抗CD3和抗CD28单抗对淋巴细胞产生RANTES的影响

目的 探讨CD28共刺激通路活化对淋巴细胞产生RANTES的影响与意义,以及免疫抑制剂CsA对RANTES产生的抑制作用。方法 分离健康人外周静脉血中的淋巴细胞。实验分为4组:抗CD3mAb刺激组,抗CD28mAb刺激组,抗CD3mAb+抗CD28mAb共刺激组(CD28共刺激组),未加任何刺激作为对照组。PDTC和CsA以不同终浓度干预CD28共刺激组。采用ELISA方法测定培养上清中RANTES含量,流式细胞术检测淋巴细胞CD25和CCR5表达率。结果 培养48h后,CD28共刺激组RANTES产生显著增加(P<0.05);不同剂量PDTC和CsA对CD28共刺激后淋巴细胞产生RANTES均具有抑制作用;CD28共刺激后淋巴细胞CD25表达率显著增高(P<0.05),而CCR5表达率显著降低(P<0.05)。结论 CD28通路共刺激后淋巴细胞产生RNATES显著增加,这一效应受到NF-κB信号通路的调控。淋巴细胞产生RANTES及其对RANTES的反应均受到CD28共刺激信号调控。抑制淋巴细胞产生RANTES可能是CsA发挥作用的重要分子免疫学机制。     

CD28通路共刺激对淋巴细胞产生趋化因子 RANTES的影响

目的探讨CD28通路共刺激对淋巴细胞产生趋化因子RANTES的影响与意义,以及免疫抑制剂环孢素(CsA)对RANTES产生的抑制作用.方法分离健康人外周静脉血中的淋巴细胞,实验分为4组①抗CD3单克隆抗体(mAb)刺激组;②抗CD28mAb刺激组;③抗CD3mAb+抗CD28mAb共刺激组,即CD28共刺激组;④未加任何刺激作为对照组.吡咯啉烷二甲基硫脲(PDTC)和CsA以不同终浓度干预CD28共刺激组.采用ELISA法测定培养上清中RANTES含量,流式细胞术检测淋巴细胞CD25和RANTES受体CCR5表达率.结果培养48 h后,CD28共刺激组RANTES产生显著增加(P＜0.05);不同剂量PDTC和CsA对CD28共刺激后淋巴细胞产生RANTES均具有抑制作用;CD28共刺激后淋巴细胞CD25表达率显著增高(P＜0.05),而CCR5表达率显著降低(P＜0.05).结论CD28通路共刺激后淋巴细胞产生RANTES显著增加.淋巴细胞产生RANTES及其对RANTES的反应均受到CD28共刺激信号调控.核因子(NF)-κB的特异性抑制剂PDTC和免疫抑制剂CsA均可抑制淋巴细胞产生RANTES.     

协同刺激分子CD28/B7及CD40/CD40L在哮喘特异性免疫治疗中的作用

目的探讨协同刺激分子CD28／B7—1、CD28／B7—2及CD40／CD40L在哮喘发病中的作用及在特异性免疫治疗前后表达水平的变化。方法选择30例哮喘患者为实验组,30例健康人群为对照组。采用流式细胞仪方法比较两组间T、B淋巴细胞表面CD28／B7—1、B7—2及CD40／CD40L的表达及与血清总IgE水平的相关性,以及哮喘患者特异性免疫治疗前后T、B淋巴细胞表面CD28／B7—1、B7—2及CEl40／CEl40L的表达水平。结果与健康人群相比,哮喘患者CD28、CD40L、B7—2及CD40表达水平均增高。血清总IgE水平与T淋巴细胞表达CD40L水平呈正相关。特异性免疫治疗6个月后,哮喘患者T、B淋巴细胞表达的CD28／B7—2及CD40／CD40L水平均有所下调,但均未达正常水平。结论协同刺激分子CD28／B7—2及CD40／CD40L表达水平的上调在哮喘发病中可能起重要作用,特异性免疫治疗能下调哮喘患者CD28／B7-2及CD40／CD40L的表达水平,并可能由此间接下调血清总IgE水平,起到相应的治疗作用。     

