青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞Wnt/β-catenin信号通路相关因子表达的影响

目的:探讨青蒿琥酯抑制大鼠肝星状细胞增殖并可促进细胞凋亡的作用机制。方法:大鼠肝星状细胞体外培养,分别用含梯度质量浓度(0,1,5,12.5,25,37.5μg·ml-1)青蒿琥酯的培养基培养24 h。采用Western blot方法检测青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞HSC-T6内Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响;采用实时荧光定量PCR方法检测随着药物浓度的变化在RNA水平上的变化。结果:0~37.5μg·ml-1的青蒿琥酯作用大鼠肝星状细胞24 h后蛋白β-catenin和GSK-3β(ser9)逐渐降低(P<0.05)并且有一定的剂量相关性,而GSK-3β逐渐升高(P<0.05)。实时定量PCR结果提示,1~37.5μg·ml-1的青蒿琥酯能抑制β-catenin的表达,且呈剂量相关性。但是GSK-3β在低剂量青蒿琥酯(1~12.5μg·ml-1)的时候并无明显变化(P>0.05),在高剂量青蒿琥酯(12.5~37.5μg·ml-1)抑制GSK-3β的表达(P<0.05)。结论:青蒿琥酯抑制大鼠肝星状细胞与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

FAK抑制剂对人肝星状细胞Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响

目的：探讨FAK抑制剂（PF562,271）对人肝星状细胞（LX-2）Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响,为抗肝纤维化寻找新的作用靶点。方法：CCK-8法检测不同浓度范围（0~7 μmol·L^-1）FAK抑制剂（PF562,271）在12、24、48 h和72 h时对LX-2细胞增殖的影响,Real-time PCR分析PF562,271对LX-2细胞中α-SMA、Collagen Ⅰ mRNA表达水平的影响,Western-blot检测不同浓度PF562,271对LX-2细胞中Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin蛋白表达的影响,评价PF562,271对LX-2细胞中Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响。结果：PF562,271能够抑制LX-2细胞增殖,且该作用呈剂量和时间相关性;qRT-PCR检测到PF562,271能够抑制LX-2细胞中α-SMA、collagen ⅠmRNA表达,与对照组相比,表达量显著降低（P<0.05）;Western-blot结果显示PF562,271对Akt/GSK-3β的磷酸化表达水平显著降低（P<0.05）。结论：FAK抑制剂能够抑制LX-2细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能是通过抑制Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路从而缓解肝纤维化进程。     

青蒿琥酯诱导人结肠癌细胞凋亡与Wnt/β-catenin信号通路的关系研究

目的研究青蒿琥酯(ART)对人结肠癌Lovo细胞增殖的影响和可能的分子机制。方法采用噻唑蓝实验(MTT)检测ART对Lovo细胞的增殖抑制作用,用流式细胞术和电镜检测ART对细胞凋亡的影响,荧光素酶报告质粒检测ART对Wnt/β-catenin通路中TCF4/LEF转录活性的影响,Western blot检测ART对细胞内β-catenin、GSK-3β、cMyc以及凋亡相关蛋白caspase-3表达的影响。结果与对照组相比,ART能抑制Lovo细胞增殖,72 h、320μmol·L~(-1)ART的细胞抑制率高达(78.99±1.95)%(F=898.301,P=0.000)。ART能诱导细胞凋亡,24 h、160μmol·L~(-1)ART的细胞早期凋亡率达到(19.00±0.05)%,同时电镜观察到细胞凋亡的形态学表现。ART能降低TCF4/LEF报告质粒的荧光素酶活性,24 h、160μmol·L~(-1)ART可使TCF4/LEF报告质粒的荧光素酶活性降至(0.36±0.30)%(F=470.954,P<0.01);ART处理48 h后,GSK-3β和caspase-3呈浓度依赖性升高(P<0.01),而β-catenin和c-Myc蛋白水平呈药物浓度依赖性降低(P<0.01)。结论青蒿琥酯能明显抑制结肠癌Lovo细胞增殖,并促进其凋亡,可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。     

