南赤瓟提取物诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及作用机制研究

目的 观察南赤瓟提取物对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用,并探讨其可能的作用机制.方法 用不同浓度的南赤瓟提取物(0.10、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/ml)于不同作用时间(24、48、72 h)处理宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法检测不同浓度的南赤瓟提取物在不同作用时间下对HeLa细胞增殖率的影响;用0.50和1.00 mg/ml的南赤瓟提取物处理宫颈癌HeLa细胞48 h后Hoechst33258染色观察细胞形态变化,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HeLa细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值.结果 南赤瓟提取物对HeLa细胞的生长抑制作用呈明显的时间-剂量依赖性;南赤瓟提取物(0.50和1.00 mg/ml)处理能显著降低HeLa细胞线粒体膜电位,促进HeLa细胞凋亡(P＜0.05,P＜0.01);上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P＜0.05,P＜0.01).结论 南赤瓟提取物可诱导HeLa细胞凋亡,其作用机制与降低HeLa细胞线粒体膜电位及调节凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-9、Caspase-3的表达有关.     

甲氨蝶呤的两种给药方式对宫颈癌Hela细胞生长的不同影响

目的研究甲氨蝶呤(MTX)的两种给药方式对宫颈癌Hela细胞生长的不同影响,以探索更好的给药方法。方法培养Hela细胞,设生理盐水对照组、常规化疗组(MTX 12 mg/mL,72 h)和节律化疗组(MTX2 mg/mL,12 h/次,72 h给药6次),分别用MTT法检测各组的细胞增殖改变,Hoechst 33342/PI双染色检测细胞凋亡和死亡情况,RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Caspase-3的表达。结果与生理盐水对照组比较,两个MTX化疗组Hela细胞均有不同程度的增殖抑制和凋亡(P<0.01);与常规化疗组比较,节律化疗组Hela细胞的增殖抑制率和凋亡率更高(P<0.05),Hela细胞的死亡率更低(P<0.01)。RT-PCR结果显示,两个MTX化疗组Hela细胞中Caspase-3的表达高于生理盐水对照组;而节律化疗组Hela细胞Caspase-3的表达显著高于常规化疗组。结论甲氨蝶呤节律化疗比常规化疗对宫颈癌Hela细胞的抑制作用更强、毒性更小。     

半枝莲抑制宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的作用机制研究

目的分析半枝莲抑制宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的作用机制。方法人宫颈癌Hela细胞株常规传代,取对数生长的Hela细胞,应用CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双标记法检测半枝莲对Hela细胞增殖、凋亡的影响,并计算其作用48 h时的半抑制浓度(IC50);应用PI单标记法检测半枝莲对Hela细胞周期的影响;应用Western Blot检测自噬相关蛋白LC3、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路蛋白磷酸化。结果与0mg/ml浓度比较,0.30 mg/ml、0.34 mg/ml、0.38mg/ml、0.42 mg/ml、0.46 mg/ml、0.56 mg/ml浓度的半枝莲作用48 h后,细胞增殖抑制率显著更高,作用48h时半枝莲的IC50为0.421 mg/ml;Hela细胞经0mg/ml、0.34 mg/ml、0.38 mg/ml、0.42 mg/ml浓度的半枝莲培养48 h后,细胞凋亡率逐渐上升(P<0.05),且宫颈癌Hela细胞增殖抑制率、细胞凋亡率呈显著剂量依赖性;与0mg/ml浓度比较,随着半枝莲...     

研究蒙药梅花草的乙醇提取物对人肝癌细胞(HepG2细胞)的体外增殖抑制作用

目的探究蒙药梅花草的乙醇提取物对人肝癌细胞(HepG2细胞)增殖作用。方法对梅花草乙醇提取物的相关剂量组的HepG2细胞增殖抑制作用用MTT法检测,对HepG2细胞内的细胞Bcl-2与Bax蛋白表达用ELISA法检测。结果梅花草乙醇提取物剂量4.615 mg/ml、6.25 mg/ml、12.5 mg/ml时对HepG2细胞生长的抑制效果增强,并且伴随浓度的提高作用明显增强;梅花草乙醇提取物的剂量为12.5 mg/ml时Bax蛋白表达明显比对照组高,Bcl-2蛋白表达明显降低(P0.05)。结论蒙药梅花草的乙醇提取物对HepG2细胞增殖具有抑制作用,作用机制和诱导肿瘤细胞的凋亡具有相关性。     

