组织工程骨修复种植体周围骨缺损的应用研究

应用骨组织工程修复种植体周围骨缺损为种植技术开辟了一条崭新途径.本文就骨组织工程三大要素的特点、相互作用以及应用组织工程骨修复即刻种植术中种植体周围骨缺损的研究进展作一综述.     

粗糙钛表面纳米掺锶羟基磷灰石涂层对 BMSCs成骨分化的影响

目的研究粗糙钛表面纳米掺锶羟基磷灰石涂层对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM SCs)增殖、成骨分化的影响。方法采用电化学沉积技术在粗糙钛表面沉积薄层纳米掺锶羟基磷灰石、纳米羟基磷灰石,用场发射扫描电子显微镜观察其表征,分析锶元素修饰的纳米羟基磷灰石涂层对大鼠BM SCs增殖、碱性磷酸酶活性、矿化结节形成和成骨相关蛋白骨钙素分泌的影响。结果纳米掺锶羟基磷灰石涂层和纳米羟基磷灰石涂层不影响细胞增殖,与目前临床广泛应用的金属钛种植体粗糙表面一样具有良好的生物相容性。相较于纳米羟基磷灰石涂层和粗糙组,纳米掺锶羟基磷灰石涂层可增强BMSCs碱性磷酸酶活性,促进矿化结节形成,提高细胞骨钙素的分泌。纳米羟基磷灰石涂层亦表现了比粗糙组更好的生物活性。结论应用电化学沉积技术进行纳米掺锶羟基磷灰石涂层的制备,可以促进BMSCs成骨分化、种植体周围新骨早期形成,提高种植体骨组织结合率。     

高压氧和骨髓浸泡对游离植骨种植体骨整合的影响

[目的]探讨高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)和骨髓浸泡对羟基磷灰石涂层(HA-coated)种植体在非血管化自体游离移植骨上形成骨整合的影响.[方法]选用4只成年杂种狗,按完全随机设计裂区试验分为2组,将狗定为一级实验单位,接受A因素(HBO)2个水平的处理(A1:HBO治疗,A2:不用HBO治疗);将游离植骨设定为二级实验单位,接受B因素(自体骨髓浸泡)2个水平的处理(B1:进行骨髓浸泡:B2:不进行骨髓浸泡).术后10周处死动物,取羟基磷灰石涂层种植体移植骨标本,用组织学方法和生物力学测试方法评价移植骨与种植体的结合强度.[结果]组织学观察可见,HBO组种植体表面的新生骨组织已形成连续的骨界面,而非HBO组的新生骨组织尚未形成连续的骨界面;结合强度测试分析,在HBO治疗组,移植骨与种植体的结合强度较非HBO治疗组中的结合强度高(P＜0.05);而骨髓浸泡对移植骨与种植体的结合强度无明显增高(P＞0.05).[结论]HBO能促进HA种植体在游离植骨上形成骨整合,而自体骨髓浸泡对种植体在游离植骨上形成骨整合的促进作用未能检测到.     

自体骨髓干细胞移植治疗终末期肝病研究现状

目的:寻求治疗终末期肝病的最佳种子细胞。方法:本文就近年自体骨髓干细胞移植治疗肝病研究进展作一综述。结果和结论:自体骨髓干细胞移植是治疗终末期肝病的最佳选择。     

自体骨髓干细胞移植治疗终末期肝病的研究进展

成人骨髓干细胞(bone marrow-derived stem cell,MSCs)最早由Friedenstein等于1966年发现并提出.他将MSCs描述为由骨髓分化而来具有克隆源性、可塑性及黏附性的细胞,并且具备分化为骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞的潜能.     

纯钛表面加载RGD多肽的体外实验研究

目的 探讨纯钛表面加载RGD多肽进行生物功能化修饰的可行性.方法 借助电化学和分子自组装技术在纯钛表面构建TiO2纳米管-聚多巴胺-RGD多肽活性层,采用场发射扫描电镜(FESEM)、X射线光电子能谱(XPS)对各组钛片进行表面形貌和元素组成分析.培养小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs),对处理前后的钛片进行体外生物活性评价.结果 SEM和XPS显示,两步阳极氧化后在纯钛表面形成蜂窝多孔的TiO2纳米管,多巴胺在TiO2纳米管上自聚合成聚多巴胺涂层,同时向外接枝偶联RGD多肽,最终在纯钛表面成功形成了TiO2纳米管-聚多巴胺-RGD多肽活性层,体外细胞培养显示,该活性层有利于细胞黏附、增殖和分化.结论 RGD多肽功能化修饰的钛片有良好的生物相容性,这种钛表面功能化修饰法可望用于改善钛种植体,提高骨结合.     

