人非小细胞肺癌P16基因突变研究

目的探讨ｐ１６基因缺失和突变与人非小细胞肺癌发生、发展的关系。方法应用多重ＰＣＲ、ＳＳＣＰ分析及ＤＮＡ序列分析技术，对４５例人非小细胞肺癌组织中ｐ１６基因外显子１和外显子２进行基因缺失和突变分析。结果４５例肺癌样品中共检出１９例ｐ１６基因缺失，总的缺失率为４２．２％（１９／４５）。其中纯合型缺失８例（１７．８％），半合型缺失１１例（２４．４％）；外显子１缺失７例（１５．６％），外显子２缺失１２例（２６．７％）；ｐ１６基因外显子２的突变检出率为３１．１％（１４／４５）；ＤＮＡ序列分析显示ｐ１６基因７２位密码子无义突变７例，７５位密码子错义突变７例。结论ｐ１６基因的缺失和突变可能与人非小细胞肺癌的发生、发展有关。     

抗癌基因p53在肾癌组织的异常表达及其意义

研究表明，ｐ５３基因缺失或突变与众多肿瘤有关。我们采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法对肾癌组织的ｐ５３ｍＲＮＡ进行了检测。结果显示，在２１例肾癌组织中，１２例（５７％）ｐ５３ｍＲＮＡ表达异常，其中７例明显增高，５例缺失或表达明显低于正常对照。ｐ５３基因发生改变的多数是晚期和分化较差的肾癌组织，包括１例肾癌转移病灶和３例有肾静脉癌栓或肾门淋巴结转移的肾癌组织。这提示ｐ５３基因失活与肾癌密切相关，可能是肿瘤细胞向恶性发展或具有转移倾向的潜在因素之一。     

应用PCR—SSCP—EB染色法检测结直肠肿瘤P53基因突变

运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＥＢ染色法对３０例结直肠腺癌和１８例结直肠癌瘤中Ｐ５３基因外显子５、６、７、８突变分别进行检测，结果显示腺癌，腺瘤中Ｐ５３基因突变率分别为６６．７％和３３．３％（Ｐ〈０．０５），高、中、低分化腺癌中Ｐ５３基因突变率分别为３７．５％，６２．５％和８５．７％（Ｐ〈０．０５）。结果提示Ｐ５３基因突变与结直肠腺癌分化程度有关，在结直肠腺瘤向腺癌恶突过程中可能起着重要作用，ＰＣＲ－ＳＳ     

直肠癌旁移行粘膜p53、p21表达及其临床意义

目的 探讨直肠癌移行粘膜的生物病理学性质。方法 应用组织化学和免疫组织化学方法观察，３４例直肠癌旁粘膜中ｐ５３，ｐ２１蛋白表达及其与粘蛋白改变的关系。结果 ２９．４％（１０／３４）直肠癌旁移行粘膜体杯状细胞胞浆内顾在ｐ５３表达，其范围不超出远端４ｃｍ肠管，ｐ２１在２６．５％（９／３４），癌旁移行粘膜腺体柱六细胞头内存在表达，其范围不超过２ｃｍ肠管。结论 直肠癌移行粘膜中存在ｐ５３失活及ｒａｓ激活，系     

甲状腺癌中p53基因248位密码子突变及其蛋白过度表达的临…

对５４例甲状腺癌标本分别用ＤＮＡ聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）法检测ｐ５３基因第２４８位密码子的突变及免疫组化法检测ｐ５３蛋白，并用时序检验分析ｐ５３基因突变和ｐ５３蛋白表达与甲状腺癌的关系。结果发现，甲状腺癌中１５例（２７．８％）有ｐ５３基因突变和３０例（５５．６％）有ｐ５３蛋白过度表达，临床分期晚、分化程度低的甲状腺癌突变率较高，ｐ５３抑癌基因突变和ｐ５３蛋白阳性病     

应用PCR—SSCP银染技术检测结直肠癌P53基因突变

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测３０例结直肠癌Ｐ５３基因第５、６、７和８外显子的突变情况，结果发现１６例（５３．３３％）发生Ｐ５３基因突变，提示：（１）结直肠癌普遍存在Ｐ５３基因突变。（２）比较传统的同位素标记ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术不仅灵敏度相当，而且简便，快速，低耗，重复性好，尤其适于其样本筛选，可在临床实验室中推广。     

