TLR信号通路关键因子在肺腺癌组织中的表达与临床意义

目的研究Toll样受体（Toll-likereceptors,TLR）介导的信号通路关键因子：Toll样受体4（TLR4）、核因子资B（NF-资B）、髓样分化因子88（MyD88）、白介素-1受体相关激酶-1（IRAK1）、IRAK4以及肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）在肺腺癌组织中的表达与临床意义。方法分别采用免疫组化SP法和RT-PCR法检测92例肺腺癌组织和30例正常肺组织中TLR4、NF-资B、MyD88、IRAK1、IRAK4、TRAF6的表达情况并作比较分析。结果肺腺癌组织中TLR4、NF-资B、MyD88、IRAK1、IRAK4蛋白的表达水平均明显高于正常肺组织（均P＜0.05）。不同性别、年龄、肿瘤大小、分化程度患者TLR4、NF-资B、MyD88、IRAK1、IRAK4蛋白比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）,而不同程度淋巴结转移、临床分期、远处转移患者上述蛋白比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;不同性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、临床分期、远处转移患者TRAF6蛋白比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。肺腺癌组织TLR4、NF-资B、MyD88、IRAK1、IRAK4mRNA的表达水平均明显高于正常肺组织（均P＜0.05）,而TRAF6mRNA的表达水平与正常肺组织比较无统计学差异（P＞0.05）。结论TLR4、NF-资B、MyD88、IRAK1、IRAK4在肺腺癌中的高表达与肺腺癌的发生、发展及预后密切相关。     

卡非佐米通过抑制FLS增殖对大鼠类风湿关节炎模型的作用研究

目的 本研究通过第二代蛋白酶体抑制剂卡非佐米(carfilzomib,CFZ)对大鼠佐剂诱导型关节炎(adjuvant-induced arthritis,AIA)的作用,研究第二代蛋白酶体抑制剂卡非佐米(carfilzomib,CFZ)对大鼠类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的治疗作用及其机制。 方法 通过注射弗氏佐剂诱导SD大鼠建立AIA大鼠模型。试验分组:低剂量组(1.0 mg/kg)、中剂量组(1.5 mg/kg)、高剂量组(2.0 mg/kg)、预治疗组(1.5 mg/kg)、同时治疗组(1.5 mg/kg)、模型对照组及空白对照组。观察各组大鼠后足关节情况;TRAP染色研究各组破骨细胞抑制水平;采用ELISA分析外周血IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ表达水平;采用CCK-8分析不同剂量治疗组对纤维母细胞样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的抑制水平。 结果 足趾观察结果显示各治疗组大鼠后足病变情况均优于模型对照组;TRAP染色结果显示,与AIA模型对照组相比,各CFZ治疗组的破骨细胞均明显受到抑制;ELISA分析显示各CFZ治疗组外周血中IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ表达显著降低(P<0.01);CCK-8结果显示3种剂量治疗组均显著抑制FLS增生(P<0.01)。 结论 CZF通过抑制AIA大鼠FLS增殖,降低IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ表达,调控炎症反应,达到治疗大鼠AIA的目的,CFZ是一种具有治疗类风湿关节炎潜力的药物。      

