大鼠脑血栓溶解和亚低温联合治疗的研究

选用纯种健康雄性Spraque-Dawley大白鼠,行双肾双夹肾动脉狭窄术.双肾动脉狭窄术后高血压持续8～10周以上,血压达24 kPa或以上,从未出现脑卒中神经系统症状的肾血管性高血压大鼠(RHRSP)用光化学法制成一侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,在MCAO后0.5、1、2、3小时应用尿激酶静脉溶栓,结合亚低温治疗,用TTC染色和HE染色,观察溶栓治疗和亚低温联合治疗对梗塞灶大小的影响以及溶栓复流后脑出血情况.     

全身亚低温对缺血脑BCL-2蛋白表达的影响

目的研究亚低温对易卒中型肾血管性高血压大鼠（ＲＨＲＳＰ）复制的大脑中动脉闭塞（ＭＣＡＯ）模型的梗死灶大小及对ＢＣＬ－２蛋白表达的影响。方法用环型银夹以双肾双夹法复制ＲＨＲＳＰ,改良Ｌｏｎｇａ’ｓ线栓法制成ＭＣＡＯ缺血模型,冰袋法诱导亚低温,ＴＴＣ染色测定梗死灶体积,免疫组化法、图象识别系统计算ＢＣＬ－２蛋白表达强度。结果１亚低温能明显缩小梗死灶体积;２亚低温组ＢＣＬ－２蛋白表达明显强于正常体温组。结论亚低温增强缺血后基因ＢＣＬ－２的表达可能是它具有缺血脑保护作用机制之一。     

经颅多普勒超声辅助尿激酶溶栓的实验研究

目的评价经颅多普勒超声辅助尿激酶溶栓的有效性。方法制备兔大脑中动脉栓塞模型后应用经颅多普勒超声（TCD）辅助尿激酶溶栓。尿激酶对照组在溶栓后2h应用经颅多普勒超声检测大脑中动脉血流情况。经颅多普勒超声加尿激酶组在溶栓前及溶栓后2h内持续监测并记录溶栓后不同时间点的大脑中动脉血流速度。结果TCD加用尿激酶组血管再通率为73．7％，尿激酶对照组血管再通率为42．1％，统计学分析有显著性差异（P〈0．05）。TCD加用尿激酶组的梗死体积小于对照组。结论TCD有助于增强尿激酶的溶栓效果。初步证明经颅多普勒超声可辅助尿激酶溶栓治疗脑梗死。     

强力霉素对溶栓脑缺血大鼠血脑屏障通透性的影响

目的观察强力霉素对脑缺血不同时间尿激酶溶栓大鼠血脑屏障通透性的影响,评价其对溶栓后出血性转化的干预效果。方法采用大鼠白体血栓塞大脑中动脉闭塞（MCAO）模型,分别测定MMP-9表达水平、血脑屏障通透性、恼出血量和出血发生率。结果各时间点尿激酶溶栓治疗使MMP-9表达增加,血脑屏障通透性、脑出血量和出血发生率较对照组增加,且溶栓时间越晚增加越明显;强力霉素联合尿激酶溶栓组与相应时间点尿激酶溶淦组比较MMP-9表达水平和血脑屏障通透性显著降低,而脑出血量和出血发生率均有下降趋势。结论强力霉素联合尿激酶溶栓治疗可降低脑缺血大鼠溶栓后MMP-9高表达,减轻不同时间点尿激酶溶栓后血脑屏障破坏导致的颅内出血性转化。     

病变侧亚低温对大鼠局脑缺血再灌注后Akt、Survivin表达的影响

目的 通过检测Akt及Survivin蛋白的表达,探讨亚低温对局脑缺血再灌注后神经元存活的影响.方法 用线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）局脑缺血再灌注模型,将44只SD大鼠随机分成假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,缺血组分别缺血2,6 h再灌注4,24,72 h,1周,2周后处死,亚低温组于缺血后13～14 min实施病灶侧亚低温持续4 h.免疫组织化学法检测Akt、Survivin 蛋白的表达.结果 相同缺血再灌注时间点,亚低温组比常温组缺血侧Akt、Survivin、表达水平显著增高（P＜0.05）.结论 病灶侧亚低温通过促进缺血半暗带脑组织Akt、Survivin表达的核内移,从而抑制神经元凋亡,促进脑缺血后神经功能恢复.     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP70mRNA表达及损伤神经细胞凋亡的影响