CD40配体对套细胞淋巴瘤细胞系增殖的影响

套细胞淋巴瘤（MCL）是一种表达CD5的非霍奇金B细胞淋巴瘤,以中等大小B细胞侵入外套层为特征。CD40L与CD40间的相互作用对B细胞的增殖与分化有重要意义。对于不同阶段的B细胞,CD40L的刺激可产生抑制或诱导分化的作用。在本次研究中,利用SP49和SP53这两个套细胞淋巴瘤细胞系对CD40L反应作了研究。与表达CD40L的鼠淋巴细胞混合培养后,BrdU结合的SP49及SP53细胞减少了1/2～1/3,而BrdU结合的对照细胞系（包括Ramos,BJAB and BALL-1）无反应或增加。抗CD40L抗体在0～20 ng/ml时能封闭CD40L对SP49细胞增殖的抑制作用。这些结果提示CD40L在活体内可能对MCL增殖有抑制作用。     

4-1BBL/4-1BB信号对系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞活化的影响

目的:探讨4-1BBL/4-1BB信号对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞活化及共刺激分子表达的影响。方法:用CD3单抗刺激SLE患者外周血单个核细胞,并用抗4-1BBL单抗阻断4-1BBL/4-1BB共刺激信号,流式细胞术检测阻断前后T、B细胞上4-1BB、CD40L、4-1BBL、CD40以及CD69表达水平。结果:SLE患者T细胞上CD69表达明显高于正常对照组(P<0.01);SLE患者外周血T细胞上4-1BB、CD40L和B细胞上4-1BBL、CD40表达明显高于正常对照组(P<0.01),活化后T细胞上共刺激分子表达升高更加明显(P<0.01);抗4-1BBL单抗阻断后4-1BB、CD40L表达明显下降(P<0.01),B细胞上CD40表达下降,与SLE未活化组和活化组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SLE患者外周血T、B细胞活化水平升高,4-1BBL/4-1BB信号对其活化状态维持可以起重要作用。     

CD40-CD40L和CD28-B7共刺激信号在同种异体角膜移植免疫排斥反应中的研究进展

角膜移植在器官移植手术中的成功率很高,而术后免疫排斥反应是导致移植失败的主要因素之一。目前已知角膜移植后免疫排斥反应的主要原因是T淋巴细胞介导的免疫排斥反应,而T淋巴细胞的激活是共刺激信号协同作用的结果。CD40．CD40L和CD28-B7共刺激信号在同种异体角膜移植免疫排斥中具有重要意义,而且两者具有协同作用,同时阻断这两个信号比单独阻断任一信号可延长移植物的存活时间。该文对CD40-CD40L和CD28-B7的生物学特性、免疫学功能以及两者的关系进行综述。     

CTLA4Ig诱导免疫耐受的体外研究

目的 观察CTLA4Ig在诱导人外周血T细胞免疫耐受中的作用。方法 以结核菌素刺激人外周血淋巴细胞，观察不同剂量CTLA4Ig对外周血淋巴细胞增殖反应的影响；观察CTLA4Ig和CsA(环孢霉素A)对再次结核菌素刺激和非相关第三者APC细胞刺激淋巴细胞增殖反应的影响，IL-2的变化，以及外源性IL-2对免疫耐受诱导的影响。结果 CTLA4Ig抑制淋巴细胞增殖呈剂量依赖关系，20μg／ml时抑制作用最强；CTLA4Ig能诱导免疫耐受并与CsA有协同作用；外源性IL-2能抑制免疫耐受的诱导。结论 CTLA4Ig能抑制淋巴细胞的增殖和IL-2的分泌释放，CTLA4Ig和CsA联合应用能更彻底抑制淋巴细胞增殖和IL-2的分泌释放，并诱导免疫耐受；外源性IL-2能逆转免疫耐受。     