白芍总苷对糖尿病所致心肌损伤的保护作用及机制研究

目的探讨白芍总苷（TGP）对糖尿病所致心肌损伤的保护作用及机制。方法取120只SD大鼠按随机数字表法分为二甲双胍（Met）组、TGP低、中、高剂量组、模型组和正常对照组6组,每组20只;采用一次性腹腔注射链尿佐菌素联合高脂饲料喂养的方法制备糖尿病心肌病大鼠模型;自造模第1天开始,Met组1次/d40mg/ml的Met溶液灌胃,TGP低、中、高剂量组分别1次/d10、20、40mg/ml的TGP溶液灌胃,模型组和正常对照组1次/d0.9%氯化钠溶液灌胃,溶液体积均为5ml/kg,疗程8周。8周后采用血糖仪检测FPG水平,动物超声仪检测心功能指标,HE染色、Masson染色观察心肌组织病理学改变和纤维化程度,ELISA法检测血清炎症因子含量,Westernblot法检测心肌组织Toll样受体4（TLR4）、髓样分化蛋白（MyD88）、NF-资B蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠FPG水平明显升高（P＜0.01）;与模型组比较,Met组和TGP中、高剂量组FPG水平均明显降低（均P＜0.01）。与正常对照组比较,模型组大鼠左心室舒张末期内径（LVIDd）、左心室收缩末期内径（LVIDs）均明显升高,而射血分数（EF）、每搏输出量（SV）均明显降低（均P＜0.01）;与模型组比较,Met组和TGP中、高剂量组LVIDd、LVIDs均明显降低,而EF、SV均明显升高（均P＜0.05）;与Met组比较,TGP高剂量组LVIDs明显降低,EF、SV均明显升高（均P＜0.05）。正常对照组大鼠心肌纤维排列整齐规则,细胞形态正常、结构完整,着色均匀;模型组可见心肌纤维断裂、排列紊乱,细胞呈空泡变性,可见大量炎性细胞浸润;与模型组比较,Met组和TGP低、中、高剂量组心肌纤维和细胞病变呈不同程度改善,其中TGP高剂量组未见心肌纤维断裂,炎性细胞浸润数量明显减少。正常对照组大鼠心肌可见肌束平行方向的胶原纤维,含量事宜、分布均匀;与正常对照组比较,模型组蓝染胶原纤维明显增多,排列紊乱,分布不均、以血管周围含量较多;与模型组比较,Met组和TGP低、中、高剂量组心肌纤维化呈不同程度减轻,其中以TGP高剂量改善最为明显。与正常对照组比较,模型组大鼠血清TNF-琢、IL-1茁、IL-6含量均明显升高（均P＜0.01）;与模型组比较,Met组和TGP中、高剂量组TNF-琢、IL-1茁、IL-6含量均明显降低（均P＜0.01）;与Met组比较,TGP高剂量组TNF-琢、IL-6含量均明显降低（均P＜0.01）。与正常对照组比较,模型组大鼠TLR4、MyD88、NF-资B蛋白表达水平均明显上调（均P＜0.01）;与模型组比较,Met组和TGP中、高剂量组TLR4、MyD88、NF-资B蛋白表达水平均明显下调（均P＜0.05）;与Met组比较,TGP高剂量组TLR4、MyD88、NF-资B蛋白表达水平均明显下调（均P＜0.05）。结论TGP对糖尿病大鼠心肌结构和功能具有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-资B通路进而抑制炎症反应有关。     

替格瑞洛对急性心肌梗死患者TLR4/My D88/NF-κB信号通路的影响研究

目的 探讨替格瑞洛对急性心肌梗死患者Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/NF-κB信号通路的影响。方法 选择南京中医药大学附属常州市中医医院于2021年1月至2022年6月收治的142例急性心肌梗死患者,采用随机数字表法分为观察组与对照组各71例。对照组采用常规药物治疗,观察组在对照组基础上加用替格瑞洛片治疗。治疗疗程4周。比较两组疗效,治疗前后心功能,血小板聚集率,TLR4、MyD88和NF-κB mRNA相对表达量和蛋白表达水平。结果 观察组总有效率高于对照组（P<0.05）。相比治疗前,两组治疗后左心室射血分数（LVEF）均显著升高,左心室后壁厚度（LVPWT）、左心室舒张末期内径（LVDD）、血小板聚集率均显著降低,TLR4、MyD88和NF-κB相对表达量均显著降低,TLR4、MyD88和NF-κB mRNA蛋白表达灰度值均显著降低,差异均有统计学意义（均P<0.05）。治疗后观察组LVEF显著升高,LVPWT、LVDD、血小板聚集率显著降低,TLR4、MyD88、NF-κB mRNA相对表达量显著降低,TLR4、MyD88和NF-κB蛋...     

基于TLR4/MyD88/NF-κB通路异甘草素对大鼠颅脑外伤后炎症反应及Th1/Th2失衡的影响

【摘要】 目的 探讨异甘草素（ISL)通过介导Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB (NF-κB)通路对大鼠颅脑外伤 （TBI)炎症反应及Th1/Th2细胞失衡的影响。方法将SPF级大鼠随机分为模型组、ISL低剂量组（20 mg·kg-1）、ISL高剂量组（40 mg·kg-1）、阳性药物组（甘油果糖氯化钠,40 mg·kg-1）,每组10只,另设对照组。HE染色观察大鼠脑组织病理学变化;比较血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,脑组织TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA及TLR4、My D88、NF-κB p65、磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达。结果与对照组比较,模型组血清IL-1β、IL-4、TNF-α水平,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平升高,血清IFN-γ水平降低（均P＜0.05）;与模型组比较,ISL低剂量组、ISL高剂量组、阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）;与ISL低剂量组比较,ISL高剂量组、阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）;与ISL高剂量组比较,阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）。HE结果显示,ISL低剂量组、ISL高剂量组、阳性药物组脑组织病变较模型组出现不同程度改善,ISL高剂量组和阳性药物组改善尤为明显。结论ISL能有效改善大鼠TBI炎性反应、调节Th1/Th2细胞平衡,可能基于调控TLR4/MyD88/NF-κB通路相关mRNA和蛋白表达发挥作用。     

