细胞自噬在多柔比星诱导淋巴瘤细胞凋亡中的作用

目的 研究细胞自噬在阿霉素诱导Raji细胞发生细胞凋亡过程中所起的作用。 方法 采用Western Blot法观察阿霉素杀伤Raji细胞过程中自噬相关蛋白的表达,并用MDC染色法观察Raji细胞内的自噬体和自噬溶酶体的形成情况;并在给予阿霉素的同时使用PI3K通路抑制剂3-MA和自噬溶酶体抑制剂NH4Cl对细胞自噬进行抑制后利用MTT和流式细胞术测定Raji细胞的细胞活力与凋亡。 结果 阿霉素能诱导Raji细胞发生细胞自噬,并且通过抑制自噬能显著地增强阿霉素诱导的Raji细胞的细胞凋亡（p<0.05, p<0.01）从而增加阿霉素的疗效。 结论 在阿霉素杀伤Raji细胞的过程中,阿霉素诱导的细胞自噬能减弱阿霉素诱导的细胞凋亡作用;并且自噬抑制剂3-MA和NH4Cl抑制细胞自噬能增强阿霉素诱导的Raji细胞的细胞作用,增强对Raji细胞的杀伤,并提示抑制自噬可能能增强阿霉素对淋巴瘤的杀伤。     

自噬与凋亡在骨肉瘤中的作用

骨肉瘤是儿童和青少年中最常见的原发性骨肿瘤,其恶性程度高,严重影响患者的生存。虽然手术和多靶点化疗的联合治疗使得患者整体的生存率有了大幅度的提高,但化疗耐药仍然是骨肉瘤治疗的阻碍。骨肉瘤化疗耐药与其在发生发展过程中的凋亡和自噬等有一定关系。现在骨肉瘤中细胞凋亡、自噬的机制以及相互作用已经被初步探索,参与细胞凋亡、自噬的分子靶点、介质及相关机制已经开始研究,这对缓解骨肉瘤治疗过程中的化学耐药指导引领新的方向。     

细胞自噬在三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡中的作用研究

【摘要】 目的 研究细胞自噬在三氧化二砷（ATO）诱导的肝癌细胞死亡中的作用,观察调控细胞自噬对ATO诱导的细胞凋亡有何影响。方法 以人肝癌HepG2细胞为研究对象,在ATO作用于HepG2细胞的基础上,加入自噬激动剂〔雷帕霉素（Rap）〕和自噬抑制剂〔三甲基腺嘌呤（3-MA）〕进行调控。以MTT法检测细胞生存率,透射电镜观察自噬体结构,免疫印迹法分析自噬相关蛋白LC-3和Beclin1的表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 5~20 μmol/L ATO与10 mmol/L 3-MA联用时HepG2细胞存活率比同剂量ATO单独作用时降低（P <0.05）,凋亡率增加（P <0.05）,细胞内呈现典型凋亡反应特征,自噬蛋白LC3和Beclin1表达低于ATO单独作用组（P <0.05）。相反,5~20 μmol/L ATO与0.25 μmol/L Rap联用时,HepG2细胞的存活率比ATO单独作用时显著增加（P <0.05）,凋亡率降低（P <0.05）,细胞内出现大量自噬体结构,自噬蛋白LC3和Beclin1的表达较ATO单独作用组有增加趋势,但差异无统计学意义（P >0.05）。结论 特异性自噬抑制剂能显著增强ATO杀伤肝癌细胞的敏感性,其机制与增强肝癌细胞凋亡有关。     

