nm23-H1蛋白的表达与癌组织分化浸润转移的关系,以及探讨两者之间的相关性,并进一步分析癌组织中p53和nm23-H1蛋白表达对食管癌患者的预后意义。方法:采用免疫组织化学(S-P法)方法对100例人食管鳞癌组织中的p53和nm23-H1蛋白的表达情况进行检测。结果:100例食管鳞癌组织中,nm23-H1阳性表达者70例(阳性率为70%),p53阳性表达者64例(阳性率为64%)。nm23-H1蛋白表达与食管癌淋巴结转移有关(P<0.025),与食管鳞状细胞癌的分化程度、肿瘤部位、浸润深度、病变长度以及患者性别、年龄无关(P>0.05)。p53蛋白表达与食管鳞状细胞癌的分化程度、浸润深度有关(P<0.05),与食管癌淋巴结转移、肿瘤部位、病变长度、患者性别、年龄无关(P>0.05)。高分化鳞癌组织中p53明显低表达(29.2%);低分化鳞状细胞癌组织中p53表达明显增高(71.4%)。食管外膜受累者p53表达较高(56%);仅发生食管粘膜和(或)粘膜下浸润组的癌组织中未发现有p53蛋白的表达。食管癌组织中nm23-H1蛋白低(高)表达与p53高(低)表达之间有明显相关性(P<0.01)。nm23-H1和p53蛋白表达亦与食管癌的TNM分期密切相关(P<0.05)。食管癌TNM分期越晚,其癌组织中nm23-H1蛋白表达越低,p53蛋白表达越高。结论:nm23-H1基因低表达与p53基因高表达可能在食管鳞状细胞癌浸润转移过程中发挥重要作用。nm23-H1可以作为食管鳞状细胞癌患者预后的基因标记,其蛋白表达产物的检测可以用于患者预后的判断,并为患者治疗方案的制定提供参考。     

PTEN在食管鳞状细胞癌中的表达和临床意义

目的：研究抑癌基因PTEN蛋白表达与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系,探讨其在食管癌变中的可能作用。方法：应用免疫组织化学SP法检测60例食管鳞状细胞癌及20例癌旁正常组织中PTEN蛋白的表达,结合临床资料进行分析。结果：PTEN蛋白阳性反应主要定位于胞浆。食管鳞状细胞癌组织中PTEN蛋白表达阳性率56．7％明显低于正常组织阳性率90．0％（P〈0．05）。PTEN蛋白在低分化、中分化、高分化鳞癌组的阳性表达率分别是21．4％、55．0％、76．9％,三组之间相互比较有极显著统计学差异（P〈0．01）,肿瘤分化程度越低PTEN蛋白表达越低。有淋巴细胞转移的食管癌组织中VrEN表达的阳性率42．9％明显低于无淋巴细胞转移的食管癌组织阳性率76．0％（P〈0．05）。有外膜浸润的食管癌组织中PTEN表达的阳性率26．1％明显低于无外膜浸润的食管癌组织阳性率75．7％（P〈0．05）。PTEN蛋白在食管癌早期表达高于晚期（P〈0．01）。结论：PTEN蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的低表达可能与食管鳞癌的发生发展有重要关系。     

食管癌及癌前病变组织P53蛋白表达的研究

对１９７例食管内窥镜活检组织中Ｐ５３蛋白的免疫组化分析表明，约３８．８％的食管轻度不典型增生，５２．０％的中重度不典型增生，６１．１％的原位癌和６２．５％食管浸润癌组织中有高表达的Ｐ５３蛋白。正常食管鳞状上皮和慢性皮炎症食管上皮中很少有Ｐ５３蛋白聚积，对１４例食管癌病人癌及癌旁不典型增生组织中Ｐ５３蛋白的免疫组化分析表明，９例Ｐ５３蛋白高表达的食管癌中，８例癌旁不典型增生组织也有高表达的Ｐ５３基因     

P16蛋白在食管鳞状细胞癌的表达及意义

目的探讨多肿瘤抑制基因P16／MTS1在食管鳞状细胞癌形成中的作用。方法采用免疫组织化学方法，对51例食管鳞状细胞癌及其16例淋巴结转移癌进行了P16蛋白多克隆抗体免疫组织化学染色。结果P16蛋白在食管鳞状细胞癌中呈低表达，阳性率为45．1％（23／51），阳性率显著低于正常食管粘膜及癌旁组织（P＜0．01），在各组织学分级的食管癌中阳性率分别为：Ⅰ级66．7％（14／21），Ⅱ级34．8％（8／25），Ⅲ级14．3％（1／7），Ⅰ级显著高于Ⅱ级（P＜0．05），P16蛋白阳性率与肿瘤分化程度呈负相关（P＜0．01），与肿瘤浸润、转移无相关性。结论食管癌中有频发的P16基因失活，致基表达下降，并与组织分化程度有关，而与肿瘤浸润、转移无密切关系     

