培美曲塞与吉非替尼联合应用对肺腺癌细胞放射增敏的基础研究

目的：观察培美曲塞二钠与EGFR抑制剂吉非替尼单独及联合使用对肺癌细胞放射增敏作用,探讨其作用机制。方法：1、使用噻唑蓝比色法(MTT),检测培美曲塞二钠和EGFR抑制剂吉非替尼各自对人肺腺癌细胞株A549细胞的抑制作用,分别计算出两种药物的IC20和IC50,接着参照各自IC20的药物浓度及预实验结果确定作为放射增敏的浓度。2、采用体外培养克隆形成实验,检测培美曲塞二钠和EGFR抑制剂吉非替尼联合放射线对人肺腺癌细胞株A549细胞的抑制作用,计算其存活分数,同时绘制细胞存活曲线。3、使用流式细胞术,检测细胞周期和细胞凋亡的变化。4、提取蛋白,使用Western-blot,检测Akt和pAkt的表达变化,进一步探索两药联合及放射增敏效应的可能作用机制及细胞信号通路。结果：1．MTT结果显示培美曲塞二钠和吉非替尼对人肺腺癌细胞株A549细胞具有抑制增殖作用,随剂量增加而增强。培美曲塞二钠的IC50为(1485.326) ng/ml;吉非替尼的IC50为(7.196) uM。2．体外培养克隆形成实验分析显示,放疗+两药联用组的Dq、D0及SF2均明显低于单纯放疗组、放疗+培美曲塞二钠组及放疗+吉非替尼组;培美曲塞二钠和吉非替尼SER分别为1.17和1.48,两药联合 SER为2.62。两药联用的放射增敏效应明显高于各自单药的放射增敏效应,两药联合使用可以进一步提高放射增敏作用。3．流式细胞术检测细胞周期结果显示培美曲塞二钠和吉非替尼可以使细胞阻滞在G1/G0期;与放射线联合作用后,使S期细胞比例减少,两药合用作用更明显。检测凋亡结果显示培美曲塞二钠和吉非替尼均可以提高放射线诱导的凋亡,但两药联用可以使其凋亡率达到最高,提示两药联合作用可以进一步提高放射线诱导的细胞凋亡。4．Western- blot结果显示,药物作用前后、照射前后及药物增敏照射后Akt在蛋白表达水平没有明显改变;培美曲塞二钠和吉非替尼均能抑制p-Akt的表达;与单纯照射组相比,培美曲塞二钠和吉非替尼联合照射组p-Akt蛋白的表达减低,两药联用并联合照射组p-Akt/Akt的比值最低。结论：培美曲塞二钠和吉非替尼各自均有放射增敏的作用,两药联合使用可以明显提高放射效应。其机制可能涉及到使细胞周期中对放射线不敏感的S期细胞减少到最低,同时进一步增强了放射线诱导的细胞凋亡;另外可以推断培美曲塞二钠和吉非替尼两药都可抑制PI3K/Akt信号转导通路,为两药联合应用进一步提高放射增敏效应的可能的机制之一。     

培美曲塞联合吉非替尼治疗EGFR-TKI进展后晚期肺腺癌

目的：研究表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂（ EGFR-TKI）治疗进展后,继续应用培美曲塞联合吉非替尼治疗晚期肺腺癌的临床疗效及安全性。方法既往接受过EGFR-TKI（包括吉非替尼/厄洛替尼/埃克替尼）靶向治疗后复发或进展的ⅢB或Ⅳ期肺腺癌患者36例,继续应用培美曲塞联合吉非替尼治疗,具体方案为：培美曲塞第1天500mg/m2＋吉非替尼250mg每天1次,每21天为1个周期,直至肿瘤进展或不良反应无法耐受。每接受2个周期治疗后评价临床疗效及不良反应。结果36例晚期肺腺癌患者均可评价临床疗效,其中治疗后完全缓解率为0.0％,部分缓解率为38.9％,疾病稳定率为41.7％,疾病进展率为19.4％。客观有效率为38.9％,疾病控制率为80.6％。中位无进展生存时间6个月,中位生存时间13.3个月。Ⅲ或Ⅳ度中性粒细胞减少发生率为22.2％,Ⅲ度以上皮疹的发生率为16.7％。结论 EGFR-TKI治疗进展后,继续应用培美曲塞联合吉非替尼治疗晚期肺腺癌患者,能够取得较好的临床疗效,且不良反应能耐受。     