Akt联合电离辐射对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡、自噬和增殖的影响

目的: 通过检测Akt联合电离辐射对乳腺癌MCF-7细胞凋亡、自噬和增殖的影响,探讨以Akt为靶点的乳腺癌放射治疗作用。方法: 选择人乳腺癌MCF-7细胞、Akt过表达MCF-7(Akt-MCF-7)细胞和Akt低表达(Akt-RNAi-MCF-7) 细胞,实验分为MCF-7组、MCF-7+4 Gy组、Akt-MCF-7+4 Gy组和Akt-RNAi-MCF-7+ 4 Gy组 。3种细胞经4 Gy照射后,Western blotting法检测Akt蛋白表达,AnnexinⅤ-FITC和PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率,MDC染色荧光显微镜观察细胞自噬百分比,MTT法检测细胞增殖活性。结果: 与MCF-7 细胞比较,Akt-MCF-7细胞中Akt蛋白表达强度增加,Akt-RNAi-MCF-7细胞中Akt蛋白表达强度降低。与MCF-7组比较,MCF-7+4 Gy、Akt-MCF-7+4 Gy和Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞凋亡率和自噬百分比均明显增加(P<0.05或P<0.01),且以Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组增加最明显;与MCF-7+4 Gy组比较,Akt-MCF-7+4 Gy组细胞凋亡率和自噬百分比明显降低(P<0.05或P<0.01),而Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞凋亡率和自噬百分比明显增加(P<0.05或P<0.01)。与MCF-7组比较,MCF-7+4 Gy组、Akt-MCF-7+4 Gy组和Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞增殖活性在不同时间点均明显降低(P<0.05或P<0.01),Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞增殖活性降至最低。与MCF-7+4 Gy组比较,Akt-MCF-7+4 Gy组细胞增殖活性在24 h时明显升高(P<0.05),而Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞增殖活性在不同时间点均明显降低(P<0.01)。结论: Akt过表达可以显著降低电离辐射诱导的MCF-7细胞凋亡、自噬和增殖,而Akt低表达作用则相反。     

“Sirt1-自噬”在低氧诱导小鼠成牙骨质细胞凋亡中的作用

目的：初步研究“Sirt1-自噬”在低氧诱导小鼠成牙骨质细胞OCCM-30凋亡中的作用。方法：体外培养小鼠成牙骨质细胞,随机分为对照组、低氧组、低氧+Sirt1激活剂白藜芦醇组、低氧+自噬抑制剂3-MA组、低氧+白藜芦醇+Sirt1抑制剂ex527组、低氧+白藜芦醇+3-MA组,MDC染色观察自噬溶酶体变化;LC3Ⅱ免疫荧光检测自噬体变化;透射电镜观察自噬体;Western blot检测Sirt1、LC3Ⅱ、p62等蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;不同组间结果数据采用单因素方差分析,组间采用LSD-t分析。结果：低氧组较对照组自噬溶酶体含量（P=0.000）及自噬体数量（P=0.000）明显增加,LC3Ⅱ蛋白表达明显增加（P=0.001）,p62蛋白表达明显减少（P=0.000）,细胞凋亡率增加（P=0.000）;低氧+白藜芦醇组较低氧组自噬溶酶体（P=0.019）及自噬体数量（P=0.000）、LC3Ⅱ蛋白表达（P=0.049）、Sirt1蛋白表达（P=0.000）明显增加,p62蛋白表达明显减少（P=0.000）,细胞凋亡率减少（P=0.021）;低氧+白藜芦醇+ex527组...     

自噬在低氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的：探讨自噬在低氧诱导人肾小管上皮细胞株（HK-2）凋亡中的作用。方法：培养HK-2细胞,根据培养环境氧浓度不同分为对照组（21%O2）和低氧组（1%O2）;根据低氧培养时间不同,低氧处理细胞进一步分为：低氧6 h亚组、低氧12 h亚组、低氧18 h亚组和低氧24 h亚组。Western blot检测HK-2细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62和凋亡相关蛋白活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（cleaved-caspase3）表达水平,流式细胞仪检测HK-2细胞凋亡情况;采用低氧诱导稳定表达GFP-LC3的HK-2细胞18 h,在荧光显微镜下观察GFP-LC3自噬小体的变化;进一步采用低氧联合自噬诱导剂雷帕霉素（ra－pamycin,RP）或自噬抑制剂巴弗洛霉素A1（bafilomycin A1,BAfA1）处理HK-2细胞,细胞分为常氧对照组、常氧+雷帕霉素/或巴弗洛霉素组、低氧对照组、低氧+雷帕霉素/或巴弗洛霉素组。Western blot检测Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62和cleaved-caspase3表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：与对照组（0.161±0.043）相比较,低氧12 h[（0.315±0.060）,P=0.019]、18 h[（0.586±0.063）,P=0.000]、24 h[（0.698±0.085）,P=0.000]亚组HK-2细胞cleaved-caspase3蛋白表达明显增多;低氧12 h、18 h、24 h亚组HK-2细胞凋亡率分别为（23.633±5.346）%、（25.200±4.782）%、（38.567±8.046）%,较对照组（11.800±3.966）%明显增多（P=0.036,P=0.021,P=0.000）。同时,低氧18 h、24 h亚组HK-2细胞表达Beclin1蛋白[（0.557±0.071）,（0.897±0.074）[较对照组（0.249±0.040）明显上调（P=0.001,P=0.000）;低氧6 h、12 h、18 h、24 h亚组细胞表达LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白[（1.795±0.143）,（2.873±0.078）,（3.029±0.089）,（3.735±0.059）]较对照组（1.322±0.191）明显上调（P=0.036,P=0.000,P=0.000,P=0.000）;细胞表达自噬底物P62蛋白[（0.776±0.061）,（0.602±0.119）,（0.419±0.117）,（0.384±0.068）]较对照组（0.957±0.035）明显下调（P=0.028,P=0.001,P=0.000,P=0.000）;低氧组细胞GFP-LC3斑点计数相对值为（40.667±6.028）,较对照组（18.667±5.508）明显增加（P=0.010）。雷帕霉素增加自噬后,低氧诱导的HK-2细胞凋亡（26.433±3.402）及cleaved-caspase3蛋白表达（0.265±0.066）较低氧对照组[（36.133±5.856）,（0.358±0.060）]明显减少（P=0.012,P=0.000）;巴弗洛霉素A1抑制自噬后,低氧诱导的HK-2细胞凋亡增多（49.233±3.412）及cleaved-caspase3蛋白表达（1.242±0.110）较低氧对照组[（25.933±3.650）,（0.659 ± 0.060）]明显增加（P=0.000,P=0.000）。结论：自噬在低氧诱导的HK-2细胞凋亡中起保护作用。     

