皮下免疫热休克蛋白65对高密度脂蛋白抗炎抗氧化功能的影响

目的 观察不同剂量热休克蛋白65对载脂蛋白E基因敲除小鼠高密度脂蛋白抗炎抗氧化功能的影响。方法 8周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为磷酸盐缓冲液对照组、5 μg热休克蛋白65组及25 μg热休克蛋白65组，分别于第3、6周进行皮下免疫。第16周取标本，分别检测血脂水平、血清屏氧酶1活性、髓过氧化物酶活性、高密度脂蛋白炎症指数及炎症因子白细胞介素10和干扰素γ含量。结果 随着热休克蛋白65剂量的增加，血清高密度脂蛋白胆固醇水平和白细胞介素10表达量逐渐下降，屏氧酶1活性逐渐降低，高密度脂蛋白炎症指数、髓过氧化物酶活性和干扰素γ表达量则逐渐升高。与对照组比较，25 μg热休克蛋白65组血清高密度脂蛋白胆固醇水平和白细胞介素10表达量明显下降（P<0.01），屏氧酶1活性明显降低（P<0.05），高密度脂蛋白炎症指数、髓过氧化物酶活性、干扰素γ表达量则显著升高（P<0.01）。结论 热休克蛋白65可引起炎症反应，损害高密度脂蛋白抗炎抗氧化功能，并且这种作用与其剂量有关。     

胆固醇流出调节蛋白和胆固醇逆向转运与动脉粥样硬化

胆固醇流出调节蛋白(cholesterol efllux regulatory protein，CERP)是由腺苷三磷酸结合暗盒运输器l(ATP binding cassette transporter l，ABCl)基因编码的蛋白质，在胆固醇的逆向转运中起重要的作用。ABCl基因突变导致其编码的CERP异常，引起胆固醇逆向转运障碍，胆固醇在外周组织细胞聚集，从而可导致血脂异常，动脉粥样硬化等一系列临床病理改变。细胞内脂质，核受体PPARγ，LXR、RXR对ABC1蛋白的表达具有调控作用，这些研究结果为新药开发，动脉粥样硬化以及冠心病、脑卒中的治疗开辟了新的前景。     

热休克蛋白与支气管哮喘

热休克蛋白是从细菌到人类均广泛存在的一类热应急蛋白质,并且广泛参与了机体的免疫调节过程。支气管哮喘（简称哮喘）是一种气道慢性炎症性疾病,亦被认为是一种自身免疫性疾病,其发病率逐年上升,已成为全球普遍关注、严重危害公众健康的常见病。目前,细胞免疫功能紊乱被视为哮喘的重要发病机制。越来越多的证据表明,热休克蛋白极可能参与哮喘的发病过程。     

热休克蛋白与支气管哮喘

热休克蛋白是从细菌到人类均广泛存在的一类热应急蛋白质,并且广泛参与了机体的免疫调节过程.支气管哮喘(简称哮喘)是一种气道慢性炎症性疾病,亦被认为是一种自身免疫性疾病,其发病率逐年上升,已成为全球普遍关注、严重危害公众健康的常见病.目前,细胞免疫功能紊乱被视为哮喘的重要发病机制.越来越多的证据表明,热休克蛋白极可能参与哮...     

人热休克蛋白65检测在冠心病中的应用价值

目的:探讨入院即刻人热休克蛋白65(heat shock protein 65,HSP65)检测在反映冠心病病情程度中的作用,并分析其与冠心病其他危险因素之间的关系.方法:入选89例研究对象,分为急性冠状动脉综合征(ACS)组、稳定型心绞痛组、无冠心病组.所有患者均行冠状动脉造影术明确病变程度.记录所有患者的一般临床资料.应用ELISA方法测定血清中人HSP65含量.结果:ACS组中人HSP65的含量为(2 228.63±616.56)ng/L,较稳定型心绞痛组(1 891.89±182.91)ng/L及无冠心病组(1 773.65±157.21)ng/L均明显增高(P<0.05),稳定型心绞痛组人HSP65含量比无冠心病组亦明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05).人HSP65含量与入院即刻血糖、脑钠肽、肌酸激酶同工酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、Gensini积分呈正相关关系(P<0.05),与左室射血分数呈负相关关系(P<0.05).人HSP65与冠心病已确立的其他危险因素均无关(P>0.05),Logistic回归分析显示人HSP65是ACS的一个独立危险因素(P=0.001).结论:人HSP65检测在冠心病中具有重要的应用价值,人HSP65是ACS的独立危险因素,可以作为反映病情的一个重要的实验室指标.     