参苓白术散对溃疡性结肠炎脾虚湿困证大鼠结肠组织TLR2、MyD88、COX-2表达的影响

目的观察参苓白术散对溃疡性结肠炎脾虚湿困证大鼠结肠组织Toll样受体2(TLR2)、髓样分化因子88(MyD88)及环氧化酶-2(COX-2)表达的影响,探讨参苓白术散改善溃疡性结肠炎的作用机制。方法采用TNBS/乙醇灌肠结合环境与饮食干预法复制溃疡性结肠炎脾虚湿困证大鼠模型。按照随机数字表将大鼠分为正常组、模型组、参苓白术散组(15.6 g/kg)、参苓白术散(15.6 g/kg)+TLR2激动剂(50μg/只)组、参苓白术散(15.6 g/kg)+TLR2拮抗剂组(0.121 2μg/g),每组12只,连续给药14 d。ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及白细胞介素1β(IL-1β)水平,免疫组织化学法和Western blot法测定结肠组织中TLR2、MyD88、COX-2蛋白表达,Real-time PCR法检测结肠组织TLR2、MyD88、COX-2 mRNA表达。结果模型组大鼠血清TNF-α、IL-6及IL-1β水平均升高(P<0.05),结肠组织TLR2、MyD88、COX-2蛋白和mRNA表达增强(P<0.01);与模型组比较,参苓白术散组和参苓白术散+TLR2拮抗剂组大鼠血清TNF-α、IL-6及IL-1β水平均下降,结肠组织TLR2、MyD88、COX-2蛋白和mRNA表达下调(P<0.01)。与参苓白术散组比较,参苓白术散+TLR2拮抗剂组大鼠血清TNF-α、IL-6及IL-1β水平,结肠组织TLR2、MyD88、COX-2蛋白和mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);参苓白术散+TLR2激动剂组大鼠血清TNF-α、IL-6及IL-1β水平,结肠组织TLR2、MyD88、COX-2蛋白和mRNA表达均高于参苓白术散组(P<0.01)。结论参苓白术散可下调溃疡性结肠炎脾虚湿困证大鼠结肠组织TLR2、MyD88、COX-2表达,降低炎性因子的释放;参苓白术散通过负性调控TLR2/MyD88信号通路,减轻肠道炎症反应,可能是其治疗溃疡性结肠炎的重要机制之一。     

干预miR-31对哮喘小鼠肺组织TGF-β1/Smad3、TLR2/MyD88/NF-资B信号通路的影响

目的探讨干预miR-31对哮喘小鼠肺组织肺组织转化生长因子-茁1（TGF-茁1）/果蝇MAD基因3哺乳动物类似基因（Smad3）、Toll样受体2（TLR2）/髓样分化因子（MyD88）/NF-资B信号通路的影响。方法选取40只SD健康雄性小鼠,10只为正常组,其余30只建立哮喘模型,建模成功后分为哮喘组、上调组、下调组,每组各10只。上调组小鼠尾部静脉注射miR-31激动剂干预,下调组小鼠尾部静脉注射miR-31拮抗剂干预,正常组、哮喘组小鼠尾部静脉注射等量0.9%氯化钠注射液干预。采用HE染色观察各组小鼠肺组织病理学改变情况,RT-PCR法检测各组小鼠肺组织miR-31、CD44mRNA表达水平,酶标分析仪检测各组小鼠血清IFN-酌、IL-2、IL-4、IL-22、IL-3水平,免疫透射比浊法各组小鼠血清总抗氧化能力（TAOC）、一氧化氮（NO）水平,Westernblot法检测TGF-茁1/Smad3、TLR2/MyD88/NF-资B信号通路蛋白水平。结果与正常组比较,其他3组小鼠miR-31、CD44mRNA表达水平,IL-2、IL-4水平,TAOC、NO、IL-22、IL-3水平,TGF-茁1、Smad3、TLR2、MyD88、NF-资Bp65蛋白表达水平均升高,IFN-酌水平均降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与哮喘组、上调组比较,下调组小鼠miR-31、CD44mRNA表达水平,IL-2、IL-4水平,TAOC、NO、IL-22、IL-3水平,TGF-茁1、Smad3、TLR2、MyD88、NF-资Bp65水平均降低,IFN-酌水平升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论下调哮喘小鼠miR-31水平,能够调控CD44mRNA水平,调节Th1/Th2平衡,减轻哮喘小鼠氧化应激反应、炎症反应的严重程度,其作用机制可能与调控TGF-茁1/Smad3、TLR2/MyD88/NF-资B信号通路蛋白水平有关。     

