转化生长因子-β1对骨形态发生蛋白诱导成骨的促进作用

目的：我们通过观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ,TCF－β1）和骨形态发生蛋白(bone morpho-genetic protein,BMP)共同修复骨缺损,达到进一步阐明BMP诱导成骨机制的目的,方法：实验采用日本大耳白兔左尺骨中段12mm骨缺损实验模型,分为实验组,对照组和空白组,缺损内分别植入BMP／TGF－β1／载体,BMP／载体,载体,通过X线,组织学及电镜对比观察三组骨缺缶修复情况,结果：实验组骨缺损无论是骨痂出现还是骨接发生时间均较对照组明显提前,空白组骨缺损形成骨不连,实验组成骨细胞和软骨细胞无论出现的时间,数量和功能活跃程度均优于对照组,电镜观察见成骨细胞,软骨细胞内线粒体丰富,内质网增多,而对照组则相对较少,软骨细胞内线粒体丰富,内质网络增多,而对照组则相对较少,结论：TGF－β1具有促进BMP诱导成骨的作用,TGF－β1通过促进间充质细胞分裂增殖为BMP提供靶细胞,促进成骨细胞及软骨细胞的分裂增殖,促进骨细胞合成产生I型胶原,促进基质钙化,碱少骨吸收等作用来促进BMP的诱导成骨。     

骨形态生成蛋白在成骨细胞分化机制中的研究进展

在成骨细胞分化和骨形成过程中，骨形态生成蛋白（BMP）是关键性的调节因素，它通过调节转录因子以及借助一些未知的信号转导途径，发挥诱导分化和定向分化的效应，而借助于受体的特异性信号转导系统和特异的受体抑制剂。其表达水平及功能还可受到多种方式的调控。作者就BMP在骨分化中的作用、基本机制方面的研究进展进行综述。     

骨形态发生蛋白-4对肝干细胞增殖与分化的影响

目的:探讨骨形态发生蛋白-4(BMP-4)对大鼠肝干细胞系WB-F344的增殖及分化的影响.方法:采用50 ng/mL的基因重组BMP-4作用于WB-F344细胞,以BMP-4拮抗剂Noggin(200 ng/mL)阻断BMP-4的作用为对照.在实验不同时间点,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测BMP-4对WB-F...     

17β-雌二醇抑制星形胶质细胞趋化Th17细胞的机制

摘 要: 【目的】 本研究旨在明确17β-E2能否通过阻断星形胶质细胞表达抗原提呈相关分子(MHCⅡ?CD80和CD86)和抑制细胞因子分泌,从而抑制其对Th17细胞的趋化作用?【方法】 原代培养的小鼠星型胶质细胞分为5组:未处理组?IFN-γ (20 ng/mL)处理组?IFN-γ (20 ng/mL)+17β-E2(0.28 ng/mL)处理组?IFN-γ (20 ng/mL)+ 17β-E2(2.75 ng/mL)处理组和IFN-γ (20 ng/mL)+ 17β-E2(27.50 ng/mL)处理组?Western blotting检测未处理组和IFN-γ (20 ng/mL)处理组星形胶质细胞ERα和ERβ表达? 免疫荧光检测各处理组星形胶质细胞MHCⅡ表达?流式细胞术检测各处理组星形胶质细胞MHCⅡ及协同刺激分子表达? ELISA检测各组星形胶质细胞分泌IL-17和TGF-β情况? 趋化实验检测各处理组星形胶质细胞条件培养基体外趋化Th17细胞的能力? 【结果】 IFN-γ诱导星形胶质细胞ERα表达上调,对ERβ表达无明显影响? 不同浓度17β-E2处理均明显降低星形胶质细胞MHCⅡ及协同刺激分子的表达?27.50 ng/mL浓度的17β-E2可抑制IFN-γ活化星形胶质细胞产生IL-17,而对TGF-β无明显影响?2.75 ng/mL浓度的17β-E2可抑制IFN-γ活化星形胶质细胞趋化Th17细胞?【结论】 本研究的结果表明17β- E2可能部分通过抑制炎症活化的星形胶质细胞表达MHCⅡ?CD80?CD86及分泌炎性因子抑制对Th17细胞的趋化作用?     