肾移植受者外周血中共刺激分子CD28与CD40/CD154的表达研究

目的检测肾移植受者外周血中共刺激分子CD28与CD40/CD154表达的动态变化情况。方法对同种异体移植肾患者于术前1、术后1、3、7、14、21和28d分别取外周血,对AR受体,在临床诊断急性排斥反应当天和抗排斥治疗1周后额外采血。对白细胞进行免疫荧光双标记,用流式细胞仪检测各共刺激分子在外周血淋巴细胞中的表达。结果术后1、3d内CD28 、CD4 CD28 、CD8 CD28 细胞比率均有显著下降,但术后7d逐渐恢复至术前水平;AR时表达上升,其中CD28 和CD4 CD28 细胞比率显著高于术前水平,抗排斥治疗后下降至术前水平。AR时CD40 和CD154 细胞比率显著高于术前水平,抗排斥治疗后恢复至术前水平。结论外周血淋巴细胞CD28、CD40、CD154在移植后排斥反应时表达上调,提示外周血淋巴细胞共刺激分子的表达在临床肾移植急性排斥反应中起重要作用。     

共刺激分子CD28单克隆抗体制备的新策略

目的 发展一种制备抗人CD28单克隆抗体的新方法。方法 构建编码人CD28基因的逆转录病毒表达系统,感染BALB／c小鼠骨髓瘤细胞NS－1,使其细胞膜表达CD28抗原并用于免疫小鼠,制备单克隆抗体。结果 获得分泌抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为E66－3S,IgG亚类鉴定为IgG1。该株单抗能够特异性识别CD28阳性的T细胞,并完全阻断标准CD28抗体与细胞表面CD28抗原结合。在亚剂量分裂原的共刺激下,具有促进T淋巴细胞活化和增殖作用。结论 E66－3S具有高度特异性和共刺激活性,为临床免疫治疗奠定了基础,同时,也为进一步制备其它膜抗原的单克隆抗体提供了一种新途径。     

CD40L对单纯疱疹病毒2型DNA疫苗的免疫增强作用研究

目的 研究重组质粒pcDNA3-Kan/CD40L辅佐HSV-2 DNA疫苗增强小鼠体液免疫和细胞免疫的作用效果,探讨其作为HSV-2 DNA疫苗佐剂的潜力。 方法 (1)构建鼠CD40L基因的重组真核表达质粒pcDNA3-Kan/CD40L。(2)体外细胞实验:检测重组质粒pCD40L刺激小鼠外周血淋巴细胞增殖情况和脾细胞分泌IFN-γ的能力。(3)体内动物实验:48只雌性BALB/c小鼠随机分为4个免疫组pK组、pgD组、pcCD40L+pgD组和pK+pgD组。小鼠后腿肌内注射,共免疫2次,间隔3周。末次免疫3周后,每组随机取4只小鼠进行致死剂量攻毒实验验证疫苗的保护作用。 ELISA检测小鼠血清抗HSV-2 IgG抗体水平和趋化因子RANTES;流式细胞术检测全血中CD4⁺和CD8⁺T细胞百分率以及分泌IFN-γ和IL-4的T细胞的百分率;MTS法检测小鼠脾脏T细胞的增殖能力。 结果 (1)体外实验结果:重组质粒pcDNA3-Kan/CD40L对小鼠外周血淋巴细胞的增殖能力和刺激脾细胞分泌IFN-γ的能力均显著大于空质粒pcDNA3-Kan(P<0.05)。(2)体内实验结果:小鼠血清抗HSV-2 IgG水平、趋化因子RANTES、脾淋巴细胞刺激指数和外周血CD4⁺T细胞数和分泌IFN-γ的Th1细胞数均高于其他免疫组(P<0.05)。pcDNA3-Kan/CD40L+pgD组预防小鼠感染HSV-2效果好于其他免疫组。 结论 (1)重组质粒pcDNA3-Kan/CD40L能够诱导外周血淋巴细胞增殖并刺激脾细胞分泌IFN-γ具有作为疫苗佐剂的潜力。(2)pcDNA3-Kan/CD40L可以辅助HSV-2 DNA疫苗诱导BALB/c小鼠产生特异性抗HSV-2的体液免疫和细胞免疫,具备作为HSV-2 DNA疫苗免疫佐剂的能力。     

大鼠心脏移植排斥反应过程中外周血CD28、CD40通路相关分子的变化

目的探讨CD28、CD40共刺激通路与排斥反应的关系,同时也为排斥反应的诊断寻找一种新的检测指标。方法采用大鼠异位心脏移植模型,用免疫组化方法动态检测外周血单核细胞（PBMC）CD28、CTLA4、CD40及CD40L分子的表达。结果在0～4级排斥反应中,外周血细胞CD28分子阳性表达率在各组间的差异无统计学意义。外周血细胞表达CTLA4分子的阳性率随排斥反应增强而升高（P〈0.01）。CD40及CD40L在PBMC中的表达强度也随排斥反应的分级逐渐增强（P〈0.01）。结论外周血CTLA4、CD40及CD40L分子的表达与排斥反应有密切关系,动态检测这些分子有助于对排斥反应状态的评价。     

