缝隙连接蛋白的非通讯功能

缝隙连接是相邻细胞间通道结构,其"看家功能"是细胞通讯,又称缝隙连接细胞间通讯参与许多重要生物学过程的调节.近年大量研究证实,缝隙连接蛋白作为一个单独的功能单位,可调节细胞的生长、增殖、分化、凋亡等生物学过程.本文对缝隙连接蛋白上述功能作一综述,并探讨其可能机制.     

心肌缝隙连接蛋白43与心血管疾病的关系

心脏缝隙连接（gap junction,GJ）是细胞间进行电化学偶联及信息交换的重要途径,是介导心脏维持正常的协调性和同步性功能的重要桥梁及特殊通道。GJ主要由连接蛋白组成,而在心肌细胞水平上主要包括连接蛋白（connexin,Cx）43、Cx40和Cx45,但各自在心脏部位的表达分布和功能上却有所不同。现已有研究报道分析在许多心血管疾病中,GJ在结构和功能上的改变或异常与主要心血管事件的发生有直接关联。Cx含量及分布的减少、GJ调控因素的影响及GJ的侧一侧连接导致传导异向性变化等,均可能使心脏整体功能活动不同程度地下降或受到抑制,从而引起心脏疾病的发生和发展。     

预防重塑——心血管疾病治疗的新靶点

重塑作为一种病理现象,在很多心血管疾病的发生过程中起重要作用,预防重塑已成为新的心血管病的治疗靶点。本文就心衰时的心肌重塑、房颤时的心房重塑、心肌梗死时细胞凋亡导致的梗死面积的延展和血管重塑等现象予以综述。     

以神经为靶点，治疗心脏病

长期以来，人们控制心血管疾病，都聚焦在通过药物和手术的方法治疗动脉内部情况方面。现在，有研究人员提出新的观点，以神经作为靶点治疗心血管疾病例如治疗心力衰竭和高血压等。     

大鼠心肌急性缺氧时缝隙连接蛋白43磷酸化水平的改变及心律失常肽10对其影响

目的:研究急性缺氧时缝隙连接蛋白Cx43磷酸化水平的改变及抗心律失常肽(AAP)10对其影响。方法:大鼠体外心脏灌流模型,随机分为对照组、缺氧30min组、AAP10干预组,每组各9只。用Western-Blot技术检测Cx43磷酸化水平的改变,用免疫荧光双标结合激光扫描共聚焦成像技术显示Cx43分布的改变。结果:Western-Blot结果显示:缺氧30min组总Cx43蛋白表达下降(P<0.05),而去磷酸化的Cx43(NP-Cx43)蛋白表达不变。AAP10干预组能提高总Cx43蛋白表达(P<0.05),但对NP-Cx43蛋白表达无影响。而免疫荧光结果显示:缺氧30min组总Cx43和NP-Cx43蛋白分布均明显减少,且AAP10干预组仅能提高总Cx43蛋白表达,但对NP-Cx43蛋白无影响。结论:急性缺氧时细胞间通讯功能下降主要由于磷酸化的Cx43蛋白水平下降,而其中NP-Cx43蛋白的内化也可能参与该影响因素。而AAP10改善传导主要通过促进Cx43磷酸化而发挥作用。     

Rho激酶是心血管药物治疗的一个重要靶点

业已证实Rho激酶是小GTP结合蛋白Rho效应器之一。越来越多的资料表明Rho／Rh。激酶途径在多种细胞功能上起重要作用，如血管平滑肌细胞收缩、肌动蛋白细胞骨架形成、细胞粘附与迁移、胞质分裂和基因表达，而这些都可能涉及心血管疾病的发病机制。在分子水平，Rho激酶上调促进炎症、氧化应激、血栓形成和纤维化的各种因子，下调内皮型一氧化氮合酶。     

冷刺激对乳鼠心肌细胞缝隙连接蛋白43的影响及药物干预的研究

目的：在急性冷刺激乳鼠心肌细胞模型下,评价缝隙连接蛋白43（Connexin43,Cx43）的表达及研究急性冷刺激时乳鼠心肌细胞间传导的变化及其机制。
　　方法：乳鼠心肌细胞原代培养,随机分为正常对照组,实验4℃组;实验0℃组;并在实验4℃组和实验0℃组分别加入100 nmol/L抗心律失常肽（APP）10,每组乳鼠8只。采用流式细胞术（FCM）分析各组细胞的凋亡率,应用聚合酶链反应(PCR)和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Cx43及其磷酸化水平在基因和蛋白上的表达。
　　结果：FCM结果显示：实验4℃组和实验0℃组随着冷刺激程度加强和低温时间的延长,心肌细胞的凋亡率增加;同时PCR结果显示：实验4℃组和实验0℃组Cx43 mRNA呈现不同程度的下降;Western blot结果显示：实验4℃组和实验0℃组随着刺激强度和低温时间的延长,Cx43蛋白表达亦出现不同程度的下降;磷酸化的Cx43(P-Cx43)蛋白表达亦下降,而AAP10干预后可提高两组Cx43和P-Cx43蛋白的表达。
　　结论：心肌细胞在急性冷刺激时Cx43在基因和蛋白水平上表达均有不同程度的下降,P-Cx43表达亦下降,而AAP10能提高Cx43和P-Cx43蛋白的表达从而改善细胞间的传导。     

