泼尼松龙保护实验性变态反应性脑脊髓炎中轴突损伤的实验研究

目的探讨泼尼松龙对实验性变态反应性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）中枢神经轴突损伤的影响以及与炎症反应及髓鞘脱失的关系。方法用MOG35-55蛋白多肽免疫C57BL／6J小鼠复制多发性硬化（multiple sclerosis,MS）的动物模型EAE,采用轴突的Bielschowsky染色结合常规形态学染色和神经系统髓鞘染色比较治疗组与对照组的差别。结果泼尼松龙能促进EAE临床症状的缓解;减轻中枢神经轴突损伤,同时能清除病灶中浸润的炎症细胞及降低神经髓鞘的脱失。但是当停止用药后,该疾病又复发,轴突的损伤与未治疗对照组相同。结论泼尼松龙能诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎的缓解,对轴突损伤有短暂的保护作用。     

SD大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎模型的建立

目的探索SD大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）模型制作的试验方法与技术。方法采用完全福氏佐剂-脑脊髓匀浆，并辅以注射百日咳疫苗诱导SD大鼠EAE模型，比较不同的免疫原（同种或异种），注射方法（一次或多次注射）以及性别差异对模型制作的影响。观察和比较动物的神经症状和病理改变。结果使用同种脑脊髓匀浆，多次注射雌性SD大鼠诱导的模型，其发病持续时间分别为16～20天，10～14天；发病率为85％；复发率为46．67％，而致死率仅有5．88％；明显优于其他组别。病理学证实发病大鼠具有典型的脱髓鞘改变和胶质结节形成。结论使用同种脑脊髓匀浆，多次注射雌性SD大鼠诱导的动物模型其临床表现、病理特征、病程特点与人类的多发性硬化（MS）具有很大的相似性，适用于MS的研究。     

减毒百日咳杆菌对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠模型诱导的影响

目的 :探讨在不同部位加用减毒百日咳杆菌对EAE非敏感品系Wistar大鼠EAE模型诱导影响。方法 :免疫组除常规免疫外在足背皮下或腹腔注射减毒百日咳杆菌 0 .0 5ml/只 (含 5 .0× 10 10 个菌体 )。结果 :足背皮下注射百日咳组发病率为 87.5 % ,发病时间为免疫后 (10 .2 5± 1.6 7)d ,而腹腔组分别为 35 .7%和 (14 .8± 1.79)d。结论 :足背皮下注射百日咳毒素诱导EAE模型适合在国内开展。     

减毒百日咳杆菌对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠模型诱导的影响

目的:探讨在不同部位加用减毒百日咳杆菌对EAE非敏感品系Wistar大鼠EAE模型诱导影响.方法:免疫组除常规免疫外在足背皮下或腹腔注射减毒百日咳杆菌0.05 ml/只(含5.0×1010个菌体).结果:足背皮下注射百日咳组发病率为87.5%,发病时间为免疫后(10.25±1.67)d,而腹腔组分别为35.7%和(14.8士1.79)d.结论:足背皮下注射百日咳毒素诱导EAE模型适合在国内开展.     

大鼠急性实验性变态反应性脑脊髓炎模型的建立

目的建立大鼠急性实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)模型.方法采用豚鼠脊髓和福氏完全佐剂混合乳剂一次性注入Wistar大鼠双足垫和尾部,同时腹腔注射左旋咪唑诱导大鼠发生EAE.观察发病情况;HE染色观察病理变化;Loyez氏髓鞘染色法观察髓鞘改变.结果空白对照组大鼠均未出现症状,HE染色大脑白质及脊髓无炎性细胞浸润;Loyez氏染色未见髓鞘脱失;模型组临床症状发生率为87.5%,HE染色见大脑白质及脊髓血管周围有大量炎性细胞浸润;Loyez氏染色见部分脱髓鞘改变.结论用豚鼠脊髓髓鞘蛋白和福氏完全佐剂混合乳剂同时辅以左旋咪唑成功地诱导Wistar大鼠发生急性EAE.     