17-β-雌二醇对凝血酶诱导血管平滑肌细胞增生和c-fos、bcl-2蛋白表达影响

目的通过建立凝血酶(T)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增生模型,观察17-β-雌二醇(E_2)对 T 诱导的VSMC 增生的影响,并进一步观察其对 c-fos 蛋白和 bcl-2蛋白的表达有何作用,旨在认识 E_2作用的分子机制。方法以细胞计数法和流式细胞仪 DNA 含量测定,细胞周期分析的方法观察 T 及 E_2对 VSMC 增生和 DNA 合成的影响。免疫印迹法(Western blot)观察 T 及 E_2等各处理因素作用1小时及3天后,c-fos 蛋白和 bcl-2蛋白的变化情况。结果 10~(-9)～10~(-7)M 的E_2呈浓度依赖性地抑制2u/ml T 诱导的细胞增生和 DNA 合成作用(P<0.01)。各处理因素作用1小时后,T 能显著促进 c-fos蛋白的增加。各浓度的 E_2能显著抑制 T 的促 c-fos 蛋白增加作用,作用3天后,c-fos 蛋白含量各组差异无显著性。各处理因素作用1小时后,bcl-2蛋白无显著变化,作用3天后,T 能显著促进 bcl-2蛋白的增加。各浓度的 E_2能显著抑制这种增加。上述各项指标中,雌激素受体(ER)拮抗剂 tamoxifen(TAM)(10~(-6)M)能部分阻断10~(-7)M E_2的作用,差异有显著性。结论 E_2能抑制 T 诱导的 VSMC 增生,这可能与其抑制 c-fos 蛋白和 bcl-2蛋白表达有关,且该作用至少部分通过 ER 介导。     

17β-雌二醇通过ERK1/2途径诱导绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-1的表达

目的 探讨17β-雌二醇(E2)对输卵管上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)mRNA基因表达的影响以及相关信号通路作用机制.方法 利用10-8 mol/L E2培养绵羊输卵管上皮细胞6 h,分别添加MAPK/ERK1/2信号通路阻断剂和PI3 K信号通路阻断剂,通过RT-qPCR技术检测SBD-1 mRNA的表达变化....     

骨形态发生蛋白诱导大鼠胚胎NSCs分化研究

目的：建立骨形态发生蛋白（BMP7）诱导大鼠E14中枢神经系统神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）分化的模型。方法：50μg／LBMP,处理大鼠E14中枢神经系统NSCs,以RT—PCR、Western杂交和免疫细胞化学方法,检测平滑肌细胞标记物SMA、Calponin的表达。结果：骨形态发生蛋白BMP,处理E14大鼠胚胎NSCs,作用6d后以抗Rip、抗-GFAP和抗pHI—tubulin抗体分别鉴定少突胶质细胞、星形胶质细胞和神经元,发现无一细胞表达Rip抗原,10％左右细胞表达GFAP,约1．4％细胞βⅢHI—tubulin阳性;以抗-平滑肌肌动蛋白（Smooth muscle actin,SMA）和抗-Calponin检测平滑肌细胞标志物SMA和Calpo—nin蛋白的表达,65％的细胞共同表达SMA和Calponin。结论：50μg／LBMP,处理大鼠E14中枢神经系统NSCs,大部分细胞分化为平滑肌细胞,其次为星型胶质细胞。     

17β-雌二醇对小鼠子宫DLL1基因表达的影响

目的:研究高水平17β-雌二醇持续刺激去卵巢小鼠,对子宫组织DLL1基因表达的影响。方法:将16只小鼠随机平均分为正常对照组和去卵巢E2实验组(手术造模+E2干预);TRIzol一步法提取两组小鼠子宫组织总RNA,采用RT-PCR法扩增目的基因及内参基因的目的片段,紫外光下观察电泳结果并采用QuantityOne-4.6.2凝胶分析软件测定目标带光强度值。结果:两组小鼠子宫组织标本均出现目的基因DLL1与内参基因Gapdh的目标带,DLL1/Gapdh光强度的比值分别为0.33±0.12、0.78±0.11,两者差异有统计学意义(P<0.05),并且去卵巢E2实验组明显高于正常对照组。结论:高剂量E2的持续干预可显著提高去卵巢小鼠子宫组织DLL1基因的表达水平,可能是雌激素依赖性子宫组织细胞不正常增殖的病理基础。     

