Rab27A和Rab27B在4种不同人肝癌细胞株中的表达

目的：检测Rab27A与Rab27B在3种人肝癌细胞系及1种永生化肝细胞系中的表达情况,初步研究Rab27A与Rab27B表达对肝癌细胞生物学特性的影响。方法采用RT-PCR及Western blot技术,检测Rab27A与Rab27B mRNA在3种人肝癌癌细胞HepG2、Huh-7、Li-7及1种永生化肝细胞系HL-7702中的表达。结果Rab27A与Rab27B在肝癌细胞系及原发性肝癌组织中存在差异性表达。 Rab27A mRNA在3种人肝癌细胞系中表达明显强于1种人永生化肝细胞系;Rab27B mRNA在3种人肝癌及1种人永生化肝细胞系中均明显表达但无显著差异。结论 Rab27A与Rab27B与原发性肝癌密切相关,可以为临床采取合理诊断措施提供有效的参考依据。     

外泌体携载阿霉素递送体系构建及体外抗肿瘤活性评价

目的 制备肝癌细胞Hep1-6外泌体并对化疗药物阿霉素（DOX）进行包载,以期实现对肿瘤细胞更高的靶向活性与杀伤作用。方法 采用梯度离心法对肿瘤细胞Hep1-6来源的外泌体进行制备分离;采用透射电镜技术、表面标记蛋白表征以及纳米颗粒追踪分析技术对外泌体的形态、特征蛋白、粒径分布和浓度进行表征;采用电穿孔方法实现外泌体对DOX的有效包载,制备包载阿霉素外泌体（EXO_DOX）。采用CCK-8法检测EXO_DOX与DOX（0.5、1、2、3、5、10 μg·mL^-1）体外对 Hep1-6细胞增殖的影响,采用激光共聚焦显微镜观察体外 Hep1-6细胞对 EXO_DOX与 DOX（1 μg·mL^-1）的靶向摄取作用。结果 所制备的外泌体具有形态良好 、 粒度均一的特性且具备外泌体特征膜蛋白 CD63、 CD81、 肿瘤易感基因101（TSG101）的表达;在电穿孔条件为150 V和75 μF下外泌体对DOX具备良好的包载特性;相比于单独给药DOX,在同等质量浓度下 EXO_DOX对 Hep1-6细胞增殖抑制作用显著增强（P＜0.05、0.01）,同时肿瘤细胞对 EXO_DOX的摄取更具靶向性。结论 制备的EXO_DOX较DOX具有更强的体外细胞毒活性,EXO_DOX表现出对肿瘤细胞更高的靶向特性。     

GPER特异性拮抗剂G15对子宫内膜癌侵袭、迁移的影响及作用机制

目的 探讨G蛋白偶联雌激素受体GPER特异性拮抗剂G15对子宫内膜癌细胞Ishikawa、HEC-1A、KLE侵袭、迁移的影响及相关作用机制。方法 应用划痕愈合及Transwell迁移、侵袭实验检测不同浓度G15作用不同时间对子宫内膜癌细胞Ishikawa、HEC-1A、KLE迁移能力的影响。应用 Western blotting检测Ishikawa、HEC-1A、KLE细胞中GPER、MMP9及ERK蛋白表达水平的变化。结果 划痕愈合实验及Transwell小室实验显示,随着G15浓度的增加和作用时间的延长,经E2处理的HEC-1A、KLE细胞迁移能力逐渐增强,而G15对经E2处理的Ishikawa细胞迁移能力的抑制作用较弱。Western blotting结果显示,G15可显著抑制E2诱导的HEC-1A、KLE细胞GPER、ERK、MMP9蛋白表达上调。而在Ishikawa细胞中,G15仅能抑制GPER的表达,对ERK、MMP9蛋白的表达无显著影响。结论 G15可抑制经E2处理的子宫内膜癌细胞Ishikawa、HEC-1A、KLE的迁移能力,且对ER低表达HEC-1A细胞和ER阴性KLE细胞迁移能力的抑制作用更为显著,而GPER/ERK/MMP9信号通路在这一过程中发挥重要作用。因此,GPER特异性拮抗剂G15有望成为子宫内膜癌新型靶向治疗药物。     