饥饿诱导下小鼠成骨细胞自噬与凋亡相互作用研究

目的:探讨饥饿条件下自噬与凋亡在小鼠成骨细胞中的发生情况与相互关系。方法:培养初代MC3T3-E1小鼠成骨细胞系,将其分为饥饿诱导组与3-甲基腺素(3-MA)预处理饥饿诱导组。其中,饥饿诱导组采用单纯饥饿诱导法,用厄尔氏平衡盐溶液(earle’s balanced salt solution,EBSS)培养1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h。3-MA是一种特异性自噬抑制剂,在3-MA预处理饥饿诱导组中,正常培养的小鼠成骨细胞加入3-MA预处理1 h后,再用EBSS平衡盐溶液培养1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h。应用透射电子显微镜观察饥饿诱导组小鼠成骨细胞自噬与凋亡的形态学变化,应用Western blot免疫印迹法和Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测小鼠成骨细胞中自噬相关蛋白LC3,凋亡相关蛋白caspase 3表达水平的变化。结果:透射电镜结果显示单纯饥饿诱导条件下,细胞在2 h前以自噬为主,2 h后以凋亡为主,并随着时间的延长,凋亡水平逐渐增高。Western blot免疫印迹法结果显示与饥饿诱导组相比,3-MA预处理饥饿诱导组的LC3转化水平在1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h都出产生了明显的下降趋势(P<0.05);caspase 3蛋白表达水平在1 h、2 h、3 h和4 h增高(P<0.05),但0 h、5 h和6 h无差异(P>0.05)。Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测结果和单纯饥饿诱导组相比,3-MA预处理组仅在1 h、2 h、3 h和4 h促进了细胞凋亡(P<0.05),而并未影响到0 h、5 h和6 h的细胞凋亡(P>0.05)。结论:饥饿发生后,小鼠成骨细胞的自噬作用通过降低caspase 3的活化水平,在细胞饥饿2 h前拮抗凋亡作用,随着饥饿时间的不断延长,细胞自噬的表达水平在3 h和4 h时不断下降,自噬对细胞的保护不断降低,最终走向凋亡,此时自噬对凋亡的发生将不再有任何作用。     

APE1乙酰化调节电离辐射诱导的HeLa细胞自噬

目的 探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子(apurinic/aprimidinic endonuclease/redox factor-1,APE1/Ref-1)乙酰化对电离辐射诱导HeLa细胞自噬的调节作用.方法 给予Elekta precise直线加速器处理HeLa细胞及子系细胞APE1wT和APE1 K6R/KTR,应用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)的方法检测APE1乙酰化修饰及Beclin1/Bcl2的结合,流式细胞仪检测细胞自噬的水平,免疫荧光激光共聚焦检测LC3的聚集,Western blot检测APE1、LC3和p62的表达.结果 HeLa细胞APE1乙酰化水平随着照射剂量的增加和照射后时间的延长而逐渐升高(P＜0.05).HeLa细胞LC3Ⅱ的表达与照射剂量呈正相关,而与p62呈负相关(P＜0.05);电离辐射促进细胞的自噬水平和LC3的聚集.电离辐射后,LC3Ⅱ上调;与对照组APE1wT相比,APE1 K6R/K7R细胞Beclin1/Bcl2结合增强,LC3Ⅱ/LC3 I比值降低,p62表达上调(P＜0.05).结论 APE1乙酰化通过Beclin1/Bcl2途径调节电离辐射诱导的HeLa细胞自噬.     

