天泰1号对自发阿尔茨海默病鼠海马CA1区分子层突触可塑性的影响：超微结构定量研究

背景：中枢神经的突触可塑性是行为依赖性学习记忆的核心基础，治疗阿尔茨海默病的天然中药是否通过增加突触可塑性来改善学习记忆尚罕见报道。 目的：观察天泰1号对自发阿尔茨海默病模型学习记忆功能及神经突触可塑性的影响。 设计：随机对照实验。 单位：深圳市中西医结合研究所。 材料：实验在深圳市中西医结合临床研究所二级动物实验室完成。实验动物为昆明种小鼠。 方法：从21个月龄昆明种小鼠筛选出自发阿尔茨海默病（记忆障碍）鼠52只，随机分为4组即老年痴呆组、西药对照组、天泰1号6．80g/kg组、天泰1号20．41g／kg组，另设13只老年学习记忆正常鼠为老年正常组。西药对照组给以甲磺酸二氢麦角碱0．6mg／kg，天泰1号6．80g／kg，20．41g／kg组分别予天泰l号方6．80g／kg及20．41g／kg，以上均研配成0．5mL液体灌胃给药，连续60d，老年正常组和老年痴呆组均灌以等量双蒸水。用跳台实验检测学习记忆成绩；海马CA1区脑组织超薄切片，透射电镜观察，并全自动显微图像分析系统定量检测突触可塑性参数。 主要观察指标：①天泰1号不同剂量对自发阿尔茨海默病鼠学习记忆的影响。②突触电镜观察及体视学定量检测结果。 结果：实验过程中实验动物无脱失，均进入结果分析。①天泰1号不同剂量对自发阿尔茨海默病鼠学习记忆的影响：天泰1号6．80g／kg组，20．41g／kg组的学习、记忆错误次数均小于老年痴呆组，且天泰1号20．41g／kg组的学习、记忆错误次数小于天泰1号6．80g／kg组；天泰1号6．80g／kg组，20．41g／kg组的学习训练逃避潜伏期小于老年痴呆组，记忆测试安全平台潜伏期大于老年痴呆组，且天泰1号20．41g／kg组的记忆测试安全平台潜伏期大于天泰1号6．80g／kg组。（参突触电镜观察及体视学定量检测：与老年正常鼠相比，老年痴呆鼠出现突触数明显减少，部分突触间隙模糊不清，突触连接间断，突触小泡大小不等等变性现象，其余各组也可见突触变性改变，但程度较模型组轻。天泰1号可明显增高其海马CA1区分子层突触的数密度和面密度，且天泰1号20．41g／kg组所增高的幅度大于天泰1号6．80g／kg组。 结论：天泰1号可明显改善自发阿尔茨海默病模型鼠的学习记忆障碍，这一作用可能与其促进突触再生，改善其大脑的突触可塑性有关，其作用呈现出一定的量效关系。     

电针对血管性痴呆大鼠学习记忆功能和海马突触可塑性的影响

目的 观察电针对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆功能的影响,探讨电针治疗VD的作用机制.方法 将40只Sprague-Dawley大鼠分为假手术组、模型组、电针组和西药组,除假手术组行假手术外,其余各组建立VD大鼠模型.电针组术后给予电针百会、大椎穴治疗,药物组给予尼莫地平灌胃,均治疗10 d.采用Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力,微电极记录海马齿状回长时程增强效应,免疫组织化学染色技术观察脑组织海马突触素(Syp)染色情况.结果 与模型组比较,电针组和西药组治疗后水迷宫逃避潜伏期明显缩短(P＜0.01),相同时间内在原平台象限跨越相应平台次数明显增多(P＜0.01),高频刺激后相对群峰电位潜伏期缩短、相对兴奋性突触后电位斜率和相对群峰电位幅值增大(P＜0.05),Syp免疫阳性细胞积分光密度值显著增大(P＜0.01).结论 电针大鼠百会、大椎穴能改善大鼠学习记忆能力,其机制可能是通过促进海马Syp的表达从而增强海马突触可塑性以及加快海马神经元突触传递过程来实现.