散发性结直肠癌患者18号染色体高频杂合缺失的研究

目的：探讨散发性结直肠癌患者18号染色体上抑癌基因相关的杂合缺失（LOH）情况，并探索新的抑癌基因位点。方法：对83例散发性结直肠癌患者基因组DNA用14个不同荧光标记的高度多态性微卫生引物，扩增相应的微卫星位点，平均距离为10厘摩（centi-morgan,cM）。用ABI PRISM377测序仪进行基因扫描，统计各位点杂合缺失率。结果：在12个获得有效数据的微卫星位点中，平均杂合缺失率为36．78％,18p中最高为D18S53（38．09％），18q中最高为D18S474（55．74％）。4位患者的18号染色体所有杂合位点都存在缺失，30位患者的杂合缺失位点不少于50％（平均6个／人）；缺失位点少于50％的有53人（平均1个／人）。结论：结直肠癌患者18号染色体存在高频的LOH，并以整体缺失为特点。存在高频LOH的区域定位有转化生长因子（TGF）信号传导相关基因、结直肠癌缺失基因（DCC）、Rb结合蛋白8(RbBP8），特别是TGF信号传导相关基因MADH2、4、转化生长因子－β1反应元件（TGF－β1）等的缺失可能对结直肠癌的发生有重要影响。18p也有存在未知抑癌基因的可能。     

结直肠癌中错配修复基因杂合性缺失的初步分析

目的探讨散发性结直肠癌中错配修复基因杂合性缺失的发生情况。方法利用微卫星分析法对30例散发性结直肠癌6个错配修复基因(mismatch repair genes，MMR)的杂合性缺失(loss of heterozygosity，LOH)进行了分析。结果6个MMR基因LOH的发生率由高到低依次分别为hMSH3(30％)、hPMS2(25％)、hMLH1(30．0％)、hMSH2／hMSH6(23．07％)，hPMS1基因未发现杂合性缺失。结论在中国人散发性结直肠癌中，MMR基因通过等位基因杂合性缺失是结直肠癌发生的重要分子遗传途径之一。     

p53基因和C—erbB—2基因在胃癌中的表达

为探讨ｐ５３基因和Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因与胃癌组织分型、浸润深度、淋巴结转移、肝转移、腹膜种植及预后关系，应用免疫组化方法检测了胃癌组织中的ｐ５３基因和Ｃ－ｅｒｂＢ－２的表达情况，结果发现ｐ５３阳性染色率为２４／７２（３３．３％），Ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性染色率２０／１０６（１８．９％）。ｐ５３阳性染色与胃癌淋巴结转移、胃癌组织分型及Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因表达呈高度相关。Ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性染色与胃癌腹膜种植、肝转移以及肿瘤组织分型呈正相关。ｐ５３阴性表达５年生存率（４８．９％）显著高于阳性表达（１７．６％）（Ｐ＜０．０５）。Ｃ－ｅｒｂＢ－２阴性表达５年生存率（３８．６％）高于阳性表达（２１．７％），但无统计学差异。单因素和多因素分析显示ｐ５３表达是一个独立的预后因素。单因素分析Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达对预后无影响。     

重组腺病毒介导CD自杀基因联合野生型p53基因对直肠癌细胞的杀伤作用

目的 观察重组腺病毒介导胞嘧啶氨酶（ＣＤ）基因和人野生型ｐ５３基因共转染对直肠癌细胞的杀伤作用。方法 用携带ＣＤ／ｐ５３、ＣＤ、ｐ５３基因腺病毒感染直肠癌细胞ＳＷ８３７,计数瘤细胞集落数,采用四唑蓝比色（ＭＴＴ法）检测瘤细胞存活率。于６０只裸鼠移植瘤内注射重组腺病毒、磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）,测定肿瘤生长抑制率。结果 用ＣＤ／ｐ５３、ＣＤ、ｐ５３重组腺病毒感染ＳＷ８３７细胞,加５－ＦＣ后细胞集落形成分别为：６、３８、６９。裸鼠移植肿瘤生长抑制率分别为７８．６％、５６．５％、２２．３％。ＣＤ／ｐ５３重组腺病毒感染组肿瘤细胞集落形成和存活率下降最显著（Ｐ〈０．０１）,对肿瘤的抑制作用明显。结论 ＣＤ自杀基因与野生型ｐ５３基因共转染对肿瘤细胞有更强的杀伤作用。     

抑癌基因KLF-6和APC在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的 研究抑癌基因KLF-6和APC在结直肠癌中的表达规律及其临床意义。方法 应用RT-PCR和免疫组织化学法对32例结直肠癌组织和正常黏膜组织中KLF-6和APC基因mRNA及蛋白的表达进行检测和分析。结果 KLF-6与APC的mRNA阳性表达率在结直肠癌组织中分别为37、5％和34，3％，明显低于正常结直肠黏膜组织的96．9％和93．8％（P〈0．05）。KLF-6与APC的免疫组化染色阳性表达率在结直肠癌组织中分别为28．1％和25．0％，明显低于正常结直肠黏膜组织的81．3％和84．4％（P〈0．05）。KLF-6与APC在结直肠癌中的表达存在相关性（P〈0．05），并与肿瘤组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期均有明显相关性（P〈0．05）。结论 抑癌基因KLF-6和APC的低表达可能与结直肠癌的发生、发展、转移及预后有关，且两者存在相关性。     