小白菊内酯对宫颈癌细胞增殖、凋亡及PTEN/AKT通路的影响

目的研究小白菊内酯对宫颈癌细胞增殖、凋亡及磷酸酶及张力蛋白同系物/蛋白激酶(PTEN/AKT)通路的影响。方法体外培养宫颈癌Hela细胞,分别用不同浓度(10、50、60 mg/L)小白菊内酯(Par)处理对数期生长的Hela细胞为实验组,未经处理的Hela细胞为阴性对照组,2.5 mg/L顺铂处理为阳性对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组宫颈癌Hela细胞增殖情况;采用平板克隆试验法检测宫颈Hela细胞增殖能力;采用AnnexinVFITC/碘化丙锭(PI)双染法体外检测宫颈癌Hela细胞凋亡;采用免疫印迹法(WB)检测宫颈癌Hela细胞中PTEN/AKT通路相关蛋白及凋亡相关蛋白表达。结果与阴性对照组比较,顺铂组、5、10、20、40、50 mg/L Par组对Hela细胞增殖抑制率均显著升高,差异有统计学意义(P均0.05),且呈浓度依赖性和时间依赖性,其中50 mg/L Par作用48 h时,对Hela细胞抑制率达51.04%。与阴性对照组比较,顺铂组、10、50、60 mg/L Par组Hela细胞克隆形成率及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、p-AKT蛋白水平降低,细胞凋亡率及B淋巴细胞瘤2相关X蛋白(Bax)、cleavedCaspase8、cleaved-Caspase3、PTEN蛋白水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。其中50、60 mg/L Par组与顺铂组Hela细胞克隆形成率、凋亡率及Bcl-2、p-AKT、Bax、cleaved-Caspase8、cleaved-Caspase3、PTEN蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论小白菊内酯可能通过抑制PTEN/AKT通路,从而抑制宫颈癌Hela细胞增殖,促进其凋亡。     

siRNA沉默Msi1表达对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人宫颈癌Hela细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法针对Msi1基因mRNA序列设计合成siRNA,转染人宫颈癌Hela细胞;实验分Msi1siRNA组、空白对照组、脂质体组及阴性对照组;通过RT-PCR法检测Msi1基因在mRNA水平的表达;分别利用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色试验、群体倍增时间及平皿克隆实验分析干扰Msi1基因对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制效应;通过细胞划痕实验观察干扰Msi1对细胞迁移能力的影响;利用Transwell小室实验观察干扰Msi1对细胞侵袭能力的影响。结果Msi1siRNA能有效抑制人宫颈癌Hela细胞中Msi1基因的表达;Msi1siRNA转染Hela细胞24、48、72h后,与其他各组比较,Msi1siRNA组Hela细胞的生长、增殖速度明显减缓（均P＜0.05）。空白对照组Hela细胞群体倍增时间为（20.18±0.01）h,而干扰Msi1基因处理后的Hela细胞,群体倍增时间延长至（35.68±0.04）h（P＜0.05）;同时平皿克隆实验结果发现,Msi1siRNA处理后的Hela细胞与其他各组相比,Hela细胞生长明显减慢（均P＜0.05）;细胞划痕实验和Transwell小室实验分别显示处理后的Hela细胞其迁移和侵袭能力均明显下降,与其他各组相比差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论沉默Msi1基因表达对人宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移及侵袭有负性调节作用。     

莽吉柿提取物对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响

目的研究莽吉柿提取物对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法使用不同浓度0.75、1.25、2.5、5μg/mL的莽吉柿提取物处理体外培养Hela细胞,CCK-8检测试剂盒检测其对宫颈癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞活性氧(ROS)表达水平;Western Blot检测磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(BAX)表达水平。结果莽吉柿提取物对宫颈癌细胞的增殖具有显著的抑制作用(P0.05),IC50为1.63μg/mL。流式细胞术检测发现,莽吉柿提取物处理组(2.5μg/mL和5μg/mL)的Hela细胞的凋亡率显著高于对照组[(4.19±0.24)%、(14.03±0.21)%比(3.30±0.10)%,P均0.05]。莽吉柿提取物处理组的ROS含量显著高于对照组,为对照组的3.05倍,P0.05。荧光显微镜结果显示莽吉柿提取物处理组的ROS荧光强度显著升高。Western Blot检测发现,莽吉柿提取物处理组(2.5μg/mL和5μg/mL)宫颈癌Hela细胞p-ERK1/2蛋白表达量显著低于对照组,分别为对照组的54%和25%;Bcl-2蛋白表达量显著低于对照组,分别为对照组的76%和67%;BAX蛋白表达量显著高于对照组,分别为对照组的1.11倍和1.45倍(P均0.05)。结论莽吉柿提取物对宫颈癌细胞的影响可能是通过诱导细胞氧化损伤,调控肿瘤细胞MAPK/ERK1/2信号通路和凋亡相关蛋白,进而诱导细胞发生凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖。     

