脑泰方含药血清对缺氧缺糖/复氧PC12细胞损伤的保护作用

目的 探讨脑泰方含药血清通过内质网应激相关通路调控缺氧缺糖/复氧PC12细胞凋亡,从而阐明脑泰方对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法 将PC12细胞分为正常组（常规培养）、模型组（OGD/R）、抑制剂（4-PBA）组及脑泰方低浓度（10%）、中浓度（15%）、高浓度（20%）组。CCK8法检测细胞活力;采用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）试剂盒检测LDH活性;Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化;Tunel染色检测细胞凋亡率;免疫荧光法和Western blot检测细胞Beclin-1、LC3、GRP78、CHOP、PERK蛋白表达情况。结果 模型组LDH活性增加,细胞凋亡率增加,细胞存活率下降（P<0.01）,GRP78、PERK、CHOP、LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白表达明显增加,LC3Ⅰ蛋白表达减少（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,抑制剂（4-PBA）组、脑泰方中浓度组、脑泰方高浓度组LDH活性降低,细胞凋亡率减少,细胞存活率明显增加（P<0.05,P<0.01）,GRP78、PERK、C...     

重组新城疫病毒rL-RVG诱导人胃腺癌细胞内质网应激和凋亡

目的: 观察新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)及稳定表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒(recombinant avirulent NDV LaSota strain expressing the rabies virus glycoprotein,rL-RVG)对胃腺癌HGC细胞内质网应激及凋亡的影响。方法: 将HGC细胞随机分为对照组、NDV组和rL-RVG组,分别转染PBS、NDV和rL-RVG 24 h,免疫印迹法和免疫荧光检测糖调节蛋白78 (glucose regulated protein 78, GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)表达。再将HGC细胞随机分为对照组、4-苯基丁酸钠盐(sodium phenylbutyrate, 4-PBA)组、rL-RVG组和4-PBA+rL-RVG组,4 PBA组和4-PBA+rL-RVG组分别加入4-PBA预处理4 h,然后rL-RVG组和4-PBA+rL-RVG组分别转染rL-RVG,对照组和4-PBA组转染PBS,免疫印迹法检测各组细胞GRP78、CHOP和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果： 感染HGC细胞24 h后,NDV组及rL-RVG组GRP78和CHOP表达明显高于对照组(P均<0.05),且rL-RVG组明显高于NDV组(P<0.01)。4 PBA预处理后,4-PBA+rL-RVG组GRP78、CHOP、caspase-3蛋白表达和细胞凋亡率较rL-RVG组明显降低(P<0.05)。结论： rL-RVG较NDV更易引起胃腺癌HGC细胞内质网应激,且与凋亡相关。     

参芍口服液对糖尿病肾病大鼠肾脏内质网应激因子GRP78、PERK及CHOP表达的影响

目的观察参芍口服液对糖尿病肾病大鼠肾脏内质网应激标志性因子GRP78、PERK 及CHOP 表达的影响。方法将30只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组（Sham 组）、模型组（DN 组）和参芍口服液组（SS 组）。DN组和SS 组予以高脂饲料加链脲佐菌素腹腔注射复制糖尿病肾病模型。SS 组每日1 次给予参芍口服液（250 mg/kg）灌胃,Sham 组和DN 组每日1 次给予等剂量的蒸馏水灌胃。12 周后检测各组血糖、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）及24 h尿蛋白定量（PRO）;HE染色光镜下观察大鼠肾组织病理形态学改变;Western blot检测大鼠肾组织GRP78、PERK 及CHOP 蛋白表达情况;TUNEL 染色检测大鼠肾组织细胞凋亡情况。结果DN组血糖、BUN、Scr及PRO与Sham组相比均增高,SS组血糖、BUN、Scr及PRO 与DN组相比均降低（P <0.05）。HE发现Sham 组大鼠肾组织形态结构清楚,未见异常;DN 组可见肾小球体积增大,可见大量炎症细胞浸润,肾小球系膜基质区增生,肾小管基底膜增厚,部分肾小球、肾小管出现纤维化;SS 组肾组织病理形态变化轻于DN组。Western blot发现DN组肾脏组织GRP78、PERK 及CHOP 蛋白表达高于Sham 组,SS 组肾组织GRP78、PERK 及CHOP 蛋白表达均低于DN 组（P <0.05）。TUNEL发现DN组较Sham 组肾脏组织存在更多细胞凋亡;SS 组凋亡细胞少于DN组。结论参芍口服液可减轻糖尿病肾病大鼠肾脏病理损害,延缓肾功能减退,具有肾保护作用,其机制可能与降低内质网应激相关因子GRP78、PERK 及CHOP的表达及减少肾组织细胞凋亡有关。     

