黄粉虫蛋白提取物纤溶活性及性质研究

目的 研究黄粉虫蛋白提取物的纤溶活性及其性质.方法 通过生物化学方法从黄粉虫Tenebrio molitor Linne组织分离纯化出纤溶活性蛋白,纤维蛋白平板法测定其纤溶性,对其进行溶血性、体外溶栓实验和血管生成抑制作用实验,并对其部分性质做了研究.结果 分离纯化得到纤溶性蛋白.结论 黄粉虫蛋白提取物具有纤溶性,该成分在40℃下基本稳定,最适反应温度为25～45℃,最适pH为7.5～8.0.其溶血率小于5%,不引起体外红细胞的明显溶血,安全性好.黄粉虫蛋白提取物受尿素和巯基乙醇(BME)的影响,而Na+,Mg2+,K+及Ca2+等各种金属离子及EDTA对其影响不大.     

纳豆激酶分离纯化及其性质研究

目的：优化纳豆激酶分离纯化工艺，并研究其理化性质和酶学性质。方法：通过硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose F．F．柱层析、冷冻干燥得到纳豆激酶；SDS-PAGE测定纳豆激酶分子量；Lowry法测定蛋白质含量；纤维蛋白平板法测定其纤溶活性；并研究温度、pH、金属离子和抑制剂等因素对其纤溶活性的影响、结果：纳豆激酶的分子量约为28kD；在pH 5-12和温度不高于60℃范围内其活性稳定；K^ 、Ca^2 、Fe^3 、Md^2 、Mn^2 等金属离子对纳豆激酶活性无明显影响，而Cu^2 明显抑制其纤溶活性；ε-ACA和EDTA对纳豆激酶活性无明显影响，而100μmol／L的PMSF能完全抑制其活性；纳豆激酶的纤溶活性为蚓激酶的1．6倍。结论：建立纳豆激酶的分离纯化方法并鉴定了其部分性质。     

少棘蜈蚣活性蛋白提取及纤溶作用性质研究

目的 研究少棘蜈蚣活性蛋白的纤溶性及其性质.方法 通过硫酸铵分段盐析、DEAE纤维素柱和Sephadex G-75柱层析从少棘蜈蚣Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch组织分离纯化出纤溶性活性蛋白,纤维蛋白平板法测定其纤溶性,SDS-PAGE测定样品纯度和分子量,温度、pH改变对少棘蜈蚣纤溶性蛋白活性的影响.结果 分离纯化到一种相对分子质量约为48.3 kD的纤溶性蛋白,水解纤维蛋白的比活力为42.36 u/mg.结论 少棘蜈蚣活性蛋白具有纤溶性,该成分在40℃下基本稳定,最适温度35℃,最适pH8.0.     

黄黑小斑蝥纤溶活性蛋白分离纯化及性质研究

目的以药用斑蝥(Mylabris)为原料,从其中分离纯化得到一种具有纤溶性的蛋白MFP(Fibrinolyric Protein of Myla-bris)。方法采用硫酸铵分段盐分、透析和DEAE-32纤维素离子交换层析等纯化方法进行分离纯化,SDS-PAGE电泳测定其分子量,纤维蛋白平板法测定其纤溶活性。结果该目的蛋白相对分子质量约为95.5 kD,其水解纤维蛋白的相对比活力为14.7 u/mg;该成分在35℃下最稳定,65℃及以上活性丧失,金属离子K+,Na+对其活力无影响,Mn2+,Ca2+对其有明显抑制作用,最适pH为6.0。结论研究分离出的斑蝥活性蛋白确为一种具有纤溶性的蛋白组分,并证明其纤溶作用机理为纤溶酶原激活;体外溶栓实验表明,其对血栓的溶解具有一定作用;溶血实验结果表明,该纤溶活性蛋白溶液无溶血反应。     