Abstract：

Objective To investigate the effects of electroacupuncture (EA) on spatial learning and memory ability, long-term potentiation (LTP) and synaptophysin (Syp) levels in the dentate gyrus of the hippocampus.Methods Forty Sprague-Dawley rats were randomly divided into a sham-operated control group, a model group, an EA group and a medication group. A rat model of vascular dementia (VD) was established by repeated ischemia and reperfusion after pretreatment with sodium nitroprusside. EA was applied to the rat homologues of the human "Baihui" (GV20) and "Dazhui" (DU14) acupoints of the rats in the EA group for 20 min, once daily for 10 d.Morris water maze tests were conducted for evaluating the rats,learning and memory ability. LTP in the hippocampal dentate gyrus was recorded as an electrophysiological index for evaluating learning and memory. Antigenic Syp produced in hippocampal tissue was examined with immunohistochemical assays. Results In comparison the with model group, escape latency (EL) shortened and target-platform crossing times increased significantly in the EA and medication groups. After high frequency stimulation the population spike (PS) latency shortened in the EA group compared with the model group, and the excitatory postsynaptic potential (EPSP) slope and PS amplitude increased.All of these differences were statistically significant. Syp positive cells also increased significantly in the EA-treated rats. Conclusions EA can increase Syp expression and improve the learning and memory ability of rats with this model of VD. EA could facilitate the induction and maintenance of LTP in the dentate gyrus of the hippocampus through influencing synaptic transmission.     

电针对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元突触形态可塑性的影响机制

背景：电针治疗阿尔茨海默病有较好的临床疗效，但其作用机制尚不清楚。 目的：观察电针对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元突触数密度、面密度、突触连接带的平均面积及海马CA3区超微结构的影响。 设计：完全随机分组设计，对照实验。 单位：四川省人民医院中医科，成都中医药大学针灸推拿学院。 材料：选用24月龄雄性SD大鼠50只，体质量（480&;#177;20）g；3月龄雄性SD大鼠6只，体质量（250&;#177;15）g。通道式水迷宫：由黑色玻璃制成（2．1m&;#215;1．7m&;#215;0．6m），水深40cm，水温22～25℃。共设4个盲端。WQ1002F型Hans电针仪。 方法：实验于2002—09／2003—06在成都中医药大学三级动物实验中心完成。①先后通过3次通道式水迷宫实验将老年SD大鼠分组：第1次水迷宫实验（针对6只青年大鼠）在造模前8d进行，共4d。得出青年大鼠平均逃避潜伏期。第2次水迷宫实验（针对50只老年大鼠）在造模前4d进行，得出老年大鼠平均逃避潜伏期。其中36只潜伏期〈青年大鼠潜伏期均值＋1倍标准差值为正常老年大鼠，从中随机选出12只，随机分为2组：对照组和假手术组，每组6只。对其余24只大鼠采用穹窿一海马伞切断术造成阿尔茨海默病模型。第3次水迷宫实验（针对造模的24只大鼠）在造模后第2天进行，从中选出潜伏期大于青年大鼠潜伏期均值＋2倍标准差值的大鼠，即为合格的阿尔茨海默病模型，再从中随机筛选出12只，随机分为2组：模型组和电针组，每组6只。②造模后第6天开始对电针组进行治疗，选穴百会、涌泉、太溪、血海，用30号3．33cm毫针分别在“百会”斜刺0．5寸，“涌泉”、“太溪”、“血海”直刺0．3寸，连接电针仪进行治疗，旅以连续波，频率20Hz，电压24V，强度以大鼠能安静耐受为度（约为2mA），留针30min，1次／d，连续治疗20d。对照组、假手术组（只在与造模大鼠相同位嚣暴露大脑皮质，不切断穹窿-海马伞）和模型组只进行固定，未予任何治疗。③治疗结束后，采用透射电镜观察大鼠海马CA3区超微结构，采用体视学方法计数突触的数量和突触连接带与测试线的交点数，求出能够较好反映突触形态可塑性变化的体视学参数突触的数密度、面密度和突触连接带的平均面积。④组间两两比较，方差齐性用t检验，非齐性用t检验。 主要观察指标：各组大鼠突触数密度、面密度、突触连接带的平均面积比较。 结果：最终符合要求进入结果分析的老年大鼠24只，每组6只。①超微结构：对照组和假手术组的突触密度大于模型组，而突触平均面积较小；电针后突触的密度较模型组明显增大，而突触的平均面积较小。②大鼠海马CA3区突触数密度、面密度：模型组和电针组明显低于对照组和假手术组（P〈0．05～0．01），以模型组最低；假手术组与对照组差异不明显（P〉0．05）；电针组明显高于模型组（P〈0.01）。③大鼠海马CA3区突触连接带平均面积：模型组和电针组明显大于对照组和假手术组（P〈0．05～0．01），以模型组最高；假手术组与对照组差异不明显（P〉0．05）；电针组明显小于模型组（P〈0．01）。 结论：电针能有效地使阿尔茨海默病大鼠海马神经元突触形态得到一定程度的修复，阻止海马神经元突触的退变。     