雷公藤内酯醇对类风湿关节炎大鼠的治疗作用及其网络药理学研究

目的 评价雷公藤内酯醇对类风湿关节炎大鼠的治疗作用,并研究其作用机制的网络药理学。方法 2014年12月-2015年7月选取SPF级健康Wistar大鼠40只,采用随机数字表法分为4组,分别为对照组、模型组、双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组,每组10只。采用热杀死结核分枝杆菌诱导大鼠构建类风湿关节炎模型,造模成功后,双氯芬酸组大鼠给予10 mg/kg双氯芬酸灌胃,雷公藤内酯醇组大鼠给予6 mg/kg雷公藤内酯醇灌胃,对照组和模型组大鼠给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。采用酶联免疫吸附法测定大鼠血清中炎性细胞因子〔肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素（IL）-4、IL-6〕表达水平;评价关节炎指数及足体积;利用Chemidraw 2010软件将雷公藤内酯醇转换成3D形式,预测其可能的作用靶点;利用Cytoscape软件通过BLAST数据库和美国国家生物技术信息中心（NCBI）数据库进行蛋白质的功能注释和分类,得到雷公藤内酯醇的网络药理图。结果 模型组、双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组大鼠血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平较对照组升高（P＜0.05）;双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组大鼠血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平较模型组降低（P＜0.05）;双氯芬酸组与雷公藤内酯醇组大鼠血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。第4、8、12、16、20天双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组大鼠关节炎指数较模型组降低（P＜0.05）;双氯芬酸组与雷公藤内酯醇组大鼠关节炎指数比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20天模型组、双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组大鼠足体积较对照组增大（P＜0.05）;第4、6、8、10、12、14、16、20天双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组大鼠足体积较模型组减小,第18天双氯芬酸组大鼠足体积较模型组减小（P＜0.05）;第2、4、6、8、10、12、14、16、20天双氯芬酸组与雷公藤内酯醇组大鼠足体积比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）;第18天双氯芬酸组大鼠足体积较雷公藤内酯醇组减小（P＜0.05）。网络药理学研究示,6个靶点（MP2K1、ADH5、BACE1、ADK、GLO1、AKR1B1）存在基因-靶点-信号转导通路网络,9条信号转导通路与免疫和炎症相关,包括focal adhesion、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、血管内皮生长因子（VEGF）、toll-like receptor、ErbB、促性腺激素释放激素（GnRH）、NK cell-mediated cytotoxicity、Fc epsilon RI 和B cell receptor信号转导通路。结论 雷公藤内酯醇治疗类风湿关节炎大鼠可降低TNF-α、IL-4、IL-6表达水平、关节炎指数、足体积,其治疗作用主要是通过调节MAPK和VEGF等信号转导通路实现。     

丙泊酚通过减轻炎症反应和内质网应激缓解烧伤后急性肾损伤

摘要:目的 探讨丙泊酚(propofol)是否通过减轻炎症反应和内质网应激缓解大鼠烧伤后急性肾损伤(acutekidney injury,AKI)。方法 采用热损伤法构建大鼠烧伤后 AKI模型,实验分为5组:假烧伤组、AKI组、丙泊酚组、4-PBA(内 质网应激抑制剂)组和4-PBA+丙泊酚组。苏木精-伊红(HE)染色观察造模后48h肾脏组织形态;生化检测仪检测血清 中BUN 和Cr含量;ELISA 法检测血清中炎症因子 TNF-α、IL-1β和IL-6水平;Westernblot法检测肾脏组织中内质网应 激相关蛋白 PERK、GRP78、CHOP和 Caspase-12的表达。结果 与假烧伤组相比,AKI组大鼠肾脏组织呈现明显的组 织病理学损伤,血清中 BUN、Cr、TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高(均 P<0.05),肾脏组织中 PERK、GRP78、CHOP 和 Caspase-12蛋白表达量显著升高(均P<0.05)。与 AKI组相比,丙泊酚组和4-PBA 组大鼠肾脏组织病理学损伤明显 减轻,血清中BUN、Cr、TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低(均P<0.05),肾脏组织中PERK、GRP78、CHOP和Caspase12蛋白表达量显著降低(均P<0.05)。结论 丙泊酚可通过降低炎症因子水平和内质网应激相关蛋白的表达来缓解烧 伤后急性肾损伤。     