目的 探讨亚低温对大鼠脑缺血再注损伤后HSP70mRNA、HSP70（热休克蛋白70）表达及损伤神经细胞凋亡的影响。方法 采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,大脑中动脉阻塞2小时,再灌注损伤10小时,用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术、免疫组织化学法和原位缺口末端标记（TUNEL）法分别检测假手术组、对照组和亚低温组HSP70mRNA、HSP70表达水平和凋亡细胞百分率。结果 亚低温组HSP70mRNA、HSP70表达水平较对照组显著升高（P＜0．05）,而凋亡细胞百分率明显低于对照组（P＜0．05）。结论 亚低温上调大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP70mRNA、HSP70表达水平可能与其抗损伤神经细胞凋亡作用有关。     

病变侧亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经元存活的影响

目的 通过检测Survivin及NF-κB蛋白的表达,探讨亚低温对局灶性脑缺血再灌注后神经元存活的影响.方法 用线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）局灶性脑缺血再灌注模型,将164只SD大鼠随机分成假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,缺血组分别缺血2h、3h、6h、8h再灌注4h、24h、72h、1周、2周后处死,亚低温组于缺血后13～14 min实施病灶侧亚低温持续4h.免疫组织化学法检测Survivin、NF-κB蛋白的表达.结果 相同缺血再灌注时间点,亚低温组比常温组缺血侧Survivin表达水平显著增高（P＜0.05）,NF-κB P65核内移明显降低（P＜0.01）.结论 病灶侧亚低温通过促进缺血半暗带脑组织Survivin表达,抑制NF-κB的核内移,从而抑制神经元凋亡,促进脑缺血后神经功能恢复.     

依达拉奉对尿激酶溶栓大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9表达及出血转化的影响

目的探讨依达拉奉对尿激酶溶栓大鼠脑组织基质金属蛋白-9(MMP-9)表达及脑出血性转化的影响。方法健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠制作大鼠自体血大脑中动脉栓塞模型,制作成功后随机分成3组:尿激酶组、脑缺血组、尿激酶+依达拉奉组;每组20只,另加20只为假手术组。取脑组织进行病理学检查并用免疫组化技术检测MMP-9表达,RT-PCR检测MMP-9mRNA表达。结果各组大鼠脑组织病理学结果:尿激酶组中7只发生脑出血,脑缺血组仅1只有红细胞漏出血,尿激酶+依达拉奉组4只发生脑出血,且出血体积较尿激酶组明显减少。尿激酶组中MMP-9在脑组织中高度表达,尿激酶+依达拉奉组表达相对减少,与脑缺血组及尿激酶组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。假手术组大鼠脑组织中微量表达。MMP-9mRNA表达与MMP-9在各组中表达一致。结论依达拉奉能显著降低尿激酶溶栓大鼠脑组织中MMP-9mRNA及MMP-9蛋白表达,并可能降低溶栓后出血转化率。     

犬大脑中动脉栓塞时动脉与静脉溶栓治疗的对比研究

目的　对比性探讨尿激酶在犬大脑中动脉急性栓塞时动脉与静脉溶栓治疗的疗效。方法　建立犬自体血栓大脑中动脉栓塞（ＭＣＡＯ）模型,血管造影证实大脑中动脉（ＭＣＡ） 完全阻塞后３小时,经ＭＣＡ注射尿激酶或静脉滴注尿激酶,监测各时相点的静脉凝血象变化,治疗后９６ 小时进行病理学评定。结果　动脉溶栓组的平均ＭＣＡ系统残留血栓重量极显著低于对照组和静脉溶栓组,动脉溶栓组的脑梗死容积亦小于其他两组。结论　犬急性缺血性脑卒中超早期选择性动脉溶栓治疗疗效可靠。     