电针对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元突触形态可塑性的影响机制

背景:电针治疗阿尔茨海默病有较好的临床疗效,但其作用机制尚不清楚。目的:观察电针对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元突触数密度、面密度、突触连接带的平均面积及海马CA3区超微结构的影响。设计:完全随机分组设计,对照实验。单位:四川省人民医院中医科,成都中医药大学针灸推拿学院。材料:选用24月龄雄性SD大鼠50只,体质量(480±20)g;3月龄雄性SD大鼠6只,体质量(250±15)g。通道式水迷宫:由黑色玻璃制成(2.1m×1.7m×0.6m),水深40cm,水温22～25℃。共设4个盲端。WQ1002F型Hans电针仪。方法:实验于2002-09/2003-06在成都中医药大学三级动物实验中心完成。①先后通过3次通道式水迷宫实验将老年SD大鼠分组:第1次水迷宫实验(针对6只青年大鼠)在造模前8d进行,共4d。得出青年大鼠平均逃避潜伏期。第2次水迷宫实验(针对50只老年大鼠)在造模前4d进行,得出老年大鼠平均逃避潜伏期。其中36只潜伏期<青年大鼠潜伏期均值 1倍标准差值为正常老年大鼠,从中随机选出12只,随机分为2组:对照组和假手术组,每组6只。对其余24只大鼠采用穹窿-海马伞切断术造成阿尔茨海默病模型。第3次水迷宫实验(针对造模的24只大鼠)在造模后第2天进行,从中选出潜伏期大于青年大鼠潜伏期均值 2倍标准差值的大鼠,即为合格的阿尔茨海默病模型,再从中随机筛选出12只,随机分为2组:模型组和电针组,每组6只。②造模后第6天开始对电针组进行治疗,选穴百会、涌泉、太溪、血海,用30号3.33cm毫针分别在“百会”斜刺0.5寸,“涌泉”、“太溪”、“血海”直刺0.3寸,连接电针仪进行治疗,施以连续波,频率20Hz,电压2～4V,强度以大鼠能安静耐受为度(约为2mA),留针30min,1次/d,连续治疗20d。对照组、假手术组(只在与造模大鼠相同位置暴露大脑皮质,不切断穹窿-海马伞)和模型组只进行固定,未予任何治疗。③治疗结束后,采用透射电镜观察大鼠海马CA3区超微结构,采用体视学方法计数突触的数量和突触连接带与测试线的交点数,求出能够较好反映突触形态可塑性变化的体视学参数突触的数密度、面密度和突触连接带的平均面积。④组间两两比较,方差齐性用t检验,非齐性用t检验。主要观察指标:各组大鼠突触数密度、面密度、突触连接带的平均面积比较。结果:最终符合要求进入结果分析的老年大鼠24只,每组6只。①超微结构:对照组和假手术组的突触密度大于模型组,而突触平均面积较小;电针后突触的密度较模型组明显增大,而突触的平均面积较小。②大鼠海马CA3区突触数密度、面密度:模型组和电针组明显低于对照组和假手术组(P<0.05～0.01),以模型组最低;假手术组与对照组差异不明显(P>0.05);电针组明显高于模型组(P<0.01)。③大鼠海马CA3区突触连接带平均面积:模型组和电针组明显大于对照组和假手术组(P<0.05～0.01),以模型组最高;假手术组与对照组差异不明显(P>0.05);电针组明显小于模型组(P<0.01)。结论:电针能有效地使阿尔茨海默病大鼠海马神经元突触形态得到一定程度的修复,阻止海马神经元突触的退变。     