外泌体miRNA-222预警shRNA-PCSK9诱发脑Tau蛋白过度磷酸化

目的 探究血浆外泌体携带的微小RNA-222(microRNA-222,miRNA-222)能否作为shRNA-PCSK9 诱发认知障碍提供早期预警的标志物。方法 高脂饲料(high-fat diet,HFD)喂饲法制备高胆固醇血症小鼠模型。再将模型小鼠分为HFD-shRNA空白对照组和HFD-shRNA-PCSK9组。构建shRNA-PCSK9慢病毒,经静脉注入体内,实时荧光定量(realtime polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测PCSK9 mRNA表达。免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)观察脑组织Tau蛋白和磷酸化。Western blotting检测Tau蛋白和P-Tau蛋白。ELISA法测定血清淀粉样蛋白Aβ1-42Ab水平。试剂盒分步提取血浆外泌体,负染电镜技术对外泌体形态进行鉴定,纳米颗粒跟踪分析技术测定外泌体粒径。RT-PCR技术检测血浆外泌体中携带的miRNA-222表达水平。结果 HFD喂饲13周制备模型组小鼠,血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL-C)含量显著升高,同时,模型组小鼠脑组织内PCSK9 mRNA表达明显升高。经shRNA-PCSK9慢病毒干扰后,PCSK9 mRNA表达抑制,同时IHC观察到shRNA-PCSK9诱发了脑组织Tau蛋白的异常表达和过度磷酸化,表明已发生神经纤维缠结的病理改变。然而,此时血清Aβ1-42Ab尚未明显升高,尚未具备诊断认知障碍的意义。将血浆外泌体中的miRNA提取,RT-PCR结果显示,HFD-shRNA-PCSK9组外泌体中携带的miRNA-222表达量与HFD-shRNA空白对照组相比显著降低。结论 血浆外泌体携带的miRNA-222可以作为shRNA-PCSK9 诱发认知障碍提供早期预警的标志物。     

固公果根提取物促进结肠癌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨固公果根提取物促进结肠癌细胞凋亡及机制研究。方法 分别采用MTT法、DAPI染色及流式细胞术检测固公果根提取物对结肠癌细胞增殖活性及细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹（Western-Blot）法检测凋亡相关蛋白的活性表达水平。结果 固公果根提取物能显著抑制结肠癌SW620和LOVO细胞增殖,促进两种结肠癌细胞凋亡,上调凋亡相关基因Keap-1、Bax的蛋白表达,下调Nrf2、HO-1以及Bcl2蛋白的表达。结论 固公果根提取物能显著抑制人结肠癌细胞SW620和LOVO增殖、诱导细胞凋亡,其作用机制可能涉及调控凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达,且与激活Nrf2氧化应激通路有关。     

右美托咪定对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin通路的影响

目的 探究右美托咪定对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）通路的影响。方法 将Ishikawa、RL95-2细胞分为对照组,右美托咪定1、10、100 nmol/L组,右美托咪定（100 nmol/L）＋LiCl组。CCK-8法和EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、β-连环蛋白（β-catenin）、c-Myc基因（c-Myc）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）表达水平。构建子宫内膜癌裸鼠模型,分为对照组、右美托咪定组、右美托咪定＋LiCl组,测量肿瘤质量与体积,苏木精–伊红（HE）染色观察移植瘤组织形态,免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67、β-catenin蛋白表达。结果 与对照组相比,不同浓度右美托咪定处理后Ishikawa、RL95-2细胞吸光度（A）值、EdU阳性细胞率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax表达上升（P＜0.05）;与右美托咪定100 nmol/L组相比,右美托咪定＋LiCl组A值、EdU阳性细胞率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax表达下降（P＜0.05）。右美托咪定能抑制移植瘤质量和体积,促进肿瘤凋亡,降低β-catenin、Ki-67蛋白表达（P＜0.05）;LiCl能逆转右美托咪定对移植瘤的抑制作用（P＜0.05）。结论 右美托咪定能抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

