肝细胞核因子4α在胃癌中的研究进展

2018年我国最新癌症报告显示,胃癌发病率和死亡率在我国肿瘤中居第2位。胃癌是全球第5大常见癌症,2018年新发病例超过1000000例,其中估计有783000例死亡(相当于全球每12例胃癌病例就有1例死亡),居癌症死亡率的第3位[1]。胃癌的发生是多因素参与、多步骤演变的复杂病理过程,是人口、生活饮食、遗传、感染和环境等因素相互作用的综合结果。尽管本病的全球发病率在下降,但近90%胃癌患者在被诊断时已是进展期,使患者错失最佳手术期。即使患者接受了以外科手术为主的综合治疗,其5年生存率仍低于30%。《中国癌症预防与控制规划纲要(2004—2010)》明确指出癌症的早期预防控制、早期筛查诊断和早期精准治疗是降低癌症发病及提高生存率的主要策略。因此,筛选早期胃癌特有分子靶点对胃癌高危人群进行早期筛查、早期诊断及早期治疗具有重要意义[2],是改变我国胃癌诊治严峻形势的高效可行途径。肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)是细胞核受体之一,是一种高度保守的转录因子,其在促进胃癌发生发展、影响胃癌预后等方面的作用正逐渐受到重视,可能成为胃癌早期诊断及判断预后的重要分子靶点之一。本文就HNF-4α与胃癌致病因素、癌前病变、病情进展、侵袭转移及诊断预后方面的研究进展作一综述。     

2型糖尿病大鼠肝脏肝细胞核因子-4α表达的变化

目的：：探讨2型糖尿病大鼠肝脏肝细胞核因子-4α(HNF-4α)表达的变化和意义。方法：24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组,每组12只大鼠。链脲佐菌素连续腹腔注射法制作2型糖尿病大鼠模型。采用SP免疫组织化学染色、Western Blotting法、RT-PCR法检测大鼠肝脏HNF-4α的表达情况。结果：与正常对照组大鼠比较,糖尿病模型组大鼠肝脏HNF-4α蛋白和mRNA的表达均明显升高(P＜0.01)。结论：肝脏HNF-4α表达的升高可能参与了2型糖尿病时肝脏损伤的发生发展。     

肝细胞核因子4α:肝脏疾病研究与治疗的新方向

肝脏是人体内最大的实质性器官,是人体的"化工厂"。肝脏组织60%⁸0%由肝细胞组成,肝细胞通过特异性地表达一系列功能与分化相关基因,为肝脏发挥重要的生物学功能提供保障。肝细胞核因子4α(HNF4α)是细胞核受体超家族成员,在分化成熟的肝细胞中高表达,能与成熟肝脏中12%的基因的启动子结合,对促进正常的肝细胞分化和维护正常的肝细胞生物学功能发挥着重要的调控作用。近年来,人们开始研究HNF4α与各种肝脏疾病间的关系,并且取得了一定的研究成果,为肝脏疾病的进一步研究和临床治疗提供了新的思路。     