事艾滋病流行病学和电离辐射生物效应领域的研究。

目的：探讨电离辐射联合自噬和凋亡抑制剂及诱导剂对人乳腺癌细胞株增殖的抑制作用。方法： 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）和流式细胞术（FCM）检测经不同剂量（0、2、4、8和10 Gy）照射和4 Gy 、4 Gy+自噬抑制剂三甲基腺嘌呤（-MA）、4 Gy +自噬诱导剂（rapamycin）、4 Gy + 凋亡抑制剂泛半胱氨酸蛋白酶抑制剂（z-VAD-fmk）不同方法处
理的人乳腺癌细胞存活和增殖情况,并分析其量效、时效关系。结果：随着照射剂量的增加
（4、8和10 Gy）及时间的延长（48和72 h）,乳腺癌细胞的增殖抑制率升高,组间比较差
异有显著性（P<0.05 或 P<0.01）。与4Gy＋rapamycin处理组比较,4 Gy + 3-MA和4 Gy + z
-VAD-fmk处理组癌细胞增殖抑制率比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）,不同方法处理后24、48和72
h其抑制率组间比较差异有显著性（P<0.05或 P<0.01）。结论：电离辐射联合自噬诱导剂能够促进癌细胞凋亡,而电离辐射联合自噬抑制剂或凋亡抑制剂能够抑制其凋亡。电离辐射可诱导人乳腺癌细胞自噬并促进其凋亡。     

褪黑素对电离辐射诱导离体小鼠淋巴细胞凋亡的影响

目的：探讨褪黑素（melatonin,MLT）对电离辐射诱导的离体小鼠淋巴细胞凋亡的影响及其机制。 方法：采用流式细胞术（FCM）和荧光分光光度法分别检测小鼠胸腺和脾淋巴细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率。 结果：电离辐射可诱导离体小鼠胸腺、脾淋巴细胞凋亡,在0.5~6.0 Gy范围内凋亡呈剂量依赖性增加。照射前预先加入2 mmol•L^-1MLT,细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率与单纯照射组比较均显著降低,胸腺、脾淋巴细胞凋亡小体百分率分别降低为单纯照射组的86.25%和89.22%,DNA裂解率分别降低为单纯照射组的87.23%和89.16%。 结论：MLT在体外可减轻电离辐射诱导的小鼠淋巴细胞凋亡,对淋巴细胞损伤有防护作用。     

电离辐射对小鼠胸腺bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的作用机制

目的:研究不同剂量X射线照射对小鼠胸腺bcl-2 蛋白表达及细胞凋亡的作用机制.方法:用免疫组织化学、图像分析技术及透射电镜技术分别检测小鼠胸腺bcl-2蛋白表达及细胞凋亡.结果:假照组胸腺实质内bcl-2蛋白表达主要分布于髓质,胸腺皮质内可有少量凋亡的胸腺细胞.2 Gy照射后4、8和12 h胸腺髓质内bcl-2表达减少,皮质内出现许多典型的凋亡细胞;0.075 Gy照射后bcl-2蛋白表达增多,皮质内凋亡细胞减少,且可见较多的细胞分裂像.结论:不同剂量电离辐射对胸腺细胞凋亡的影响与胸腺髓质内bcl-2蛋白表达水平有关.     