右美托咪定对H9C2细胞内质网应激性损伤的影响及机制研究

目的研究右美托咪定（DEX）对H9C2心肌细胞内质网应激反应（ERS）的影响,探讨可能的发生机制。方法取正常培养的大鼠H9C2细胞,同时进行对照培养和缺氧/复氧（H/R）培养,其中H/R条件为5%CO2和95%N2密闭缺氧装置中缺氧3h后,常氧条件下培养3h。以含有1滋mol/LDEX和1mmol/L4-苯基丁酸（4-PBA）的培养基提前孵育细胞1h和24h。采用低损伤法检测各组细胞上清液的乳酸脱氢酶（LDH）浓度、CCK-8法检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡率,以及RT-PCR和Westernblot法检测内质网应激特异性分子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、Caspase-12的mRNA及蛋白表达情况。将H9C2细胞分设Control组、毒胡萝卜素（TG）组、4-PBA组以及p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂（SB202190）组并进行相应的干预,Westernblot法检测各组p38MAPK和p-p38MAPK的表达,以及GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达情况。结果与Control组相比,H/R组的H9C2细胞活力减低,细胞上清液LDH浓度增加,细胞凋亡率增加（P＜0.05）;与H/R组比较,DEX+H/R组的细胞活力明显增加,细胞上清液LDH浓度明显下降,细胞凋亡率下降（P＜0.05）;与DEX+H/R组比较,4-PBA+DEX+H/R组的H9C2细胞损伤被逆转,GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达也进一步升高。在Control组、TG组和DEX+TG组之间,p38MAPK的表达均无统计学差异,但是TG组的p-p38MAPK表达明显增加,DEX能够抑制p-p38MAPK表达增加（P＜0.05）;与TG组比较,DEX+TG组的GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达被抑制,但是DEX+SB202190+TG组的GRP78、CHOP、Caspase-12mRNA及蛋白表达被逆转增高。结论DEX对H/R损伤下的H9C2心肌细胞具有保护作用,其作用机制与抑制细胞ERS有关,通过调控p38MAPK能够减轻细胞损伤和凋亡。     

Mfn2通过抑制内质网应激减轻椎间盘退变大鼠髓核细胞凋亡

目的 研究Mfn2对椎间盘退变大鼠髓核细胞内质网应激及细胞凋亡的作用及机制。方法 离体培养正常大鼠NP细胞为control组,离体培养椎间盘退变大鼠NP细胞分为model组、OE-Mfn2组、OE-NC组及4-PBA组。Western blot法检测Mfn2、PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4、CHOP、GRP78、Bcl-2、Bax、caspase-3的蛋白水平;qRT-PCR检测Mfn2、PERK、eIF2α、ATF4mRNA水平;免疫共沉淀实验验证Mfn2与PERK互作关系;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Mfn2可特异性结合PERK;与model组比较,OE-Mfn2组Mfn2、Bcl-2水平及细胞活力增加(P＜0.05),PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4、CHOP、GRP78、Bax、caspase-3水平及凋亡率降低(P＜0.05)。结论 Mfn2可通过降低ERS抑制椎间盘退变大鼠NP细胞凋亡。     

雷公藤内酯醇对小鼠H22腹水瘤细胞凋亡及PD\|L1表达的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇诱导H22腹水瘤细胞凋亡以及作用机制。 方法 采用腹腔注射肝癌H22细胞建立小鼠腹水瘤模型,80只成模小鼠随机分为对照组、雷公藤内酯醇低、中、高剂量(0.05, 0.1, 0.2 mg/kg)组,每组20只。观察小鼠体质量变化、生存期; 计量腹水体积及计数腹水内肿瘤细胞数; 流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡及程序性死亡受体-配体1(PD-L1)表达的变化。 结果 与对照组比较,雷公藤内酯醇3个剂量组小鼠的体质量增长缓慢,生存期中位数均有显著延长(P<0.01); 雷公藤内酯醇低、中、高3个剂量组的腹水体积以及每毫升中的肿瘤细胞数均显著低于对照组(P<0.05); 流式细胞术检测结果显示,不同剂量的雷公藤内酯醇可以显著诱导H22细胞凋亡并下调H22细胞PD-L1的表达(P<0.05,P<0.01)。 结论 雷公藤内酯醇可能通过诱导肝癌H22细胞凋亡及抑制PD-L1表达,发挥抗肝肿瘤的作用。     