亚低温对局灶性脑缺血再灌注后不同时间点Akt、NF-κB变化规律的影响

目的 通过检测Akt及NF-κB蛋白的表达，探讨亚低温对局脑缺血再灌注后神经元存活的影响。方法 用线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCA0）局脑缺血再灌注模型，将44只SD大鼠随机分成假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组，缺血组分别缺血2h、6h，再灌注4h、24h、72h、1周、2周后处死，亚低温组于缺血后13～14min实施病灶倒亚低温持续4h。免疫组织化学法检测Akt、NF—κB蛋白的表达。结果 相同缺血再灌注时闾点，亚低温组比常温组缺血侧Akt表达水平显著增高（P〈0．05），NF—κBP65核内移明显降低（P〈0．01）。结论 病灶侧亚低温通过促进缺血半暗带脑组织Akt表达，抑制NF—κB的核内移，从而抑制神经元凋亡，促进脑缺血后神经功能恢复。     

大鼠局灶性脑缺血后CPP32和P53蛋白的表达

目的　探讨大鼠脑缺血后神经元损害过程中CPP32和P5 3蛋白表达的变化。方法　建立大鼠大脑中动脉闭塞 (MCAO 2h)模型 ,采用免疫组化方法观察CPP32和P5 3蛋白在大鼠脑缺血后不同时间的动态变化。结果　CPP32蛋白在脑缺血再灌注 2 2h和 4 6h ,阳性表达最明显。而P5 3在脑缺血再灌注 2 2h阳性表达最明显 ,并持续至再灌注 70h。阳性表达主要位于神经元严重受损的缺血区内。结论　CPP32和P5 3蛋白表达与脑缺血后神经细胞死亡关系密切。     

脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和Akt，bcl-2，Bax和caspase3表达的影响

目的研究脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡和Akt、bcl-2、Bax、caspase3表达的影响。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞再灌注动物模型,将雄性SD大鼠随机分为假手术组（sham）、脑缺血再灌注模型组（MCAO）、脑脉泰大剂量组（MCAO＋脑脉泰2．24g／kg）、脑脉泰中剂量组（MCAO＋脑脉泰1．12g／kg）、脑脉泰小剂量组（MCAO＋脑脉泰0．56g／kg）,每组10只大鼠。脑脉泰组在MCAO前5天开始灌胃给药,连续5d。用TUNEL法和免疫组化染色法分别检测缺血半暗带凋亡细胞和Akt、bcl-2、Bax和caspase3表达。结果脑脉泰大剂量组和中剂量组大鼠脑缺血半暗带的凋亡细胞显著减少（P〈0．01）,Akt、bcl-2表达显著增加,caspase3和Bax表达减少,与MCAO模型组比较,有显著性差异（分别为P〈0．05和P〈0．01）。结论脑脉泰对脑缺血／再灌注损伤有保护作用,其保护作用与促进Akt和bcl-2的表达,抑制Bax和caspasse3的表达有关。     

脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和Akt,bcl-2,Bax,caspase3表达的影响

目的 研究脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡和Akt,bcl-2, Bax,caspase3表达的影响。方法 在大鼠大脑中动脉栓塞再灌注动物模型,将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组（sham）、脑缺血再灌注模型组（MCAO）、脑脉泰大剂量组（MCAO+脑脉泰2.24g·kg-1）、脑脉泰中剂量组（MCAO+脑脉泰1.12g·kg-1 ）,脑脉泰小剂量组（MCAO+脑脉泰0.56g·kg-1）和尼莫地平组（MCAO+nimodipine 10mg·kg-1）,每组10只大鼠。脑脉泰组在MCAO前五天开始灌胃给药,连续五天。用TUNEL法和免疫组化染色法分别检测缺血半暗带凋亡细胞和Akt,bcl-2,Bax,caspase3表达。结果 脑脉泰大剂量组和中剂量剂量组大鼠脑缺血半暗带的凋亡细胞显著减少,Akt、bcl-2 表达显著增加, caspase3 和 Bax表达减少,与MCAO模型组比较,有显著性差异（P<0.01）。结论 脑脉泰对脑缺血/再灌注损伤产生保护作用,其保护作用与促进Akt,bcl-2的表达,抑制Bax和caspasse3的表达有关。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后血管内皮细胞凋亡及其与P53表达的关系

