抗间日疟原虫红内期单克隆抗体的研制和鉴定

用Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心法从志愿者血液中分离出感染间日疟原虫的红细胞。以此作为免疫原，免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，获得５株杂交瘤细胞系。融合率平均为４５％，抗体阳性率为０．６６％，用ＩＦＡ和ＩＰＡ染色进行免疫组化分析，４Ｂ２和８Ｅ３分泌的单克隆抗体呈较强的阳性反应，与约氏疟原虫红内期无交叉反应。     

间日疟原虫抗独特型抗体的制备和鉴定

利用低渗透析-Sephadex G200层析制备电泳纯、并具免疫活性的IgM型抗Pv红内期McAb(6H_6G_(11))免疫家兔,获得抗-6H_7G_(11)独特型抗体(Anti-6H_7G_(11)Id)。经免疫双扩散、ELISA以及竞争性免疫实验和动物实验表明,该Anti-6H_7G_(11) Id具有针对相应独特型决定簇的特异性,为半抗原抑制性Ab_2,并能模拟Pv抗原的作用,为交叉反应独特型。     

间日疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其鉴定

目的研制间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)单克隆抗体,并对抗体特性进行了初步鉴定。方法用纯化的重组PvLDH蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,测定其免疫球蛋白亚类及效价,结合ELISA、Western blot试验分析其特异性。结果共获得5株稳定分泌抗PvLDH重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别为6D1、6D2、5A10、5C7、4A8。5株单抗培养上清的ELISA效价为1∶512～1∶1024,腹水效价为1∶12800～1∶25600,其中5C7、6D1经Western-blot鉴定能与天然的恶性疟原虫和间日疟原虫的LDH发生特异性反应。结论本研究方法成功制备并获得了针对PvLDH的单克隆抗体,为进一步研究疟疾诊断试剂奠定了基础。     

抗人间日疟原虫单克隆抗体的产生和筛选

作者用Percoll密度梯度离心法自患者血液中分离出原虫,作为全虫颗粒抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞,进行了两批融合试验,均获成功。融合率分别为44。27及91.64％,抗体阳性率分别为9.41及19.84％。通过克隆化培养,已初步筛选出25株分泌抗人间日疟红内期原虫单克隆抗体的杂交瘤细胞。     

抗人肝癌细胞单克隆抗体的研制及鉴定

利用杂交瘤技术,以人肝癌细胞株HC_(108)免疫Balb/c小鼠,4周后取其脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经细胞抗原ELISA和间接酶桥法筛选,获得一株能稳定分泌抗人肝癌单克隆抗体的杂交瘤株,其染色体众数为96～110个,DNA指数为3.0。此单抗为IgM型,轻链为k链。免疫组化证实此单抗与2例胚胎肝脏组织、胚胎结肠组织呈现较弱的阳性反应;除与3例宫颈癌细胞有很弱的着色反应外,与5例肝癌组织和肝癌细胞株均呈明确的阳性反应,而与其他肿瘤细胞,胚胎组织,正常成人肝脏、心脏、肾脏、肺脏、结肠、胰腺等均未见反应。琼脂糖免疫双扩散和单抗吸收试验证实此肿瘤抗原与甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、铁蛋白(Ferritin)、癌糖蛋白(CA_(19-9))无免疫相关性。免疫酶电镜染色显示此肝癌相关抗原定位于细胞膜,Western Blot显示其分子量为38kD。是一株特异性良好,阳性反应率较高的抗人肝癌单克隆抗体。     

三株抗人B淋巴细胞表面抗原单克隆抗体的研制及初步鉴定

用慢性Ｂ淋巴细胞白血病患者外周血白血病细胞免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术产生了三种单克隆抗体，分别命名为ＳＭＵ＿（１０）、ＳＭＵ＿（１１）ＳＭＵ＿（１２）。初步鉴定的结果表明，（１）ＳＭＵ＿（１０）、ＳＭＵ＿（１１）是抗成熟阶段Ｂ细胞及浆细胞的单抗，二者的特性及反应谱相类似；（２）ＳＭＵ＿（１２）是一非系限性单抗，与成熟Ｔ细胞、分化后期的Ｂ细胞及部分粒单细胞反应；（３）ＳＭＵ＿（１０）、ＳＭＵ＿（１１）、ＳＭＵ＿（１２）可较好地判明白血病细胞的来源及Ｂ细胞的分化阶段，在白血病的免疫学分型中具有实用价值；（４）三株单抗是新的抗Ｂ细胞特异性单抗。     