肝细胞肝癌中p53、ras基因与血管内皮生长因子表达的关系

目的 研究肝细胞肝癌中血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的表达与ｐ５３,ｒａｓ基因之间的关系。方法 用免疫组织化学方法研究４５例肝癌标本ＶＥＧＦ,ｐ５３及ｒａｓ基因的表达。结果 ＶＥＧＦ的表达率为６４．４％（２９／４５）,ｐ５３的表达率为４８．９％（２２／４５）,ｒａｓ表达率为５３．３％（２４／４５）,经连续切片对比分析表明,在ＶＥＧＦ表达较高的区域,ｐ５３,ｒａｓ的表达亦较强,但Ｘ＾２检验仅提示ｐ５３     

骨肉瘤标本中P53抗癌基因异常的研究

作者应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交和免疫组织化学方法对２４例骨肉瘤进行了ｐ５３基因的缺失及表达的观察。发现５８．３％的骨肉瘤有ｐ５３蛋白的表达增高。与同时进行的流式细胞ＤＮＡ定量进行了对照分析。在ＤＮＡ分子杂交分析中，发现２５％的骨肉瘤有ｐ５３基因结构的异常，包括基因的重排和片断的丢失。     

高复发及浸润性膀胱癌的分子生物学基础

目的　探讨膀胱癌多发,复发和浸润的分子生物学基础。　方法　采用分子生物学方法对膀胱癌实体肿瘤 Ｔ Ｇ Ｆα, Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ,ｐ１６ 和ｐ５３ 基因表达、缺失及生物学意义进行了研究。　结果　３４ 例膀胱癌中８５ ％ （２９／３４） Ｔ Ｇ Ｆαｍ Ｒ Ｎ Ａ 阳性表达,肿瘤的表达量是癌旁正常对照的２ ～５ 倍, Ｐ＜０ ．０１ 。膀胱癌 Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达率为４４ ％ （４／９） 。５０ 例膀胱癌ｐ５３ 蛋白免疫组化阳性核染率４２ ％（２１／５０ ） ,其中 Ｐ Ｔ３ ８２ ％ （９／１１） , Ｇ３ ７２ ％ （１３／１７） , Ｐ Ｔ２ ４０ ％ （１２／３０） , Ｇ２ ３２ ％ （８／２５） , Ｐ Ｔ１ 和 Ｇ１ 级肿瘤未见阳性核染。随访２５ 例,ｐ５３ 阳性核染者中７６ ％ （１０／１３） 有复发转移。２０ ％ （２／１０） 实体膀胱癌有ｐ１６ 基因的丢失。结论　 Ｔ Ｇ Ｆαｍ Ｒ Ｎ Ａ 高表达可能是膀胱癌发生的早期事件。 Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ 和ｐ５３ 基因异常表达可能与膀胱癌的分化和恶性度相关。     

不同病理类型结直肠肿瘤中MTS1基因的表达

目的 研究不同病理类型人类结直肠肿瘤中ＭＴＳ１基因产物ｐ１６蛋白的表达情况；探讨其异常表达与肿瘤发生关系的关系。方法 采用免疫组织化学方法，对１３６例结直肠肿瘤石蜡标本的ｐ１６蛋白进行测定。结果 ｐ１６蛋白在结直肠癌中的阳性检出率为８３．１％，明显高于切缘粘膜的１．２％和非肿瘤患者结肠粘膜的１０％（Ｐ〈０．０１），管状腺癌的阳性率为９４．１％，显著高于绒毛状腺瘤恶变，乳头状腺癌和粘液腺癌（Ｐ〈０．     

肝细胞癌与p53基因突变的关系研究

目的 探讨肝细胞癌（ＨＣＣ）和ｐ５３基因突变的关系，方法 采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析技术，检测ＨＣＣｐ５３基因第７外显子点突变，研究来自黄曲霉素Ｂ１（ＡＦＢ１）污染严重的南宁地区的ＨＣＣ标本５５例，结果 ３４例ＨＣＣｐ５３基因２４９密码子中的点突变，突变频率为６２％（３４／５５），伴乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阳性组ｐ５３基因突变率６２．５％，ＨＢｓＡｇ阴性组ｐ５３基因突变率５７     