小鼠骨髓间质干细胞的生物学特点及分化潜能鉴定

目的：建立一种体外分离，培养和鉴定小鼠骨髓间质干细胞的方法，探讨体外培养中间质干细胞的一些生物学特点，为利用MSCs促进创伤修复提供实验基础，方法：分离5－6周龄的小鼠胫骨，股骨，用预冷的IMDM培养基冲洗出骨髓，经密度梯度离心得到骨髓单个核细胞，接种后12－16d形成意志贴壁的成纤维状细胞，体外多向诱导分化鉴定分离的细胞，用传代的细胞进行生长曲线的测定，观察其接种贴壁率，检测细胞周期和超微结构。结果：体外传代培养的MSCs具有分化形成成骨和成脂细胞的能力；MSCs倍增时间约为38h，传代后12h贴壁达90％以上，细胞周期显示有80％细胞处于G0／G1期，并用电镜照片显示其超微结构。结论：在本实验条件下，体外培养的MSCs具有多向分化潜能,体外生长稳定，传代后的细胞适应性强，增殖较快，超微结构和细胞周期表现出较早期细胞特点，可望用于自体创伤促愈。     

骨髓移植治疗DMD模型鼠后骨髓重建和目的蛋白的表达

目的：观察在骨髓移植(bone marrow transplantation，BMT)治疗Duchenne型肌营养不良症(DMD)模型鼠mdx鼠后．骨髓重建过程及目的蛋白的表达情况方法：对致死剂量放疗的20只mdx鼠进行BMT，于放疗后2、4、7、14、21、30d断尾取血，观察血液性状，用红细胞计数板计数红、白细胞数量，瑞-姬染色观察血涂片中血细胞变化情况，于移植后2个月用荧光免疫组化染色观察受体骨骼肌dystrophin的表达情况。结果：白细胞对放疗的反应最敏感、下降最快，红、白细胞在放疗1周内下降到最低点、血容量减少1周后白细胞和血容量逐渐增多，1个月左右恢复正常在移植后2个月部分mdx鼠肌膜上有dystrophin的表达结论：对外周血象的观察，可间接、敏感地反映放疗效果及骨髓造血情况，从而推断BMT成功与否BMT可使骨髓重建后病损骨骼肌上表达目的蛋白，利于骨骼肌修复。     

自体骨髓干细胞移植的研究进展

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。按生存阶段顺序分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞是受精后胚胎内细胞团的衍生物。成年人和动物的许多组织和器官内,始终保留着未被分化的于细胞,即为成体干细胞。由丁成体干细胞的材料来源不像胚胎干细胞会毁坏所使用的胚胎,而且容易获得组织替代,冈而成体干细胞有着比预想更为广阔的应用前景。至今,科学家已成功分离到造血干细胞、神经干细胞、骨髓间质干细胞、上皮干细胞、肝干细胞、胰干细胞、肠干细胞、脂肪干细胞、牙髓干细胞、前列腺干细胞、嗅觉干细胞、角膜干细胞、胎盘干细胞,骨骼肌干细胞、心脏干细胞等。但目前研究和应用最广泛的是骨髓来源的骨髓干细胞（Bone Marrow Stem cells,BMS）。     

肝硬化患者骨髓间充质干细胞的体外培养及生长特性

目的 研究肝硬化患者骨髓间充质干细胞（MSCs）的体外扩增方法及其生长特性和特异性表面标记,为肝组织工程“种子细胞”的选择提供新的理论依据,为进一步研究自体骨髓间充质干细胞移植治疗肝衰竭时移植细胞在体内的调控机制打下基础。方法 无菌抽取4例肝硬化志愿者骨髓3～4mL,年龄30～40岁,利用密度梯度离心法联合贴壁筛选法逐步筛选MSCs,获取MSCs,倒置显微镜下逐日观察细胞生长特性,细胞计数,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面标志CD甜、CD45。结果 原代培养细胞生长潜伏期0～9d,对数增殖期为10～19d,生长平台期为20～24d;传代细胞生长周期较原代细胞快,细胞生长潜伏期为4～24h,对数增殖期为3～12d,13～15d进入生长平台期。肝硬化患者骨髓MSCs高表达CD44,低表达CD45。结论 肝硬化患者骨髓MSCs体外生长良好,性质稳定,可以作为“种子细胞”用于自体骨髓干细胞移植和生物人工肝系统。     