奈达铂联合β-榄香烯对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨奈达铂（nedaplatin,NDP）联合β-榄香烯（β-elemene）对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响. 方法 体外培养宫颈癌HeLa细胞,分别将奈达铂（浓度为7.5,15,30,45,60 μg/ml）,β-榄香烯（浓度为25,50,100,150,200 μg/ml）,单独作用于HeLa细胞后24h、48h用MTT比色法检测细胞的增殖情况,并选取合适的药物浓度（奈达铂15μg/ml,β-榄香烯150 μg/ml）,进行联合用药,加药24 h、48 h后用MTT法检测细胞的增殖情况,用流式细胞术检测24 h细胞的凋亡率.结果 ①MTT法显示不同浓度β-榄香烯作用HeLa细胞24 h、48 h后,其增殖抑制率均明显高于正常对照组（P＜0.05）.奈达铂组除24h时7.5 μg/ml和15 μg/ml无显著差异外,其余各组增殖抑制率均明显高于相应正常对照组（P＜0.05）.②联合用药（奈达铂15 μg/ml,β-榄香烯150 μg/ml）时,对HeLa细胞的抑制作用显著高于单独用药（P＜0.01）. 结论 奈达铂、β-榄香烯单独或二者联合作用均能抑制HeLa细胞的增殖,且联合应用的作用显著高于单独用药,可协同促进HeLa细胞的凋亡.     

芍药苷诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡的相关性分析

目的 探讨芍药苷对人子宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度芍药苷作用于人宫颈癌HeLa细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同时间HeLa细胞的生长抑制效应,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染色流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率及细胞周期变化,透射电镜观察HeLa细胞形态变化,免疫细胞化学法检测芍药苷作用后HeLa细胞Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的变化.结果 不同浓度的芍药苷作用不同时间后,对子宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率呈明显的浓度-时间依赖关系,在24、48、72 h的IC50值分别为5054、2965、2459 μg/ml(P＜0.05);应用不同浓度芍药苷后HeLa细胞凋亡率逐渐增高,对照组及1000、2000μg/ml组凋亡率分别为0.94%、10.94%、13.95%(P＜0.05),细胞周期S期比例呈增多趋势;芍药苷作用48 h后透射电镜下可见HeLa细胞出现典型凋亡改变;芍药苷作用于HeLa细胞48 h后,与对照组相比Bcl-2表达减少、Bax及Caspase-3表达增多(P＜0.05).结论 芍药苷能够诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡,其作用机制可能与抗凋亡基因Bcl-2表达减弱及促凋亡基因Bax、Caspase-3表达增强有关.     

莽吉柿提取物通过调控MAPK/ERK信号通路诱导宫颈癌细胞凋亡的作用研究

目的: 研究莽吉柿(Garcinia mangostanaSL.)提取物对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法:使用0μg/ml、0.75μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml的莽吉柿提取物体外培养Hela细胞,CCK-8法检测其对宫颈癌细胞增殖的影响;使用不同浓度莽吉柿提取物体外培养Hela细胞,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞活性氧(Cell reactive oxygen, ROS)表达水平;不同浓度莽吉柿提取物体体外培养Hela细胞,Western Blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、p-ERK的表达。 结果: 莽吉柿提取物对宫颈癌细胞的增殖具有显著的抑制作用(P<0.05),IC50为1.63μg/ml。流式细胞术检测发现, 0、2.5μg/ml、5μg/ml的莽吉柿提取物处理后Hela细胞的凋亡率分别为(3.30 ± 0.10)%,(4.19 ± 0.24)%,(14.03±0.21)%,具有显著性差异(p＜0.05)。流式细胞术检测发现0、5μg/ml的莽吉柿提取物处理后,细胞活性氧(ROS)水平显著提高(P<0.05),mean值分别为(129796 ± 1336)和(481665 ± 9804)。荧光显微镜结果显示其ROS荧光水平显著提高。Western Blot检测发现宫颈癌Hela细胞中Bcl-2蛋白显著降低、BAX蛋白显著升高、p-ERK蛋白显著降低(P均<0.05)。结论: 莽吉柿提取物对宫颈癌细胞的影响可能是通过诱导细胞氧化损伤,调控肿瘤细胞MAPK/ERK信号通路,调控凋亡相关蛋白,进而诱导细胞发生凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖。     