虫草素对人胃癌细胞系HGC-27的影响及分子机制

目的 探讨虫草素对HGC-27细胞增殖、运动性和凋亡的影响及相关机制。方法 用不同浓度虫草素处理人胃癌细胞系HGC-27、AGS和MGC-803,利用CCK-8法检测细胞活力,集落形成试验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,体外划痕试验检测细胞运动性。Western blot检测Bcl-2、Bax、ERK、磷酸化ERK（p-ERK）和糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）蛋白表达水平。结果 与对照组相比,虫草素处理组明显抑制细胞增殖、集落形成率、细胞运动性并诱导细胞凋亡,下调Bcl-2、GSK-3β和p-ERK蛋白表达水平,且呈浓度和时间依赖性,但对Bax蛋白表达水平没有影响。结论 虫草素通过调节ERK/GSK-3β信号通路起到抗肿瘤作用,有望成为临床干预和治疗胃癌的潜在药物。     

新型AKT抑制剂Hu7691对胃癌细胞的抗肿瘤活性及机制研究

目的 考察新型AKT抑制剂Hu7691对胃癌细胞的体内外抗肿瘤活性及作用机制。方法 以人胃癌细胞HGC27和BGC823为体外细胞模型，采用SRB法评价不同浓度的Hu7691对胃癌细胞的体外增殖抑制作用；以流式细胞术考察Hu7691对HGC27细胞周期的影响，采用Western blotting考察Hu7691作用后，细胞内相关蛋白的表达变化；采用HGC27裸小鼠移植瘤模型评价Hu7691的体内抗肿瘤活性。结果 Hu7691在HGC27和BGC823细胞模型上能显著抑制肿瘤细胞增殖；引起肿瘤细胞发生细胞周期阻滞，浓度依赖性地下调AKT通路相关蛋白p-PRAS40（T246）、p-GSK3β、p-S6（S235/236）、p-4EBP1（T37/46）及p-4EBP1（S65）的蛋白表达，上调p-AKT （S473）、p-AKT （S308）的表达；下调细胞周期相关蛋白Cyclin D1的表达；在HGC27裸小鼠移植瘤模型中，Hu7691能显著抑制肿瘤生长，并且对小鼠体质量无显著影响。结论 新型AKT抑制剂Hu7691通过诱导细胞周期阻滞，发挥对胃癌细胞体内外显著的抗肿瘤活性。     

铜绿假单胞菌注射液对NCI-N87胃癌细胞株增殖能力的影响及其机制研究

目的 探讨铜绿假单胞菌注射液（Pseudomonas aeruginosa mannose-sensitive hemagglutinin,PA-MSHA）对NCI-N87胃癌细胞增殖能力的影响及其分子作用机制。方法 MTT法检测PA-MSHA对NCI-N87胃癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,划痕实验和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化,Western Blot检测PTEN蛋白和p-AKT蛋白的表达变化,转染PTEN siRNA敲低PTEN表达后,再次行MTT法检测PA-MSHA对细胞增殖的影响。结果 PA-MSHA抑制NCI-N87胃癌细胞的增殖具有剂量和时间依赖性。与对照组比较,NCI-N87细胞经PA-MSHA处理后,凋亡率显著增加（P<0.05）,迁移和侵袭能力显著下降（P<0.05）。与对照组比较,PA-MSHA显著提高PTEN蛋白表达,降低p-AKT蛋白表达（P<0.05）。通过siRNA转染敲低PTEN表达后,PA-MSHA抑制NCI-N87细胞增殖的能力较对照组显著下降（P<0.05）。结论 PA-MSHA对NCI-N87胃癌细胞具有抑制增殖、促进凋亡、抑制侵袭转移的作用,其机制与PTEN/AKT信号通路有关。     