左旋咪唑激发大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的初步观察

目的：观察左旋咪唑(LMS)激发大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的作用。方法：将Wistar大鼠分为5组：Control组、GPSCH(琢鼠全脊髓匀浆) CEA(完全福氏佐剂)组、LMS组、LMS CFA组和CFA组，采用动物行为学、常规HE和LFB染色法观察动物的发病情况与中枢神经系统(CNS)的病理变化情况。结果：①LMS CFA组2/10和GPSCH CFA组5／10大鼠出现典型的EAE行为学改变、CNS炎性细胞浸润和髓鞘脱失。②CFA组8／10大鼠出现住剂性关节炎症状，未见CNS炎性细胞浸洞和髓鞘脱失。③LMS组和Control组都未见动物行为学和CNS病理学改变。结论：LMS CFA可直接激发EAE，而不需要全脊髓匀浆的诱导。     

甲基强的松龙对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠脑组织Nogo-A及其受体NgR蛋白表达的影响

目的 探讨甲基强的松龙(MP)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑组织Nogo-A及其受体NgR蛋白表达的影响.方法 将60大鼠随机分为正常对照组(n=10)和实验组(n=50).实验组大鼠通过皮下注射粗制髓磷脂碱性蛋白建立EAE模型,造模成功大鼠随机分为EAE组(n=8)、大剂量甲基强的松龙(MP-H)治疗组(n=8)和小剂量甲基强的松龙(MP-L)治疗组(n=8).大小剂量MP分别在模型成功后7 d通过尾静脉注射,取脑前18 h、6 h各注射1次.各组标本均取视交叉前后2 mm脑组织.HE染色观察脑组织的细胞形态学变化;免疫组化染色,检测Nogo-A及其受体NgR蛋白的阳性表达量.结果 ①HE染色:正常对照组未见异常;EAE组大鼠脑组织可见炎性细胞浸润、血管套、脱髓鞘改变及胶质细胞增生.②免疫组化染色:与正常对照组比较,EAE组Nogo-A及NgR蛋白阳性表达明显增加(P<0.05);与EAE组比较,MP-L组Nogo-A及NgR蛋白表达无明显变化,而MP-H组Nogo-A及NgR蛋白表达明显降低(P<0.05).结论 EAE大鼠脑组织中Nogo-A及NgR蛋白表达增高;大剂量MP对EAE大鼠脑组织中Nogo-A及NgR蛋白的表达有一定的抑制作用,提示MP对EAE的作用机制可能与此作用有关.     

二黄胶囊对实验性变态反应性脑脊髓炎模型大鼠急性期炎性反应和髓鞘修复的影响

目的观察二黄胶囊对实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)模型大鼠的保护和治疗作用。方法 通过用豚鼠脊髓匀浆和完全福氏佐剂1∶1混合,制成乳剂作为免疫抗原,给Lewis大鼠4足垫内注射,建立大鼠EAE模型。观察二黄胶囊对EAE大鼠发病情况、神经组织病理变化及其血清髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)水平的影响。结果 二黄胶囊可显著改善EAE的发病程度,降低血清MBP的含量,与模型对照组比较其差异有统计学意义(P<0.05);二黄各剂量组大鼠大脑的2个取材部位、小脑、脑干炎性反应细胞浸润灶计数均明显少于模型对照组,差异具有统计学意义(P<0.01);二黄各剂量组大脑和小脑、脑干的髓鞘病变灶计数均明显少于模型对照组,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。二黄中剂量组脊髓纵切标本、二黄大、中剂量组脊髓横切标本的髓鞘病变灶计数明显少于模型对照组,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 二黄胶囊对EAE大鼠的体质量、动物发病情况和脑、脊髓病理改变具有明显改善作用。     

髓磷脂碱性蛋白的提取、纯化及鉴定实验性变态反应性脑脊髓炎动物模型的建立

本实验用Deibler方法通过脱脂、抽滤、酸化及低温高速离心从羊脑中提取出髓磷脂碱性蛋白(Myelin Basic Protein MBp),并进行了纯化及鉴定。用纯化的MBP致敏动物,成功地造成了家兔和豚鼠实验性变态反应性脑脊髓炎。     