腺相关病毒介导的肝细胞核因子1α过表达改善四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化

目的 探讨特异性上调肝细胞中肝细胞核因子1α(HNF1α)表达对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化的影响.方法 取18只C57/B6小鼠随机分为正常组、AAV8-TBG-Ctrl组和AAV8-TtBG-HNF1α组,每组6只.应用CCl4诱导制备小鼠肝纤维化模型,造模后AAV8-TBG-HNF1α组小鼠通过尾静脉注射带有甲状腺素结合球蛋白(TBG)启动子驱动表达HNF1α的腺相关病毒AAV8-TtBG-HNF1α特异性上调肝细胞中HNF1α的表达,AAV8-TBG-Ctrl组小鼠注射对照病毒AAV8-TBG.采用免疫组织化学法及qPCR检测各组小鼠HNF1α的表达,苏木素-伊红(H-E)染色、天狼猩红染色检测肝组织的病理改变及胶原沉积,免疫组化法检测旷平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并对Ⅰ型胶原(COL1A1)及α-SMA的表达进行软件定量分析;qPCR法检测小鼠肝组织中纤维化相关基因(α-SMA和COL1A1)、上皮指标(E-cadherin和Plakoglobin)及间质指标(Vimentin,Slug和Twist1)的mRNA水平;免疫组化法及TUNEL法检测上调HNF1α对纤维化肝脏中细胞增殖、凋亡的影响.结果 与正常组小鼠相比,CCl4造模可促进小鼠肝脏胶原沉积及α-SMA的表达,且在肝纤维化发生过程中HNF1α的表达下降(P＜0.01);与AAV8-TBG-Ctrl组相比,应用AAV8-TBG-HNF1α特异性上调肝细胞HNF1α的表达可抑制纤维化肝脏中的COL1A1及α-SMA的水平(P＜0.01).上调肝细胞HNF1α表达对纤维化肝脏中E-cadherin、Vimentin等上皮间质转换指标的表达无明显影响(P＞0.05),也不影响肝细胞的增殖与凋亡(P＞0.05).结论 特异性上调肝细胞HNF1α表达可显著改善CCl4诱导的小鼠肝纤维化.     

基于报告基因的PPAR-α激动剂筛选体系的建立

目的 基于PPAR-α受体的信号传递通路和利用双萤光素酶报告基因分析方法,建立稳定的PPAR-α激动剂体外筛选体系。方法 pcDNA3.1-PPAR-α、pGL3-PPRE-luc及pRL-CMV共转染293T细胞后,设0,0.1,1,10,50 μmol·L^-1非诺贝特不同浓度点进行干预后,测定每浓度点重复5个样本。对转染优化试验数据,比较均值大小选取最佳结果;对不同转染组之间的差异性比较,采用t检验和方差分析。结果 浓度为0.1,1,10,50 μmol·L^-1非诺贝特干预组相对诱导率分别为：0.82,1.29,1.72,1.94,表现有统计学差异(P<0.05)。结论 成功建立基于PPAR-信号通路及双萤光素酶报告基因分析方法的PPAR-α激动剂筛药系统。     

肝细胞核因子的研究进展

肝细胞核因子是调节肝脏内基因特异性表达的一类转录因子,这些转录因子及其相互作用构成的复杂调控网络,精确地控制着肝脏的发育和肝细胞的功能。深入研究肝细胞核因子在胚胎发育和肝癌发生中的作用,可以为胚胎发育的基因调控和寻找更有效的肝癌诊断标志物、治疗靶点提供新思路。     

PEP-1介导的重组肝细胞核因子4α蛋白转导对肝癌细胞的抑制作用

目的 利用细胞穿膜肽PEP-1介导重组肝细胞核因子4α（HNF4α）蛋白进入肝癌细胞,并明确外源融合蛋白P-HNF4α对肝癌细胞的作用。方法 构建表达质粒pET28a-P-HNF4α,优化原核表达体系的诱导条件,经大量表达、亲和层析纯化以及浓缩、透析后获得纯度较高的带有细胞穿膜肽PEP-1的融合蛋白P-HNF4α;P-HNF4α转导人肝癌细胞,Western blot检测其穿膜效率,核浆分离和细胞免疫荧光检测P-HNF4α的亚细胞定位,Real-time PCR检测肝癌细胞基因表达,CCK-8法检测肝癌细胞的增殖,细胞划痕实验以及小室侵袭实验检测P-HNF4α对肝癌细胞转移能力的影响。结果 细胞穿膜肽PEP-1成功介导融合蛋白P-HNF4α进入Huh7细胞并定位于细胞核;P-HNF4α蛋白可促进Huh7细胞肝功能基因的表达,抑制干细胞相关基因的表达,并显著抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论 P-HNF4α可诱导肝癌细胞向成熟肝细胞分化,降低肝癌细胞的恶性程度,提示利用P-HNF4α转导肝癌细胞是诱导分化治疗肝癌的潜在手段。     