阿法替尼联合培美曲塞和卡铂化疗治疗吉非替尼耐药肺腺癌患者的临床效果

目的 分析阿法替尼联合培美曲塞和卡铂化疗治疗吉非替尼耐药肺腺癌患者的临床效果。方法 将149例吉非替尼耐药肺腺癌患者分为化疗组74例和联合组75例。化疗组患者采用培美曲塞+卡铂化疗,联合组在上述化疗方案的基础上口服阿法替尼治疗。比较两组患者治疗前后的肿瘤标志物[糖类抗原199、癌胚抗原、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)]水平,肿瘤增殖基因[B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)]、肿瘤凋亡基因[Bcl-2相关X蛋白(Bax)]mRNA的相对表达水平,以及小核仁RNA宿主基因(SNHG)12、SNHG15、SNHG16的相对表达水平。评价两组患者的临床疗效,随访2年的生存情况,并记录其治疗过程中的毒副反应发生情况。结果 与治疗前水平和化疗组治疗后水平相比,联合组治疗后的糖类抗原199、癌胚抗原、CYFRA21-1、Bcl-2 mRNA相对表达水平及SNHG12、SNHG15、SNHG16相对表达水平降低,Bax mRNA相对表达水平升高(均P<0.05)。两组患者的毒副反应总发生率差异无统计学意义(P>0.05)。联合组患者的临床缓解率和2年生存率均高于化疗组,且...     

培美曲塞联合卡铂序贯吉非替尼治疗晚期肺腺癌的效果

目的探讨培美曲塞联合卡铂序贯吉非替尼治疗晚期肺腺癌的效果。方法回顾性分析2015年1月至2018年1月郑州大学第一附属医院收治的EGFR基因检测显示19外显子缺失突变或21外显子L858R突变的214例晚期肺腺癌患者的临床资料。将接受吉非替尼治疗的121患者纳入对照组。将接受培美曲塞联合卡铂序贯吉非替尼治疗的93例患者纳入观察组。比较两组患者无进展生存期(PFS)及与治疗相关的不良反应。结果观察组中位PFS(15个月)长于对照组(9个月),差异有统计学意义(P<0.05)。基因突变类型是影响晚期肺腺癌患者PFS的独立因素(P<0.05)。根据EGFR突变类型亚组分析,19外显子缺失突变患者的中位PFS(12个月)长于21外显子L858R突变患者的中位PFS(10个月),差异有统计学意义(P<0.05)。在19外显子缺失突变的患者中,观察组中位PFS(16个月)长于对照组(9个月),差异有统计学意义(P<0.05)。在21外显子L858R突变的患者中,观察组中位PFS(10个月)长于对照组(8个月),差异有统计学意义(P<0.05)。观察组消化道反应、骨髓抑制、肝功能损伤、肾功能损伤的发生率均高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。两组3级以上不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论培美曲塞联合卡铂序贯吉非替尼治疗EGFR突变晚期肺腺癌患者的效果显著,有助于延长患者的PFS。     

培美曲塞与吉非替尼二线治疗晚期NSCLC的对比研究

目的 比较培美曲塞与吉非替尼单药二线治疗晚期NSCLC患者的疗效及不良反应.方法 将符合入组标准的患者75例随机分成培美曲塞组38例和吉非替尼组37例进行治疗观察,主要评价指标为ORR,DCR,生活质量改善率及不良反应.结果 培美曲塞组ORR为13.2％、DCR为47.4％,而吉非替尼组的ORR为18.9％,DCR为56.8％,两组差异无统计学意义(P＞0.05),但吉非替尼组的血液学毒性明显低于培美曲塞组(P＜0.05),症状改善及生活质量改善优于培美曲塞组(P＜0.05).结论 培美曲塞和吉非替尼单药二线治疗晚期非小细胞肺癌效率相近,但吉非替尼不良反应轻微,对症状和生活质量的改善率更高.     