人参皂苷Rg3通过内质网应激PERK通路抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤生长的研究

目的探讨人参皂苷Rg3通过内质网应激双链RNA依赖性蛋白激酶样内质网激酶（PERK）通路抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤生长的机制。方法采用随机数字表法将裸鼠分为人参皂苷Rg3灌胃组和对照组各6只,于每只裸鼠右侧腹股沟皮下注射0.2ml细胞悬液（1×106/个人胆囊癌细胞GBC-SD）,7d后观察成瘤情况。待肿瘤长至50~70mm3开始进行灌胃处理。人参皂苷Rg3组将Rg3按20mg/kg剂量溶于0.2ml0.9%氯化钠溶液后灌胃,对照组用0.2ml0.9%氯化钠溶液灌胃,1次/d,连续给药3周。以游标卡尺测量肿瘤长、短径,计算肿瘤体积。实验结束时,处死小鼠,切除肿瘤并称重。采用Westernblot法检测磷酸化PERK（p-PERK）、PERK、真核起始因子2琢（eIF2琢）、磷酸化eIF2琢（p-eIF2琢）、转录激活因子4（ATF4）、脂质运载蛋白2（Lcn2）蛋白表达水平。结果人参皂苷Rg3灌胃组瘤体质量明显低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）。灌胃12d开始,人参皂苷Rg3灌胃组裸鼠瘤体积较对照组均明显减小,差异均有统计学意义（均P＜0.01）。人参皂苷Rg3灌胃组p-PERK、p-elF2琢、ATF4和Lcn2蛋白表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）;但两组PERK和elF2琢蛋白表达水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论人参皂苷Rg3通过激活胆囊癌细胞内质网应激PERK通路,抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤生长。     

车叶草苷通过内质网应激促进胰腺癌细胞凋亡的机制研究

目的:探讨车叶草苷(ASP)通过内质网应激(ERS)诱导胰腺癌(PC)细胞凋亡的机制。方法:选取人胰腺癌PANC-1细胞作为研究对象。将PANC-1细胞按照随机数字表法分为4组，分别为对照组、ASP组、ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-Phenylbutyric acid, 4-PBA)组和ASP+4-PBA组。采用CCK-8检测细胞增殖情况，采用流式细胞术检测细胞凋亡情况，Transwell法检测细胞迁移，蛋白质印迹法检测细胞中活化转录因子6(ATF6)、C/BEP环腺苷酸反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、活化的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase 3)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)及肌醇依赖性激酶1α磷酸化蛋白(p-IRE1α)相对表达水平。结果:随着ASP浓度的增加，PANC-1细胞增殖率呈下降趋势。与对照组相比，ASP组迁移细胞数量降低，细胞凋亡率增加，ATF6、CHOP、cleaved-caspase-3、PERK及p-IRE1α蛋白相对表达水平上升，差异均有统计学意义(P<0.05)。与ASP组相比，ASP+4-PBA组细胞迁移数量增多、细胞凋亡...     

姜黄素通过内质网应激途径诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的:观察姜黄素诱导宫颈癌HeLa细胞的凋亡并探讨其相关机制。方法:在以不同浓度姜黄素处理HeLa细胞后,采用MTT法观察细胞活性并选择姜黄素的最适干预浓度。将等量HeLa细胞分为4组:对照组(Ctrl)不加任何药物干预;对照组+4-苯基丁酸钠组(Ctrl+PBA)采用4-PBA(3mmol/L)对HeLa细胞进行干预;姜黄素组(Cur)采用姜黄素(25μM)对HeLa细胞进行干预;姜黄素+4-苯基丁酸钠组(Cur+PBA)则在姜黄素干预后48h采用4-PBA(3mmol/L)对HeLa细胞进行干预。流式细胞术检测各组HeLa细胞凋亡情况;采用Real-time PCR和Western Blotting检测各组HeLa细胞中内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)以及C/EBP同源蛋白质(CHOP)mRNA及蛋白表达情况。结果:不同浓度姜黄素干预HeLa细胞后,细胞生长均受到不同程度的抑制,并呈现出浓度依赖性;与Ctrl及Ctrl+PBA组相比,Cur组HeLa细胞凋亡率显著升高;与Cur组相比,Cur+PBA组HeLa细胞凋亡率显著降低;与Ctrl组及Ctrl+PBA组相比,Cur组GRP78及CHOP mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与Cur组相比,Cur+PBA组GRP78及CHOP mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:内质网应激途径是姜黄素诱导HeLa细胞凋亡的重要机制之一。     