肝细胞核因子4α抑制大鼠肝癌细胞增殖、侵袭能力和新生血管生成相关基因表达

目的 :研究肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)在体内、体外实验中与大鼠肝癌新生血管生成相关基因表达之间的相互关系。方法:将过表达HNF4α腺病毒转染CBRH-7919细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖效应,Transwell法检测细胞侵袭能力,RT-PCR和Western blot检测血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial grouth factor,VEGF)的表达情况。体内试验建立肝大部切除模型(70%),分别在残肝上注入CBRH-7919细胞(空白组)或转染空载体腺病毒CBRH-7919细胞(阴性对照组)或转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞(实验组)。4周后处死大鼠,通过免疫组化来观察肝标本Ang-2、VEGF的表达情况。结果:转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞增殖能力和侵袭能力较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05);实验组Ang-2、VEGF在基因、蛋白水平表达较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。体内实验大鼠肝脏组织免疫组织化学切片显示实验组Ang-2、VEGF蛋白表达水平较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。结论 :HNF4a可以抑制大鼠肝癌7919的增殖、侵袭能力,并且抑制肝癌新生血管生成相关基因Ang-2、VEGF的表达。     

肝细胞核因子1B的研究进展

肝细胞核因子1B(HNF1B)转录因子由17q12染色质编码,其涉及包括肝、胰、肾等多个脏器的生长与发育。在肾脏的发育过程中,HNF1B主要调控肾小管的生长与发育。而其在胰腺发育的各个阶段均发挥不可或缺的作用,包括胰腺内外分泌细胞及导管发育。HNF1B转录因子编码基因易发生各种类型突变,并可造成HNF1B转录因子功能异常,从而引起多种疾病的发生与进展,包括糖尿病、肾功能不全以及多种恶性肿瘤。同时,HNF1B异常所致疾病症状广泛并同时累及多个系统,因此诊断困难且易发生误诊。     

肝细胞核因子-1α基因A1a98 Val变异与中国汉族迟发型2型糖尿病的关系

目的 :探讨肝细胞核因子 1α(HNF 1α)基因外显子 1Ala98Val变异是否与中国汉族迟发型 2型糖尿病相关。方法 :选择中国汉族 15 0例迟发型 2型糖尿病患者及 15 5例正常对照者 ,应用聚合酶链反应———限制性片段长度多态 (PCR SSCP)及直接测序法检测Ala98Val变异。结果 :受检者均不存在Ala98Val变异。结论 :Ala98Val变异不是引起中国汉族迟发型 2型糖尿病的重要遗传因素。     

肝细胞核因子1α基因多态位点与上海地区2型糖尿病相关临床性状的关系

目的肝细胞核因子(HNF)-1α基因单核苷酸多态(SNP)位点可能与2型糖尿病及其相关性状相关,对以往发现的HNF-1α基因6个标签SNP进行糖尿病相关数量性状分析,以进一步探讨其与糖脂代谢及体脂分布的潜在关系。方法245名无亲缘关系的上海地区中国人,包括152例早发/多发糖尿病家系先证者(病例组)及93名糖调节正常者(正常对照组)。采用直接测序或聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)方法检测受试者基因型,并测定所选人群的糖脂代谢及体脂分布指标。对不同基因型亚组间进行标签SNP的单点和单倍型数量性状分析。结果正常对照组中,rs1169294、rs1169301和rs2259820的各基因型亚组间的体质指数(BMI)、腰臀比(WHR)和腰股比(WFR)的差异均有统计学意义(P值均<0.05),且经性别、年龄校正后差异仍有统计学意义(P值均<0.05)。此外,rs1169289的基因型亚组间WFR的差异有统计学意义(P<0.05)。单倍型分析发现,正常对照组中最常见单倍型GCGC携带者的BMI较非GCGC携带者显著降低(P=0.006 5),且经年龄和性别校正后,差异仍有统计学意义(P=0.017 0)。结论HNF-1α多态位点与中国人体脂分布相关。     

肝细胞核因子1α基因突变与年轻的成人发病型糖尿病3

年轻的成人发病型糖尿病(maturity-onset diabetes of the young，MODY)是一种单基因突变所致的糖尿病，其特点为发病年龄小于25岁，无酮症酸中毒，糖尿病传递符合常染色体显性遗传规律，诊断后至少2年内不用胰岛素。MODY是一组遗传异质性疾病，已发现至少有6种基因突变可导致该病：肝细胞核因子(HNF)4α基因(MODY1)、葡     