青蒿琥酯通过wnt／β-catenin信号通路抑制低分化大肠癌的生长及转移

目的：研究青蒿琥酯（ART）对低分化大肠癌细胞生长和转移的影响，探讨Wnt／β-catenin信号通路在此抗癌效应中发挥的作用。方法：用免疫荧光和激光共聚焦扫描技术，筛选出β-catenin在细胞核内高度聚集。体外试验中，用MTT法、流式细胞术和ki-67免疫荧光法检测ART对该大肠癌细胞增殖和凋亡的影响；用western blot和免疫荧光法，分析ART对β-catenin表达量及细胞内分布的影响。体内试验中，将荷瘤裸鼠随机分组静脉注射给药，20天后处死裸鼠，称量瘤重，并用免疫组化法检测ART对肿瘤组织中β-catenin表达及分布的影响。用活体生物发光成像技术，实时监测ART对肿瘤增殖和转移活性的影响。结果：来源于中国大肠癌患者肝转移灶的肿瘤细胞CLY，其β-catenin聚集于细胞核内，Wnt／β-catenin通路高度激活。体外试验中，ART对CLY的IC50为20．34±2．20μM；10、20及50μM ART作用于CLY 72h后，凋亡率分别为17．37％，31．22％和40．18％，ki-67的表达也呈现出明显的剂量依赖性降低。ART不影响β-catenin的表达量，但能使其从细胞核内转移到细胞膜上，并下调Wnt／β-catenin通路靶基因c-myc和survivin的表达量，这提示该通路活性受到抑制。体内试验中，ART大剂量问歇给药组和小剂量持续给药组的抑瘤率分别为50．5％和35．4％；肿瘤组织中的β-catenin从细胞核内转移到细胞膜上。ART能有效降低CLY细胞转移活性。结论：ART通过下调低分化大肠癌细胞Wnt／β-catenin通路的活性，抑制其增殖、促进其凋亡，并降低其转移活性。     

青蒿琥酯对结肠癌细胞增殖、凋亡及β-catenin表达的影响

目的　探讨青蒿琥酯对结肠癌细胞增殖、凋亡及β-catenin 表达的影响。方法　取对数生长期的结肠癌HT-29 细胞,用12.5 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL的青蒿琥酯分别培养24 h、48 h 和72 h。MTT 检测细胞增殖;AnnexinV/PI 双染检测细胞凋亡率;流式细胞术检测细胞周期分布;Western blot 检测β-catenin 蛋白表达。结果　MTT 结果显示,青蒿琥酯能明显抑制结肠癌HT-29 细胞增殖,与对照组（0 μg/mL）相比,差异具有统计学意义（P<0.01）;AnnexinV/PI 检测结果表明,细胞的凋亡率随着青蒿琥酯浓度的增高而逐渐增高,明显高于对照组（P<0.05）;流式细胞仪检测细胞周期变化的结果显示,HT-29 细胞G0/G1 期比例与青蒿琥酯浓度呈反比（P<0.05）,G2/M 及S 期比例逐渐增加（P<0.05）。Western blot 检测结果证实,青蒿琥酯处理细胞后β-catenin 表达随药物浓度升高而降低（P<0.05）。结论　青蒿琥酯可抑制结肠癌细胞增殖,促进细胞凋亡,下调β-catenin 的表达,有望成为临床治疗肿瘤的新型药物。     

青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响

摘 要 目的:探讨青蒿琥酯（Artesunate,Art）对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）增殖和凋亡的影响。方法: 选用活性良好的HSC-T6细胞进行体外培养,应用倒置显微镜观察药物作用后的细胞形态改变;用CCK-8测定不同浓度、不同时间Art对该细胞增殖的抑制作用的影响;用Annexin Ⅴ和PI双染的流式细胞术检测HSC-T6的细胞凋亡率的影响。结果:①倒置显微镜结果显示,Art作用过的贴壁细胞数目变少、突触变短变细、细胞表面变皱、由星形变成圆形。②12.5～200 μg·ml^-1的Art在0～72 h范围内对HSC的增殖有明显的抑制作用（P＜0.01）,抑制率有时间和剂量依赖性。③流式细胞仪结果显示随着剂量、时间的增加,凋亡率显著增加（P＜0.05）。结论:Art能抑制HSC T6细胞的增殖,并可促进细胞凋亡。     

异橙黄酮通过AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路诱导胃癌AGS细胞凋亡和周期阻滞研究

目的:探讨异橙黄酮对胃癌细胞AGS增殖、凋亡和周期的影响及相关作用机制.方法:用2.5,5和10 μmol·L-1的异橙黄酮处理胃癌AGS细胞,另设阴性对照组,加入等体积的DMSO.应用CCK-8、EDU和流式细胞数检测各组AGS细胞增殖、凋亡和周期情况;分子对接技术明确异橙黄酮的可能作用靶点;Western blot...     