培美曲塞二钠二线治疗晚期肺腺癌32例临床观察

目的观察培美曲塞二钠二线治疗32例晚期肺腺癌患者的近期疗效及不良反应。方法 32例经病理学确诊既往化疗失败的进展期肺腺癌患者,其中男性19例,女性13例,中位年龄61岁。单药组：培美曲塞500 mg/m2,第1天静脉滴注;联合组：培美曲塞500 mg/m2第1天＋顺铂20 mg/m2第1～4天,均为每3周重复,并口服地塞米松、叶酸和肌肉内注射维生素B12以减轻毒副反应。完成2个周期及以上评价疗效和不良反应。结果 32例患者中,完全缓解0例,部分缓解4例,客观有效率12.5%,稳定18例,进展10例,疾病控制率68.8%,疾病进展时间3.1个月。主要不良反应为骨髓抑制和胃肠道反应。结论培美曲塞二钠作为二线治疗化疗失败的晚期肺腺癌,具有较好的疗效和安全性。     

羟基喜树碱联合足叶乙甙对肺腺癌细胞的放射增敏作用

目的：探讨拓扑异构酶（TOP0）Ⅰ抑制剂－羟基喜树碱（HCPT）与TOPOⅡ抑制剂足叶乙甙（VP-16）对肺腺癌细胞毒作用及放疗增敏作用。方法：MTT法检测HCPT、VP-16及二药在间隔不同时间应用对肺腺癌GLC-82的细胞毒作用及放疗增敏作用。结果：HCPT、VP-16单药及联合用药各实验组均对GLC-82细胞生长产生抑制作用，以HCPT＋VP-16（12h后）组对癌细胞的抑制作用最强（38．31％）。放疗后应用HCPT、VP-16可降低癌细胞存活率，其中以放疗＋HCPT＋VP-16组存活率最低。结论：HCPT与VP-16联合应用时抗癌效应呈时问依赖性，以间隔12h用药最佳。HCPT联合VP-16对肺腺癌放疗起增敏作用。     

培美曲塞二钠联合卡铂治疗晚期肺腺癌效果观察

目的观察培美曲塞二钠联合卡铂治疗晚期肺腺癌的临床效果。方法选取晚期肺腺癌患者100例为研究对象,随机分为两组,各50例。对照组患者给予吉西他滨联合卡铂静脉滴注化疗,观察组患者给予培美曲塞二钠联合卡铂静脉滴注化疗,观察两组疗效及毒副反应发生情况。结果观察组治疗有效率为56.0%,高于对照组的30.0%(P<0.01)。观察组疾病控制率为96.0%,高于对照组的84.0%(P<0.05)。观察组患者Ⅲ~Ⅳ度白细胞减少发生率低于对照组(P<0.05)。结论培美曲塞二钠联合卡铂治疗晚期肺腺癌近期疗效肯定,严重毒副反应发生率低。     

吉非替尼与培美曲塞二线治疗晚期非小细胞肺癌临床对比研究

目的对比吉非替尼与培美曲塞二线治疗晚期非小细胞肺癌临床效果。方法选取2013年2月至2016年4月郑州大学第一附属医院收治的72例晚期非小细胞肺癌患者,均经一线化疗后病情未得到控制;根据化疗药物不同分为A、B两组,各36例。A组给予吉非替尼化疗,B组给予培美曲塞化疗。对比两组临床疗效及不良反应发生情况。结果两组治疗总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组血小板、粒细胞减少发生率低于B组,皮疹发生率高于B组,差异有统计学意义(P<0.05);两组恶心呕吐发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论吉非替尼与培美曲塞二线治疗晚期非小细胞肺癌效果相当,但不良反应各异,临床应根据患者自身情况选择最佳治疗药物。     