TLR9、MyD88及NF-κB在过敏性紫癜中的表达及意义

目的 探讨免疫上游因子TLR9、MyD88、NF-κB及免疫下游细胞因子IL-6、TNF-α在HSP组与正常对照组间的差异及相关性。方法 采用实时荧光定量PCR检测HSP患儿外周血单核细胞TLR9、MyD88及NF-κB mRNA表达量,ELISA法检测血浆IL-6、TNF-α水平。结果 1HSP患儿外周血单核细胞TLR9、MyD88及NF-κB mRNA表达均显著高于正常对照组;2HSP组血浆IL-6、TNF-α水平较对照组水平显著增高;3HSP组中TLR9与MyD88、TLR9与NF-κB、MyD88与NF-κB、NF-κB与IL-6以及NF-κB与TNF-α均存在线性正相关关系。结论HSP患儿TLR9、MyD88、NF-κB、IL-6、TNF-α水平均较正常儿童显著升高。TLR9-MyD88-NF-κB信号通路参与HSP发病,并在其中起重要作用。     

TLR4/MyD88/NF-κB在克罗恩病结肠组织的表达及临床意义

目的 探讨免疫组织化学法检测CD 结肠组织中TLR4、MyD88、NF-κB 的表达情况,分析各组间是否存在差异,以及与疾病活动度间是否相关。方法 收集郑州大学第二附属医院住院CD 患者的结肠组织标本共17例,收集对照组结肠组织标本5 例,比较两组患者TLR4、MyD88、NF-κB 的表达有无差异及不同程度CD 组间表达有无差异。结果 CD 组TLR4、MyD88、NF-κB 在结肠组织的表达水平均高于正常对照组;TLR4 和MyD88 与ESR存在显著的中等强度相关,NF-κB 与CRP、白蛋白存在显著的中等强度相关。结论 CD 结肠组织中TLR4、MyD88、NF-κB 的表达高于正常结肠组织,TLR4/MyD88/NF-κB 通路在CD 发病中发挥着重要作用。TLR4、MyD88、NF-κB的表达水平与多种炎症指标间存在显著相关性。     

低剂量艾司氯胺酮通过TLR4/MyD88/NF-κB通路减轻肢体缺血再灌注损伤

目的 探讨Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）/髓样分化初级反应基因88（myeloid differentiation primary response gene 88，MyD88）/核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）通路在低剂量艾司氯胺酮预处理的肢体缺血再灌注损伤中的作用。方法 将28只大鼠分为对照组、模型组、实验1组（艾司氯胺酮，5mg/kg）、实验2组（艾司氯胺酮，10mg/kg），每组各7只。实验组大鼠腹腔注射艾司氯胺酮，其余两组同样方法给予生理盐水，造模成功后取血清测定白细胞介素（interleukin，IL）-6、IL-1和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）含量；取骨骼肌测定湿/干重比值，测定TLR4、MyD88基因表达水平和NF-κB蛋白含量，病理切片观察骨骼肌改变。结果 与对照组相比，模型组湿/干重比值、IL-6、IL-1、TNF-α、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA及NF-κB蛋白均显著升高（P<0.05）；与模型组相比，实验1组和实验2组的上述各项指标均显著降低（P<0.05）；而实验1组和实验2组的上述各项指标比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 艾司氯胺酮可通过TLR4/MyD88/NF-κB通路降低相关炎症因子表达，从而减轻肢体缺血再灌注损伤，且低剂量的艾司氯胺酮即可起到抗炎保护作用。     

不同剂量天麻素对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路的影响

目的 探讨不同剂量的天麻素（Gastrodin,Gas）对甲基苯丙胺（Methamphetamine,Meth）依赖条件性位置偏爱（Conditioned place preference,CPP）大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB通路的作用。方法 建立Meth(10 mg/kg,ip,14 d)依赖大鼠CPP模型,采用低中高剂量的天麻素（10、30、100 mg/kg）干预14 d后,采用Western blotting和RT-qPCR方法检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中关键因子的蛋白和mRNA在海马中的表达水平。结果 天麻素干预后TLR4、MyD88、NF-κB p65、TRAF6的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性降低（P <0.001、P <0.01或P <0.05）、p-NF-κB p65的蛋白表达呈剂量依赖性降低（P <0.01或P <0.05）、IκB-α的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性升高（P <0.01或P <0.05）,天麻素干预后p-IκB-α的蛋白表达降低（P <0.01）。结论 天麻素干预对甲基...     