慢性实验性变应性脑脊髓炎猴脊髓非病灶部位轴突损伤的机制

【目的】探讨多发性硬化非病灶部位轴突损伤及其机制。【方法】以8只慢性实验性变应性脑脊髓炎猴为研究对象,先对其进行磁共振扫描,然后对颈髓3-4节段进行苏木素-伊红染色观察炎症细胞浸润、银染色及神经丝免疫组化染色观察轴突损伤、双重染色标记凋亡的少突胶质细胞,同时观察轴突密度以及少突胶质细胞的凋亡情况。【结果】在颈髓3-4节段未发现有实验性变应性脑脊髓炎病灶、炎症细胞浸润及髓鞘脱失,但是存在轴突损伤以及少突胶质细胞的凋亡,轴突密度波动于1900～3232/单位面积,高倍视野下平均凋亡少突胶质细胞数为1.5～5.167。【结论】造成多发性硬化或实验性变应性脑脊髓炎非病灶部位轴突损伤的机制,可能与少突胶质细胞凋亡有关,而炎症细胞可能不参与非病灶部位的轴突损伤,髓鞘脱失并不是轴突损伤的必要条件。     

慢性实验性变应性脑脊髓炎猴脊髓非病灶部位轴突损伤的机制

【目的】探讨多发性硬化非病灶部位轴突损伤及其机制。【方法】以8只慢性实验性变应性脑脊髓炎猴为研究对象，先对其进行磁共振扫描，然后对颈髓3-4节段进行苏木素-伊红染色观察炎症细胞浸润、银染色及神经丝免疫组化染色观察轴突损伤、双重染色标记凋亡的少突胶质细胞，同时观察轴突密度以及少突胶质细胞的凋亡情况。【结果】在颈髓3—4节段未发现有实验性变应性脑脊髓炎病灶、炎症细胞浸润及髓鞘脱失．但是存在轴突损伤以及少突胶质细胞的凋亡，轴突密度波动于1900～3232／单位面积，高倍视野下平均凋亡少突胶质细胞数为1．5～5．167。【结论】造成多发性硬化或实验性变应性脑脊髓炎非病灶部位轴突损伤的机制．可能与少突胶质细胞凋亡有关，而炎症细胞可能不参与非病灶部位的轴突损伤，髓鞘脱失并不是轴突损伤的必要条件。     

左旋咪唑对实验性过敏性脑脊髓炎大鼠脊髓IL—1、IL—2及IL—6mRNA表达的影响

目的了解左旋咪唑(LMS)对实验性过敏性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓内白细胞介素(IL)-1、IL-2及IL-6mRNA表达的影响,为探讨LMS性白质脑病的发病机制提供实验依据。方法用豚鼠全脊髓匀浆免疫wistar大鼠建立EAE模型,EAE+LMS组大鼠分别于免疫后0、24、48hipLMS10mg/kg;大鼠免疫后第16天处死,采用RT-PCR的方法检测大鼠脊髓内IL-1α、IL-1β、IL-2和IL-6mRNA表达的相对量。结果和正常对照组相比,EAE组大鼠脊髓内IL-1α(P＜0.05)、IL-1β(P＜0.05)、IL-2(P＜0.01)和IL-6(P＜0.05)mRNA的表达量均明显升高。EAE+LMS组大鼠脊髓内IL-1α、IL-1β、IL-2和IL-6mRNA的表达量和EAE组相比则分别升高131％(P＜0.05)、121％(P＜0.05)、95％(P＜0.05)和28％(P＞0.05)。结论LMS能明显促进EAE大鼠脊髓内IL-1α、IL-2β、IL-2mRNA的表达,提示该作用可能是LMS促发EAE的机制之一。     

促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后神经生长蛋白43和微管相关蛋白-2表达的影响

目的 观察促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的保护作用及神经细胞神经生长蛋白43(GAP-43)、微管相关蛋白-2(MAP-2)表达的影响。方法 制作SCI模型,分为假手术组、生理盐水组、EPO治疗组。用免疫组织化学染色方法检测神经细胞内GAP-43和MAP-2的表达变化,同时通过BBB运动评分检测动物的运动功能。结果 EPO治疗组较生理盐水组GAP-43和MAP-2表达水平高,EPO治疗组的BBB运动评分明显优于生理盐水组。结论 EPO能够通过增加GAP-43和MAP-2表达,促进神经细胞生长。     