体外氧化修饰高密度脂蛋白对人单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出的影响

目的探讨体外氧化修饰后的高密度脂蛋白（ox-HDL）对人外周血单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出的影响。方法采用一次性密度梯度超速离心法从血浆中分离低密度脂蛋白（LDL）及高密度脂蛋白（HDL）,分别以Cu2+诱导法将其氧化修饰成ox-LDL及ox-HDL。采用密度梯度离心法和塑料吸附法从人外周血中分离出单核细胞,以50nmol/L佛波酯（PMA）刺激48h使之转化为巨噬细胞。细胞分为对照组（ox-LDL组）、阳性对照组（HDL组）及实验组（ox-HDL组）,对照组仅加入终浓度为80mg/L的ox-LDL;HDL组和ox-HDL组分别先加入终浓度均为50mg/L的HDL和ox-HDL共孵育1h后,再分别加入终浓度为80mg/L的ox-LDL,并于实验的0、6、12及24h测定细胞内总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）及蛋白（Pro）含量。观察不同时间点各组细胞内TC/Pro比值的变化,并比较ox-HDL与HDL对细胞内TC/Pro比值影响的时效关系。结果成功地由体外氧化修饰了LDL及HDL并制备出理想的泡沫细胞模型。在实验的6、12及24h,ox-HDL组细胞内TC/Pro比值均较HDL组细胞高,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论体外氧化修饰后的HDL导致其胆固醇逆向转运（RCT）功能与效率的降低。     

结核分支杆菌热休克蛋白65kD在大肠杆菌中表达

目的 构建能表达结核分支杆菌热休克蛋白65KD的工程菌。方法 设计引物并PCR扩增，目的基因克隆并转化，重组子经酶切和自动测序鉴定，阳性重组子转化表达宿主菌并受化学诱导后表达重组65kd蛋白。结果 65KD蛋白编码基因约1.6kd，重组子单酶切和双酶切证明目的的基因插入载体，3个测序反应覆盖99.1%目的基因；大肠杆菌表达重组65kd蛋白。结论 大肠杆菌表达系统是一种快速、简便获得单一结核分枝杆菌抗原的途径。     

高密度脂蛋白对炎症状态下脂肪细胞胆固醇流出的影响

目的:探讨高密度脂蛋白(High-density lipoprotein,HDL)对体外模拟脂肪细胞炎症状态下胆固醇流出的保护作用及其机制.方法:将前脂肪细胞株3T3-LI(3T3-L1)诱导分化成为成熟的脂肪细胞后,作为空白对照组,脂肪细胞以脂多糖(LPS,100 ng/ml)刺激6小时,为LPS组;脂肪细胞经LPS( 100ng/ml)刺激6小时后,分别用不同浓度HDL孵育16小时,为10 μg/ml HDL+LPS组、50μg/ml HDL+LPS组、100 μg/ml HDL+LPS组.采用液体闪烁计数器检测不同浓度的HDL对LPS刺激的脂肪细胞胆固醇流出的影响,并检测细胞内B族I型清道夫受体(SR-BI)信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平.结果:LPS组的胆固醇流出率(2.5±0.6)％较空白对照组(4.1±0.4)％减少,3种不同浓度的HDL+LPS组干预后细胞胆固醇流出率较LPS组增加;LPS组SR-BI mRNA和蛋白表达较空白对照组降低,与LPS组相比较,3种不同浓度的HDL+LPS组SR-BI mRNA和蛋白表达随HDL浓度的增加而递增,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:炎症状态下脂肪细胞的胆固醇流出减少,通过上调SR-BI表达能促进炎性脂肪细胞内胆固醇的流出,减少胆固醇在脂肪细胞内的蓄积.该作用可能与其促进脂肪细胞表达SR-BI有关.     

皮下免疫热休克蛋白65对小鼠巨噬细胞胆固醇流出率的影响及机制

目的观察皮下免疫不同剂量热休克蛋白65(HSP65)对载脂蛋白E缺失小鼠动脉粥样硬化及巨噬细胞TC流出率的影响。方法选择apoE-/-小鼠24只,随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、5μg HSP65组及25μg HSP65组,每组8只,第3、6周进行皮下免疫。实验第16周末取标本,分离小鼠主动脉测定血管斑块面积;用自动生化仪测定小鼠血脂水平,酶联免疫吸附法分别检测血清HSP65抗体滴度及炎性因子白细胞介素10(IL-10)和干扰素γ水平,液闪计数仪检测巨噬细胞TC流出率;提取肝脏mRNA及膜蛋白,分别检测ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和G1(ABCG1)、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)的表达。结果与PBS对照组比较,5μg HSP65组和25μg HSP65组TC流出率明显降低,HSP65抗体滴度和干扰素γ水平明显升高,主动脉粥样硬化斑块面积明显增加(P<0.05,P<0.01);其中25μg HSP65组血清HDL-C和IL-10表达较PBS对照组明显降低(P<0.01);5μg HSP65组和25μg HSP65组ABCA1、ABCG1及SR-BⅠmRNA表达明显低于PBS对照组(P<0.05)。结论皮下免疫HSP65可抑制小鼠巨噬细胞TC流出,可能是通过下调ABCA1、ABCG1和SR-BⅠ的表达。     