CD_(28):CTLA-4/B7及CD_(40)/CD_(40)L与多发性硬化

共刺激分子CD28:CTLA-4/B7及CD40/CD40L对T细胞的活化、调节、B细胞的增殖、分化具有重要作用,共刺激分子在多发性硬化中的表达发生明显变化,它们对多发性硬化的发生、发展起着重要的促进作用,选择性阻断共刺激分子可控制疾病的发展,对多发性硬化治疗具有重要的意义。本文综述了CD28:CTLA-4/B7和CD40/CD40L生物学特性、功能,在多发性硬化的发生、发展中的作用以及相关的治疗前景。     

肺炎支原体感染和支气管哮喘患儿CD40L和CD25的表达研究

目的 探讨肺炎支原体(MP)感染和支气管哮喘发作的关系以及CD40L和CD25的作用。方法 分别对26例MP感染组、24例MP感染并支气管哮喘组、23例支气管哮喘组及25例正常健康儿童组,用PMA和离子霉素刺激外周血单个核细胞,采用流式细胞仪检测CD4+T细胞上CD40L和CD25的表达。结果 支气管哮喘组和MP感染组CD4+T细胞上CD25的表达均有增高。MP感染并支气管哮喘组CD25在CD4+T细胞上的表达高于MP感染非支气管哮喘组(JD相似文献   

CD40及CTLA4模拟小分子肽诱导免疫耐受的实验研究

目的 最新实验数据显示了CD28－B7和CD40－CD154共刺激信号通路在T细胞活化与效应过程中起重要作用。治疗策略关键在于干扰这些通路，诱导移植物宿主产生免疫耐受。方法 我们运用生物信息学和多肽合成技术模拟CTLA4和CD40小分子肽，以阻断这些信号通路。通过MLC，IL－2测定及同源小鼠皮肤皮肤移植实验，检测了不同剂量的两种小分子短肽在体内和体外对免疫反应的影响。结果 所有治疗组的巴细胞增殖降低，IL－2表达低下。在不同水平与时间段，皮肤移植物存活时间显著延长。结论 成功模拟CTLA4和CD40小分子肽，该小分子肽能有效地阻断调节T细胞活化的CD28－B7和CD40－CD154分子连接，是潜在的具有临床应用价值的免疫抑制剂。     

CD40培养体系的建立及B淋巴细胞的体外培养

采用自行研制成的功能性抗人ＣＤ４０单克隆抗体、转导ＣＤ３２的Ｌ细胞（ＬＣＤ３２）和细胞因子建立体外研究人Ｂ淋巴细胞增殖、生长和分化的ＣＤ４０系统。方法：①流式细胞仪分析ＣＤ４０分子的表达;②在ＣＤ４０激发型单抗（克隆５Ｃ１１）与ＬＣＤ３２共培养中,加入ＩＬ－４及其它细胞因子,组成ＣＤ４０培养系统,观察人扁桃体来源Ｂ细胞的体外生存和增殖等生物学效应。结果：①ＣＤ４０分子表达于人外周血、扁桃体来源的Ｂ细胞及人多发性骨髓瘤（ＭＭ）细胞株ＸＧ２和人Ｂ淋巴瘤细胞株Ｄａｕｄｉ;②用ＣＤ４０激发型单抗（克隆５Ｃ１１和２Ｇ１１）与ＬＣＤ３２细胞联合ＩＬ－４能使静止期Ｂ细胞体外长期生存和增殖。表明用激发型ＣＤ４０单抗５Ｃ１１和２Ｇ１１建立的ＣＤ４０培养体系,能使Ｂ细胞长期生存和增殖,为体外研究Ｂ细胞提供了有效的手段。     

