clpP基因对变异链球菌生长及氧化应激的影响

目的观察变异链球菌clpP基因缺陷株的生长特点;比较标准株与clpP基因缺陷株在氧化应激条件下的生长情况的差异。方法将两菌株分别培养在普通TPY液体培养基和含有H2O2终浓度0.0 005%的TPY培养基中,37℃微需氧条件下培养,从接种入培养基开始以2 h间隔采用酶联免疫检测仪在600 nm下测定各菌株的生长曲线并比较其生长情况的差异。结果①缺陷株在TPY液体培养基中生长时,生长周期发生改变,对数期峰值提前且此阶段生长速度较标准株快(P<0.05),而标准株的对数期峰值及稳定期A值均明显高于缺陷株(P<0.05);②标准株和缺陷株在含有H2O2的TPY液体培养基中生长时生长能力较无H2O2条件下明显降低(P<0.05)。结论 clpP基因的失活一定程度上导致变异链球菌生长能力和氧化应激能力的降低。     

luxS基因在变形链球菌生物膜形成中的硫代谢作用

目的 通过比较在不同条件培养基中变形链球菌Ingbritt C国际标准株及luxS基因缺陷株24 h生物膜形成的厚度及平均荧光强度,探讨luxS基因在变形链球菌生膜形成中的硫代谢作用.方法 建立以圆形玻片为载体的生物膜模型,通过营养补充实验培养两菌株生物膜,利用激光共聚焦扫描显微镜观察测定两菌株生物膜厚度和平均荧光强度.结果 当分别加入一定浓度半胱氨酸、蛋氨酸时,缺陷株生物膜厚度有明显增长,但未恢复至标准株水平;加入半胱氨酸,标准株生物膜厚度有所增加;当加入S-腺苷甲硫氨酸时,缺陷株与标准株生物膜的厚度均降低.结论 在变形链球菌生物膜形成中,luxS基因不但具有密度感应功能,在硫代谢中也起着重要作用.     

变异链球菌luxS基因对牙菌斑生物膜形成的影响研究

目的敲除变异链球菌中的luxS基因,构建luxS突变株,测试变异链球菌失去luxS基因后形成牙菌斑生物膜的能力。方法把luxS基因敲除重组质粒转入变异链球菌UA159中,得到转化菌,在含有卡拉霉素的培养基中进行筛选,得到变异链球菌luxS基因突变株,并利用聚合酶链式反应（PCR）和哈氏弧菌发光实验对变异链球菌luxS突变株进行检测,通过扫描电镜,对不同时间段变异链球菌luxS突变株和变异链球菌UA159在BHIS培养液（含1%蔗糖的脑心浸液）和BHIG培养液（含1%葡萄糖的脑心浸液）中形成的生物膜进行比较。结果成功的构建了变异链球菌luxS突变株,在BHIS培养液中,变异链球菌luxS突变株形成生物膜的能力比变异链球菌UA159弱,而在BHIG培养液中,二者无显著差异。结论变异链球菌luxS基因对牙菌斑生物膜的形成有重要的影响,并且luxS基因对变异链球菌生物膜的调控是蔗糖依赖型的。     

变异链球菌LuxS突变株的构建及其耐酸性的测试

目的:把构建好的含有luxS基因两侧同源序列的重组质粒转入变异链球菌进行luxS的敲除以形成luxS突变株,同时测试变异链球菌失去luxS基因后在pH 3.0酸性环境中的生长情况.方法:把含有luxS基因两侧同源序列的重组质粒(pMD-19TUKD)转化入变异链球菌UA159中,利用间源重组,等位基因交换进行luxS基因敲除,再对此突变株进行PCR的检测,利用测试A值、梯度稀释和平板计数法,对变异链球菌luxS突变株和野生型的变异链球菌在pH 3.0酸性环境下生存情况进行比较.结果:成功的构建了变异链球菌luxS的突变株,并且变异链球菌失去luxS基凶后,在酸性环境下的生存能力相对于野生型的变异链球菌低.结论:LuxS基因对变异链球菌的耐酸性起着重要作用.     