培美曲塞二钠联合顺铂治疗晚期肺腺癌的临床研究

目的：探讨培美曲塞联合顺铂治疗晚期肺腺癌的临床疗效及毒性反应。方法：选取晚期肺腺癌患者96例,随机分为PP组与TP组,PP组采用培关曲塞联合顺铂治疗,TP组采用多西他赛联合顺铂治疗,对比两组患者的疾病进展时间（TTP）、生存期（OS）和毒性反应。结果：PP组Ⅲ～Ⅳ度白细胞减少病例少于TP组（P〈0．05）,III～Ⅳ度血小板减少病例少于TP组（P〈0．05）,两组疗效和生存率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：两种方案治疗晚期肺腺癌均具有较好的耐受性和临床疗效,应根据患者临床特点,选择个体化治疗。     

TCF21基因对肺腺癌 A549细胞DDP化疗及放疗敏感性的影响

目的：为探讨转录因子21（TCF21）基因对人肺癌A549细胞放化疗敏感性的影响。方法利用慢病毒转染技术在肺癌A549细胞中高表达TCF21基因,以荧光定量PCR、Westernblot分析目的基因的表达,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测高表达TCF21肺腺癌A549细胞对顺铂（DDP）化疗敏感性的影响,平板克隆实验检测高表达TCF21肺腺癌A549细胞对放疗敏感性的影响。结果在72h时,随着DDP浓度的增高（0、0．625、1．250、2．500、5．000、10．000mg／L）,各组细胞的抑制率相应增高,高表达组各个药物浓度时的抑制率明显高于空载体组与未转染组（P＜0．05）,而后两者之间无明显差异;过表达TCF21组随着药物浓度及时间及的增加,高表达组抑制率相应增高（P＜0．05）;接受X照射后,未转染组、未转染＋放疗组、空载体组、空载体＋放疗组、高表达组及高表达＋放疗组克隆形成率分别为：95．17％±2．85％、88．20％±2．03％、93．80％±4．17％、85．60％±2．42％、71．67％±3．21％、56．00％±2．65％。结论TCF21基因高表达能显著增强肺癌A549细胞对放疗及DDP化疗敏感性。     

二甲双胍联合培美曲塞对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究二甲双胍（metformin,Met）联合培美曲塞（pemetrexed,Pem）对人肺腺癌A549细胞株的增殖及凋亡的影响。方法：不同浓度Met（0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mmol/L）、Pem（0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 μmol/L）48 h下处理A549细胞,CCK?8法检测细胞增殖率并确定Met及Pem的半抑制浓度（IC50）;Met（IC50）及Pem（IC50）单用或联用,不同时间（24、36、48 h）下处理A549细胞,CCK?8法检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot 检测Bcl?2、Bax、Mcl?1、Noxa蛋白表达。结果：①不同浓度Met及Pem对A549 细胞均有增殖抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）;②Met+Pem组作用A549细胞增殖抑制率优于单药组（P＜0.05）,呈时间依赖性（P＜0.05）;③Met+Pem组作用 A549细胞的凋亡率（30.6 ± 0.4）%优于Met组凋亡率（13.3 ± 0.3）%和Pem组凋亡率（12.9 ± 0.1）%（P＜0.05）;④与单药组相比,Met+Pem组明显下调Bcl?2、Mcl?1蛋白表达,上调Bax、Noxa蛋白表达（P＜0.05）。结论：Met联合Pem可抑制A549细胞增殖、诱导凋亡,其效果优于单药,机制可能与下调Bcl?2、Mcl?1蛋白,上调Bax、Noxa蛋白的表达有关。     