甲状腺癌中p53基因248位密码子突变及其蛋白过度表达的临床意义

对５４例甲状腺癌标本分别用ＤＮＡ聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）法检测ｐ５３基因第２４８位密码子的突变及免疫组化法检测ｐ５３蛋白，并用时序检验分析ｐ５３基因突变和ｐ５３蛋白表达与甲状腺癌的关系。结果发现，甲状腺癌中１５例（２７８％）有ｐ５３基因突变和３０例（５５６％）有ｐ５３蛋白过度表达，临床分期晚、分化程度低的甲状腺癌突变率较高，ｐ５３抑癌基因突变和ｐ５３蛋白阳性的病例有较高的复发率和死亡率。表明ｐ５３基因突变及其蛋白过度表达在甲状腺癌的发生和发展过程中起重要作用，是预后不良的标志。     

ras、p53基因突变和蛋白表达与尿路上皮肿瘤预后的关系

目的　研究ｒａｓ、ｐ５３ 基因突变和蛋白表达及ＤＮＡ 倍体异常与尿路上皮肿瘤预后关系。　方法　应用ＰＣＲＳＳＣＰ和流式免疫荧光法检测５２ 例尿路上皮肿瘤Ｋｒａｓ 和ｐ５３ 基因突变及蛋白表达和ＤＮＡ 含量变化。　结果　Ｋｒａｓ、ｐ５３ 基因突变分别为５ 例（９ ．６ ％ ） 和２２ 例（４２ ．３ ％ ） ;ｒａｓ ｐ２１ 、ｐ５３ 蛋白阳性表达分别为３６ 例（６９ ．２ ％ ） 和３３ 例（６３ ．５ ％ ） ;异倍体和二倍体肿瘤分别为２２ 例（４２ ．３ ％ ） 和３０ 例（５７ ．７ ％ ） ;ＤＮＡ 倍体异常、ｐ５３ 基因突变及ｒａｓ ｐ２１ 和ｐ５３ 蛋白表达与肿瘤病理分级、分期及预后密切相关（ Ｐ＜ ０ ．０１） ;异倍体肿瘤其ｐ５３ 基因突变、ｒａｓ ｐ２１ 和ｐ５３ 蛋白表达率均明显高于二倍体肿瘤（ Ｐ＜ ０ ．０１） 。　结论　ＤＮＡ 倍体异常、ｐ５３ 基因突变及ｒａｓ ｐ２１ 和ｐ５３ 蛋白表达对尿路上皮肿瘤预后判断有重要意义。     

脾酪氨酸激酶基因甲基化与结直肠癌临床病理特征之间的关系

目的探讨脾酪氨酸激酶（Syk）基因甲基化、表达水平与结直肠癌患者临床病理特征及预后之间的关系。方法收集2001年1～12月间经手术治疗的120例结直肠癌标本．采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）分析Syk基因的甲基化状态和表达情况，并分析Syk基因甲基化失表达与结直肠癌临床病理特衙和生存预后之间的关系。结果（1）120例结直肠癌患者中，48例肿瘤组织未检测到Syk基因的表达，而正常组织Syk基凶均表达；差异有统计学意义（X^2=60，P=0．000）。（2）发生甲基化的37例肿瘤组织中，Syk基因均失去表达。未发生甲基化的83例中，仅11例失表达；而癌旁匹配的正常组织均有表达。（3）Syk基因的甲基化状态与结直肠癌的淋巴结转移状态、病理分期密切相关，而与其他临床参数无关。（4）术后随访资料表明，Syk基因甲基化组患者的3年生存率明显低于未甲基化组（73．5％比95．7％，P=0．007）；而术后复发转移率明显高于未甲基化组（32．4％比8．4％，P=0．02）。结论Syk基因过甲基化失表达参与了结直肠癌的发生，导致结直肠癌侵袭性增强，患者术后复发转移率升高，3年生存率降低。     

甲状腺肿瘤中H—ras基因12密码子和p53基因248密码子突变

目的 探讨甲状腺癌是否存在Ｈ－ｒａｓ基因１２密码子和ｐ５３基因２４８密码子突变。方法 用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）法分析８０例甲状腺肿瘤标本中Ｈ－ｒａｓ基因１２密码子和ｐ５３基因第２４８位密码子的突变，包括甲状腺癌５４例，甲状腺滤泡性腺瘤１０例、结节性甲状腺肿１０例和桥本氏甲状腺炎６例。结果 Ｈ－ｒａｓ基因１２密码子突变在甲状腺癌为３３．３％（１８／５４），在良性甲