青蒿琥酯对人肝癌细胞HepG2增殖迁移及细胞凋亡的影响

目的利用多种生物学方法检测青蒿琥酯对肝癌细胞在增殖、周期、迁移、细胞凋亡等生物学特性方面的影响。方法在一定时间下,将不同浓度的青蒿琥酯(ART)作用于人肝癌细胞株HepG2,利用噻唑蓝(MTT)方法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡变化情况;利用trans-well检测细胞迁移变化情况;利用聚合酶链反应(PCR)方法,检测ART用药前后与细胞凋亡相关的基因Caspase3的表达变化情况。结果对照组(0 mg/L ART)HepG2细胞在增殖、迁移等方面的能力显著高于青蒿琥酯实验组;对照组静息期(G0/G1期)细胞比例、细胞凋亡率显著低于ART实验组;ART实验组细胞Caspase3基因的表达水平显著高于对照组。结论实验结果表明ART是新的潜在的有效抗肝癌药物,可以通过抑制细胞增殖、迁移,阻滞细胞周期,提高细胞凋亡率等方面起到抑癌作用。     

青蒿琥酯对脂多糖诱导人结肠上皮细胞炎症反应影响的分子机制研究

目的探讨青蒿琥酯对脂多糖诱导人结肠上皮细胞炎症反应的影响,并研究青蒿琥酯对人结肠上皮细胞炎症治疗作用的可能机制。方法体外原代培养人结肠上皮细胞,并分为空白对照组,LPS诱导组,青蒿琥酯低、中、高剂量组,CCK-8法检测青蒿琥酯对人结肠细胞增殖的影响,ELISA法检测青蒿琥酯对人结肠上皮细胞分泌IL-6和TNF-α炎症因子的影响,Western blot检测青蒿琥酯对Traf6/p65信号通路的影响。结果与LPS诱导组相比,青蒿琥酯能显著改善LPS对人结肠上皮细胞增殖的抑制作用(P<0.05);与LPS诱导组相比,各剂量青蒿琥酯均显著降低了人结肠上皮细胞分泌的IL-6和TNF-α水平(P<0.05);免疫印迹法检测发现,各剂量青蒿琥酯组相对LPS诱导组细胞中Traf6和p-p65表达水平明显降低(P<0.05)。结论青蒿琥酯可抑制人结肠上皮细胞炎症反应,进而改善炎症对细胞增殖的抑制作用,其作用机制可能与下调Traf6/p65信号通路活化有关。     

褪黑素对PDGF诱导的肝星状细胞中JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨褪黑素对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的肝星状细胞-T6(HSC-T6)JAK2/STAT3信号通路的影响。方法将HSC-T6细胞分为6组:对照组、模型组、实验组(褪黑素1 nmol·L^-1、1μmol·L^-1、0.1 mmol·L^-1)、抑制剂组(AG490为JAK2/STAT3通路的抑制剂),MTT实验检测褪黑素对PDGF激活的HSC-T6细胞增殖的影响;免疫组化和Western blot检测褪黑素HSC-T6细胞中p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达。结果与对照组比较,PDGF能明显激活HSC-T6细胞增殖,明显上调HSC-T6细胞中p-JAK2、p-STAT3的表达;与模型组比较,褪黑素和抑制剂均可抑制PDGF激活的HSC-T6细胞增殖,显著下调p-JAK2、p-STAT3的表达。结论褪黑素可抑制PDGF诱导的HSC-T6的活化与增殖,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