培美曲塞联合奥沙利铂一线治疗老年晚期肺腺癌的临床观察

目的观察培美曲塞二钠联合奥沙利铂治疗老年晚期肺腺癌的临床疗效及不良反应。方法晚期肺腺癌患者共56例,培美曲塞二钠500 mg/m2第1天,奥沙利铂120 mg/m2第1天,每3周重复。每例患者至少接受两个周期的治疗。结果 56例患者均可评价疗效,无完全缓解（CR）病例,29例获部分缓解（PR）,15例稳定（SD）,12例进展（PD）,总有效率为51.8%,中位生存时间为11个月,中位疾病进展时间为6.4个月,一年生存率为55.4%。毒副作用主要有骨髓抑制和胃肠道反应,均未达到Ⅲ、Ⅳ度。结论培美曲塞二钠联合奥沙利铂方案治疗老年晚期肺腺癌患者的疗效较好,不良反应较轻,患者的耐受性好。     

低氧降低肺癌A549细胞对培美曲塞的药物敏感性

目的 研究低氧环境下非小细胞肺癌A549细胞对化疗药物培美曲塞(Pe)敏感性变化的影响.方法 将A549细胞分组培养,分为常氧对照组、常氧溶剂组、常氧加药组、低氧细胞组、低氧溶剂组、低氧加药组.用MTT法检测Pe对A549细胞增殖能力的影响,并筛选出Pe的适宜实验浓度;用Hoechst染色观察6组细胞凋亡情况;用Wes...     

紫杉醇对人肺腺癌细胞系A549生长抑制作用的研究

目的:评价紫杉醇对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用,以及诱导凋亡与G2-M期阻滞的关系。方法:紫杉醇不同浓度、不同时间分别处理A549细胞,采用MTT试验和流式细胞术进行检测及分析。结果:紫杉醇对A549的细胞毒性呈时间依赖性(P<0.05),10~1 000 nmol/L的浓度对A549生长的影响差异不显著(P>0.05)。紫杉醇浓度≤100 nmol/L时,G2-M期细胞的比率随浓度增加而增高(P<0.05);凋亡的比例在低浓度范围内(0.1~10 nmol/L)呈浓度依赖性,浓度进一步增加,反而降低。10 nmol/L作用时,凋亡的发生呈时间效应;1 000 nmol/L作用时,G2-M期阻滞表现出时间效应,但不如低浓度诱导凋亡出现的早。紫杉醇诱导的凋亡和G2-M期阻滞无相关性(P>0.05)。结论:紫杉醇对A549的生长抑制作用呈时间依赖性,但在一定浓度范围内剂量效应不明显;低浓度紫杉醇虽然对G2-M期阻滞的影响较小,但却能比高浓度更早诱发凋亡,延长作用时间亦可达到有效抑制肿瘤细胞增殖的目的。     

Effects of PI3K inhibitor NVP-BKM120 on acquired resistance to gefitinib of human lung adenocarcinoma H1975 cells