整合素的作用及其应用:心血管疾病治疗新靶点

整合素家族受体是细胞表面重要的黏附分子,在细胞和微环境之间的相互作用中发挥着重要作用.整合素与多种人类疾病密切相关,如心血管疾病、血栓症、炎症、癌症等.是重要的药物靶点.本文主要论述整合素在心血管疾病中的研究进展.     

以内皮细胞微粒为靶点治疗内皮功能障碍的研究进展

内皮细胞微粒是内皮细胞在活化或凋亡时释放的一种直径约0.1～1μm的微粒。目前的研究证实内皮细胞微粒是内皮功能障碍的一种关键标志,早期改善内皮细胞功能是防治内皮功能障碍的关键途径,本文就针对以内皮细胞微粒为治疗靶点的国内外研究现状做一概述。     

中药以肝星状细胞为靶点的抗肝纤维化研究进展

肝纤维化的形成主要是由于肝炎病毒、酒精、药物与毒物、血吸虫、代谢和遗传、胆汁郁积、自身免疫性肝病等多种损伤因素长期慢性刺激肝脏，使肝窦内肝星状细胞（HSCs）活化，胶原等细胞外基质（ECM）代谢失衡，生成大于降解，促使肝脏ECM沉积与组织结构重构。而HSCs活化和功能改变是肝纤维化发生发展的关键，对HSCs的干预无疑将成为防治肝纤维化的核心措施之一。     

调节性T细胞—动脉粥样硬化治疗的新靶点

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是血管壁的一种慢性炎症疾病,免疫系统在其发生发展中起着重要的作用。有研究表明,调节性T(regulatory T,Treg)细胞参与了AS的炎症反应,通过下调其反应可延缓疾病的进程。本文综述了近年有关Treg细胞与AS关系的文献,探讨了Treg细胞在AS发生发展中的重要作用,说明了CD3对Treg细胞增殖的影响及与AS的关系,提出了AS治疗的免疫学新靶点。     

线粒体相关内质网膜:心血管疾病治疗的新靶点

线粒体相关内质网膜是指内质网和线粒体之间高度动态的紧密连接部分,参与维持内质网和线粒体的正常功能,与细胞脂质代谢、钙稳态、线粒体动力学、自噬和凋亡、内质网应激和炎症等密切相关。研究显示线粒体相关内质网膜功能异常或者数量和结构改变参与心血管疾病的发生发展。本文总结了线粒体相关内质网膜的功能,阐述了其在心血管疾病中的作用及可能机制,为线粒体相关内质网膜成为心血管疾病治疗的新靶点提供理论参考。     

磷脂转运蛋白作为动脉粥样硬化性疾病治疗靶点的研究从实验室走向临床

磷脂转运蛋白(phospholipid transfer protein,PLTP)的研究始于1970年美国康奈尔大学的两位学者Wirtz和Zilversmit,他们发现这个蛋白可以介导磷脂在细胞器、细胞膜和血浆脂蛋白之间的交换。但其对动脉粥样硬化的影响一直争论不休,直至30年后的2001年作者所在美国哥伦比亚大学的Jiang、Qin和Tall等学者发现该蛋白在三个动脉粥样硬化模型鼠的表达缺陷     