电离辐射对Beclin1过表达和低表达MCF-7细胞模型细胞自噬和凋亡的影响及其调控机制

目的:建立Beclin 1过表达和低表达MCF-7细胞模型,检测4 Gy照射后细胞自噬和凋亡的变化,探讨Beclin 1的分子调控作用机制。方法:实验分为MCF-7组、MCF-7+4Gy组、MCF-7-Beclin1+4Gy组和MCF-7-Belin1 RNAi+4Gy组。利用分子生物学方法构建Beclin 1过表达载体pcDNA3.1-Beclin 1,并建立Beclin 1过表达和低表达细胞模型。细胞经4 Gy照射后,采用MDC染色荧光显微镜观察自噬细胞百分比,AnnexinⅤ-FITC和PI染色流式细胞术检测凋亡细胞百分比,Western blotting法检测Beclin 1、P53、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:与MCF-7组比较,MCF-7+4 Gy组、MCF-7-Beclin 1+4 Gy组和MCF-7-Beclin 1 RNAi+4 Gy组自噬和凋亡细胞百分比均明显升高(P<0.05 或 P<0.01),以MCF-7-Beclin 1+4 Gy组升高最明显,且高于MCF-7+4 Gy组 (P<0.05);各组坏死细胞百分比无明显差异。4 Gy照射后,MCF-7组和MCF-7-Beclin 1组细胞中Beclin 1、P53和Bax蛋白表达水平均升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,且以MCF-7-Beclin 1组最为明显。结论:成功建立Beclin 1过表达和低表达MCF-7细胞模型,电离辐射能够诱导其细胞自噬和凋亡,且对Beclin 1过表达细胞作用更明显。Beclin1通过激活P53,进而抑制Bcl-2和激活Bax,从而形成以P53为中心的自噬与凋亡分子调控机制。     

电离辐射对小鼠淋巴结皮质细胞凋亡的影响

目的：研究不同剂量Ｘ射线全身照射对小鼠淋巴结皮质细胞凋亡的影响。方法：采用原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）法检测高、低剂量电离辐射后肠系膜淋巴结皮质中细胞凋亡情况。结果：淋巴结皮质的不同区域对高、低剂量电离辐射的敏感性均不同。结论：低剂量辐射所致的小结间区及深皮质区凋亡细胞数减少,是低水平辐射兴奋效应的一种表现。     

分割剂量电离辐射对卵巢癌耐药细胞自噬性死亡的影响

目的:研究不同电离辐射方式对卵巢癌耐药细胞株SKVCR自噬性细胞死亡的影响,并探讨其相关机制.方法:实验分为假照组、分割照射组(2 Gy·d-1×5)及单次照射组(10 Gy·d-1×1).采用MTT法检测各组细胞对长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP-16)及顺铂(DDP)的药物敏感性,MDC染色及流式细胞术检测自噬发...     

电离辐射对Jurkat T细胞凋亡与坏死的影响

目的：研究电离辐射诱导Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的变化规律,探讨电离辐射作用后细胞的死亡模式与机理。方法：采用Annexin V-EGFP和PI 双染、流式细胞术(FCM)检测不同剂量（0.075、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系,2.000 Gy X射线照射后,与假照组比较,Jurkat细胞凋亡百分率在照射后18 h显著增加,至24 h始终维持在较高水平（P＜0.001）;细胞坏死百分率于照射后4 h显著增加,12 h 达峰值,至48 h始终维持在较高水平（P＜0.001）。剂量-效应关系,0.075Gy X射线照射后18 h,Jurkat T细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组相比较未见明显变化（P＞0.05）。2.000~6.000 Gy较大剂量X射线照射后18 h,细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组比较均呈剂量依赖性增加（P＜0.001）。结论：2.000 Gy以上剂量X射线可以诱导Jurkat T细胞发生凋亡和坏死,细胞坏死比细胞凋亡出现时间更早,持续时间更长。     

低剂量辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的时间效应

目的：研究低剂量辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的时间效应，以揭示低剂量辐射生物效应及其诱导适应性反应的可能机制。方法：实验分D2组（攻击剂量）、D1（诱导剂量）+ D2组和假照组。用X射线照射离体EL-4淋巴瘤细胞，其D1为75 mGy（剂量率12.5 mGy•min^-1），D2为1.5 Gy（剂量率287 mGy•min^-1），D1和D2间隔为3~60 h。通过流式细胞仪检测其细胞凋亡和细胞周期进程的变化。结果：当D1和D2间隔为3~24 h时，D1+D2组细胞凋亡百分数明显低于D2组（P<0.05或P<0.01），G₀/G₁期细胞百分数不同程度低于D2组，而S期细胞百分数明显高于D2组（P<0.05）。结论：75 mGy（12.5 mGy•min^-1）照射后3~24 h，进行1.5 Gy（287 mGy•min^-1）照射，可诱导体外EL-4淋巴瘤细胞凋亡和细胞周期进程的适应性反应。