天泰1号对自发阿尔茨海默病鼠海马CA1区分子层突触可塑性的影响超微结构定量研究

背景中枢神经的突触可塑性是行为依赖性学习记忆的核心基础,治疗阿尔茨海默病的天然中药是否通过增加突触可塑性来改善学习记忆尚罕见报道.目的观察天泰1号对自发阿尔茨海默病模型学习记忆功能及神经突触可塑性的影响.设计随机对照实验.单位深圳市中西医结合研究所.材料实验在深圳市中西医结合临床研究所二级动物实验室完成.实验动物为昆明种小鼠.方法从21个月龄昆明种小鼠筛选出自发阿尔茨海默病(记忆障碍)鼠52只,随机分为4组即老年痴呆组、西药对照组、天泰1号6.80 g/kg组、天泰1号20.41 g/kg组,另设13只老年学习记忆正常鼠为老年正常组.西药对照组给以甲磺酸二氢麦角碱0.6 mg/kg,天泰1号6.80 g/kg,20.41 g/kg组分别予天泰1号方6.80 g/kg及20.41 g/kg,以上均研配成0.5 mL液体灌胃给药,连续60 d,老年正常组和老年痴呆组均灌以等量双蒸水.用跳台实验检测学习记忆成绩;海马CA1区脑组织超薄切片,透射电镜观察,并全自动显微图像分析系统定量检测突触可塑性参数.主要观察指标①天泰1号不同剂量对自发阿尔茨海默病鼠学习记忆的影响.②突触电镜观察及体视学定量检测结果.结果实验过程中实验动物无脱失,均进入结果分析.①天泰1号不同剂量对自发阿尔茨海默病鼠学习记忆的影响天泰1号6.80 g/kg组,20.41 g/kg组的学习、记忆错误次数均小于老年痴呆组,且天泰1号20.41 g/kg组的学习、记忆错误次数小于天泰1号6.80 g/kg组;天泰1号6.80 g/kg组,20.41 g/kg组的学习训练逃避潜伏期小于老年痴呆组,记忆测试安全平台潜伏期大于老年痴呆组,且天泰1号20.41 g/kg组的记忆测试安全平台潜伏期大于天泰1号6.80 g/kg组.②突触电镜观察及体视学定量检测与老年正常鼠相比,老年痴呆鼠出现突触数明显减少,部分突触间隙模糊不清,突触连接间断,突触小泡大小不等等变性现象,其余各组也可见突触变性改变,但程度较模型组轻.天泰1号可明显增高其海马CA1区分子层突触的数密度和面密度,且天泰1号20.41 g/kg组所增高的幅度大于天泰1号6.80 g/kg组.结论天泰1号可明显改善自发阿尔茨海默病模型鼠的学习记忆障碍,这一作用可能与其促进突触再生,改善其大脑的突触可塑性有关,其作用呈现出一定的量效关系.     

电针对阿尔茨海默病模型SD大鼠学习记忆功能及海马神经细胞凋亡的影响

目的观察电针对阿尔茨海默病(AD)模型SD大鼠学习记忆、海马神经细胞凋亡、谷氨酸(Glu)含量、N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体、caspase-3蛋白、自噬相关蛋白Beclin-1表达的影响。方法 48只健康雌性SD大鼠随机分为AD模型组、假手术组、正常对照组和电针组,每组12只。采用Aβ25~35建立AD模型,Morris水迷宫观察大鼠学习记忆能力,尼氏染色观察海马神经元数量,细胞术检测各组海马神经元的凋亡,高效液相色谱法检测海马Glu含量,免疫组化法检测海马组织NMDA受体表达,Western blotting检测海马caspase-3和beclin-1蛋白的表达。结果与AD模型组比较,电针组SD大鼠在第Ⅱ象限停留时间所占的百分比较大、跨越平台次数较多、目标象限停留时间较长、平台象限停留路程占总路程百分比较大、平均潜伏期较短,学习记忆能力有明显改善;海马区神经元凋亡率较低,NMDA受体功能增强,Glu含量、caspase-3和Beclin-1蛋白表达减少(P0.05)。结论电针治疗可改善AD大鼠学习记忆功能,抑制神经元凋亡,上调NMDA受体功能,减少凋亡相关蛋白的含量。     