变形链球菌luxS基因在硫代谢中的功能研究

目的 采用前期实验已构建成功的luxS基因缺失的变形链球菌突变株,分析luxS基因在口腔变形链球菌的密度感应及硫代谢中的双重作用.方法 在不同硫限定条件培养基(半胱氨酸、蛋氨酸、标准株无菌上清液、S-腺苷高半胱氨酸、S-腺苷甲硫氨酸,空白对照为脑心浸液培养基)中分别对不同培养时间(24、48 h)的变形链球菌标准株和突变株的生长进行吸光度值(A值)的测定与分析,通过激光扫描共聚焦电子显微镜观察测定并比较不同培养条件下两菌株生物膜厚度的差异.结果 在半胱氨酸培养基中培养48 h,突变株生长A值及生物膜厚度均有所增长,分别为(1.301±0.009)和(45.009±0.429)μm,但未及标准株水平(P＜0.05);在蛋氨酸及S-腺苷高半胱氨酸培养基中培养24 h,突变株的生长A值及生物膜厚度与空白对照相比均有所补充,在蛋氨酸培养基中突变株的生长A值及生物膜厚度分别为(0.448±0.028)和(37.068±2.392)μm,在S-腺苷高半胱氨酸培养基中,突变株的生长A值及生物膜厚度分别为(0.460±0.005)和(27.343±1.107)μm,但均未及标准株水平(P＜0.05),48 h时达到标准株水平;在标准株上清液培养基中突变株的生长A值及生物膜厚度均明显增高且超过标准株水平;在S-腺苷甲硫氨酸培养基中两菌株的生长A值及生物膜厚度与空白对照相比均有不同程度的降低.结论 luxS基因在变形链球菌中不但具有密度感应功能,在硫代谢方面也发挥着一定作用.

Abstract：

Objective To investigate the function of luxS in sulfurmetabolism of Streptococcus mutans (Sm). Methods The growth with absorbency(A) of the standards and mutant strains was measured and analyzed in the sulfur-limited defined medium at different periods. The laser scanning confocal microscopy( LSCM ) was used to observe and compare the biofilm thickness of the two kinds of strains at different culture conditions. Results The significant increases in the thickness of mutant strain biofilm and its growth were observed after the addition of cysteine, but did not reach the standards strain levels ( P ＜0. 05). The growth and the biofilm thickness of the mutant strains were ( 1. 301 ±0. 009) and (45.009 ±0. 429) μm. When methionine and S-adenosylhomocysteine of certain concentrations were respectively added, the biofilm thickness and the growth of mutant strain were raised but did not reach the level of the standards strain at 24 h( P ＜0. 05 ), but at 48 h they did. When the methionine was added in the mutant strains for 24 h, the biofilm thickness and the growth of mutant strain were (0. 448 ± 0. 028 ) and ( 37. 068 ± 2. 392 ) μm, as for the adding of S-adenosylhomocysteine were (0. 460 ± 0. 005 ) and ( 27. 343 ±1. 107 ) μm. When adding the supernatant fluid of standard strains, the biofilm thickness and the growth levels of mutant strain were much higher than those of the standards strain. The biofilm thickness and growth of both kinds of strains decreased after the addition of S-adenosylmethionine. Conclusions luxS gene plays not only a role in quorum sensing but also a role in sulfurmetabolism.     

变异链球菌luxS基因对多糖基质代谢的影响

目的:利用变异链球菌luxS基因敲除的突变株,研究该基因缺陷对于生物膜多糖基质的影响。方法:通过向生物膜培养悬液中加入与细菌直径相近的磁性小珠,利用这些小珠由于生物膜约束而在磁场中位移受限的原理,采用生物膜定量分析仪,定量比较luxS突变株与野生株在利用外源性碳水化合物合成生物膜多糖基质能力方面的差异。采用SPSS 10.0软件包对实验数据,进行Dunnet双侧t检验。结果:变异链球菌luxS基因突变株与野生株均可利用碳水化合物合成胞外多糖基质,且外源性糖的加入可显著促进生物膜的形成。在加入1%蔗糖时,2菌株生物膜均在1h内迅速形成,而两者之间无显著差异。在加入1%葡萄糖时,两菌株的生物膜形成速度均有所加快,突变株的改变则更为明显。结论:luxS基因参与调节细菌对多糖基质代谢的过程,而其对于生物膜形成的影响也更多是通过调节多糖基质代谢实现的。     