17β-雌二醇对神经干细胞分裂分化作用的观察

目的　探讨雌激素对神经干细胞分裂分化的作用。方法　大鼠神经干细胞培养模型加入剂量为 10mg/L 17β 雌二醇和 10mmol/LBrdU ,分别在培养 4、12h取出细胞 ,进行免疫细胞化学标记。结果　培养 4h ,雌二醇组单位面积细胞总数和BrdU标记细胞与对照组比较差别无显著性 (P=0 2 5 9,P =0 0 6 7) ,培养 12h ,雌二醇组细胞BrdU胞核着色变浅 ,胞浆有着色 ,有 4 0 %的细胞可见明显突起 ,单位面积的细胞总数较对照组无显著性改变 (P =0 0 6 ) ,BrdU标记细胞数目减少 (P =0 0 0 3) ,提示分裂细胞减少。另一方面 ,培养 12h时的雌二醇处理组BrdU免疫荧光阳性细胞的光密度 (OD)显著高于对照组 (P <0 0 1)。结论　 17β 雌二醇可以抑制大鼠神经干细胞分裂 ,促进神经干细胞分化。     

人重组骨形态发生蛋白-2和β转化生长因子在诱导成骨中的协同作用

目的:对人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)和β转化生长因子(TGF-β)在诱导成骨的协同作用进行探讨. 方法:210只BALB/c小鼠随机分为3组,每组70只,试验侧均位于右后肢,设立rhBMP-2/牛松质骨载体、单纯牛松质骨载体为对照组. 分别于术后12 h～21 d共11个时间点取材,观察其诱导成骨过程. 结果:rhBMP-2/TGF-β/牛松质骨载体组在诱导间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成方面均早于rhBMP-2/牛松质骨载体组,成骨量优于rhBMP-2/牛松质骨载体组,其碱性磷酸酶水平高峰较对照组提前,其组织钙含量明显高于对照组(P<0.05). 而单纯牛松质骨载体组在21 d 仅出现了少量增殖的间充质细胞. 结论:rhBMP-2和TGF-β在诱导成骨调节中存在着协同作用.     

17β-雌二醇在体外诱导人胆管上皮细胞增殖的研究

目的：研究利用雌激素诱导人胆管上皮细胞的增殖作用,并探讨其临床作用。方法：用17β-雌二醇作用于人胆管上皮细胞,CCK8方法检测17β-雌二醇对人胆管上皮细胞生长的影响,Westernblot胆管上皮细胞的雌激素受体（ER-a,ER—β）表达水平,并通过ELISA检测上述两种培养条件下胆管上皮细胞培养上清中表皮细胞生长因子（epidermal growth factor,EGF）的分泌水平。结果：17β-雌二醇可以促进人胆管上皮细胞增殖,雌二醇组的人胆管上皮细胞ER-a,ER-p表达水平明显高于对照组（P〈0．05）,用ELISA检测两组的上清中表皮细胞生长因子（epidermal growthfactor,EGF）无显著性差异（P〉0．05）。结论：17β-雌二醇可以诱导人胆管上皮细胞增殖,主要通过胆管上皮细胞的雌激素受体表达水平上升,而不是表皮细胞生长因子的通路来实现的。     

骨形态发生蛋白对人骨髓基质细胞的体外成骨分化影响

目的 提取牛骨形态发生蛋白，并观察其对人骨髓基质细胞的体外成骨分化作用，为将骨形态发生蛋白与骨髓基质细胞用于进一步的缺损修复研究提供实验依据。方法 从小牛骨中的提取骨形态发生蛋白，配制条件培养液，并作用于培养状态的人骨髓基质细胞，染色检测细胞碱性磷酸酶，I型胶原表达情况，放免法测定培养液中骨钙素含量。结果 人骨髓基质细胞经衣导培养后，碱性磷酸酶，I型胶原，骨钙素表达明显增加。结论 体外培养时，天然骨形态发生蛋白可促进人骨髓基质细胞的成骨分化。     