子宫内膜癌患者人附睾蛋白4含量变化及其与肿瘤组织中凋亡分子表达的相关性

目的 探讨子宫内膜癌患者血清人附睾蛋白4（HE4）含量变化及其与肿瘤组织中凋亡分子表达的相关性。方法 收集2015年9月至2016年9月安徽医科大学第二附属医院收治的子宫内膜癌患者38例,根据病理分期将其分为早期子宫内膜癌组（Ⅰ期）30例、中晚期子宫内膜癌组（Ⅱ~Ⅳ期）8例;另取同期在安徽医科大学第二附属医院门诊接受诊刮治疗的良性疾病患者50例作为对照组。采用电化学发光法测定HE4含量;采用荧光定量PCR法检测肿瘤组织促凋亡基因、抗凋亡基因mRNA表达量。结果 早期子宫内膜癌组和中晚期子宫内膜癌组患者血清HE4含量分别为（125.64±15.82） pmol/L、（243.25±46.83） pmol/L,均高于对照组的（57.38±6.91） pmol/L（P<0.05）。早期子宫内膜癌组、中晚期子宫内膜癌组患者肿瘤组织中促凋亡基因XAF1、ITLN-1 mRNA表达量及Caspase-3蛋白表达量低于对照组,中晚期子宫内膜癌组患者以上分子mRNA表达量低于早期子宫内膜癌组（P<0.05）;早期子宫内膜癌组、中晚期子宫内膜癌组患者肿瘤组织抗凋亡基因Survivin、c-myb、Bax、RLIP76、PTP1B mRNA表达量高于对照组患者,中晚期子宫内膜癌组患者以上分子的mRNA表达量高于早期子宫内膜癌组患者（P<0.05）。经Pearson检验,子宫内膜癌患者血清HE4含量与肿瘤组织促凋亡基因及Caspase-3蛋白表达量呈负相关,与肿瘤组织抗凋亡基因表达量呈正相关。结论 子宫内膜癌患者血清中存在异常高表达的HE4,且其表达量与肿瘤恶性程度直接相关。     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法 购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测人卵巢上皮细胞HOSEpiC以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区（3’-UTR）的野生型（WT）和突变型（mut）荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义（P<0.05）,选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义（P<0.05）。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

米非司酮对子宫腺肌病组织中血小板源性生长因子表达及对月经的影响

目的探讨米非司酮对子宫腺肌病患者在位内膜组织中血小板源性生长因子(PDGF)表达及对月经的影响的可能机制。方法 2006年1月至2011年8月在山西医科大学第一医院妇科因子宫腺肌病行子宫切除术者为研究组,因宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅲ行子宫切除术者为对照组,采用组织芯片和免疫组织化学SP法,检测试验组、对照组在位子宫内膜组织中PDGF的表达水平以及对月经的影响,并比较其差异。结果 PDGF主要表达在子宫内膜腺细胞胞质内,对照组(17%)与试验组在位内膜(37%)阳性率差异有统计学意义(P<0.05);PDGF阳性表达率用米非司酮干预组(27%)与未用米非司酮组(70%)之间差异有统计学意义(P<0.05);月经量改变与PDGF阳性表达率差异有统计学意义。小剂量米非司酮有抑制子宫出血的作用,无不良反应。结论 PDGF参与子宫腺肌病的发病过程;米非司酮对PDGF有抑制作用。PDGF在月经改变中可能起一定的作用。小剂量、短时间应用米非司酮可抑制子宫出血。     

Hesperidin Suppresses Melanosome Transport by Blocking the Interaction of Rab27A-Melanophilin

We investigated the inhibitory effects of hesperidin on melanogenesis. To find melanosome transport inhibitor from natural products, we collected the structural information of natural products from Korea Food and Drug Administration (KFDA) and performed pharmacophore-based in silico screening for Rab27A and melanophilin (MLPH). Hesperidin did not inhibit melanin production in B16F10 murine melanoma cells stimulated with α-melanocyte stimulating hormone (α-MSH), and also did not affect the catalytic activity of tyrosinase. But, hesperidin inhibited melanosome transport in melanocyte and showed skin lightening effect in pigmented reconstructed epidermis model. Therefore, we suggest that hesperidin is a useful inhibitor of melanosome transport and it might be applied to whitening agent.     