通俗环毛蚓抗血栓活性蛋白成分的快速富集及活性考察

目的 以地龙品种中的通俗环毛蚓为研究对象,对其蛋白总提物进行纯化富集以获得抗血栓活性蛋白成分（PvQ）,对PvQ进行抗血栓活性研究,以期为地龙的抗血栓物质基础研究提供参考。方法 采用AKTA-Pure型蛋白纯化系统,以体外活性为导向,富集通俗环毛蚓PvQ;采用纤维蛋白平板法、纤维蛋白原-凝血酶时间法（Fibg-TT法）对PvQ的纤溶及抗凝活性进行测定;利用体外血栓溶解试验评价PvQ对体外血栓的溶解能力,同时,考察了不同温度及pH对PvQ活性的影响。结果 成功富集得到通俗环毛蚓PvQ,活性测定表明其具有显著的纤溶及抗凝活性。体外血栓试验结果显示,37 ℃孵育5 h后PvQ可水解超过80%的血栓块。此外,温度和pH对于PvQ活性影响显著,在≥60 ℃或酸性条件（pH<7）下PvQ活性显著降低或失活,而在≤50 ℃和碱性条件下PvQ活性则不受影响或受较少影响。结论 建立了可行的通俗环毛蚓PvQ制备方法,PvQ可同时作用于纤维蛋白和纤维蛋白原,从而发挥双重纤溶作用,表现出良好的纤溶及抗凝活性,为其用于治疗血栓性疾病提供了科学阐释,并可为地龙抗血栓蛋白类产品的开发提供参考。     

五谷虫中蛆激酶分离及其生物活性评价

目的 分离五谷虫中蛆激酶,并对其进行生物活性评价。方法 采用盐析法、CM52离子交换层析、苯甲脒亲和层析分离蛆激酶,利用纤维蛋白平板法测定其溶纤活性,通过丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟、抑肽酶判定其活性中心类型。结果 蛆激酶分子量为25 kDa,比活性933 262 U/mg,属于丝氨酸蛋白酶家族,具有分解纤维蛋白,激活纤溶酶原活性。结论 蛆激酶是一种具有降解纤维蛋白、激活纤溶酶原作用的多靶点溶栓酶。     

螺旋藻激酶对大鼠动静脉环路血栓的溶栓作用研究

目的 探索螺旋藻激酶(SPK) 对大鼠动静脉环路血栓的溶栓作用及其机制.方法采用大鼠颈动-静脉环路血栓模型, 通过称取血栓重量来测定螺旋藻激酶的溶栓作用;腹主动脉取血分离血浆,测定螺旋藻激酶对血浆D二聚体、TPA含量的影响.结果 螺旋藻激酶使动静脉环路血栓干、湿重明显减轻,高、低剂量螺旋藻激酶使血浆D-二聚体含量明显升高(P均<0.05),高剂量螺旋藻激酶使TPA含量明显升高(P<0.05).结论 螺旋藻蛋白激酶能抑制血栓形成, 激活纤溶活性,具有较好溶栓效力.     

影响胃蛋白酶和胰蛋白酶纤溶活性因素初探及其纤溶活性失活研究

目的通过探讨影响胃蛋白酶和胰蛋白酶纤溶活性的因素及其纤溶活性失活方法,排除胃蛋白酶和胰蛋白酶对中药鼠妇Armadillidium vulgare活性粗蛋白纤溶活性检测的干扰,以在鼠妇活性粗蛋白酶解过程,获取相对分子质量更小、效价更高的蛋白质或多肽。方法采用纤溶蛋白平板法分别研究pH值、温度、金属离子、酶抑制剂和表面活性剂对胃蛋白酶和胰蛋白酶纤溶活性的影响,以获取较佳的酶失活工艺,并研究较佳酶失活工艺对尿激酶、蚓激酶、鼠妇纤溶酶纤溶活性的影响。结果 pH值、温度、金属离子、酶抑制剂和表面活性剂均可对胃蛋白酶和胰蛋白酶纤溶活性产生影响,其中胃蛋白酶的最优失活方案为pH 6.0~8.0;胰蛋白酶的最优失活方案为质量浓度25 mg/mL TLCK和浓度1 mmol/L EDTA的混合制剂。结论研究所获取的较佳酶失活工艺,可用于以纤维蛋白平板法检测胃蛋白酶、胰蛋白酶降解产物的纤溶活性,操作简单,重复性好,稳定性好。     