分泌抗人早期T细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

以胎儿胸腺细胞免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术产生了两种单克隆抗体，分别命名为ＳＭＵ１３、ＳＭＵ１４。初步鉴定的结果表明，（１）ＳＭＵ１３、ＳＭＵ１４是抗早期Ｔ淋巴细胞的单克隆抗体，但与浆细胞也发生反应；（２）两株单抗的特性、反应谱与ＣＤ３８抗原相似；（３）ＳＭＵ１３、ＳＭＵ１４在白血病免疫学分型中可以明确判断白血病细胞的来源，具有结合补体的能力，在急性Ｔ淋巴细胞白血病的治疗中可发挥重要作用     

抗人PDCD10单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备鼠抗人程序性细胞死亡分子10(programmed cell death 10, PDCD10)的单克隆抗体,探讨PDCD10蛋白的结构和功能.方法:利用重组PDCD10蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合, 通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗PDCD10蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA,Western blot和免疫荧光实验等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了3株稳定分泌抗PDCD10蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为5G1, 4F7和3H5.3株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类分别为IgG1(4F7和5G1)和IgG2b(3H5).ELISA检测的单克隆抗体腹水效价可达1:10⁷.3株单克隆抗体与重组PDCD10蛋白有较强的特异性反应,而与大肠杆菌细胞裂解液以及谷胱苷肽-S转移酶(glutathione S-transferase,GST)没有交叉反应.同时,5G1单克隆抗体也能特异性地结合真核细胞内源性和超表达的PDCD10蛋白,免疫荧光竞争结合实验以及Western blot的结果证明3株PDCD10的单克隆抗体能够识别不同的抗原表位,内源性以及超表达的PDCD10蛋白主要定位在细胞核.结论:获得了效价高、特异性好的PDCD10蛋白的单克隆抗体,为PDCD10的生物学功能研究奠定了基础.     

间日疟红内期原虫单克隆抗体对配子体感染力及其在蚊体内发育的影响

作者试用媒蚊离体吸血法,观察抗间日疟红内期原虫单克隆抗体对配子体的感染力及其在蚊体内发育的影响,获得成功。受试的五株杂交瘤细胞克隆或亚克隆腹水抗体中,1D_6—G_7对配子体的感染力具有明显抑制作用,抑制率高达84.6％。另有三株也对配子体具不同程度的抑制效果。提示此类单克隆抗体在阻断间日疟传播方面将有重要的应用研究价值。     

间日疟红内期原虫单克隆抗体Ig类别检定及种、期特异性免疫荧光分析

作者用琼脂双向免疫扩散法检定20株抗间日疟红内期原虫杂交瘤McAbs 的Ig类别及IgG亚类。结果显示:其中8株属IgG_1、9株属IgM。用IFA法对此20株杂交瘤McAbs进行种、期特异性免疫荧光的检测和分析,发现它们对间日疟原虫红内期均呈阳性反应,其中 5株与三日疟、6株与恶性疟原虫红内期有交叉反应,而对同种疟原虫子孢子期却均呈阴性反应。     

抗人Hb单克隆抗体的制备与鉴定

用超声波快速乳化人Ｈｂ，作为抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞经离心ＰＥＧ法融合，微波ＥＬＩＳＡ筛选阳性克隆，获得三株分泌针对人Ｈｂ不同抗原位点的单克隆抗体杂交瘤细胞系。分别命名为Ｈｂ２６４、Ｈｂ２１０和Ｈｂ２３８。其中Ｈｂ２６４能特异识别人Ｈｂ的β链而不与动物Ｈｂ交叉反应；解离常数Ｋｂ为１．６×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ，ＩｇＧ＿（２ａ）。Ｈｂ２１０能结合人Ｈｂ的α链，可被猪Ｈｂ抑制，但亲合力低１００倍；Ｋｄ（人Ｈｂ）为２．８×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ；Ｋｄ（猪Ｈｂ）为３．０×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ；ＩｇＧ＿（２ｂ）。Ｈｂ２３８是两个脾细胞与一个Ｓｐ２／０细胞融合而成的三体瘤（ｔｒｉｏｍａ）；染色体１３２条；Ｈｂ２３８单克隆抗体可同人Ｈｂ的α和β链结合，Ｋｄ（人Ｈｂ）为８．９×１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ；ＩｇＧ＿（２ａ）；经分析鉴定，Ｈｂ２３８是针对人Ｈｂα和β链的双特异性抗体。本方法对免疫学隐血检测、法医学鉴定和双特异抗体的研制有一定意义。     