热休克蛋白对类风湿关节炎患者T辅助细胞的作用及意义

类风湿关节炎 (ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＲＡ)的发病机制目前尚不十分清楚。研究认为本病为多种因素诱发机体的自身免疫反应而致病 ,其中 ,感染因素在ＲＡ的发病 ,尤其是触发疾病方面 ,可能起着相当大的作用。ＲＡ患者存在对某些微生物的高免疫反应现象 ,提示部分微生物可能与ＲＡ的发病有关[1] 。近年来 ,国内外研究揭示人的Ｔｈ1细胞识别软骨的Ⅱ、Ⅸ、Ⅺ型胶原以及其他的软骨和软骨细胞的抗原成分是ＲＡ发病机制的重要因素。此外 ,一些分枝杆菌抗原如结核杆菌 6 5 0 0 0的热休克蛋白 (ＨＳＰ6 5 )已被证实在佐剂性关节炎…     

热休克蛋白72重组腺病毒包装及其对细胞凋亡的影响

目的 包装热休克蛋白72重组腺病毒表达载体,探讨其对ECV304细胞凋亡的影响.方法采用细菌同源重组法构建了热休克蛋白72重组腺病毒表达载体;流式细胞仪检测重组腺病毒对细胞凋亡的影响;荧光报告系统和蛋白印迹分析重组腺病毒对p53转录的调节和蛋白表达的影响.结果 成功包装了热休克蛋白72重组腺病毒,热休克蛋白72能够促进细胞凋亡,从转录水平上调p53蛋白的表达.结论 热休克蛋白72可能通过上调p53蛋白的表达促进细胞凋亡.     

Antibodies to Heat Shock Protein 65 kD in Type 1 Diabetes Mellitus

To determine whether antibodies to mycobacterial heat shock protein of 65 kD molecular weight (hsp 65) could be important in the pathogenesis of Type 1 diabetes we tested patients before and at diagnosis of diabetes, as well as patients with rheumatoid arthritis. Using ELISA, increased hsp 65 antibodies were detected in 2 of 8 pre-diabetic twins, 1 of 13 newly diagnosed untreated diabetic patients and 3 of 10 rheumatoid arthritis patients. Levels of hsp 65 antibodies in pre-diabetic twins, median (range), 0.25 (0.104–1.904) and newly diagnosed diabetic patients (mean ± SD) (0.299 ± 0.220), did not differ significantly either from each other or from their control subjects (0.134 ± 0.123). In contrast, levels of hsp 65 antibodies in rheumatoid patients (0.59 ± 0.42) were significantly higher than in their control subjects (0.21 ± 0.18; p = 0.02). Of twins studied prospectively before diagnosis, at diagnosis but before insulin treatment, and soon after diagnosis, three of four had hsp 65 antibodies at some stage. We conclude that serological immunity to mycobacterial hsp 65 can occur in Type 1 diabetes, but it is neither a characteristic nor a specific feature of the disease.     

大蒜素对Caco-2细胞胆固醇排出的影响

目的观察大蒜素对肠道细胞系Caco-2细胞胆固醇外排及胆固醇转运基因ABCG5/ABCG8表达的影响,探讨大蒜素对肠道细胞胆固醇转运的影响及机制。方法 Caco-2细胞随机分为对照组,胆固醇微胶粒组,胆固醇微胶粒加大蒜素组和大蒜素组4组。处理末,采用油红O染色观察细胞内脂滴,高效液相色谱法测细胞内胆固醇含量,免疫印迹法测ABCG5和ABCG8的蛋白表达。结果与对照组比较,胆固醇微胶粒增加Caco-2细胞内脂滴和胆固醇含量(P0.05),而大蒜素减少胆固醇微胶粒处理后细胞内脂滴和胆固醇含量,增加细胞内胆固醇排出率(70.30%比20.92%,P0.05)。大蒜素显著上调Caco-2细胞ABCG5和ABCG8的蛋白水平。结论大蒜素促进细胞内胆固醇排出,其机制可能与上调ABCG5和ABCG8表达相关。     