竹荪多糖与多西紫杉醇联用抗肺癌效应及机制研究

目的探讨竹荪多糖与多西紫杉醇（DOC）在肺癌治疗中的协同效应及机制。方法40只C57小鼠构建路易斯肺癌（LLC）荷瘤C57小鼠模型,分别采用竹荪多糖组分ZSP1（ZSP1组）、DOC（DOC组）、ZSP1+DCC联用（联用组）及0.9%氯化钠注射液（对照组）,每组10只,在建模当天开始腹腔注射治疗,第10、12、15天时检测肿瘤体积,并采用流式细胞术检测小鼠外周血及脾中髓源抑制性细胞（MDSC）的比例。另用Toll样受体素4（TLR4）基因敲除C57小鼠（TLR4KO组）和野生型C57小鼠（WT组）构建LLC荷瘤模型,采用实时荧光定量PCR检测MDSC中IFN-γ、IL-12、CXCL-9和CXCL-2mRNA表达水平,Westernblot法检测IL-12蛋白表达水平。结果与对照组相比,ZSP1组、DOC组和联用组小鼠的肿瘤体积在第10、12、15天均明显为小（均P＜0.01）;TLR4KO组较WT组小鼠的肿瘤体积在第10、12天均明显为小（均P＜0.01）;第12、15天联用组小鼠的MDSC比例均明显低于对照组、ZSP1组和DOC组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）;与WT组相比,TLR4KO组IFN-γ、IL-12和CXCL-9mRNA表达水平均明显增加（均P＜0.01）,IL-12蛋白表达水平有所增加。结论DOC与竹荪多糖联用抗肿瘤效果优于单用,其作用机制与下调荷瘤小鼠外周血中MDSC比例有关,其作用受体可能为TLR4。竹荪多糖与DOC联用可以上调IL-12的转录水平和表达水平。     

小剂量雷公藤内酯醇对荷卵巢癌大鼠体内抑瘤作用的观察

目的研究小剂量雷公藤内酯醇对荷卵巢癌大鼠体内抗肿瘤作用。方法将40只F344大鼠右腋窝接种F344大鼠卵巢上皮低分化腺癌细胞株细胞悬液,成瘤后随机分为5组：空白荷瘤组,顺铂组,0.1、0.05、0.025mg雷公藤内酯醇组,每组8只。上述5组大鼠分别给予腹腔注射生理盐水2mL/d,顺铂3mg/（kg·d）,雷公藤内酯醇0.1、0.05、0.025mg/（kg·d）,均隔天给药,连续10d。结果0.025、0.05、0.1mg雷公藤内酯醇组对大鼠卵巢癌皮下瘤具有明显的抑瘤作用,抑瘤率分别为27.85%、35.63%、49.34%;上述3组大鼠瘤重与空白荷瘤组相比,有显著差异（P〈0.01或P〈0.05）。结论雷公藤内酯醇在体内具有抑制大鼠卵巢癌的作用。     

雷公藤内酯醇洗脱支架抑制小型猪冠脉再狭窄研究

目的评价雷公藤内酯醇洗脱支架对预防小型猪冠状动脉模型再狭窄的疗效，研究其量效关系与安全性。方法将30只西藏小型猪分为不锈钢裸金属支架组、雷帕霉素支架组、雷公藤内酯醇60灿g支架组、雷公藤内酯醇100μg支架组和雷公藤内酯醇200μg支架组等5组，设立7d组和28d组两个观察终点。每只猪选择左前降支和右冠脉分别置入同一类型支架各1枚。共置入支架60枚。28d组于术后28d行冠状动脉造影，术后处死动物，取出支架血管，行病理组织学分析。7d组于术后7d处死动物，取支架血管行核因子NF-κB免疫组化检测。所有小型猪术前术后行血常规和血肝肾功能检查。结果支架植入后28d组、雷公藤内酯醇100I-Lg支架组和雷帕霉素支架组最小内径相似（P〉0.05），均大于不锈钢裸金属支架组（P〈0.05）。雷公藤内酯醇100μg支架组与雷帕霉素支架组相比新生内膜厚度相似（P〉0.05），均明显小于不锈钢裸金属支架组、雷公藤内酯醇60μg支架组和雷公藤内酯醇200μg支架组（P〈0.05）。雷公藤内酯醇100μg支架组与雷帕霉素支架组相比狭窄程度相似（P〉0.05），均明显小于不锈钢裸金属支架组、雷公藤内酯醇60μg支架组和雷公藤内酯醇200μg支架组（P〈0.05）。支架植入后雷公藤内酯醇100μg支架组NF-κB阳性细胞数比不锈钢裸金属支架组、雷帕霉素支架组、雷公藤内酯醇60μg支架组和雷公藤内酯醇200μg支架组减少（P〈0.05），其它4组无统计学意义（P〉0.05）。结论雷公藤内酯醇支架能抑制冠脉内膜增生，在支架植入4周内能预防再狭窄，无毒副作用，且其效应呈剂量依赖性。     