纳豆激酶最新研究进展

纳豆激酶是一种由纳豆菌或纳豆产生的碱性丝氨酸蛋白酶,能直接降解血中纤维蛋白原及激活纤溶酶原为纤溶酶,刺激血管内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活剂。大量的药理药效研究表明,纳豆激酶纤溶活性强、稳定性好、副作用小,是较为理想的溶栓药物之一,但仍存在一系列有待解决的问题。综述了纳豆激酶的理化特性、药理药效等方面的研究进展,为纳豆激酶的进一步开发利用奠定基础。     

豆豉纤溶酶的分离纯化及部分酶学性质研究

 目的 从豆豉中分离出具有强纤溶活性的菌株,从该菌株的发酵液中纯化出纤溶酶并对此纤溶酶的部分酶学性质进行研究。方法 利用硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换色谱和Sephadex G-75凝胶过滤色谱等方法进行纯化;利用N-末端氨基酸序列测定及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对此酶进行鉴定。结果 从发酵液中获得了纤溶酶单一组分,表观相对分子质量为30×10³。该纤溶酶在50 ℃以下和pH 7.0~9.0之间保持稳定,最适温度为35 ℃;最适pH为8.6。N-末端氨基酸序列及飞行时间质谱测定结果都表明该酶与纳豆激酶氨基酸序列有着极高的相似性。结论 获得了纤溶酶单一组分,为纤溶酶发酵产品的大规模纯化和进一步研制开发新的溶栓药物提供重要理论依据。     

丹参酮Ⅱ_A磺酸钠的促纤溶作用(摘要)

从丹参中提取的几种纯品成分的实验结果显示,丹参酮Ⅱ_A 磺酸钠有一定程度的促纤维蛋白溶解的活性。经初步观察。其作用与纤溶酶原激活为纤溶酶有关。方法按 T.Astrup 法制成含有纤溶酶原的纤维蛋白平皿和去纤溶酶原的纤维蛋白平皿。一、将丹参酸、隐丹参酮、丹参酮Ⅱ_A、Ⅱ_B、Ⅱ_A磺酸钠、原儿茶醛和丹参素等几种纯品成分各用其最适溶媒溶解后,分别点样(10μl)于两种平皿上,37℃     

不同温度和pH对蚂蟥消化道酶活性影响的初步研究

目的:测定和比较不同温度和pH条件下蚂蟥Whitmania pigra消化道内淀粉酶、蛋白酶及脂肪酶的活性.方法:实验设计了从7～ 52℃10个温度梯度,pH从2.2 ～11.2共10个梯度,测定不同温度及pH条件下蚂蟥消化道内淀粉酶、蛋白酶及脂肪酶活力的变化.结果:当温度在7 ～52℃,pH2.2～11.2,蚂蟥消化道内脂肪酶在温度为37℃,pH为8.2时酶活最大;淀粉酶在温度为37℃,pH为5.2时酶活最大;蛋白酶在温度为42℃,pH为3.2,9.2时酶活较大.结论:蚂蟥消化道内脂肪酶的最适温度为37℃,最适pH为8.2;淀粉酶最适温度为37℃,最适pH5.2;蛋白酶最适温度为42℃,最适pH为3.2,9.2.     