骨形态形成蛋白-7对体外培养肾小管上皮细胞TGF-β1诱导转分化的作用

目的观察骨形态形成蛋白-7(BMP-7)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人类肾小管上皮细胞(HKC)转分化的作用,并探讨其作用机制.方法将体外培养的HKC分为5组:(1)无血清培养基阴性对照组;(2)TGF-β1阳性对照组;(3)BMP-7单独作用组;(4)BMP-7与TGF-β1共同作用组;(5)BMP-7预处理后加入TGF-β1组.间接免疫荧光法测定HKC角蛋白(keratin)的表达;免疫组织化学方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及E-钙粘素(E-cadherin)表达;流式细胞技术测定α-SMA阳性HKC的百分数;半定量反转录PCR(RT-PCR)方法测定HKC细胞α-SMA、TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA的表达.结果TGF-β1与BMP-7共同作用HKC细胞48 h,α-SMA表达较阳性对照组减弱,而E-钙粘素及角蛋白表达较阳性对照组增强,与阴性对照组相比差异无显著性;BMP-7预处理后再加入TGF-β1作用HKC细胞48 h,α-SMA表达较阳性对照组减弱,而E-钙粘素及角蛋白表达较阳性对照组增强,与阴性对照组相比差异无显著性;流式细胞技术测定α-SMA阳性HKC的百分数,在BMP-7与TGF-β1共同作用组明显低于阳性对照组(9.7% vs 19.8%,5.8% vs 19.8%,P＜0.05).BMP-7组预处理组亦明显低于阳性对照组(8.7% vs 19.8%,P＜0.05).RT-PCR显示BMP-7与TGF-β1共同或者预处理HKC细胞,α-SMA mRNA表达分别为阳性对照组的15%和12%,而TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA表达水平分别为阳性对照的28%和19%及47%和36%.结论一定浓度的BMP-7与TGF-β1同时培养或预处理,都能抑制TGF-β1诱导的HKC细胞转分化;BMP-7可以预防和抑制HKC细胞TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA表达,这很可能是BMP-7抑制HKC细胞转分化的重要机制之一.     

17β-雌二醇对新生牛血清诱导的血管平滑肌细胞增殖反应的影响及其机制

目的：探讨雌甾-1,3,5（10）-三烯-3,17β-二醇（17β-雌二醇）对新生牛血清诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖反应的影响及其机制。方法：用新生牛血清刺激培养的VSMCs增殖,MTT法检测17β-雌二醇对新生牛血清诱导的VSMCs增殖的影响,并用Western blot检测caveolin-1蛋白,诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及NO在此过程中的变化。结果：与对照组比,新生牛血清可促进VSMCs增殖（P〈0.05）,17β-雌二醇作用24 h后能明显抑制上述作用（P〈0.05）;17β-雌二醇预处理可抑制新生牛血清诱导的VSMCs中caveolin-1,iNOS蛋白表达下降及NO释放（P〈0.05）;17β-雌二醇受体阻断剂1-{4-[2-（n,n-二甲氨基）乙氧基]苯}-1,2-二苯-1-丁烯（他莫昔芬）预处理可部分逆转17β-雌二醇的抑制作用（P〈0.05）。结论：17β-雌二醇通过其受体可抑制新生牛血清诱导的VSMCs增殖,此过程与上调caveolin-1蛋白表达,激活iNOS,增加NO释放有关。     

神经生长因子协同重组人骨形态发生蛋白-2诱导成骨的研究

目的在重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)异位成骨过程中,局部应用神经生长因子(NGF),探讨NGF对BMP诱导成骨的作用.方法 ICR小鼠36只,随机分为实验组和对照组,于右侧股后部肌间隙内植入rhBMP-2胶原复合物.术后第3天开始,连续7 d,在实验组和对照组rhBMP-2植入部位,分别注射NGF和磷酸盐缓冲液(PBS).术后第10、20和30天取材,进行放射学、生化和组织学检测.结果两组均于术后第10天有新骨形成,但实验组新骨生成量明显大于对照组;术后第10和第20天,实验组局部组织碱性磷酸酶活性明显高于对照组;术后各时间段实验组局部组织钙和磷含量均明显高于对照组;术后第30天,实验组骨组织胶原纤维排列明显较对照组规则.结论 NGF具有协同rhBMP-2诱导成骨的作用.     