姜黄素对大鼠慢性细菌性前列腺炎的干预作用及其机制研究

目的：评价姜黄素对大鼠慢性细菌性前列腺炎（chronic bacterial prostatitis，CBP）炎性状态的影响及探讨其可能相关机制。方法：随机将40只SD大鼠分为姜黄素200 mg组、姜黄素100 mg组、氧氟沙星组、模型组及假手术组。采用大肠杆菌混悬液前列腺内注射的方法建立大鼠CBP模型，1个月后各治疗组给予药物治疗，持续12 d，电镜观察各组前列腺组织病理改变，real-time PCR测其环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）与诱导性一氧化氮合成酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS） mRNA的表达，ELISA法检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）及Western blot测定核转录因子-?资B（nuclear factor κB，NF-κB）蛋白的表达水平。结果：①COX-2、iNOS mRNA及TNF-α在模型组中表达与假手术组比较都有升高（P=0.000，P=0.000，P=0.000），而各治疗组相对模型组而言其表达都有不同程度的降低（P<0.01），其中姜黄素200 mg组相对姜黄素100 mg组与氧氟沙星组表达量降低更为明显（COX-2：P=0.015，P=0.000；iNOS：P=0.000，P=0.000）。②采取姜黄素治疗的2组能够抑制NF-κB的表达，随着剂量提高作用越明显，且与COX-2、iNOS、TNF-α的表达呈正相关（rs=0.959，P=0.000；rs=0.945，P=0.000；rs=0.910，P=0.000），氧氟沙星组对NF-κB无明显影响。结论：姜黄素对大鼠CBP炎性状态有抑制作用，随剂量增加效果增强，其作用可能与抑制NF-κB的表达有密切关系。     

UC患者PBMC中TLR4、NF-κB水平的变化及其临床意义

目的 探讨溃疡性结肠炎(UC)患者外周血单核细胞(PBMC)中TOLL样受体(TLR)4、NF-κB水平的变化及在UC发病中的可能机制.方法 选取武警浙江省总队医院嘉兴医院消化科2014年1月至2015年1月收治的UC患者30例作为观察组,另选取该院体检科健康体检者10例作为对照组.采用流式细胞仪检测外周血CD14+单核细胞表面TLR4阳性表达率,RT-PCR检测TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB(P65) mRNA表达水平,Western blot检测TLR4、MyD88、NF-κB(P65)蛋白水平.结果 观察组外周血CD14+单核细胞表面TLR4阳性表达率明显高于对照组(P＜0.05);对照组TLR4、MyD88、NF-κB(P65) mRNA及蛋白水平明显低于观察组(P＜0.01);TLR4、MyD88、NF-κB(P65)蛋白水平与UC严重程度呈正相关.结论 UC患者PBMC中TLR4、NF-κB明显增高,临床可通过检测TLR4、NF-κB水平判断UC的发展程度.     

参榆洗液调控TLR4/NF-κB信号通路促进痔术后创面愈合机制研究

目的 研究参榆洗液对肛周创面感染模型大鼠Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨其促进痔术后创面愈合的作用机制。方法 将60只SD雄性大鼠采用随机数字表法分为空白组,模型组,阳性对照组,参榆洗液低、中、高剂量组,每组10只。除空白组外,其余5组建立大鼠肛周创面感染模型,造模成功后予以相应药物外用干预。通过免疫组化法检测大鼠创面组织中白细胞介素-6(IL-6)、NF-κB蛋白表达,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测大鼠脾脏中TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB mRNA的相对表达量。结果 与空白组比较,模型组大鼠创面组织中NF-κB、IL-6蛋白平均光密度值明显升高,脾脏中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组和参榆洗液低、中、高剂量组大鼠创面组织中IL-6蛋白平均光密度值明显降低,脾脏中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA相对表达量明显降低,阳性对照组和参榆洗液中、高剂量组大鼠创面组织中NF-κB蛋白平均光密度值明显降低...     