姜黄素对脂多糖/D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝损伤中内质网应激的影响

目的探讨姜黄素预给药对脂多糖/D-氨基半乳糖（D-GalN）诱导大鼠急性肝损伤中内质网应激（ERS）的影响。方法30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、肝损组、姜黄素组,每组10只。在造模前5d,姜黄素组按5ml/kg灌饲姜黄素溶液（姜黄素溶于0.5%羧甲基纤维素钠中）,正常对照组、肝损组按5ml/kg灌饲0.5%羧甲基纤维素钠溶液,1次/d,连续5d。肝损组、姜黄素组采取腹腔注射含脂多糖（8滋g/kg）+D-GalN（800mg/kg）的0.9%氯化钠注射液800滋l制作急性肝损伤动物模型,正常对照组大鼠腹腔注射800滋l0.9%氯化钠注射液;模型建立12h后处死大鼠并收集血清及肝组织,检测并比较3组大鼠血清肝功能指标、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平,HE染色观察肝组织病理学变化,TUNEL染色观察肝细胞凋亡情况,Westernblot法检测肝组织内ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、C/EBP同源蛋白（CHOP）表达量。结果正常对照组大鼠肝组织未见明显病变;肝损组大鼠部分肝细胞坏死,坏死的肝细胞核碎裂、胞质深染,坏死区可见较多炎细胞浸润;姜黄素组大鼠肝组织内坏死细胞较肝损组明显减少。与正常对照组比较,肝损组大鼠血清ALT、AST、MDA水平,肝细胞凋亡指数,GRP78、CHOP蛋白表达水平均明显升高（均P＜0.05）,SOD水平明显降低（P＜0.05）;姜黄素组大鼠血清ALT、AST、MDA水平,肝细胞凋亡指数,CHOP蛋白表达水平也明显升高（均P＜0.05）,SOD水平、GRP78蛋白表达水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。与肝损组比较,姜黄素组大鼠血清ALT、AST、MDA水平,肝细胞凋亡指数,GRP78、CHOP蛋白表达水平均明显降低（均P＜0.05）,SOD水平明显升高（P＜0.05）。结论姜黄素可能通过抑制ERS反应对脂多糖/D-GalN诱导大鼠的急性肝损伤起保护作用。     

干细胞因子抑制糖氧剥夺诱导的人脑微血管内皮细胞内质网应激性凋亡的研究

目的探讨干细胞因子（SCF）抑制糖氧剥夺（OGD）诱导的人脑微血管内皮细胞（h-BMEC）内质网应激性凋亡的机制。方法将h-BMEC分为对照组、OGD组、SCF+OGD组（简称SCF组）、SCF+CompoundC+OGD组（简称CompC组）和SCF+AICAR+OGD组（简称AICAR组）;培养48h后,采用噻唑蓝法检测细胞存活率,膜联蛋白V/碘化丙啶（AnnexinV/PI）双染法检测细胞凋亡率,水溶性四唑盐-8（WST-8）法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性,硫代巴比妥酸（TBA）法检测丙二醛（MDA）含量,Westernblot法检测腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（CHOP）、断裂半胱氨酸蛋白酶-12（cleavedCaspase-12）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）表达。结果与OGD组比较,SCF组细胞存活率、SOD活性、Bcl-2表达均降低（均P＜0.05）,MDA含量、细胞凋亡率、Bax表达、Bax/Bcl-2以及PERK、CHOP、cleavedCaspase-12、p-AMPK表达均增高（均P＜0.05）;与SCF组比较,AICAR组细胞存活率、SOD活性、Bcl-2表达均降低（均P＜0.05）,MDA含量、细胞凋亡率、Bax表达、Bax/Bcl-2以及PERK、CHOP、cleavedCaspase-12、p-AMPK表达均增高（均P＜0.05）;CompC组AICAR组细胞存活率、SOD活性、MDA含量、细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比例、Bax、Bcl-2、、PERK、CHOP、cleavedCaspase-12、p-AMPK表达差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论SCF对OGD诱导的h-BMEC损伤具有抑制作用,其分子机制与抑制AMPK介导的内质网应激性凋亡有关。     