Mifepristone: pharmacology and clinical impact in reproductive medicine,endocrinology and oncology

Importance of the field: Mifepristone is a synthetic selective progesterone-receptor modulator (SPRM) that is widely used around the globe in the field of reproductive medicine. At present mifepristone is approved in a number of countries for early termination of pregnancy (TOP), cervical dilatation before surgical TOP, and management of early embryonic loss or fetal death. A number of new clinical applications are being developed in gynecology, endocrinology and oncology. Mifepristone has also served as an invaluable tool in the study of steroid hormone biology.

Areas covered in this review: Current indications for mifepristone are reviewed. New applications for mifepristone under clinical investigation are discussed. In addition, the unique molecular and cellular effects of mifepristone are described.

What the reader will gain: The reader will understand the mechanisms of action of mifepristone and the underlying steroid hormone biology. The reader will know the approved clinical indications for mifepristone and appreciate the ongoing basic and clinical research into new applications.

Take home message: Mifepristone is the first-discovered and still most widely used antiprogestin. It has several indications in reproductive medicine and is under investigation for a variety of potential applications in other fields of medicine. The molecular and cellular effects of mifepristone illuminate important aspects of steroid hormone biology.     

LINC00094靶向miR-19b对非小细胞肺癌增殖、侵袭的抑制作用及其分子机制

目的 探讨LINC00094对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 将pcDNA3.1、pcDNA3.1-LINC00094、si-NC、si-LINC00094转染至非小细胞肺癌A549细胞中;将pcDNA3.1-LINC00094分别与miR-NC、miR-19b转染至A549细胞中,分别记为pcDNA3.1-LINC00094+miR-NC组、pcDNA3.1-LINC00094+miR-19b组。采用实时荧光定量PCR检测LINC00094和miR-19b表达水平;采用蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白和凋亡蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术和Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测LINC00094与miR-19b的靶向关系。结果 LINC00094在肺癌组织中低表达。过表达LINC00094可降低A549细胞的生存率,并抑制细胞迁移、侵袭（P<0.05）,且伴有相关蛋白表达水平的改变（P<0.05）。LINC00094靶向调控miR-19b,过表达miR-19b可逆转LINC00...     

雷公藤红素通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对胃癌MFC细胞增殖和凋亡的影响

目的研究雷公藤红素对胃癌MFC细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响及其对胃癌MFC细胞增殖的抑制和促凋亡作用机制。方法分别设置对照组和雷公藤红素低、中、高剂量(5、10、20 mmol/L)组,采用MTT法检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞增殖的影响;采用流式细胞技术检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞周期的影响及MFC细胞凋亡的情况;Western blotting检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和PI3K、AKT和mTOR蛋白表达的影响;实时定量PCR检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞内PI3K、AKT和mTORm RNA表达的影响。结果与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制胃癌MFC细胞的增殖(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著引起MFC细胞G2/M期阻滞(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著促进MFC细胞的凋亡(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制MFC细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白和PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达(P0.05),显著促进MFC细胞内促凋亡蛋白Bax的表达(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制MFC细胞内PI3K、AKT和mTORm RNA的表达(P0.05)。结论雷公藤红素能够抑制胃癌MFC细胞的增殖并促进胃癌MFC细胞凋亡,其作用机制可能是通过抑制胃癌MFC细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路中PI3K、AKT、mTOR等蛋白的表达而抑制胃癌MFC细胞的增殖,进而促进胃癌MFC细胞内促凋亡蛋白Bax的表达,同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,从而促进胃癌MFC细胞凋亡。     