ERK1/2信号通路在青蒿琥酯抑制PDGF-BB诱导HSC细胞增殖中的作用

目的:观察青蒿琥酯(Artesunate,Art)对血小板衍生生长因子-BB(platelet derived growthfactor-BB,PDGF-BB)刺激大鼠肝星状细胞(he-patic stellate cell,HSC)增殖,磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(phosphorylated extracellularsignal regulated kinase 1/2,p-ERK1/2)表达的影响,探讨Art抗肝纤维化的分子机制。方法:实验分为对照组、PDGF-BB组、PDGF-BB+Art组和PDGF-BB+PD98059组。以PDGF-BB诱导HSC增殖,再分别加入不同浓度的Art和ERK1/2抑制剂PD98059。CCK-8法检测各组HSC细胞的增殖情况,ELISA法测定细胞上清液中Ⅰ型胶原的含量,免疫印迹(Western blot-ting)法检测各组细胞ERK1/2的表达及活化情况。结果:PDGF-BB可诱导HSC细胞增殖,p-ERK1/2表达增高,而PDGF-BB+Art组、PDGF-BB+PD98059组HSCⅠ型胶原的含量及p-ERK1/2活性均降低。结论:ERK1/2参与了PDGF-BB诱导HSC细胞增殖的作用,Art抗PDGF-BB所诱导的HSC细胞增殖作用与其抑制ERK1/2的活化有关。     

藏红花素介导DKK3调控GSK-3β/β-catenin通路对阿尔兹海默症大鼠的认知改善作用

目的：探讨藏红花素（crocin）对阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease,AD）小鼠认知能力的改善作用及机制。方法：SD大鼠海马区注射Aβ25-35建立AD模型,随机分为AD组、AD+L、M、H-crocin组（10、20、40 mg/kg）和AD+donepezil组（1 mg/kg盐酸多奈哌齐）,腹腔注射治疗4周,另设置Sham组。采用避暗实验、水迷宫实验评估大鼠学习、记忆能力,ELISA测定大鼠血清Aβ含量,HE染色和Tunel染色确定大鼠海马区内病理改变及神经元细胞凋亡,免疫组化测定大鼠海马区Brdu、Dcx、NeuN表达,Western blot测定大鼠脑组织Aβ、DKK3、β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β、Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果：与Sham组相比,AD组大鼠的学习、记忆能力下降,血清Aβ含量升高,且海马区的病理改变严重,神经元细胞凋亡增加,Brdu、Dcx、NeuN含量降低,Aβ、DKK3、pGSK-3β/GSK-3β、Caspase-3、Bax蛋白表达升高,β-catenin、Bcl-2蛋白表达降低（P<...     

青蒿琥酯抗大鼠免疫性肝纤维化的作用及机制研究

目的研究青蒿琥酯抗实验性肝纤维化的作用及其可能机制。方法制备牛血清白蛋白免疫性大鼠肝纤维化模型。动物随机分为6组:正常对照组、模型对照组、Art组(5、15、45 mg.kg-1)、阳性对照Col组(0.1 mg.kg-1)。Masson染色观察肝组织病理变化,Jamall法测定肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量,RT-PCR技术检测肝组织转化生长因子β1(TGF-β1),α-肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达。体外培养大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),用TGF-β1(5μg.L-1)刺激,与Art(终浓度6.25、25、50 mg.L-1)共培养后,检测HSC-T6中Ⅰ型前胶原(procollagenⅠ)mRNA及Ⅰ型胶原(collagenⅠ)蛋白的表达。结果与模型组相比,Art各组能减轻肝组织纤维增生的程度,降低肝组织Hyp含量,使肝组织α-SMA、TGF-β1 mRNA和HSC-T6中procollagenⅠmRNA和collagenⅠ蛋白的表达水平下降。结论 Art有明显的抗肝纤维化作用,其机制可能与抑制HSC活化,降低TGF-β1 mR-NA及collagenⅠ蛋白的表达有关。     

青蒿琥酯抗人宫颈癌Hela细胞的实验研究

目的探讨青蒿琥酯的抗肿瘤作用。方法采用四甲基二氮唑蓝（MTT）法观察青蒿琥酯及其含药血清对人宫颈癌Hela细胞的体外抑制作用。结果青蒿琥酯及其含药血清均能明显抑制体外培养的人宫颈癌Hela细胞的生长，青蒿琥酯的半数抑瘤浓度（IC50）为31、21μg／mL，20％和10％的含药血清的抑制率分别为29．78％和21、91％。结论青蒿琥酯对体外培养的人宫颈癌Hela细胞有明显的抑制作用。     