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血管内皮细胞凋亡及其与P53蛋白表达的关系。方法 采用原位末端标记法和免疫组化法分别观察脑缺血再灌注2、6、12小时,1、2、3、7、14和21天血管内皮细胞凋亡和P53蛋白表达的变化。结果 脑缺血再灌注2小时在缺血周围区即有凋亡的内皮细胞出现,12－24小时达高峰,之后逐渐下降,至21天与假手术组已无显著性差异。脑缺血再灌注6小时在缺血周围区P53蛋白开始表达,1－2天达高峰,之后逐渐下降,至7天与假手术组已无显著性差异。P53蛋白表达高峰时间迟于内皮细胞凋亡24小时。结论 脑缺血再灌注损伤中凋亡是血管内皮细胞的死亡形式之一,P53蛋白表达参与缺血再灌注后血管内皮细胞凋亡机制的调节。     

局灶性脑缺血大鼠CREB1活性调节转导子的相关研究

目的探讨磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)、CREB1活性调节转导子(TORC1)和脑源性神经影响因子(BDNF)在局灶性脑缺血大鼠脑皮质中的表达规律及意义。方法用线栓法分别制作雄性SD大鼠右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h及72h模型,应用蛋白印迹法分别检测TORC1、BDNF和p-CREB在局灶性脑缺血皮质的蛋白表达水平,用聚合酶链反应技术检测TORC1和BDNF mRNA的相对表达水平。结果与正常组相比,TORC1的核累积和细胞表达的两个高峰为术后3 h和48 h,而p-CREB和BDNF的两个高峰分别为3 h和72 h,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TORC1可能在大鼠局灶性脑缺血后48 h前参与促进了顶叶皮质神经元细胞CREB/BDNF通路的活化,对皮质神经元具有保护作用。     

一氧化氮供体及前体对大鼠脑缺血再灌注损伤保护机制的探讨

目的 观察介入给药一氧化氮（NO）供体硝酸甘油（Nitroglycerine，NG）及前体L-精氨酸（L-Arginine，ARG）对大鼠脑缺血再灌注后海马区星形胶质细胞表达的胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的影响，探讨NG及ARG的脑保护机制。方法 采用大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）法建立局灶性脑缺血模型。将大鼠随机分为假手术组、MCAO组、NG组和ARG组。MCAO组、NG组和ARG组于缺血2 h再灌注同时分别局部介入给予生理盐水、NG和ARG，于再灌注3 h或24 h时，荧光法检测血清NO含量。并在3 h或24 h时处死大鼠，病理分析脑梗死体积以及免疫组织化学法检测海马区GFAP表达情况。结果 缺血再灌注后3 h血清NO升高（P <0.01），治疗组较MCAO组明显（P <0.01），GFAP表达阳性细胞数增加，但治疗组较MCAO组减少（P <0.01），各组大鼠脑组织未出现肉眼可见梗死灶；缺血再灌注后24 h，血清NO治疗组较3 h降低，而MCAO组较3 h升高（P <0.05），GFAP表达阳性细胞数较3 h增加（P <0.01），治疗组较MCAO组减少（P <0.01），TTC染色显示脑梗死体积治疗组较MCAO组减小（P <0.05）。结论 脑缺血再灌注后海马区脑组织GFAP表达增强，通过局部介入给予NG、ARG增加NO合成，抑制GFAP高表达，减小脑梗死体积。提示NG、ARG抗脑缺血性损伤的保护机制可能与抑制星形胶质细胞过度表达有关。     