变异链球菌的htrA和clpP基因对其生长和饥饿耐受的影响

目的:观察变异链球菌(下称变链菌)htrA-clpP双基因缺陷株的生长特点;比较缺陷株与标准株在饥饿条件下生长情况的差异。方法:将两菌株分别培养在含有10 g/L葡萄糖及无碳源的TPY培养基中,37℃微需氧条件下培养,从接种入培养基开始以2 h为间隔采用酶联免疫检测仪在600 nm下测定各菌株在两种生长条件下的生长曲线并比较其生长情况的差异,同时在各时间点使用葡萄糖氧化酶法试剂盒测定在含葡萄糖培养基中生长的两菌株耗糖情况并比较其差异。结果:①缺陷株在含10 g/L葡萄糖和无碳源TPY培养基中生长时,生长周期都发生了改变,对数期峰值提前且此阶段生长速度较标准株快(P<0.05),而标准株的对数期峰值及平台期A值均明显高于缺陷株(P<0.05);②标准株和缺陷株在无碳源条件下生长时细胞的生长能力较葡萄糖条件下明显降低(P<0.05);③缺陷株消耗葡萄糖的速度较标准株快(P<0.05)。结论:htrA和clpP基因缺陷可在一定程度上导致变链菌的生长及抗饥饿能力降低。     

乳牙高毒力变异链球菌HtrA缺陷株的构建及转化力的研究

目的:构建乳牙高毒力变异链球菌HtrA基因缺陷株(简称HtrA缺陷株),比较HtrA缺陷株和高毒力株的转化力。方法:将乳牙变异链球菌HtrA高毒力菌株复苏,厌氧培养,应用基因同源重组技术进行HtrA基因缺陷株的构建。以含有HtrA基因的变异链球菌标准株DNA作为参照进行PCR鉴定。将乳牙变异链球菌HtrA高毒力株与HtrA缺陷菌株分别在TPY液体培养基中增菌,厌氧培养,以菌落计数来比较二者的转化力。结果:凝胶自动成像分析结果显示,HtrA缺陷株在500 bp未出现HtrA基因片段的特异性电泳条带,而在710、1 200、1 100 bp处分别出现了红霉素抗性基因片段、HtrA基因上游引物序列合并红霉素抗性基因引物HtrAUF/P1以及HtrA基因下游引物序列合并红霉素抗性基因引物HtrAUR/P2的特异性条带。而HtrA高毒力株的表现则相反。转化力检测结果显示:6、9、12、24、48 h,高毒力株的菌落数量均明显多于HtrA基因缺陷株(P<0.05)。结论:通过基因重组等方法可以将变异链球菌高毒力株中的Htr A基因敲除,构建高毒力变异链球菌Htr A基因缺陷株;变异链球菌高毒力株的转化力高于HtrA基因缺陷株,提示HtrA与变异链球菌的致龋性有关。     

变异链球菌luxS基因敲除重组质粒的构建

目的:构建一个含有抗卡那霉素基因和变异链球菌luxS基因上下游区同源序列的重组质粒,以便以后转化入变异链球菌进行luxS的敲除.方法:设计引物,以质粒pEGFP-N1为模板,进行PCR得到抗卡那霉素的DNA片断,再以变异链球菌的DNA为模板,PCR得到luxS基因上下游序列,最后将这3 段DNA片断分别按顺序插入到pMD19-T载体的多克隆酶切位点中,转化大肠杆菌的感受态中,通过在卡那霉素和氨苄青霉素的培养基进行筛选.结果:kana 基因和luxS基因两侧同源序列成功连入到pMD19-T载体相应酶切位点,酶切、测序结果正确.结论:成功构建变异链球菌luxS基因敲除重组质粒,为将来构建变异链球菌luxS突变株打下基础.     