木犀草素通过TLR/MyD88/NF-κB 通路参与急性痛风性关节炎大鼠的抗炎作用

目的：探讨木犀草素通过Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)/髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88, MyD88)/核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)通路减轻急性痛风性关节大鼠炎症的作用及其机制。方法： 将60 只雄性Wistar 大鼠随机分为5 组：正常对照组、尿酸钠(monosodium urate,MSU)组、秋水仙碱组、木犀草素低剂量 组(50 mg/kg)、木犀草素高剂量组(150 mg/kg)。于大鼠踝关节局部注射尿酸钠晶体混悬液制备急性痛风性关节炎模 型,观察各组大鼠不同时间点的关节肿胀指数,并测定各组大鼠血清及滑膜中白细胞介素1β (interleukin-1β,IL-1β)、 白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,采用实时PCR检测滑膜 组织中TLR2,TLR4,MyD88 mRNA 水平,蛋白质印迹测定滑膜组织中TLR2,TLR4,MyD88,磷酸化核因子 κBp65(phosphorylated-nuclear factor κB,p-NF-κB p65)蛋白表达,HE染色观察踝关节及其周围软组织炎症细胞情况, 免疫组织化学法测定NF-κB表达。结果： 与MSU组相比,木犀草素高、低剂量组及秋水仙碱组的关节肿胀指数均明 显降低(P<0.05),IL-1β,IL-6,TNF-α 的水平也显著降低(P<0.01),TLR2,TLR4,MyD88 mRNA和蛋白水平及NF- κB的蛋白水平均显著降低(P<0.01)。免疫组织化学结果显示：与正常对照组比较,木犀草素和秋水仙碱组大鼠踝关 节的炎症细胞明显减少,滑膜增生减少,软骨表面光滑,无明显软骨和骨侵蚀。结论： 木犀草素可通过下调TLR/ MyD88/NF-κB通路减轻急性痛风性关节炎的炎症反应,有望成为治疗急性痛风性关节炎的有效药物。     

LncRNA-ATB通过调节miR-200c表达对肾移植大鼠急性排斥反应的影响

目的：探讨被转化生长因子β活化的长链非编码RNA（LncRNA-ATB）调节微小RNA（miRNA）-200c对肾移植大鼠移植后急性排斥反应（AR）和受体组织炎症反应的影响,分析肾移植AR潜在的分子机制,为临床诊断和治疗AR提供理论参考。方法：30只SD大鼠为供体,30只Wistar大鼠为受体,通过手术将供体肾脏移植到受体大鼠体内,建立肾移植AR模型,将建模成功大鼠（27只）随机分为模型组、LncRNA-ATB短发夹RNA（shRNA）组和LncRNA-ATB-NC组,每组9只。选取10只Wistar大鼠为假手术组。术后2 h,LncRNA-ATB-shRNA组和LncRNA-ATB-NC组大鼠按每只200 μL分别尾静脉注射含LncRNA-ATB-shRNA和LncRNA-ATB-NC的psiCHECK2基因重组质粒脂质体复合物,假手术组和模型组大鼠按每只200 μL尾静脉注射Opti-MEM培养基。干预7 d后,RT-PCR法检测各组大鼠外周血中LncRNA-ATB和miR-200c表达水平,全自动生化分析仪检测各组大鼠血肌酐（Scr）和血尿素氮（BUN）水平,酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组大鼠血清中白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素8（IL-8）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,苏木精-伊红（HE）染色法观察各组大鼠肾组织病理形态表现并对AR进行诊断分级和半定量评分,RT-PCR法和Western blotting法检测各组大鼠肾组织中Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）和核转录因子κB（NF-κB）mRNA及蛋白表达水平。结果：HE染色,与假手术组比较,模型组大鼠肾脏出现AR,表现为炎性细胞浸润、动脉炎症、间质细胞水肿和皮质出血等,LncRNA-ATB-NC组与模型组大鼠肾脏组织病理形态表现相似,LncRNA-ATB-shRNA组大鼠肾组织病理学形态表现较模型组和LncRNA-ATB-NC组均减轻。与假手术组比较,模型组、LncRNA-ATB-NC组和LncRNA-ATB-shRNA组大鼠外周血中LncRNA-ATB表达水平,血清中Scr、BUN、IL-6、IL-8和TNF-α水平,AR半定量评分,肾组织中TLR4、MyD88和NF-κB mRNA及蛋白表达水平均升高（P<0.05）,外周血中miR-200c表达水平均降低（P<0.05）;与模型组和LncRNA-ATB-NC组比较,LncRNA-ATB-shRNA组大鼠外周血中LncRNA-ATB表达水平,血清中Scr、BUN、IL-6、IL-8和TNF-α水平,AR半定量评分,肾组织中TLR4、MyD88和NF-κB mRNA及蛋白表达水平均降低（P<0.05）,外周血中miR-200c表达水平升高（P<0.05）;模型组与LncRNA-ATB-NC组大鼠外周血中LncRNA-ATB和miR-200c表达水平,血清中Scr、BUN、IL-6、IL-8和TNF-α水平,AR半定量评分,肾组织中TLR4、MyD88和NF-κB mRNA及蛋白表达水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：沉默LncRNA-ATB可以减轻肾移植大鼠移植后AR,抑制受体组织发生炎症反应,其机制可能是通过上调miR-200c,抑制TLR4、MyD88和NF-κB mRNA及蛋白表达而发挥炎症抑制作用。     