高发区食管癌患者p16基因甲基化及其表达的比较研究

目的:比较p16基因甲基化在食管癌高发区河南林州(北方组)和广东揭阳(南方组)之间的异同,探讨p16基因甲基化在不同气候环境条件下的两地食管鳞癌(ESCC)发生中的作用。方法:采用甲基化特异性PCR方法(MSP)分别检测两地食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因启动子区域CpG岛甲基化状态。采用EnVision免疫组化法检测两地食管癌组织及癌旁组织的p16蛋白的表达。结果:南方组75例标本中,食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因甲基化率分别为41.3%(31/75)、13.3%(10/75)和6.67%(5/75);癌组织和癌旁组织p16蛋白的阳性表达率分别为29.3%(22/75)和56.7%(17/30);31例p16基因甲基化阳性标本中有2例(6.4%)检测到p16蛋白的表达,而44例p16基因甲基化阴性标本中有20例(45.5%)检测到p16蛋白的表达。北方组65例标本中,食管癌组织、癌旁组织、切缘组织p16基因甲基化率分别为52.3%(34/65)、16.9%(11/65)和7.69%(5/65);食管癌组织和癌旁组织p16蛋白的阳性表达率分别为32.3%(21/65)和66.7%(20/30);34例p16基因甲基化阳性标本中有4例(11.8%)检测到p16蛋白的表达,而31例p16基因甲基化阴性标本中有17例(54.8%)检测到p16基因的表达。两地组内癌组织p16甲基化率均显著高于癌旁组织和切缘组织,p16蛋白表达与p16基因甲基化呈负相关(P<0.01)。两地同类组织比较p16甲基化率和p16蛋白表达率均无显著性差异(P>0.05)。结论:p16基因异常甲基化后功能失活可能是南、北两地食管癌癌变过程的重要事件,在我国南北环境气候条件不同的两地高发区食管癌的发生中均起着重要的作用。本研究为环境因素和p16基因功能之间的生物学关联在食管癌的发生中提供了一定的证据。     

MT-3基因甲基化对食管鳞状细胞癌发病及预后的影响研究

目的 探讨MT-3基因甲基化对食管鳞状细胞癌发病及预后的影响.方法 选取行食管癌切除手术,术后经病理证实为食管鳞状细胞癌且病理及随访资料完整的110例病例,分别对选取的肿瘤组织、正常组织和转移淋巴结标本蜡块进行常规连续切片、免疫组化染色、提取DNA并扩增DNA样本.应用重亚硫酸钠处理限制性内切图谱分析MT-3甲基化情况,统计分析其与食管鳞状细胞癌患者的分化程度、淋巴结转移数目及生存率的关系.结果 食管鳞状细胞癌组织中的MT-3表达水平高于正常的食管组织,并且在中分化和高分化的食管癌组织中MT-3呈现较明显的高表达,而低分化食管癌组织中MT-3的表达不明显.出现MT-3基因甲基化的患者淋巴结转移数量多于未出现MT-3基因甲基化的患者,并且出现MT-3基因甲基化的患者生存时间和2年生存率均较未出现甲基化的患者差,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 MT-3基因的表达程度和甲基化程度与食管鳞状细胞癌的病情和预后评估密切相关,有望将其作为病情和预后评估的指标之一.     

食管鳞状细胞癌p16和nm23-H1基因蛋白表达及意义

目的 :探讨多肿瘤抑制基因p16蛋白和nm2 3 H1基因蛋白在人食管癌的表达及与肿瘤生物学行为的关系。方法 :应用免疫组织化学方法观察 51例食管鳞状细胞癌及其淋巴结转移癌中p16蛋白的表达 ,结合观察转移抑制基因nm 2 3 H1的表达。结果 :p16在食管鳞状细胞癌中呈低表达 ( 4 5 1% ,2 3/51) ,阳性率显著低于正常食管粘膜及癌旁组织 (P <0 0 1) ,阳性率与分化程度相关 (P <0 0 1) ,Ⅰ级66 7% ( 14/ 2 1) ,Ⅱ级 34 8% ( 8/ 2 5) ,Ⅲ级 14 3% ( 1/ 7) ;与肿瘤浸润、转移无关。nm 2 3 H1的阳性率为60 8% ( 31/ 51) ,与浸润深度呈负相关 (P <0 0 5) ,淋巴结转移癌的阳性率 ( 18 8% ,3/ 16)显著低于食管癌原发灶 (P <0 0 1)。p16与nm 2 3 H1的表达无关。结论 :p16蛋白在食管癌的低表达提示有频发性的p16基因失活 ,且与肿瘤分化有关。nm2 3 H1与食管癌的浸润 ,转移相关。p16和nm 2 3 H1的失活在食管癌的形成及发展中可能起不同的作用     

食管癌早期癌变的研究和annexin I表达的意义

目的 检查annexin Ⅰ在食管癌前病变到食管鳞癌不同病变过程中的表达。方法 按照研究食管癌早期病变的病理学取材方法取材,选择含有不同程度癌前病变的食管鳞癌标本11例,经连续取材制片和免疫组化分析,比较同一病例由食管癌前病变发展到食管鳞癌的全过程中annexin Ⅰ的表达改变。结果 Annexin Ⅰ表达水平在食管正常鳞状上皮中呈强阳性(11/11,100％),低度癌前病变(轻度不典型增生和中度不典型增生)减弱(3/8,37.5％),高度癌前病变(重度不典型增生和原位癌)明显减弱(12/14,85.7/％),食管浸润癌和淋巴结转移癌中阴性或显著减弱(15/15和3/3,100％)。Annex.in Ⅰ在食管低度癌前病变中的改变具有显著意义(P=0.002)。结论 Annexin Ⅰ是食管鳞癌早期侯选标志蛋白,在食管低度癌前病变时表达异常。