骨髓间充质干细胞移植治疗肝硬化的研究进展

临床上大多数慢性肝病最终发展为肝硬化。肝硬化进入失代偿后将导致肝功能衰竭,目前最有效的方法是肝移植,但由于供体短缺以及移植后相关的一系列并发症,导致患者生存质量不尽如人意。在此背景下以干细胞为基础的移植疗法成为当前国内外学者研究的热点之一,其中骨髓间充质干细胞移植治疗肝硬化具有一定的效果。现对骨髓间充质干细胞基因移植治疗的原理、治疗方法和治疗现状及其发展前景作一综述,旨在为其进一步应用提供理论依据。     

神经生长因子联合牙髓干细胞可促进大鼠种植体周围骨结合

目的 研究神经生长因子（NGF）联合牙髓干细胞（DPSCs）调节种植体周围骨结合的作用及机制。方法 培养SD大鼠的DPSCs并随机分3组,每组实验重复4次。对照组：不含药物的培养基处理;NFG组：含有NGF的培养基处理;NFG+K252a组：含有NGF及TrkA拮抗剂+K252a的培养基处理。成骨诱导后检测钙结节,Western blot检测RUNT相关转录因子2（RUNX2）、骨钙素（OCN）的表达量。SD大鼠建立股骨种植模型并分为对照组、DPSCs组、DPSCs+NGF组、DPSCs+K252a组、DPSCs+NGF+K252a组,8只/组。干预4周后进行种植体周围骨组织的micro-CT检查及HE染色并采用Western blot检测RUNX2、OCN表达量。结果 NGF组DPSCs的钙结节数目及RUNX2、OCN的表达水平均高于对照组（P<0.05）;NGF+K252a组DPSCs的钙结节数目及RUNX2、OCN的表达水平均低于NGF组（P<0.05）。DPSCs组及DPSCs+NGF组大鼠种植体周围骨组织的骨矿密度（BMD）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁数量（Tb.N）及RUNX2、OCN的表达水平均明显高于对照组（P<0.05）且DPSCs+NGF组种植体周围骨组织的BMD、Tb.Th、Tb.N及RUNX2、OCN的表达水平高于DPSCs组（P<0.05）;DPSCs+K252a组种植体周围骨组织的BMD、Tb.Th、Tb.N及RUNX2、OCN的表达水平与DPSCs组无显著差异（P>0.05）;DPSCs+NGF+K252a组种植体周围骨组织的BMD、Tb.Th、Tb.N及RUNX2、OCN的表达水平均明显低于DPSCs+NGF组（P<0.05）。结论 NGF联合DPSCs能够促进大鼠种植体周围骨结合,NGF通过TrkA促进DPSCs成骨分化是可能的分子机制。     

间充质干细胞在疾病治疗中的作用

骨髓干细胞具有高度的自我更新能力和多向分化潜能,加之取材、分离方便,已成为细胞治疗和基因治疗的首选靶细胞。早期干细胞研究主要集中在骨髓造血干细胞上,后来发现骨髓中除造血干细胞外,还存在骨髓间充质干细胞(mesen-chymal stem cells,MSCs),是一种来自中胚层发育的早期干     

共培养诱导人骨髓多能成体祖细胞分化为肝细胞样细胞

目的探索人骨髓来源多能成体祖细胞（ZHJ-MAPC）在与人肝细胞系L02在体外共培养条件下诱导分化为肝细胞的可行性。方法（1）间接共培养：将ZHJ-MAPC和人肝细胞系L02仅培养液相通行间接共培养。分别于培养第1、3、5、7天应用免疫细胞化学法鉴定ZHJ-MAPC的白蛋白、甲胎蛋白（AFP）、细胞角蛋白-18（CK-18）、细胞角蛋白-19（CK-19）等肝细胞特征性表型的表达情况。（2）直接共培养：将荧光染料羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE,绿色）标记的ZHJ-MAPC与L02细胞（均为1×10^4个／ml）按照各50％比例混合行直接共培养。5d后采用荧光免疫细胞化学SABC-Cy3法（红色）双标后在激光共聚焦显微镜下分别观察ZHJ-MAPC表达白蛋白、AFP、CK-18的情况。结果（1）间接共培养结果：AFP在ZHJ-MAPC间接共培养第1天即表现为强阳性,随后表达逐渐减弱;白蛋白在第5天达到高峰;CK-18在第5天开始出现阳性,第7天出现较强表达。CK-19在各时间点均为阴性。（2）直接共培养结果：共培养第5天在检测白蛋白和CK-18表达情况时呈黄色荧光的阳性细胞即向肝细胞分化的ZHJ-MAPC出现较多,而AFP阳性表达则较少。结论人骨髓来源的ZHJ-MAPC与人肝细胞系L02行间接或直接共培养均能够诱导其向成熟肝样细胞定向分化。     