TLR4/MyD88/NF-κB 信号通路对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的影响

  目的  研究TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对甲基苯丙胺（methamphetamine,MA）依赖的条件性位置偏好（conditioned place preference,CPP）大鼠海马的影响,同时采用特异性抑制剂TAK-242抑制Toll样4受体（Toll-like receptor 4,TLR4）,减轻MA依赖诱导的海马神经炎症。  方法  建立MA（10 mg/kg,ip,14 d）依赖大鼠CPP模型,分别为生理盐水组、MA组、TAK-242组、MA+TAK-242组。TAK-242组和MA+TAK-242组先分别腹腔注射抑制剂TAK-242（3 mg/kg）,1h后MA+TAK-242组再腹腔注射MA（10 mg/kg）。采用Western Blot实验和采用荧光定量PCR实验检测MA依赖CPP大鼠海马中TLR4、MyD88、TRAF6、IκB-α、p-IκB-α、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白的表达和mRNA表达。  结果  与生理盐水组相比,MA组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均升高（P < 0.001或P < 0.01）,IκB-α的蛋白和mRNA表达下降（P < 0.01）,p-IκB-α、p-NF-κBp65的表达升高（P < 0.01或P < 0.05）;与MA组相比,MA+TAK-242组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均下降（P < 0.001、P<0.01或P < 0.05）,IκB-α的蛋白和mRNA表达升高（P < 0.01）,p-IκB-α、p-NF-κBp65表达下降（P < 0.01或P < 0.05）。  结论  MA依赖可通过激活TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,诱导CPP大鼠海马神经炎症的发生,采用特异性TLR4抑制剂可以减轻MA诱导的神经炎症。     

双氢青蒿素对类风湿关节炎患者外周血单个核细胞TLR/MyD88信号通路的影响研究

背景　类风湿关节炎（RA）的发病机制复杂,已有研究证实Toll样受体（TLR）在RA的发病中起关键作用,其表达于树突状细胞、巨噬细胞、T细胞、B细胞等细胞表面,识别病原体不同的分子结构,进而上调炎性细胞因子和趋化因子,激活细胞内的信号转导通路,引起宿主细胞发生自身炎性反应,在自身免疫性疾病中发挥重要作用。目的　观察双氢青蒿素（DHA）对RA患者外周血单个核细胞（PBMCs）TLR4/MyD88信号通路及蛋白表达的影响。方法　选取2017年10月-2018年12月于内蒙古科技大学包头医学院第二附属医院就诊的活动期RA患者10例为观察组,同时随机选取本院体检中心健康体检者10例为对照组。取两组外周血PBMCs分离培养,将PBMCs分为5组,每组设5个复孔。（1）对照组：健康志愿者外周血PBMCs,不给予干预TLR介导的信号通路;（2）RA组：RA患者外周血PBMCs,不给予干预TLR介导的信号通路;（3）TLR2抑制剂组：RA患者外周血PBMCs,给予100 μg/L的TLR2抑制剂干预TLR介导的信号通路;（4）DHA低剂量组：RA患者外周血PBMCs,给予200 μmol/L的DHA干预TLR介导的信号通路;（5）DHA高剂量组：RA患者外周血PBMCs,给予1 000 μmol/L的DHA干预TLR介导的信号通路。检测并比较5组TLR2阳性率、TLR2 mRNA、MyD88 mRNA、TLR2、MyD88、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及白介素6（IL-6）水平。结果　RA组TLR2阳性率高于对照组、TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TLR2阳性率高于DHA高剂量组（P<0.05）。RA组TLR2 mRNA、MyD88 mRNA高于对照组、TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TLR2 mRNA、MyD88 mRNA高于DHA高剂量组（P<0.05）。TLR2抑制剂组、RA组、DHA低剂量组、DHA高剂量组TLR2、MyD88高于对照组（P<0.05）。RA组TLR2、MyD88高于TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TLR2、MyD88高于DHA高剂量组（P<0.05）。TLR2抑制剂组、RA组、DHA低剂量组、DHA高剂量组TNF-α、IL-6水平高于对照组（P<0.05）。RA组TNF-α、IL-6水平高于TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TNF-α、IL-6水平高于DHA高剂量组（P<0.05）。结论　DHA可抑制RA患者的PBMCs中TLR2、MyD88表达和上清液中TNF-α及IL-6水平,可能与其可抑制TLR4/MyD88信号通路介导的炎性反应有关。     