神经生长因子协同重组人骨形态发生蛋白-2诱导成骨的研究

目的在重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)异位成骨过程中,局部应用神经生长因子(NGF),探讨NGF对BMP诱导成骨的作用。方法ICR小鼠36只,随机分为实验组和对照组,于右侧股后部肌间隙内植入rhBMP-2胶原复合物。术后第3天开始,连续7d,在实验组和对照组rhBMP-2植入部位,分别注射NGF和磷酸盐缓冲液(PBS)。术后第10、20和30天取材,进行放射学、生化和组织学检测。结果两组均于术后第10天有新骨形成,但实验组新骨生成量明显大于对照组;术后第10和第20天,实验组局部组织碱性磷酸酶活性明显高于对照组;术后各时间段实验组局部组织钙和磷含量均明显高于对照组;术后第30天,实验组骨组织胶原纤维排列明显较对照组规则。结论NGF具有协同rhBMP-2诱导成骨的作用。     

17β-雌二醇对成骨细胞生成的作用

目的　研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其核结合因子α1(Cbfα1)及过氧化物酶增殖活化受体γ2 (PPAR γ2 )mRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法　 1,2 5 (OH ) 2 D3 和地塞米松 (DEX)诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化 ,应用半定量RT PCR及Northernblot技术 ,观察不同浓度E2对骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1及PPAR γ2mRNA表达的影响 ,以α 磷酸奈酚为底物 ,测定细胞碱性磷酸酶 (ALP)的活性 ,VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量。结果　E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1mRNA的表达 ,E2浓度为 (0 10 -6)mol/L时 ,Cbfα1mRNA的表达量从 (2 5 0± 3 3 ) %降至 (14 5± 1 3 ) % (P <0 0 1)和 (6 5± 1 9) % (P <0 0 1) ;E2能明显促进骨髓基质细胞在分化介质中PPAR γ2mRNA的表达 ,在上述E2浓度时 ,PPAR γ2mRNA的表达从 (1 75± 0 5 ) %增至 (9 5± 2 1) % (P <0 0 1)和 (19 3± 3 0 ) % (P <0 0 1) ;Northernblot结果显示随着E2浓度的增加 ,CbfαlmRNA的表达量从 4 42± 0 3 9降至 1 88± 0 16(P <0 0 1)和 1 2 0± 0 11(P <0 0 1) ;PPAR γ2mRNA的表达量从 1 47± 0 12增至 2 81±0 2 2 (P <0 0 1)和 4 0 2± 0 3 6(P <     

β-17雌二醇对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

向小鼠腹部皮下注入20μg β-17雌二醇后,小鼠腹腔巨噬细胞数量增加,吞噬功能及形成EAC花环能力增强。试验结果表明β-17雌二醇具有增强体内单核吞噬细胞系统的功能的特性,妊娠期间小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)增多、功能活跃的现象在某种程度上受雌激素的影响。     

17β-雌二醇对宫颈癌HeLa细胞增殖的促进作用

目的 :研究 17β 雌二醇 (E2 )对人宫颈癌HeLa细胞系增殖的影响 ,并探讨其可能的机制。　方法 :应用细胞培养、细胞计数、甲基噻唑基四唑 (MTT)、流式细胞术和激光共聚焦显微镜技术。　结果 :E2 (10 - 6mol L)使细胞生长曲线上移 ;E2 (10 - 8～ 10 - 6mol L)呈剂量依赖性地促进宫颈癌HeLa细胞系的增殖。流式细胞术检测细胞周期发现 ,E2 (10 - 6mol L)可促进细胞周期由G1 期进入S期 ,G1 期的DNA含量由 70 .0 %下降到 5 5 .5 % ,S期的DNA含量由17.3%上升到 2 9.0 %。激光共聚焦检测到E2 (10 - 6mol L)可使细胞内Ca2 浓度显著升高。　结论 :E2 可以通过调节细胞周期和细胞内Ca2 浓度水平 ,从而调节宫颈癌HeLa细胞的增殖活动