丹参在纤洛系统中的作用及其机制

目的:研究丹参是否能提高纤溶酶的活性,促进纤维蛋白溶解.方法:用纤溶激活试验、补体免疫溶血试验、红细胞C3bR功能表达调节试验、抗原抗体结合干预试验,观察丹参不同制剂对纤溶、补体活性、红细胞C3bR功能、抗原抗体反应的影响.结果:①不同丹参制剂在含有和不含纤溶酶原的纤维蛋白板上均未出现纤溶活性,也未发现试验药物对t-PA、u-PA激活纤溶的增强作用.②丹参≥0.3 mg/ml、复方丹参片≥0.3 mg/ml、丹参注射液≥1.9 mg/ml对10 IU/ml t-PA、0.3 IU/ml u-PA激活纤溶的抑制率均≥50%,丹参≥4.0 mg/ml、复方丹参片≥3.6 mg/ml、丹参注射液≥18.8 mg/ml均完全抑制t-PA激活纤溶.③丹参≥64.1 mg/ml、复方丹参片≥25.0 mg/ml、丹参注射液≥75.0 mg/ml时引起羊红细胞溶解,丹参≥0.641 mg/ml、复方丹参片≥1.25 mg/ml、丹参注射液≥30.0 mg/ml抑制补体免疫溶血活性≥50%,丹参≥6.41 mg/ml、复方丹参片≥10.0 mg/ml、丹参注射液≥75.0 mg/ml完全抑制补体免疫溶血活性.④一定浓度的丹参制剂作用于HRBC后,不影响HRBC-Z花环率,但能导致HRBC-C3bR花环率极显著降低,复方丹参片、丹参注射液在较高浓度时使HRBC-C3bR花环率增加,在较低浓度时可减少HRBC-C3bR花环率.⑤丹参制剂在一定浓度范围,分别抑制Pg、C1INH、C4、ALb的抗原抗体结合反应,对ALb、Pg的抗原抗体结合反应抑制作用更强,对C3、PA的抗原抗体结合反应无明显影响.结论:丹参无直接纤溶活性,未见增强纤溶激活和提高纤溶酶的活性.丹参在一定浓度范围,能不同程度抑制t-PA、u-PA激活纤溶活性,抑制补体免疫溶血活性,使HRBC-C3bR活性减弱,抑制Pg、C1INH、C4、ALb的抗原抗体结合反应.在纤溶和补体系统之间,丹参可能主要作用于纤溶系统.     

稀莶草抗血栓组分对凝血系统的作用研究

目的:通过血瘀模型动物灌胃给药,探讨稀莶草抗血栓组分(腺梗稀莶ⅡA)对凝血系统的影响.方法:通过给于冰水肾上腺素血瘀模型动物口服腺梗稀莶草抗血栓活性组分,测定血浆纤维蛋白原含量、抗凝血酶Ⅲ活性、血浆纤溶酶原活性、血浆ET和NO含量等指标,观察稀莶草抗血栓组分对凝血系统、纤溶系统及血管内皮细胞的影响.结果:抗血栓组分能降低血浆纤维蛋白原含量,降低降低内皮细胞分泌ET,而对抗凝血酶Ⅲ,纤溶酶原活性及内皮细胞合成一氧化氮的功能影响不大.结论:稀莶草抗血栓组分可能通过降低血浆纤维蛋白原含量抗凝血及降低内皮细胞分泌ET的途径抗血栓形成.     

纤维蛋白酶谱检测蚯蚓纤溶酶组分

 目的建立鉴定蚯蚓纤溶酶粗酶液中活性组分的方法。方法根据蚯蚓纤溶酶能水解纤维蛋白的性质,建立了纤维蛋白-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Fibrin-SDS-PAGE),优化了电泳条件,电泳后酶所在部位为透明区带。结果分离胶中纤维蛋白终质量浓度为0.4×10^-3mg·L^-1,电泳后胶板用2.5% TritonX-100复性30min,PBS缓冲液(pH7.2)保温30min,考马斯亮蓝R-250染色,7%醋酸脱色,可以得到清晰的酶谱。结论该方法灵敏度高,用2μg样品,就能准确检测出粗酶液中所有纤溶酶组分。     

不同提取法炮制对水蛭体外溶栓活性的影响

目的:研究炮制对水蛭体外溶栓活性的影响。方法:采用水提取法和仿生提取法对水蛭净制品、烫制品、酒制品进行提取,选用纤维蛋白平板法和纤维蛋白原平板法,以平板上透明圈面积为指标进行纤溶活性测定;并建立体外血栓模型,通过血凝块的失重比进一步评价水蛭不同炮制品的溶栓活性。结果:水蛭在炮制前后均能在纤维蛋白平板上产生透明圈。采用水提取法时,烫制品和酒制品的溶圈面积减小,炮制后纤溶活性降低,活性顺序为:净制品酒制品烫制品。而采用仿生提取法时,显示烫制和酒制后水蛭纤溶活性升高,活性顺序为:烫制品酒制品净制品。体外血栓模型中,血凝块失重比结果与纤溶活性测定结果一致,采取水提取法时,炮制使溶栓活性降低,而采用仿生提取法时显示炮制使溶栓活性增加。结论:与水提取法比较,仿生提取法更符合水蛭经口服后在人体内的消化吸收过程,其结果更有说服力。传统炮制可增强水蛭溶栓活性。     