兔骨髓基质干细胞体外培养的生物学特性

目的：分离培养兔骨髓基质干细胞并探讨其体外生物学特性。方法：通过梯度密度离心法分离兔骨髓基质干细胞，体外培养、扩增，观察细胞的大体形态和超微结构；通过绘制细胞生长曲线、MTT实验来研究细胞的增殖能力争代谢活性。结果：兔骨髓基质干细胞呈梭形。胞质内有丰富的粗面内质网和线粒体，具有很强的增殖能力和代谢活性。结论：本实验方法取材方便，能较容易地获得大量的兔骨髓基质干细胞。     

自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病足1例

患者 ,男性 ,5 6岁 ,因糖尿病足反复溃疡 13年、伴视物不清、肢体麻木、行走不稳 3d于 2 0 0 4年 6月 2 1日入院。入院后查患者右足背表皮约 5cm× 5cm无痛感大泡 ,双足及小腿麻木、发凉 ,保护性感觉明显减退 ,踝部及小腿皮肤多处溃疡愈合后疤痕形成 ,色素沉着明显 ;血糖高 ,头颅CT示左侧侧脑室体旁、内囊前肢脑梗塞 ,踝肱压测定 (ABI)显示右侧为 0 99,左侧为 0 97,眼底荧光造影示双侧眼底微血管呈斑块状渗出 ,有微动脉瘤形成 ,核磁共振血管显影示双下肢大中动脉未见明确异常。诊断为 :① 2型糖尿病 ;②糖尿病性血管并发症 ;③糖尿病足 …     

自体骨髓间充质干细胞介入移植治疗脑梗死临床研究

目的:观察应用自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)介入移植治疗脑梗死的临床疗效和安全性。方法:选择脑梗死患者120例,随机分为干细胞移植组和对照组各60例。对照组给予常规药物治疗,治疗组在常规药物治疗基础上给予重组人粒细胞集落刺激因子150μg皮下注射,待血常规白细胞升高达30×109/L左右后可抽取自体骨髓200 ml。自体骨髓经干细胞分离试剂盒处理获取间充质干细胞。采用自体骨髓间充质干细胞进行干细胞介入移植术,将间充质干细胞超选入脑病变供血动脉。于治疗前、治疗后1个月、6个月进行神经功能FIM评分,应用国际通用的功能独立性评定量表评定其运动和认知能力。结果:120例患者全部进入结果分析,移植组治疗后1个月、6个月功能独立性评定量表评分显著高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01),两组均无不良反应发生。结论:BMSCs移植可以一定程度地改善脑梗死患者症状,提高脑梗死患者的运动和认知功能,自体骨髓干细胞移植是安全有效的。     

组织干细胞模型的研究进展

目前 ,已经从许多组织或器官中成功地分离出干细胞 ,其中包括 :ES、造血干细胞、骨髓间充质干细胞 (MSC)等。此外 ,还有近来研究渐多的神经干细胞 (NSC)、肌肉干细胞、成骨干细胞、内胚层干细胞及视网膜干细胞等。1　造血干细胞 (Hematopietic stem cell,HSC)　在所有干细胞中     

自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死患者心肌代谢及收缩功能的变化

目的:探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)和单个核细胞(BMMNCs)经梗死相关冠状动脉(IRA)移植对冠心病心肌梗死患者近、中期心功能、心肌代谢的影响及其安全性。方法:对14例冠心病伴心肌梗死史1~35个月的患者。细胞移植组8例,通过冠脉系统将BMSCs和BMMNCs植入心肌梗死区,余6例常规治疗。两组患者均于术前和术后3,8个月行SPECT双核素心肌显像、二维超声心动图、6 m in步行试验及动态心电图检查。结果:移植组患者在梗死相关冠脉开通后注入干细胞,8例心功能从Ⅱ~Ⅳ级提高至Ⅰ~Ⅱ级,6 m in步行试验从(320.72±60.47)m提高至(406.88±68.31)m,6个月后又提高至(484.79±81.00)m。6例前壁心梗患者3,8月后LVEF由术前的42.5%提高至49.5%和54%;术后3,8月心肌双核素检查缺损区占整个心肌体积由术前的45.5%减少至39%和25%。6例对照组患者术后3月EF较术前提高,心肌双核素检查缺损区占心肌体积减少,术后8月与术后3月无明显改变。2例下壁心肌梗死患者经干细胞移植临床效果不明显。结论:自体BMSCs和BMMNCs经冠脉移植治疗冠心病心肌梗死,可以显著改善前壁心肌梗死患者左室收缩功能和心肌代谢。