建立缝隙连接蛋白43基因定点突变细胞株的研究

目的定点突变是通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的 DNA片段中引入包括碱基的添加、删除、点突变等所需变化。体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具,也是实验室中改造/优化基因常用的手段。连接蛋白43(connexin43,Cx43)是心脏表达最丰富的连接蛋白,主要分布在心室,其构成的缝隙连接(gapjunction,GJ)在心肌细胞中的电偶联中起着非常重要的作用。近年来的研究表明干细胞移植治疗心肌梗死时,细胞间电偶联障碍是导致心律失常副作用的一个重要原因。己知Cx43的磷酸化状态可以调节通道的功能,磷酸化常见的是368位点的丝氨酸磷酸化。我们对缝隙连接蛋白43基因(Cx43)的特定碱基进行定点改变,从而改变对应的氨基酸序列,并对表达产物进行研究,以利于将来探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)中转染突变的Cx43对其向心肌分化能力的影响,及其磷酸化状态是否对心律失常有调控作用。方法设计引物,sense:5’-CTTCAAGCAGAGCCAGCAGTCGTGCCAGCA-3’,antisense:5’TGCTGGCACGACGACTGCTGGCTCTGCTTGAAG-3’。以已构建的Pcdh-Cx43为模板,使用Stratagene基因定点突变试剂盒进行PCR扩增,用DpnI酶识别甲基化位点并将其酶切,PCR产物转化后筛选阳性克隆,提取质粒测序验证。在293FT中与其它3个穿梭质粒一起包装,再将慢病毒颗粒转染BMSCs,用嘌呤霉素筛选出阳性克隆BMSCs-mCx43,在压力培养基下传代培养。用流式细胞仪检测BMSCs-mCx43的干细胞相关表面标记表达情况,同时用western blot检测BMSCs-mCx43的蛋白表达情况。结果测序结果显示突变位点正确,荧光照片显示90%的293FT表达绿色荧光。50%的BMSCs有绿色荧光蛋白的表达。流式细胞仪检测示BMSCs-mCx43细胞CD29阳性表达94%±0.8%,CD73阳性表达92%±0.7%,几乎不表达CD34和CD105,与未转染病毒的BMSCs和转染空病毒载体的BMSCs的表面标记一致。Western blot结果     

肝星状细胞增殖过程中的信号转导及可能的抗肝纤维化治疗靶点

如何逆转肝纤维化是临床面临的重要问题，其发病机制是一个复杂的级联反应，包括肝星状细胞（HSC）活化、增殖、表达各种信号分子及产生大量以胶原为主的细胞外间质（ECM）成分。活化HSC的增殖受一系列细胞信息分子和细胞内信号传导的调控，作用于这些信号及其转导过程或阻断这些信号转导级联反应的重要环节正成为防治肝纤维化的重要策略。本文就活化肝星状细胞增殖过程中所涉及的主要细胞内信号转导及可能的抗肝纤维化治疗靶点作一综述。     

心脏生物标志物在心血管疾病诊断治疗中的进展

近20年来,随着生物科学技术的飞速发展,心脏标志物领域出现以肌钙蛋白（cTn）为核心、肌红蛋白、高敏C-反应蛋白（hsCRP）、利钠肽（BNP）等为代表的一系列新标志物,促进了心血管疾病诊断水平的提高,也使鉴别诊断、判断预后的能力大大提高。特别是cTn的检测出现后,临床提出急性冠状动脉综合征,扩展了诊断治疗观念,     

以心室收缩不同步作为心脏再同步化治疗筛选标准的疗效评价

目的:以心室收缩不同步作为心脏再同步化治疗的筛选标准,观察心脏再同步化(cardiac resynchronization therapy,CRT)治疗慢性心力衰竭(CHF)的临床疗效。方法:26例CHF患者经过严格的超声筛选后行CRT,全部患者均经冠状静脉窦植入左心室电极,电极位置尽量与超声提示的左心室收缩最延迟部位一致,术后随访(13.8±10.4)个月。结果:2例患者随访中死亡,其余24例患者治疗后心功能、患者活动度、心率变异性均明显改善(P0.05),左心室舒张末内径从(77.0±9.4)mm缩小至(68.7±10.2)mm(P0.05),左心室内各室壁收缩期达峰时间标准差从(48.4±17.9)ms减少至(30.2±18.6)ms(P0.05)。术后1个月左心室16,12及6节段达最小容积点时间的标准差和最大时间差均有明显减低(P0.05)。结论:CRT是CHF治疗的有效方法,术前应用常规超声心动图及组织多普勒成像技术(TDI)等多项技术来评价患者心室运动的失同步是CRT的有效筛选手段。     

以TGF-β为靶点的抗肝纤维化治疗

肝脏纤维化是慢性肝病最重要的病理特征，转化生长因子-β（TGF-β）通过对肝星状细胞／肌成纤维细胞及与其他细胞因子之间的相互作用，对肝纤维化的形成和发展起着至关重要的作用。对TGF-β认识的逐步加深，使得肝脏纤维化的治疗又有了新的突破。本文就近年来TGF-β的研究进展以及以其为靶点治疗肝纤维化的现状作一综述。     

雌激素替代治疗对心血管疾病的利与弊

心血管疾病是老年人的第一位死因。早期研究发现,女性在绝经前其心血管疾病的发病率与死亡率显著低于同龄男性;绝经后心血管疾病发病率则明显增加,甚至超过了同龄男性。小型临床试验、体外基因及细胞试验也证实,雌激素对心血管系统有较强的保护作用。因此,上世纪末至本世纪初,