龙心素胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤后p53蛋白表达的影响

目的观察龙心素胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤后p53蛋白表达的影响,探索龙心素胶囊神经保护作用的分子机制。方法采用SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型（transientmiddle cerebral arteryocclusion,MCAO）,将大鼠随机分为3组：假手术组、缺血再灌注组、龙心素胶囊（Longxinsu Jiaohang）组。各组按实验设计给药造模,分时点对各组动物造模后神经功能缺陷进行评分,应用免疫组织化学法研究缺血再灌注损伤脑组织凋亡相关蛋白p53的表达情况。结果龙心素组其缺血再灌注后神经功能缺陷评分和脑组织p53蛋白表达均明显少于缺血再灌注组（P〈0．05）。结论龙心素胶囊能减轻脑组织的缺血再灌注损伤,改善神经功能缺失。其作用机制可能与其抑制脑组织p53蛋白表达有关。     

A change of P-selectin immunoreactivity in rat brain after transient and permanent middle cerebral artery occlusion

Abstract

Although the role of an adhesion molecule such as P-selectin may be important in the pathogenesis of stroke, temporal, spacial, and cellular profiles of the expression ofsuch a protein has not been fully studied in the case ofthe middle cerebral artery (MCA) occlusion and reperfusion in rat brain. Change in expression of immunoreactive P-selectin was examined in rat brain after transient MCA occlusion (MCAO) in comparison to that of permanent occlusion with an anti-P-selectin monoclonal antibody. Western blot analyses were performed to ensure the selective detection of immunoreactive P-selectin protein with the monoclonal antibody using brain homogenates before and after MCAO. Temporal, spacial, and cellular changes of P-selectin expressions were evaluated with rat brain sections at 2, 8 h, 1 and 3 days of permanent MCAO, and at 2, 8 h, 1, 3 and 7 days of reperfusion after 1 h of transient MCAO. Western blot showed a single band with a molecular weight of 140 kOa for both cases with permanent occlusion and reperfusion. P-selectin immunoreactivity was not normally present in rat brain sections. However, it was expressed mainly in the post-capillary venules of the cerebral cortex and caudate in the MCA territory with a peak at 2-8 h after permanent occlusion and at 8 h to 1 day after the reperfusion. The expression was diminished by 1 day ofpermanent occlusion and 3 days of reperfusion. The maximum staining in the case of permanent MCAO was stronger than the case with reperfusion. However, spacial distribution of the staining was similar in the cerebral cortex and caudate between the cases with permanent or transient MCAO. These results suggest a different temporal but similar spacial and cellular expression of P-selectin immunoreactivity between permanent occlusion and reperfusion of MCA in rat brain. [Neural Res 1998; 20: 463–469]     

神经调节素1β通过激活Sirt1信号通路抑制自噬改善大鼠脑缺血再灌注损伤研究

目的 探讨神经调节素1β(neuregulin1β,NRG1β)是否通过抑制自噬减轻大鼠大脑中动脉缺血再灌注（middle cerebral artery occlusion reperfusion,MCAO/R）损伤,以及对沉默信息调节因子1(silent information regulator protein 1,Sirt1)信号通路的影响。方法 将210只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、模型组（MCAO/R组）、治疗组（NRG1β组）、激动剂组（SRT501组）、激动剂+治疗组（SRT501+NRG1β组）、抑制剂组（EX527组）和抑制剂+治疗组（EX527+NRG1β组）,每组30只。采用改良线栓法建立MCAO/R模型,线栓由颈外动脉插入颈内动脉18～22 mm,堵塞左侧大脑中动脉起始部。缺血2 h后,缓慢拔出线栓,恢复脑血流22 h。EX527(5 mg/kg)、SRT501(100 mg/kg)于术前30 min腹腔注射,NRG1β(2μg/kg)于拔出线栓后由微量注射器注入颈内动脉。脑缺血2 h、再灌注22 h后采用改良神经损伤严重程度评分（modi...     

C1q肿瘤坏死因子相关蛋白6破坏大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的机制研究

目的 探讨C1q肿瘤坏死因子相关蛋白6（C1q and tumor necrosis factor related protein 6，C1QTNF6） 对大鼠大脑中动脉缺血再灌注（middle cerebral artery occlusion reperfusion，MCAO/R）后血脑屏障及内皮细胞闭合蛋白（occludin）和闭锁小带蛋白-1（zonula occludens 1，ZO-1）表达的影响。