雷公藤内酯醇对非霍奇金淋巴瘤基质细胞衍生因子-1及其特异性受体生物学轴效应的影响

目的研究雷公藤内酯醇对非霍奇金淋巴瘤（non—Hodgkin lymphoma，NHL）细胞系Raji增殖的抑制作用，并探讨雷公藤内酯醇体外抑制NHL肿瘤细胞通过淋巴结转移的作用及其分子机制。方法采用MTT法测定雷公藤内酯醇对Raji细胞增殖的影响；采用RT—PCR方法检测雷公藤内酯醇对NHL淋巴结基质细胞中基质细胞衍生因子-1α（SDF—1α）表达的影响；采用流式细胞术检测雷公藤内酯醇作用前后NHL淋巴结瘤细胞CXCR4受体表达水平的变化；采用Transwell微孔隔离室迁移实验观察雷公藤内酯醇对NHL淋巴结瘤细胞体外迁移的影响。结果MTT法表明低剂量雷公藤内酯醇（6．25～25nmol／L）即可以时间和剂量依赖方式明显抑制Raji细胞的生长；其作用24、36、48、60、72h的IC50值分别为43．06、25．08、7．32、2．66、0．58nmol／L。RT—PCR结果显示雷公藤内酯醇能抑制NHL淋巴结基质细胞SDF-1α的表达，其中较低剂量组（12．5nmol／L）与对照组相比有一定的降低，但差异无显著性（P〉0．05），而较高剂量组（25、50nmol／L）则可明显抑制SDF-1α的表达（P〈0．05），并具有量效关系。流式细胞术分析结果发现经不同浓度雷公藤内酯醇处理后，NHL淋巴结瘤细胞CXCR4表达率与对照组相比逐渐下降（P〈0．01），此抑制效应呈剂量依赖性。Transwell趋化活性分析显示雷公藤内酯醇既能抑制重组人SDF-1α对NHL淋巴结瘤细胞的趋化作用，也能阻断NHL淋巴结基质细胞对瘤细胞的体外迁移，且雷公藤内酯醇对趋化作用的抑制具有剂量依赖关系。结论雷公藤内酯醇具有抗淋巴瘤细胞增殖的效应，并能阻断NHL淋巴结瘤细胞通过淋巴结的转移。其抗肿瘤机制及其抗细胞增殖作用与对NHLSDF-1／CXCR4生物学轴的抑制效应有关。     

伊曲康唑对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠骨髓源性抑制细胞的影响及意义

目的探讨伊曲康唑对慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠骨髓源性抑制细胞（MDSC）的影响及意义。方法按照随机数字表法将40只大鼠分为对照组、模型组、低剂量组和高剂量组,每组10只。对照组大鼠给予常规喂养;后3组大鼠按被动香烟烟雾吸入法构建COPD模型,低剂量组和高剂量组大鼠于被动吸烟12周后,分别口服10mg/kg和50mg/kg伊曲康唑,1次/d,共4周。分别检测并计算各组大鼠的第0.3s用力呼气量与用力肺活量的比值（FEV0.3/FVC）、肺顺应性和气道阻力及气道病理学评分;采用流式细胞术和免疫荧光技术分析外周血MDSC比例和肺组织中MDSC计数,Westernblot法和RT-PCR法测定肺组织中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、转化生长因子-β（TGF-β）和精氨酸酶1（ARG1）蛋白及mRNA表达。结果与对照组相比,模型组外周血MDSC比例、肺组织MDSC细胞数、iNOS、TGF-β、ARG1表达水平均增高（均P＜0.05）;与模型组相比,低剂量组和高剂量组外周血MDSC比例、肺组织中MDSC计数及iNOS、TGF-β、ARG1表达水平均明显降低（均P＜0.05）。与对照组相比,模型组FEV0.3/FVC和顺应性降低,气道阻力和小气道病理评分均增高（均P＜0.05）;与模型组相比,低剂量组和高剂量组FEV0.3/FVC和顺应性明显增高,气道阻力和气道病理评分均明显降低（均P＜0.05）。结论伊曲康唑能降低外周血MDSC比例及肺组织中MDSC计数,抑制MDSC分泌功能,有助于改善COPD大鼠的肺通气功能、降低气道炎症反应。     