蚯蚓纤溶酶部分质量标准的研究

采用亲和层析、凝胶层析对蚯蚓粗提液进行分离、纯化,得到蚯蚓纤溶酶纯化样品,并对其活性、含量、纯度等检测方法进行了试验研究,确定HPLC、SDS-PAGE电泳、280nm紫外吸收、琼脂糖-纤维蛋白平板法分别为蚯蚓纤溶酶的纯度、相对分子量、含量及活性的检测方法.同时又对纯化的蚯蚓纤溶酶进行了N-末端的测序,获得了重要的蚯蚓纤溶酶分子生物学的研究资料.     

益气活血方对大鼠凝血--纤溶系统影响的实验研究

目的 :研究中药益气活血方对血瘀证大鼠凝血 -纤溶系统的影响 ,探讨其防治心脑血管栓塞性疾病作用机理。方法 :用益气活血方混悬液给予大鼠灌胃 1周 ,第 7日同时对大鼠皮下注射 2次 0 .1 %肾上腺素 0 .0 8ml/kg,其间进行一次冷刺激 (冰水 ,0℃ ) 5 min,于第 8日晨复制成血瘀实验模型 ,并采血测定血凝血 -纤溶各指标。结果 :益气活血方能明显降低纤维蛋白原 ( Fib)含量 ,延长凝血酶原时间 ( PT)及白陶土部分凝血活酶时间 ( APTT) ,提高血浆组织型纤溶酶原激活物 ( t PA)、纤溶酶 ( PL)活性 ,降低纤溶酶原激活物抑制剂 ( PAI)活性、纤溶酶原 ( PLg)活性 ,且大剂量组优于小剂量组及对照组。结论 :益气活血方具有调节凝血—纤溶系统功能活性作用 ,这可能是临床上使用其防治缺血性心脑血管栓塞性疾病的机制之一。     

豨莶草抗血栓组分对凝血系统的作用研究

目的:通过血瘀模型动物灌胃给药,探讨豨莶草抗血栓组分(腺梗豨莶IIA)对凝血系统的影响。方法:通过给于冰水肾上腺素血瘀模型动物口服腺梗豨莶草抗血栓活性组分,测定血浆纤维蛋白原含量、抗凝血酶III活性、血浆纤溶酶原活性、血浆ET和NO含量等指标,观察豨莶草抗血栓组分对凝血系统、纤溶系统及血管内皮细胞的影响。结果:抗血栓组分能降低血浆纤维蛋白原含量,降低降低内皮细胞分泌ET,而对抗凝血酶III,纤溶酶原活性及内皮细胞合成一氧化氮的功能影响不大。结论:豨莶草抗血栓组分可能通过降低血浆纤维蛋白原含量抗凝血及降低内皮细胞分泌ET的途径抗血栓形成。     

微生物酶的方法提高红景天苷和酪醇的研究

目的 通过酶学方法短时间内提高红景天苷和酪醇的含量.方法 微生物固体和液体发酵法,通过硫酸铵沉淀法从黑曲霉H35和H42的发酵液中提取合成红景天苷和酪醇的红景天苷合成酶系和酪醇合成酶系.通过酶促反应提高红景天苷和酪醇的含量.结果 通过酶学的方法使得红景天苷和酪醇的含量分别提高了194.2%和83.8%.通过两种酶的协调作用使得红景天苷和酪醇的含量分别提高了139.9%和191.1 %.酪醇合成酶的最适反应pH和温度分别为5.5℃和40℃;红景天苷合成酶的最适反应pH和温度分别为5.0℃和45℃.酪醇合成酶在pH4～6.5温度低于65℃有较好稳定性;红景天苷合成酶在pR3.5～6.5温度低于60℃下具有较好的稳定性.结论 酶学方法可以在短期间内将红景天苷和酪醇的含量提高139.9%和191.1%,具有较高的实用经济效益.