青蒿琥酯在大鼠体内外抗肝纤维化的作用

目的观察青蒿琥酯(artesunate,Art)对大鼠肝纤维化的治疗作用及其对大鼠原代肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)增殖的影响,并探讨其作用机制。方法建立牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)免疫性肝纤维化大鼠模型,分为正常对照组、模型对照组及青蒿琥酯低、中、高剂量组;给药组分别给予不同剂量的青蒿琥酯灌胃,正常和模型对照组给予同体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续2个月;酸水解法检测其肝组织胶原蛋白含量,测定血清白蛋白(albumin,Alb)、丙氨酸氨基转移酶(alanine amino transferase,ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amino transferase,AST)水平;苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE染色)和胶原染色法对肝组织切片染色。分离大鼠HSCs,以培养活化HSCs。用MTT法测定HSCs增殖率,消化法测定细胞培养上清液中的羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,Western blot和RT-PCR法检测HSCs p53表达。结果与正常对照组相比,模型对照组大鼠血清Alb水平降低(P<0.05),ALT、AST水平增高(P<0.05);与模型对照组相比,青蒿琥酯低、中、高剂量组血清AST水平降低(P<0.05),大鼠肝组织胶原蛋白含量降低(P<0.05)。青蒿琥酯对培养活化的HSCs有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05);青蒿琥酯作用24 h后,HSCs分泌羟脯氨酸减少(P<0.05),p53 mRNA表达增加(P<0.05)。结论青蒿琥酯在大鼠体内、体外均有抗肝纤维化作用,该作用与其增加HSCs p53的表达有关。     

青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞Caspase-3表达的影响

目的 研究青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblast,HELF)系HFL-Ⅰ细胞体外生长的影响,为青蒿琥酯抗纤维化提供实验依据.方法 采用CCK-8法检测青蒿琥酯对体外培养的HFL-Ⅰ细胞生长的影响,用流式细胞术测定细胞凋亡率;RT-PCR法测定凋亡相关蛋白Caspase...     

眼镜蛇毒NGF通过PI3K/Akt促人肝星状细胞凋亡的机制研究

目的探讨眼镜蛇毒神经生长因子NGF对肝纤维化关键细胞LX2的作用及机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度NGF和LY294002对LX2细胞增殖的影响,流式法检测NGF对LX2细胞凋亡的影响,Western blot法研究NGF和LY294002单用与联用对p-Akt蛋白水平表达的影响。结果NGF可降低LX2细胞存活率,最小有效浓度为1 mg·L~(-1);增加LX2细胞凋亡率;降低p-Akt表达水平,而对Akt的表达水平无明显影响。结论 NGF可通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活,促进LX2细胞凋亡,并有一定的浓度依赖性。本研究对阐明肝纤维化的发病机制,为临床上治疗肝纤维化均有重要意义。     

鬼针草总黄酮对肝纤维化大鼠肝星状细胞TGF-β1信号传导通路的影响

目的研究外源性转移生长因子-β1(transforming growth factor betal,TGF-β1)对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的激活作用,观察鬼针草总黄酮(total flavonoids of Bidens Bipinnata L,TFB)对HSC中smad2/7和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达的影响,以探讨TFB抗肝纤维化的作用及分子机制。方法采用Collagenase Ⅳ胶原酶原位肝灌注法分离HSC,MTT法观察TFB对TGF-β1刺激下HSC增殖的作用,ELISA法检测HSC自分泌TGF-β1和产生Ⅰ型胶原的影响;RT-PCR法观察分析TFB对TGF-β1刺激下HSC中smad2/7和Ⅰ型胶原基因表达的影响;Westernblot法观察TFB对TGF-β1刺激下HSC中smad2蛋白表达的影响。结果TGF-β1明显促进HSC增殖、自分泌TGF-β1和产生胶原,促进HSCsmad2、Ⅰ型胶原mRNA及smad2蛋白的表达,明显抑制smad7mRNA表达(P<0.05),TFB作用后,TGF-β1刺激的HSC中smads2mRNA、蛋白和Ⅰ型胶原mRNA表达受到抑制,smad7mRNA表达明显上调。结论TFB抗肝纤维化作用可能与其阻断HSCTGF-β1通路进而阻断HSC的活化、增殖有关。     

Wnt/β-catenin信号转导通路在瘢痕疙瘩形成中的作用机制研究

目的 了解Wnt/β-catenin信号转导通路在瘢痕疙瘩原代成纤维细胞中关键蛋白和mRNA水平,探讨其在瘢痕疙瘩形机制中的作用.方法 采用组织块培养法进行原代成纤维细胞培养,通过Western Blot和RT-PCR法分别检测正常皮肤以及瘢痕疙瘩成纤维细胞中Wnt/β-catenin信号转导通路中相关信号分子Wnt5...