肝细胞癌变核转录因子-κB及肿瘤坏死因子-α动态表达与改变

目的:探讨了肝癌形成过程中核转录因子-κB(NF-κB)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的动态表达及其改变机制。方法:雄性SD大鼠以2-乙酰氨基芴(2-FAA)喂饲制备肝癌模型,经病理组织学(HE染色)分析肝细胞的形态学变化,在癌变不同时期定量观察核蛋白、NF-κB和TNF-α动态变化。并分析了人肝癌癌灶及癌旁组织中NF-κB和TNF-α的表达水平。结果:病理组织学检查发现大鼠在喂饲2-FAA后,正常肝细胞在诱癌早期发生颗粒样变性,中期阶段肝组织中出现不典型增生,后期可见大量癌巢结节,均为高分化肝细胞癌。在正常肝细胞中仅见较低水平的NF-κB和TNF-α表达。诱癌后,随着肝细胞组织形态的变化,肝组织中NF-κB和TNF-α表达依次增强,均显著高于正常肝组织(P<0.01),且两者的表达高度相关(r=0.81,P<0.01);人肝癌的癌灶组织中NF-κB的表达,也较癌旁组织明显增强(P<0.01)。结论:肝细胞癌变早期NF-κB信号转导途径激活和TNF-α呈过表达状态。     

肝细胞核因子4α在肝脏疾病中的研究进展

肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)是核激素受体超家族的一种转录因子,在调控肝细胞分化和维持肝脏生物学功能中起重要作用。近年研究发现,上调HNF4α的表达可阻断肝纤维化等肝脏慢性疾病进程,同时,HNF4α与乙肝病毒的转录和复制有关,本文就HNF4α在肝脏疾病中的作用机制的作一综述。     

肝细胞核因子—1α基因A1a98Val变异与中国汉族迟发型2型糖尿病的关系

目的：探讨肝细胞核因子—1α(HNF—1α)基因外显子1 A1a98Val变弄是否与中国汉族迟发型2型糖尿病相关。方法：选择中国汉族150例迟发型2型糖尿病患者及155例正常对照者，应用聚合酶链反应——限制性片段长度多态(PCR—SSCP)及直接测序法检测A1a98Val变异。结果：受检者均不存在Ala98Val变异。结论：A1a98Val变异不是引起中国汉族迟发型2型糖尿病的重要遗传因素。     

核因子-κB对TNF-α诱导的脂肪细胞葡萄糖转运 蛋白4表达的影响

 【目的】 观察TNF-α对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4) mRNA与蛋白表达的作用,并探讨核因子-κB(NF-κB)对上述作用的影响。【方法】 成熟的3T3-L1脂肪细胞分成3组:A组正常对照组,B组肿瘤坏死因子α(TNF-α)组,C组吡咯烷二硫基甲酸酯(NF-κB活性抑制剂) + TNF-α组。各组干预48 h后检测phospho- NF-κB p65(Ser536)的蛋白水平。GLUT4 mRNA及蛋白水平。蛋白检测采用Western法,mRNA检测采用RT-PCR法。【结果】 B组phospho- NF-κB p65蛋白水平(71.1 ± 5.9)高于A组(41.3 ± 1.7, P < 0.001)和C组(25.4 ± 4.7, P < 0.001)。B组GLUT4的mRNA水平(0.86 ± 0.14, P < 0.001)与蛋白水平(31.6 ± 7.2, P < 0.001)低于A组(2.01 ± 0.65; 60.7 ± 8.4),C组mRNA水平(0.46 ± 0.12)与B组比较有下降趋势但无统计学意义(P = 0.100),C组蛋白水平(9.5 ± 3.0)低于B组(P = 0.001)。【结论】 TNF-α下调3T3-L1脂肪细胞的GLUT4表达,抑制NF-κB活性后GLUT4表达进一步下调。这提示了TNF-α可能不是通过激活NF-κB而使GLUT4的表达下调。     