选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制

目的:研究选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制,探讨NS-398与卡铂在宫颈癌治疗中的协同作用.方法:用NS-398、卡铂及两者联合作用人宫颈癌Hela细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测NS-398、卡铂及两者联合对宫颈癌细胞增殖的影响,流式细胞仪PI染色法分析NS-398、卡铂处理后宫颈癌细胞凋亡率和细胞周期的改变.结果:NS-398、卡铂对人宫颈癌hela细胞的增殖具有抑制作用.卡铂联合NS-398对人宫颈癌hela细胞的增殖抑制作用显著增加,其联合抑制率近似于NS-398和卡铂单药抑制率之和,也近似于2倍卡铂剂量时的增殖抑制率.流式细胞仪检测发现,与对照组比较,NS-398处理组G1期细胞明显增加,而S期细胞明显减少,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);而卡铂处理组G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加,两组比较有统计学意义(P＜0.05).NS-398(200 μmol/L)作用Hela细胞48 h后,流式细胞仪检测发现,NS-398处理组凋亡率为3.43%±0.02%,对照组凋亡率为1.48%±0.03%,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).而卡铂(80 mg/L)处理组凋亡率为9.32%±0.02%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的增殖具有抑制作用.NS-398对宫颈癌细胞的作用可能与凋亡无关.NS-398与卡铂在宫颈癌化疗中具有叠加作用.     

姜黄素对人宫颈癌细胞株Hela细胞抑制及凋亡的影响

目的:探讨姜黄素(curcumin)对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖及凋亡的调控作用.方法:选用人宫颈癌Hela细胞进行体外培养,以5～50μmol/L的姜黄素分别处理Hela细胞24～72h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪(FCM)检测凋亡,透射电镜进行形态学观察.SABC免疫组化法检测细胞内Bcl-2、Bcl-XL、Caspase-3蛋白表达水平.结果:curcumin对Hela细胞增殖有抑制作用.并呈剂量依赖性.DNA直方图上可见亚"G1"峰;透射电镜观察见部分细胞发生凋亡形态学改变.Bcl-2、Bcl-XL表达均下调,Caspase-3表达增强.结论:姜黄素对人宫颈癌Hela细胞的增殖具有明显抑制作用.上调Cas-pase-3,下调Bcl-2、Bcl-XL蛋白的表达,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一.     

三叶青提取物对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及作用机制研究

目的分析三叶青提取物对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法取对数生长期的HeLa细胞分为5组,分别加入0（对照组）、1、2、4、8mg/ml三叶青提取物。培养24或48h后,采用MTT法检测三叶青提取物对HeLa细胞增殖的影响;培养48h后于倒置显微镜下观察细胞形态,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用Westernblot法检测HeLa细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9和细胞凋亡相关蛋白p53、Bax的表达情况。结果三叶青提取物抑制HeLa细胞增殖,且具有浓度依赖性,当药物浓度达到8mg/ml时,24、48h细胞抑制率分别为38.4%、47.2%。三叶青提取物使HeLa细胞胞质浓缩、伪足缩短、体积变小等形态学改变。三叶青提取物通过诱导p53及Bax蛋白表达上调（4mg/ml组与对照组相比,p53与Bax表达水平分别为2.21倍和1.79倍,均P＜0.05）促进细胞凋亡;且MMP-2、MMP-9蛋白表达下调,三叶青提取物通过该途径抑制HeLa细胞迁移。结论三叶青提取物对宫颈癌HeLa细胞增殖起抑制作用。其或通过上调p53及Bax蛋白表达诱导HeLa细胞凋亡,通过下调MMP-2及MMP-9表达影响HeLa细胞侵袭和迁移。     