Construction of lentiviral vector carrying Rab9 gene and its expression in mouse brain

Rab proteins and their effectors facilitate vesicular transport by tethering donor vesicles to their respective target membranes. Rab9 mediates late endosome to trans-Golgi-network trafficking. To explore the possibility of Rab9-related gene therapy for neurodegenerative diseases, we packed lentivirus encoding Rab9 cDNA. The expressing plasmid pCDH1-MCF1-Rab9-EF1-copGFP was constructed by using molecular biological techniques. The lentivirus encoding Rab9 cDNA was packed by Lifectamine-2000 mediated co-transfection of the plasmid pPACKH1-GAG, pPACKH1-REV and pVSV-G into 293T cells. DNA sequencing proved the successful construction of pCDH1-MCF1-Rab9-EF1-copGFP. After 72 h, the expression of GFP could be detected in BV-2 cells. Western blotting revealed that the Rab9 gene expression in BALB/c mice brain was up-regulated significantly 4 weeks after injection with lentivirus encoding Rab9 cDNA, which evidenced a satisfactory increasing effect of this virus. Administration of lenti-Rab9 to postnatal day 3 Niemann-Pick disease type C (NPC) mice reduced motor defects and prevented the weight loss associated with female NPC mice, as well as modulated the death rate of Purkinje neurons. It is concluded that the packaging of lentivirus encoding Rab9 cDNA was successful. lentivirus encoding Rab9 can increase the expression of Rab9 cDNA gene effectively, which might offer a novel means for the treatment of neurodegenerative diseases.     

岩藻糖氟化模拟类似物对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响及机制研究

目的研究岩藻糖的氟化模拟类似物2-氟-L-岩藻糖(2-fluoro-L-fucose,2FF)对乳腺癌MDA-MB231细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法凝集素染色法检测2FF处理后乳腺癌细胞中核心岩藻糖的表达情况;CCK-8法测定2FF处理对乳腺癌细胞增殖能力的影响;Transwell实验法测定2FF处理后乳腺癌侵袭能力的变化;Western blotting分析Hippo信号通路相关蛋白的表达情况。结果 2FF可显著抑制乳腺癌MDA-MB231细胞中核心岩藻糖的表达,呈剂量和时间依赖性;2FF处理后可以显著抑制乳腺癌MDA-MB231细胞的增殖和侵袭;Westernblotting结果显示,2FF使用后,pYAP、pLATS、pMST1/2表达下降,总体YAP、LATS、MST1表达未见明显改变。结论 2FF可以抑制核心岩藻糖在乳腺癌细胞中的表达,并抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移;其机制可能与Hippo信号通路的调节有关。     

Naloxone can improve the anti-tumor immunity by reducing the CD4CD25Foxp3 regulatory T cells in BALB/c mice

New strategies that stimulate cell-mediated immunity (CMI) against tumors and inhibit regulatory T cells are needed to improve the outcome of cancer immunotherapy. The aim of this study was to enhance the anti-tumor immunity of gp96 vaccine through naloxone administration. Therefore, we used BALB/c mouse model of fibrosarcoma tumor and analyzed the tumor size, splenocyte proliferation, spleen and tumor-infiltrated lymphocytes. Tumor and spleen CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ regulatory T lymphocytes, cytotoxic activity of the splenocytes, IFN-γ and IL-4 secretion were assessed to describe the anti-tumor immune response. Our findings showed that co-administration of gp96 and naloxone has resulted in a significant reduction in CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ regulatory T cells in the spleen. The results indicated that on days 27 and 32 the tumors in the gp96 + Nal group grew significantly slower. Moreover, co-administration of gp96 and naloxone significantly increased the intra-tumor CD8⁺ T cells and cytotoxic activity. In addition the results indicated a significant increase in the proliferation of splenocytes and IFN-γ production. Our results demonstrate that naloxone is an effective immunoadjuvant in cancer immunotherapy.