滋阴固本方对急性EAE模型大鼠脊髓损伤后Nogo-A蛋白表达的影响

目的 :观察滋阴固本方对急性实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠脊髓损伤后轴突生长抑制因子(Nogo-A)蛋白表达的影响。方法:雌性Wistar大鼠72只,按随机数字表法分为6组,建立EAE模型。观察各组大鼠体质量、饮食量和神经行为学评分、脊髓组织的病理变化、脊髓组织中Nogo-A蛋白的表达情况。结果:各组大鼠的行为学改变与模型组比较,各中药组发病率降低,临床症状改善、体质量下降(P0.01);神经功能评分中药低剂量组与高、中剂量组比较差异有统计学意义(P0.01)。各组大鼠Nogo-A免疫组织化学结果:模型组可见Nogo-A蛋白的表达呈强阳性,与之比较,激素组与中药高、中剂量Nogo-A蛋白的表达相对减少(P0.01),中药高、中剂量与低剂量比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:滋阴固本方在急性期对Nogo-A蛋白的表达有明显抑制作用,使受损的神经系统得到良好的修复。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型的改良

目的：提取并纯化正常人脑脊髓的髓磷脂碱性蛋白(MBP)，鉴定其活性，并用其诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型。方法：以人脑脊髓为原料，通过去脂、酸溶解、CM—52柱层析等步骤提取人MBP，鉴定其纯度后在Wistar大鼠诱导EAE。结果：所提取的MBP具有纯度高、免疫话性好的特点，与抗MBP抗体能特异性结合，并可成功地诱导出EAE动物模型，病理学证实发病大鼠的脑脊髓具有典型的脱髓鞘改变和胶质结节形成。结论：用人MBP在不加百日咳杆菌的条件下，同样可以诱导出EAE，这种动物模型体内的病理学改变与人类的多发性硬化症(MS)更具有相似性，适用于对MS的研究。     

Lewis大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎动物模型的建立及百日咳疫苗的影响

目的 建立可靠的Lewis大鼠实验性过敏性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis, EAE)动物模型;方法 采用Lewis大鼠脚垫皮下注射豚鼠全脊髓匀浆(spinal cords homogenate of guinea pigs, GPSCH)和含有卡介苗(bacille calmette guerin, BCG) 10mg/ml的完全福氏佐剂(complete Freund's adjuvant, CFA)诱导EAE,从临床症状评分、光镜、电镜下病理学改变对模型进行评价.结果 Lewis大鼠EAE的发病率为9/10,潜伏期为12.6±1.01天.百日咳疫苗(bordetella pertussis vaccine, BPV)可提高EAE的发病率,缩短EAE的潜伏期(P<0.05),加重其临床症状和病理改变(P<0.05).结论 GPSCH和CFA免疫Lewis大鼠建立的EAE是成功可靠的;BPV对EAE有显著的促发作用,可诱导形成超急性EAE.     

Th1/Th2细胞与实验性自身免疫性脑脊髓炎

实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是一种免疫细胞介导的以中枢神经系统白质损坏为特征的自身免疫性疾病。发病机制及病情变化过程中,CD4+T细胞起着重要的作用,以分泌INF-γ和IL-2为主的Th1细胞能够促使EAE的发生或病情的加重,以分泌IL-4和IL-10为主的Th2细胞可以抑制或逆转EAE的病情。就近几年对Th1/Th2细胞与EAE关系的研究进行综述。     

大鼠脊髓挫伤后脊髓和骨骼肌中GAP-43的表达变化

目的 观测大鼠脊髓挫伤后损伤位点尾侧和骨骼肌中GAP-43的含量变化,探讨其在脊髓损伤修复中的作用及与脊髓可塑性的关系.方法 SD成年大鼠40只,分为正常组和脊髓挫伤组,分别取材脊髓和腓肠肌,用免疫组化了解GAP-43的原位分布和Western Blot榆测GAP-43的含量;各组大鼠在存活期间均行后肢BB运动功能评分.结果 各组大鼠脊髓腹角少量神经元和腓肠肌细胞内均可观察到GAP-43阳性反应物;大鼠脊髓挫伤后3 d,脊髓及骨骼肌中的GAP-43表达均开始增加,脊髓于14 d达高峰,而骨骼肌21 d达到高峰;BBB运动功能评分从7 d起逐步恢复,21 d接近正常.结论 大鼠脊髓损伤后,脊髓和骨骼肌中GAP-43含量变化的趋势与下肢运动功能的恢复较一致,提示GAP-43表达增加与脊髓挫伤后的可塑性有关.