普罗布考干预后小鼠血清对巨噬细胞胆固醇流出的影响

目的 观察普罗布考处理后小鼠血清及不同浓度普罗布考体外干预对巨噬细胞胆固醇流出的影响,探讨普罗布考调节细胞胆固醇流出的可能机制.方法 16只健康雄性C57 BL/6J小鼠随机分为两组,分别给予普通饮食或添加普罗布考饲料饲养4周后,收集血清,酶法测定血清脂质;以乙酰化低密度脂蛋白和3H-胆固醇标记巨噬细胞,并以不同浓度普罗布考干预细胞,然后以上述血清介导,测定细胞胆固醇流出;收集干预后的细胞,提取mRNA及膜蛋白,分别检测ATP结合盒转运子A1和G1、B族Ⅰ型清道夫受体的表达.结果 普罗布考干预4周后小鼠血清较对照组介导更多的胆固醇从巨噬细胞流出,普罗布考呈剂量依赖性地增加巨噬细胞ATP结合盒转运子G1基因和蛋白的表达,并加速血清诱导的胆固醇流出率,而对B族Ⅰ型清道夫受体、ATP结合盒转运子A1基因和蛋白表达无明显影响.结论 普罗布考干预后的小鼠血清显著促进巨噬细胞胆固醇流出,其机制可能是通过增加ATP结合盒转运子G1的表达,而与细胞膜B族Ⅰ型清道夫受体、ATP结合盒转运子A1的表达无关.     

热休克蛋白与心血管疾病

详尽论述了热休克蛋白与心血管疾病之间的关系。     

热休克蛋白70与缺血-再灌注[A1]损伤

热休克蛋白70(HSP70)是一种有高度保守性的应激蛋白,在抗缺血.再灌注损伤中发挥重要作用.近年来越来越多的心脏、肝脏、肾脏等器官移植,以及心脑血管重建技术的开展,缺血.再灌注损伤都是一个不可忽视的环节,调动内源性的[A2]保护机制减轻损伤,成为目前一种新的途径之一[A3].现就HSP70分别在脑、心、肝、肾、肺及小肠缺血一再灌注损伤中的作用作一综述.     

烟酸对3T3-L1脂肪细胞胆固醇流出的影响

目的观察烟酸对分化成熟的3T3-L1脂肪细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制。方法3T3-L1细胞促分化成熟后,给与不同浓度的烟酸(0～1.0mmol/L)干预24h后,收集细胞,逆转录聚合酶链反应测定脂肪细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1、B族Ⅰ型清道夫受体和过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达,采用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出。结果烟酸呈剂量依赖性增加脂肪细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1mRNA的表达,并促进载脂蛋白AⅠ介导的胆固醇流出,但对B族Ⅰ型清道夫受体表达无影响。过氧化体增殖物激活型受体γ在分化成熟的3T3-L1脂肪细胞有较高水平的表达,与空白组(0.38±0.29)比较,在1.0mmol/L浓度的烟酸干预时过氧化体增殖物激活型受体γ表达明显升高(3.15±0.96),为空白组的8.3倍。结论烟酸可通过上调过氧化体增殖物激活型受体γ表达,促进脂肪细胞载脂蛋白AⅠ—三磷酸腺苷结合盒转运体A1通路,加速细胞内胆固醇流出。这可能为解释烟酸升高高密度脂蛋白胆固醇的机制提供有用的线索。     

Heat Shock Protein Studies in Type 1 and Type 2 Diabetes and Human Islet Cell Culture

Heat shock proteins (HSP) play an important role in auto-immunity and infection. Glutamic acid decarboxylase (GAD) the prime antigen in Type 1 diabetes has similar amino acid sequences to HSP65. An ELISA was developed using a plant-derived HSP65 antibody. HSP65 antibody was present in the serum of all normal subjects (median 1.64 AU, IQ range 1.49-1.74). Lower levels were found in established Type 1 diabetes (1.41 AU, 1.32-1.61, p<0.001) and Type 2 diabetes (1.45 AU, 1.35-1.59, p<0.006). In Type 1 HSP antibody levels fell with age (p = 0.007) and with duration (p = 0.008) and women with Type 1 had lower levels than men (p = 0.009). Human islet cell culture subjected to heat shock revealed an approximate four fold increase in heat shock protein antigen in the surrounding medium. The release of HSP antigen from stressed islet cells together with the finding of HSP antibody in the serum of all subjects suggest that HSP65 should not be completely discarded as having a possible role in the development of Type 1 diabetes. Low levels of HSP antibody in patients with established diabetes is probably a manifestation of imparied immunity induced by the diabetic state.