RNA干扰HPV E6下调eIF4E转录表达抑制宫颈癌Hela细胞增殖并影响细胞周期进程研究

目的探讨宫颈癌Hella细胞中干扰HPV E6对eIF4E表达的调控,探寻HPV E6促癌的新途径,为宫颈癌诊断和治疗提供新靶点。方法构建高效的靶向HPV18 E6的shRNA质粒(shE6)并测序,而后转染人宫颈癌Hela细胞,荧光显微镜及流式细胞术检测转染效率。而后以Real-time PCR检测E6及eIF4E的mRNA水平,采用CCK-8法检测Hela细胞增殖能力的改变,流式细胞术检测细胞周期。结果测序结果显示成功构建shE6质粒。shE6-3转染人宫颈癌Hela细胞后48 h,E6及eIF4E mRNA表达的抑制率分别约为80%,76%。shE6-3对Hela细胞的增殖活性在48 h的抑制效果最明显,增殖抑制率约为21%;相对于NC组,shE6组G0/G1期细胞比例显著增高,而S期比例减少,G2/M期未见明显变化。结论 RNA干扰HPV E6能够下调eIF4E转录表达,抑制宫颈癌Hela细胞增殖,并阻滞细胞周期于G0/G1期。eIF4E有望成为宫颈癌防治的潜在靶点。     

下调MCT1表达抑制宫颈癌Hela细胞增殖并促进其凋亡

［摘要］ 目的探讨下调单羧酸转运蛋白1(monocarboxylate transporter 1,MCT1)表达对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响及其机制。 方法将体外培养的Hela细胞分为未转染组、阴性对照组和MCT1-siRNA组,Western blot检测Hela细胞中MCT1、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,MTT法检测Hela细胞增殖活力,流式细胞仪检测Hela细胞周期分布和凋亡率。 结果与未转染组比较,阴性对照组Hela细胞中MCT1、Bcl-2、Bax蛋白表达水平和细胞增殖、周期分布以及细胞凋亡率差异均无统计学意义（P＞0.05）,MCT1-siRNA组细胞中MCT1和Bcl-2蛋白表达水平、细胞增殖活力和细胞在S期所占百分比均明显降低,Bax蛋白表达水平、细胞在G0/G1期所占百分比和细胞凋亡率均明显升高（P＜0.05）。 结论下调MCT1表达可通过诱导细胞周期阻滞抑制Hela细胞增殖,并通过上调Bax和下调Bcl-2蛋白表达促进Hela细胞凋亡。     

大蒜素对子宫内膜癌细胞顺铂增敏作用及机制的实验研究

目的研究大蒜素(Allitridi)对体外人子宫内膜癌Ishikawa细胞顺铂化疗敏感性的影响并其机制。方法体外培养并取对数生长期Ishikawa细胞,设空白对照组、大蒜素(25μg/ml)组、顺铂(40μg/ml)组和联合干预[大蒜素(25μg/ml)+顺铂(20μg/ml)]组。MTT比色法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期并观察细胞凋亡状况,RT-PCR法测定Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达,Western blotting法检测激活型Caspase-3蛋白表达。结果较顺铂组,联合干预组细胞增殖抑制率显著升高,处于细胞周期G0/G1期比例显著升高而S期、G2/M期比例显著降低,细胞凋亡率(AI)显著升高,Bax mRNA表达上调、Bcl-2 mRNA表达下调且Bax/Bcl-2比值显著升高,激活型Caspase-3蛋白表达上调;较空白对照组,大蒜素组处于细胞G0/G1期比例显著提高、G2/M期比例显著降低,Bcl-2 mRNA表达下调、Bax/Bcl-2比值升高,激活型Caspase-3蛋白表达显著上调;上述差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论大蒜素具有提高人子宫内膜癌细胞顺铂化疗敏感性的作用,机制可能与阻滞细胞周期及调节凋亡相关基因、蛋白表达有关。     