TLR4、MyD88、NF-κB在乙型肝炎病毒肝硬化患者中的表达及其临床意义

目的 探讨Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）、核转录因子-κ（NF-κB）信号通路在乙型肝炎病毒所致肝硬化中的表达及临床意义。方法 选取2017年1月—2019年1月华北石油管理局总医院收治的130例乙型肝炎肝硬化患者为研究对照（肝硬化组），选择同期130例乙型肝炎患者为乙型肝炎组，选择130例健康人群为对照组。其中肝硬化组进一步根据ChildPugh分为A级（49例），B级（47例），C级（34例）；根据肝硬化程度分为：代偿期肝硬化（49例），失代偿期肝硬化（48例），原发性肝癌（33例）。比较3组丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）的差异，比较3组单核细胞表面TLR4阳性率及血清MyD88、NF-κB水平，以及不同程度肝硬化患者TLR4、MyD88、NF-κB表达水平。采用Spearman或Pearson分析法分析TLR4、MyD88、NF-κB与ChildPugh分级、AST、ALT及TBIL的相关性，采用受试者工作特征（ROC）曲线分析ALT、AST、TBIL、TLR4、MyD88及NF-κB对肝硬化致原发性肝癌的诊断价值。结果 肝硬化组、乙型肝炎组、对照组AST、ALT、TBIL水平比较，差异有统计学意义（P <0.05）；TLR4、MyD88、NF-κB水平比较，差异有统计学意义（P <0.05）；ChildPughA级、B级、C级患者TLR4、MyD88、NF-κB水平比较，差异有统计学意义（P <0.05）；不同程度肝硬化患者TLR4、MyD88、NF-κB比较，差异有统计学意义（P <0.05）。TLR4、MyD88及NF-κB与ChildPugh分级、AST、ALT及TBIL均呈正相关（P <0.05）。ROC曲线结果显示，ALT截断值为101.44 u/L时，AUC为0.738；AST截断值为136.74 u/L时，AUC为0.706；TBIL截断值为51.86 μmol/L 时，AUC为0.746；TLR4截断值为32.342%时，AUC为0.896；MyD88截断值为931.402 pg/ml时，AUC为0.897；NF-κB截断值为1 243.620 pg/ml时，AUC为0.875。结论 TLR4、MyD88、NF-κB信号通路与乙型肝炎病毒所致肝炎及肝硬化病理进程密切相关，且TLR4、MyD88、NF-κB的检测在诊断肝硬化致原发性肝癌中具有一定临床价值。     

瑞马唑仑对颅脑损伤大鼠脑组织损伤及TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响

目的:探讨瑞马唑仑(Rem)对颅脑损伤(BI)大鼠脑组织损伤及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)通路的影响。方法:构建BI大鼠模型;将所有大鼠分为对照组(Control组)、颅脑损伤组(BI组)、瑞马唑仑低、中、高剂量组(Rem-L、Rem-M、Rem-H组)、瑞马唑仑高剂量+TLR4激活剂LPS组(Rem-H+LPS组);检测大鼠脑组织含水量;ELISA检测大鼠脑组织中的炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平;HE染色观察大鼠脑组织的形态学变化;TUNEL法检测脑组织神经元凋亡情况;Western blot法检测大鼠脑组织TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB p65、Bax、Bcl-2蛋白表达情况。结果:与Control组相比,BI组大鼠脑组织神经元变性坏死,数量减少,体积缩小,损伤严重,神经功能评分、脑组织含水量、神经元凋亡率和TNF-α、IL-1β、IL-6水平及Bax、TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB p65表达升高,Bcl-2表达降低...