核因子-κB对TNF-α诱导的脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响

【目的】观察TNF-α对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）mRNA与蛋白表达的作用,并探讨核因子-κB（NF-κB）对上述作用的影响。【方法】成熟的3T3-L1脂肪细胞分成3组：A组正常对照组,B组肿瘤坏死因子α（TNF-α）组,C组吡咯烷二硫基甲酸酯（NF-κB活性抑制剂）＋TNF-α组。各组干预48h后检测phospho-NF-κBp65（Ser536）的蛋白水平、GLUT4mRNA及蛋白水平。蛋白检测采用Western法,mRNA检测采用RT-PCR法。【结果】B组phospho-NF-κBp65蛋白水平（71.1&#177;5.9）高于A组（41.3&#177;1.7,P〈0.001）和C组（25.4&#177;4.7,P〈0.001）。B组GLUT4的mRNA水平（0.86&#177;0.14,P〈0.001）与蛋白水平（31.6&#177;7.2,P〈0.001）低于A组（2.01&#177;0.65;60.7&#177;8.4）,C组mRNA水平（0.46&#177;0.12）与B组比较有下降趋势但无统计学意义（P=0.100）,C组蛋白水平（9.5&#177;3.0）低于B组（P=0.001）。【结论】TNF-α下调3T3-L1脂肪细胞的GLUT4表达,抑制NF-κB活性后GLUT4表达进一步下调。这提示了TNF-α可能不是通过激活NF-κB而使GLUT4的表达下调。     

肝细胞核因子-1α对小鼠Ⅰ型葡萄糖载体表达的影响

[目的]探讨在CV-1细胞中肝细胞核因子-1α（HNF—1v）对小鼠I型葡萄糖载体（mGLUT1）表达的影响．[方法]利用DNA克隆技术,将HNF-1acDNA序列重组到表达载体pSV—sport上,以HNF—1α转染CV-1细胞,应用Northernblot方法测定HNF-1α对mGLUT1mRNA表达的影响．[结果]HNF—1α可提高mGLUTlmRNA表达水平及稳定性．[结论]HNF-1α可增强mGLUT1的表达,可能通过调节GLUT1的表达参与胰岛素对血糖的调节过程．     

建立基于荧光素报告基因系统检测雌激素样物质方法的研究

目的 建立基于报告基因的HeLa细胞体外雌激素样物质检测方法.方法 分别构建含有人雌激素hER α和hER β编码序列的表达质粒以及人雌激素反应元件(estrogen response elements,ERE)调控的荧光素报告质粒,用脂质体将hER α、ERE质粒或hER β、ERE质粒共转染HeLa细胞,用雌二醇(E2)处理后检测报告基因荧光素酶的活性.结果构建了pER αneo和pER βneo质粒以及ERE调控的荧光素酶报告质粒pGL3-ERE-Luc,共转染质粒pERE4-Luc和pER αneo或pERE4-Luchygro和pEP αneo到HeLa细胞株后,建立稳定表迭ERE-Luc的hER α/hEP β HeLa细胞株,实验证实报告基因的表达与E2呈明显的剂量反应关系,ER α和ER β的EC50分别为9.2×10-11mol/L和2.5×10-10mol/L.结论 基于荧光素酶报告基因的体外雌激素样物质检测方法有效可靠.     

肠三叶因子启动子荧光素酶报告基因载体的构建及活性分析

目的:克隆肠三叶因子(ITF)启动子序列,构建ITF启动子荧光素酶报告基因载体,并检测启动子活性。方法:运用PCR方法从人全血基因组DNA中获得目的基因;双酶切后连接到荧光素酶报告基因载体上,构建不同长度的ITF启动子报告基因载体(-100--1 826bp);将重组质粒转染至HEK293细胞和LS174细胞48h后,采用双荧光素酶报告基因系统检测其启动子活性。结果:PCR扩增出不同长度的ITF启动子片段;双酶切及测序鉴定重组体构建正确;转染HEK293细胞和LS174细胞后检测启动子活性,100和200bp启动子活性较低,而300至1 826bp启动子活性较强。结论:成功构建了ITF启动子报告基因载体,具有活性的启动子最小长度为300bp。