htrA、clpP基因缺失对变异链球菌耐酸性的影响

目的 探讨htrA、clpP基因缺失对变异链球菌耐酸性的影响.方法 变异链球菌标准株及htrA缺陷株、clpP缺陷株培养至对数中期分成两组,一组作为实验组进行5 h预酸化处理(pH:5.5),一组作为对照组在普通乳酪消化胨酵母(TPY)培养液中处理5 h,然后将两组菌株在致死性酸环境(pH:3.0)处理3 h,每隔1 h取菌液采用平板活菌计数法测定活菌数,计算得到生存率,统计学分析.结果 3 h内.未经预酸化处理三种菌株生存率相比差异无统计学意义(P>0.05),预酸化处理后,与标准株相比htrA缺陷株和clpP缺陷株生存率都有下降(P<0.05),两种缺陷株相比生存率差异无统计学意义(P>0.05),预酸化处理的标准株和htrA缺陷株生存率均明显高于未经预酸化处理(P<0.05),预酸化处理对生存率的影响大于两种基因分别缺失(P<0.05).结论 与变异链球菌标准株相比,htrA缺陷株和clpP缺陷株耐酸能力有不同程度的下降.     

Evidence of the validity of a model of determinants of quality of restorative dental care

A model describing the relationship between self-reported quality of restorative dentistry and dentist characteristics for 119 Montana general dentists is presented. The best predictors formed a significant model explaining 22% of the variance of the quality measure. Results are contrasted with a previous estimation of the model for 102 Washington general practitioners. Evidence for the external validity of the model is presented.     

口底癌34例临床分析

目的探讨口底癌的临床特性、治疗方法及预后。方法对我院自1992—2002年住院治疗的34例口底癌患者进行回顾性分析。结果34例口底癌患者中,男28例(82.4%),女6例(17.6%),男女比为4.7∶1,平均发病年龄58岁。发病部位:前口底22例(64.7%),后口底12例(35.3%)。淋巴结转移率41.2%。单纯手术组、化疗加手术组、放疗加手术组、化疗加手术加放疗组的5年生存率分别为45.5%、60.0%、50.0%、62.5%。结论口底癌以中老年患者好发,男性居多。易发生淋巴结转移,综合疗法疗效较好。     

平阳霉素对血管内皮细胞急性损伤后酶活性变化的实验研究

目的：探讨平阳霉素损伤血管内皮细胞的机制,为临床应用提供组织学依据。方法：选用成年Wistar大白鼠42只（其中6只为正常对照）,经肠系膜静脉分别注入平骒霉素（24只）或鱼肝油酸钠（12只）后,分别于注药后0．5,1,2,4,8,24h,切取肝脏组织,通过酶组化染色法测定肝窦内皮细胞的5’－核苷酸酶,肝细胞的琥珀酸脱氢酶（SDH）及乳酸脱氢酶（LDH）活性,结果：注入药液后,肝窦内皮细胞的5’－核苷酸酶,肝细胞的SDH和LDH活性随时间逐渐下降,其中平阳霉素组下降较轻微,结论：平阳霉素和鱼肝油酸钠都可对血管内皮细胞产生损伤,损伤的性质一样,均为非特异性,但平阳霉素损伤程度轻微,而鱼肝油酸钠严重。     

不同剂型玻璃离子水门汀溶解性比较研究

目的:研究、比较不同剂型玻璃离子水门汀的溶解性和表面微观形态改变,为临床使用提供依据.方法:将3M树脂加强型玻璃离子水门汀(水粉剂型)、GC玻璃离子水门汀(水粉剂型)及GC玻璃离子水门汀(双糊剂型)分别在人工唾液中浸泡30 d,冷热循环15000次,烘干测重,比较前后质量变化,计算溶解率,并用扫描电镜观察表面微观改变.结果:不同剂型的玻璃离子水门汀溶解率由高到低分别为3M树脂加强型玻璃离子水门汀(水粉剂型)、GC玻璃离子水门汀(水粉剂型)、GC玻璃离子水门汀(双糊剂型).3种玻璃离子水门汀经浸泡溶解后,SEM扫描表面微观形态可观察到GE玻璃离子水门汀(双糊剂型)表面形态改变较少,其他2组玻璃离子水门汀表面微观改变较多.结论:双糊剂型玻璃离子水门汀理化性能及溶解率均低于传统水粉剂型,是未来临床修复治疗的的良好选择.