新生儿B细胞CD40表达与CD40单抗诱导的B细胞功能

采用流式细胞术检测新生儿Ｂ细胞（ＢＬ）ＣＤ４０表达的同时以ＣＤ４０单抗取代Ｔ辅助细胞（ＴＨ）ＣＤ４０配体（ＣＤ４０Ｌ）作用，观察其诱导的体外ＢＬ增殖及免疫球蛋白（Ｉｇ）产生能力。结果发现新生儿ＢＬＣＤ４０表达水平与成人接近，ＣＤ４０单抗可使新生儿低下的ＢＬ增殖，Ｉｇ产生及类别转换能力明显增高。本文提示新生儿ＢＬ功能低下并非ＢＬ内在缺陷所致，ＴＨ表达的ＣＤ４０Ｌ或细胞因子（ＣＫ）不足可能在其中起重要作用。     

OX40在溃疡性结肠炎中的表达及意义

目的：研究溃疡性结肠炎（UC）患者OX40分子的表达,以及CD4＋OX40＋T细胞的免疫表型和免疫学功能.方法：从活动性UC患者肠粘膜标本中分离和纯化粘膜固有层CD4＋T细胞（LP-CD4＋T）.用FACS多参数分析法测定OX40在不同的CD4＋T细胞上的表达.用ELISA BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶）法测定LP-CD4＋T细胞的增生程度以及不同刺激剂对它们增生程度的影响.结果：UC病变部位LP-CD4＋T细胞表达OX40明显高于健康对照者外周血、UC患者外周血CD4＋T细胞以及UC患者非病变部位CD4＋T的表达.LP-CD4＋OX40＋T细胞表达淋巴细胞活化标记CD25、CD38、CD45RO和HLA-DR均明显高于LP-CD4＋OX40-T细胞的表达（P＜0.01）.抗OX40单抗可明显增强病变部位LP-CD4＋T细胞的增生反应.相反,抗OX40L单抗则能明显抑制病变部位LP-CD4＋T细胞的增生.结论：OX40在UC患者病变部位的LP-CD4＋T细胞上表达明显增加,LP-CD4＋OX40＋T细胞是一类在原位被特异性抗原激活后扩增的T细胞,它们在UC的免疫病理机制中起重要作用.抗OX40L能够抑制其增生反应,可能是一种有效治疗UC的新方法.     

Inhibition of rejection in murine islet xenografts by CTLA4Ig and CD40LIg gene transfer

Background Costimulatory signals play a vital role in T cell activation. Blockade of costimulatory pathway by CTLA4Ig or CD40LIg have enhanced graft survival in experimental transplantation models yet mechanisms remain undetermined.We investigated the effects of CTLA4Ig and CD40LIg gene transfer on islet xenografts rejection in rats.Methods Human islets were infected with recombinant adenoviruses containing CTLA4Ig and CD40LIg genes and implanted beneath the kidney capsule of diabetic rats. Levels of blood sugar, morphological changes, and survival of grafts were recorded. Expressions of CTLA4Ig, CD40LIg and insulin were detected by immunohistochemical staining and cytokines levels were quantified by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.Results Blood glucose levels in transplant rats decreased to normal level on the 2nd day post transplantation. The mean blood glucose in the control group, CTLA4Ig transfected group, CD40LIg transfected group and CTLA4Ig ＋CD40LIg cotransfected group increased on days 8, 24, 21, 68, post transplantation respectively. The grafts in control group, CTLA4Ig transfected group, CD40LIg transfected group and CTLA4Ig ＋ CD40LIg cotransfected group survived for （8±1）, （29±4）, （27±3）, and （74±10） days, respectively. Survival in CTLA4Ig ＋ CD40LIg cotransfected group was significantly longer. Survivals of CTLA4Ig transfected group and CD40LIg transfected group were significantly longer than control group. In controJ animals, serum interleukin-2 and tumor necrosis factor a concentration significantly increased within seven days post transplantation. Haematoxylin eosin staining of grafts showed live islets in situ of transplant rats without inflammatory cell infiltration. Immunohistochemical staining confirmed the expression of insulin at islets in all experimental groups.Conclusions Transfer of CTLA4Ig and CD40Llg genes, especially the cotransfer of both, inhibits rejection of murine islet xenografts. Downregulated expressions of Th1 cells related cytokines might be related to the beneficial effects.