HCG特异的10株单克隆抗体的研制

用杂交瘤技术获得１０株ＨＣＧ特异的单克隆抗体（简称单抗）。其中，２６ＡＧ只与全ＨＣＧ反应而不与ＨＣＧ－α或ＨＣＧ－β反应，其余９株与全ＨＣＧ和ＨＣＧ－β反应而不与ＨＣＧ－α反应。放射免疫试验（ＲＩＡ）表明这１０株单抗与ＬＨ及ＦＳＨ无明显的交叉反应。３０ＡＧ及３４ＡＧ与１３５Ｉ－ＨＣＧ的结合可被标准ＨＣＧ抑制，这两株单抗与ＨＣＧ的亲和力均约２×１０９Ｌ／Ｍ。１０株单抗均耐反复６次冻融，除３３ＡＧ外都还耐５６℃３０分钟热灭活。单抗Ｉｇ类别．９株都是ＩｇＧ１，只３０ＡＧ是ＩｇＧ２ｂ。     

抑制夏氏疟原虫无性体及蚊媒传播的单克隆抗体

以夏氏疟原虫(Plasmodium chabaudi chabaudi)AS株配子体免疫小鼠后,制备了两种单克隆抗体,McAb5E(5E)及McAb5F(5F);5E既有阻断疟疾传播的活性又有对抗红细胞内期无性体的保护作用。通过间接免疫荧光试验,5E可与各无性阶段、配子体及小配子起反应,而5F则仅与环状体、配子体及小配子起作用。这种抗无性体及阻断传播的活性是由于无性体与配子体有共同的表位,还是由于交叉反应所致,尚待进一步研究。     

抗人心肌肌凝蛋白轻链Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

以人心肌肌凝蛋白轻链I免疫Balb/c小鼠,取其脾淋巴细胞与NS-1细胞融合,经过筛选、克隆化和再克隆已获得3-D_3、2-D_9、1-E_(10)和2-E_(10)等4个分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经免疫酶标和放免方法测定抗体工作滴度为1:1万。流动式荧光密度计检测NS-1、小鼠脾和杂交瘤细胞DNA的含量,结果表明杂交瘤细胞的DNA含量相当于NS-1和小鼠脾细胞DNA含量之和。杂文瘤细胞传代半年以上稳定地分泌特异性的单克隆抗体。用两个单抗进行了抗原双决定簇的放免測定,并制备了高效价的小鼠腹水。     

GENERATION AND PARTIAL CHARACTERIZATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST SOLUBILIZED MEMBRANE FRACTION OF HUMAN SPERMATOZOA

Human sperm membrane antigens extracted by deoxycholate (DOC) were used to immunizeBALB/c mice.Hybrid cell lines secreting sperm-specific monoclonal antibodies were generatedby cell fusion in a semi-solid medium and screened by indirect immunofluorescent assay usinglive and methanol-fixed sperm.Out of 850 hybrid clones from cell fusion,28 were shownto secrete sperm-specific antibodies which reacted with the acrosome,equatorial segment,whole surface plasma membrane or tail of spermatozoa.Finally,seven hybrid cell lineswere established and shown to secrete monoclonal antibodies which had no cross-reactivitywith arty human tissues other than testis and sperm.The majority were also shown toinhibit fertilization of mouse oocytes in vitro and human sperm penetration of zona-freehamster ova.Western blot analysis revealed that some of these antibodies reacted withsperm membrane antigens of distinct molecular size.     

日本乙型脑炎病毒单克隆抗体的产生及其特性鉴定

用细胞融合方法获得了6株分泌日本乙型脑炎病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系,经与4种黄病毒作交叉免疫荧光反应,可以将它们分为三组:日本乙型脑炎病毒种特异性,亚组特异性及黄病毒属特异性。通过功能性抗病毒分析(血凝抑制、中和及小鼠被动保护),提出该病毒表面(囊膜糖蛋白)至少存在6种抗原决定簇。经交叉血凝抑制反应,发现国内分离的日本乙型脑炎病毒毒株间在血凝素抗原性上存在明显差异。     

抗—BudR单克隆抗体制备及特性鉴定

用碘化还原法将溴脱氧尿嘧啶(BudR)与牛r—球蛋白(BGG)偶联作为抗原(BudR—BGG)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(653)进行融合,经放射免疫分析法(RIA)筛选和克隆化后,获得四株阳性杂交瘤Ⅱ_1B_7、Ⅱ_4B_4、Ⅰ_3F_(11)和Ⅱ_1H_7。杂交瘤细胞分别腹腔注射BALB/c小鼠,其中三株(Ⅱ_1B_7、Ⅱ_4B_4和Ⅱ_1H_7)获得腹水,纯化抗体并对其特性进行鉴定,三株单抗均可与BudR、IudR反应,而不与CdR、TdR及FudR反应,具有较高的特异性。