The effects of class I PI3K inhibitor NVP-BKM120 on cell proliferation, cell cycle distri- bution, cellular apoptosis, phosphorylation of several proteins of the PI3K/AKT signaling pathway and the mRNA expression levels of HIFl-ct, VEGF and MMP9 in the acquired gefitinib resistant cell line H1975 were investigated, and whether NVP-BKM120 can overcome the acquired resistance caused by the EGFR T790M mutation and the underlying mechanism were explored. MTT assay was performed to detect the effect of gefitinib, NVP-BKM120, NVP-BKM120 plus 1 ~unol/L gefitinib on growth of H1975 cells. The distribution of cell cycle and apoptosis rate of H1975 cells were examined by using flow cytometry. The mRNA expression levels of tumor-related genes such as HIFI-a, VEGF and MMP9 were detected by using real-time quantitative PCR. Western blotting was used to detect the ex- pression level of phosphorylated proteins in the PI3K/AKT signaling pathway, such as Ser473-p-AKT, Ser235/236-p-S6 and Thr70-p-4E-BP1, as well as total AKT, $6 and 4E-BP1. The results showed that the NVP-BKM120 could inhibit the growth of H1975 cells in a concentration-dependent manner, and H1975 cells were more sensitive to NVP-BKM120 than gefitinib （IC50：1.385 vs. 15.09 ~mol/L respec- tively）, whereas combination of NVP-BKM120 and gefitinib （1 ~trnol/L） did not show more obvious ef- fect than NVP-BKM120 used alone on inhibition of cell growth （P〉0.05）. NVP-BKM120 （1 ~unol/L） increased the proportion ofH1975 cells in G0~G1 phase and the effect was concentration-dependent, and 2 ~maol/L NVP-BKM120 promoted apoptosis ofH1975 cells. There was no significant difference in the proportion of H1975 cells in G0-G1 phase and apoptosis rate between NVP-BKM120-treated alone group and NVP-BKM120 plus genfitinib （1 ~unol/L）-treated group or between DMSO-treated control group and gefitinib （1 Ixmol/L）-treated alone group （P〉0.05 for all）. It was also found that the mRNA expression levels of these genes were down-regulated by NVP-BKM120 （1 ~unol/L）, and NVP-BKM120 （1 ~tmol/L） or NVP-BKM120 （1 pmol/L） plus gefitinib （1 ~tmol/L） obviously inhibited the activation of Akt, $6 and 4E-BP1 as compared with control group, but single use of gefitinib （1 pmol/L） exerted no significant effect. These data suggested that NVP-BKM120 can overcome gefitinib resistance in H1975 cells, and the combination of NVP-BKM120 and gefitinib did not have additive or synergistic effects. It was also concluded that NVP-BKM120 could overcome the acquired resistance to gefitinib by down-regulating the phosphorylated protein in PI3K/AKT signal pathways in H1975 cells, but it could not enhance the sensitivity of H 1975 cells to gefitinib.     

多西紫杉醇与吉非替尼对SPC-Al生长及细胞周期作用的影响

目的:观察多西紫杉醇和吉非替尼联合应用对人肺腺癌细胞SPC-Al生长及细胞周期的影响,探索二者不同用药次序是否比单药更有效及其可能的细胞学机制.方法:反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测SPC-Al细胞中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA的表达情况;Western blotting法检测SPC-Al细胞EGFR蛋白表达;四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT]法检测细胞生长;流式细胞术检测细胞周期.结果:SPC-Al细胞中EGFR mRNA及蛋白均呈过表达;在10-14～10-6 mol/L浓度范围内,多西紫杉醇和吉非替尼均明显抑制SPC-Al细胞生长,二者在IC50浓度下作用呈时间依赖性.二者联合作用对细胞生长的影响与给药的次序有关:与单药组相比,先用多西紫杉醇,后用吉非替尼组对抑制细胞生长有明显增强作用(P<0.05);同时给药或先用吉非替尼,后用多西紫杉醇组对抑制细胞生长无显著增强作用(P>0.05).细胞周期研究显示:多西紫杉醇和吉非替尼分别将SPC-Al细胞阻滞于G2期(G2/M)和G1期(G0/G1,先用多西紫杉醇后用吉非替尼组G2期(G2/M)细胞显著增多,而G1期(G0/G1细胞显著减少(P<0.05).同时用药组或先用吉非替尼后用多西紫杉醇组(G1期(G0/G1)细胞显著增多(P<0.05),而G2期(G2/M)细胞显著减少(P<0.05).结论:多西紫杉醇和吉非替尼都能抑制SPC-Al细胞生长,二者联合作用对细胞生长的影响与给药次序有关,先用多西紫杉醇后用吉非替尼对抑制细胞生长有明显增强作用;同时给药或先用吉非替尼后用多西紫杉醇对抑制细胞生长无显著增强作用.