RNA干扰HPV E6下调eIF4E转录表达抑制宫颈癌He1a细胞增殖并影响细胞周期进程研究

目的 探讨宫颈癌Hella细胞中干扰HPV E6对eIF4E表达的调控,探寻HPV E6促癌的新途径,为宫颈癌诊断和治疗提供新靶点.方法 构建高效的靶向HPV18 E6的shRNA质粒（shE6）并测序,而后转染人宫颈癌Hela细胞,荧光显微镜及流式细胞术检测转染效率.而后以Real-time PCR检测E6及eIF4E的mRNA水平,采用CCK-8法检测Hela细胞增殖能力的改变,流式细胞术检测细胞周期.结果 测序结果显示成功构建shE6质粒.shE6-3转染人宫颈癌Hela细胞后48 h,E6及eIF4E mRNA表达的抑制率分别约为80％,76％.shE6-3对Hela细胞的增殖活性在48 h的抑制效果最明显,增殖抑制率约为21％;相对于NC组,shE6组Go/G1期细胞比例显著增高,而S期比例减少,G2/M期未见明显变化.结论 RNA干扰HPV E6能够下调eIF4E转录表达,抑制宫颈癌Hela细胞增殖,并阻滞细胞周期于G0/G1期.eIF4E有望成为宫颈癌防治的潜在靶点.     

薤白总皂苷对人宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响

目的观察薤白总皂苷对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响,并探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的薤白总皂苷(25、50、100、250、500、1000μg/ml)于不同作用时间(24、48、72 h)处理宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法检测不同浓度的薤白总皂苷在不同作用时间下对HeLa细胞增殖率的影响;用100和200μg/ml的薤白总皂苷处理宫颈癌HeLa细胞48 h后,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HeLa细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果薤白总皂苷对HeLa细胞的生长抑制作用呈明显的时间一剂量依赖性;薤白总皂苷(100和200μ/ml)处理能显著降低HeLa细胞线粒体膜电位,抑制HeILa细胞增殖,促进其凋亡(P<0.05,P<0.01);上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P<0.05,P<0.01)。结论薤白总皂苷有显著的抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能与其降低HeLa细胞线粒体膜电位,上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性有关。     

戈壁天冬乙醇提取物的体外抗肿瘤活性

目的:研究戈壁天冬乙醇提取物(ethanol extract of Asparagus gobicus,EEA)的体外抗肿瘤活性。方法:使用MTT法测定EEA对体外培养人宫颈癌细胞Hela、人肺腺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG2和人胃癌细胞SGC7901的增殖抑制作用。使用DAPI/Rh123双染色法荧光显微镜下观察两种化合物对Hela细胞凋亡的影响。结果:EEA对4种肿瘤细胞均有明显抑制作用,200mg·L-1的EEA作用于Hela细胞48h后,细胞凋亡率可达80.17%。结论:戈壁天冬乙醇提取物对多种肿瘤细胞有较强的增殖抑制作用,并可诱导Hela细胞凋亡,具有明显体外抗肿瘤活性。     

干扰INHBA-AS1通过抑制糖酵解途径促进宫颈癌细胞凋亡的作用及机制

目的 观察干扰INHBA-AS1通过糖酵解对宫颈癌细胞Hela增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 将宫颈癌细胞Hela细胞分为空白对照组、阴性对照组、干扰INHBA-AS1组、Prosapogenin A（10 μM,处理48 h）组、阴性对照+Prosapogenin A组（10 μM,处理48 h后转染）和干扰INHBA-AS1+Prosapogenin A（10 μM,处理48 h后转染）组。CCK8检测细胞增殖,TUNEL检测细胞凋亡,测试盒检测葡萄糖、乳酸和ATP含量,qRT-PCR检测细胞INHBA-AS1、HK2、PDK1、GLUT1、LDHA的mRNA表达,Western blot法检测HK2、PDK1、GLUT1、LDHA的蛋白表达情况。结果 与对照组相比,干扰INHBA-AS1或Prosapogenin A组细胞的增殖被抑制（P＜0.05）,凋亡被促进,葡萄糖含量显著上升（P＜0.05）,乳酸、ATP含量显著下降（P＜0.05）,HK2、PDK1、GLUT1、LDHA的mRNA和蛋白表达均显著下降（P＜0.05）;而同时使用干扰INHBA-AS1和Prosapogenin A处理细胞会加重上述现象（P＜0.05）。结论 干扰INHBA-AS1通过抑制糖酵解使宫颈癌细胞Hela的增殖被抑制,凋亡被促进,其机制可能与PDK1相关