雷公藤内酯醇对糖尿病大鼠心肌内葡萄糖转运体1型4型表达的干预

目的探讨雷公藤内酯醇对糖尿病大鼠心肌内葡萄糖转运体(Glut)-1、Glut-4表达的干预。方法雄性SD大鼠60只,按体质量随机分为正常对照组10只和糖尿病模型组50只。糖尿病模型组一次性腹腔注射链脲佐菌素53 mg/kg,正常对照组仅腹腔注射等体积0.1 mol/L柠檬酸缓冲液。注射链脲佐菌素72 h后,尾静脉采血测空腹血糖并同时测尿糖,血糖≥16.7 mmol/L、尿糖(+++)以上者列入糖尿病观察对象。将造模成功的48只雄性大鼠,按体质量、空腹血糖随机分为糖尿病模型对照组(12只),雷公藤内酯醇小、中、大剂量组(各12只)。结果雷公藤内酯醇中、大剂量组大鼠心体比值均比糖尿病对照组降低,但都高于正常对照组;雷公藤内酯醇中、大剂量组大鼠心肌中Glut-1、Glut-4的表达均比糖尿病对照组有显著增高,但都较正常对照组明显减少;雷公藤内酯醇小剂量组糖尿病大鼠心体比值、心肌中Glut-1、Glut-4的表达与糖尿病对照组相比变化不明显。结论雷公藤内酯醇能明显上调糖尿病大鼠心肌细胞内Glut-1、Glut-4的表达,改善高血糖对糖尿病大鼠心肌的毒性作用。     

护肝清脂片药物血清对非酒精性脂肪肝细胞模型内质网应激的影响

目的探讨护肝清脂片药物血清对混合脂肪酸诱导的非酒精性脂肪肝HepG2细胞模型内质网应激（ER stress）的影响及其 可能机制。方法油酸和棕榈酸以2∶1比例混合制备成1 mmol/L游离脂肪酸（FFA）混合液,诱导HepG2细胞24 h发生脂肪变 性,建立NAFLD体外模型,将HepG2细胞分为对照组（CON）、FFA组、护肝清脂片低剂量组（HG-L）、护肝清脂片中剂量组（HGM） 、护肝清脂片高剂量组（HG-H）及非诺贝特阳性对照组（FF）,在加入1 mmol/L FFA前分别加入各组对应的药物血清作用 24 h,CON组及FFA组则加入大鼠空白血清作为对照。油红O染色观察细胞内脂滴分布;试剂盒检测细胞内甘油三酯（TG）含 量及培养上清液谷草转氨酶（AST/GOT）、谷丙转氨酶（ALT/GPT）的水平;透射电镜观察细胞内质网形态结构的改变;Western blot、qRT-PCR技术检测ERS相关信号分子GRP78、PERK、p-PERK、ATF6、ATF4、XBP-1、CASPASE-12、CHOP、PKC-δ、p-PKC-δ 蛋白及（或）mRNA的表达情况。利用siRNA 瞬时转染技术沉默PKC-δ在HepG2细胞中的表达后观察GRP78、PERK、p-PERK、 CASPASE-12和CHOP蛋白表达变化。结果与CON组相比,FF组HepG2细胞油红染色可见红色脂滴密布细胞质,TG、AST、 ALT含量升高（P<0.001）;与FF组相比,HG-L、HG-M、HG-H及FF均在不同程度上降低TG、AST、ALT含量,减少细胞内脂滴堆 积,差异有统计学意义（P<0.05）,并能够在蛋白及mRNA水平上有效地下调ERS相关信号分子GRP78、p-PERK、ATF6、ATF4、 CHOP、CASPASE-12、XBP-1、PKC-δ、p-PKC-δ的表达,差异有统计学意义（P<0.05）。在1 mmol/L FFA共同作用下,PKC-δ siRNA转染组GRP78、p-PERK、CHOP、CASPASE-12蛋白表达均较对照组明显下调,差异具有统计学意义（P<0.001）。然而,与 PKC-δ siRNA +FFA组相比,PKC-δ siRNA+HG-H组GRP78 和P-PERK表达下调更显著（P<0.001,0.01）,CHOP和CASPASE- 12则无统计学差异（P>0.05）。结论护肝清脂片药物血清可以有效地防治混合脂肪酸诱导的NAFLD细胞模型脂肪变性,改善 HepG2功能状态,有效地缓解1 mmol/L游离脂肪酸所致的内质网应激,其作用机制在一定程度上与下调PKC-δ表达有关。