电针对大鼠海马兴奋性突触后电位长时程增强的作用

背景海马长时程增强(1ong-term potentiation,LTP)与行为学研究相结合,已被广泛用于包括中医药在内的改善学习记忆功能和治疗老年性痴呆的研究.目的观察电针对麻醉状态下正常和东莨菪碱引起的学习记忆减退模型大鼠海马兴奋性突触后电位(excitatory postsynaptic potential,EPSP)LTP的作用.设计随机对照研究.地点和材料SD大鼠40只,体质量270～310 g,单纯随机分成为对照组、电针组、模型组和模型+电针治疗组,每组10只.干预引导大鼠海马齿状回颗粒细胞层突触后兴奋性电位群(EPSPs),强直刺激大脑皮质前穿质区引起海马突触LTP反应;用东莨菪碱制备学习记忆障碍模型;电针(疏密波3～5 mA,30 min)大椎和双侧肾俞穴;观察电针对正常和模型大鼠海马LTP的影响.主要观察指标强直刺激前和强直刺激诱发后0,60,120 min LTP群发电位信号(PS),PS的EPSP潜伏期,PS锋值潜伏期,EPSP的斜率,PS锋值和PS锋面积(PSa).结果①电针对强直刺激诱发的海马突触LTP效应的作用强于对照组.与对照组比,EPSP潜伏期明显缩短[相对于强直刺激前的变化率对照组与电针组分别为(-7.8±2.6)%比(-14.4±7.7)%,差异有显著性意义(t=2.568 1,P＜0.05)];EPSP的斜率增加(t=2.436 4,P＜0.05);PS锋面积增大(t=2.750 8～2.990 9,P＜0.05),且维持时间长于对照组.②东莨菪碱可显著抑制强直刺激诱发的海马突触LTP,表现为EPSP潜伏期和PS锋值潜伏期延长,与对照组比较差异均有非常显著性意义(t=4.564 8～5,996 5,P均＜0.01);EPSP的斜率下降,PS锋值和PS锋面积变小.③电针能显着对抗东莨菪碱对海马突触LTP的抑制作用,与模型组比较各参数均有统计学意义.结论电针对强直刺激引起的海马突触LTP有一定的易化作用,并对东莨菪碱引起的学习记忆障碍有显著的对抗作用.     

脐血单个核细胞颈内动脉输注对血管性痴呆大鼠学习记忆能力和海马神经元突触可塑性的干预

目的：以主动回避反应和脑海马齿状回长时程增强为指标，观察颈内动脉输注脐血单个核细胞后血管性痴呆大鼠学习记忆能力和脑海马神经元突触可塑性的变化。方法：实验于2005—03／07在解放军第三军医大学生理教研室和大坪医院野战外科研究所完成。选取清洁级24月龄Wistar大鼠36只，随机分为正常对照组、模型对照组、脐血单个核细胞组，12只／组。选取解放军第三军医大学大坪医院产科的健康足月妊娠产妇（产妇均签署知情同意书），无菌条件下穿刺脐静脉，收集胎盘脐血后体外分离脐血单个核细胞。模型对照组、脐血单个核细胞组应用改良Pulsinellis四血管阻断法建立血管性痴呆大鼠模型，正常对照组不进行椎动脉烧灼和颈总动脉夹闭。造模后24h脐血单个核细胞组颈内动脉输注5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的脐血单个核细胞6&;#215;10^9L^-1，正常对照组和模型对照组输注等量生理盐水。采用电脑控制的穿梭箱系统和海马齿状回长时程增强系统检测各组大鼠学习记忆能力及其电生理的改变。结果：实验选用36只大鼠，全部进入结果分析。①造模后4．8周各组大鼠主动回避反应率的比较：与正常对照组比较，模型对照组明显降低[（90．0&;#177;4．3）％，（42．5&;#177;5．0）％；（92．5&;#177;5．0）％，（45.8&;#177;3．6）％；P均〈0．01]；与模型对照组比较，脐血单个核细胞组显著提高（P均〈0．01）。②造模后4，8周各组大鼠脑海马齿状回长时程增强诱导率的变化：模型对照组诱导率较正常对照组均明显降低（91％，17％，X^2=13．59，P〈0．01；91％．25％，X^2=10．97，P〈0．01）；脐血单个核细胞组诱导率较模型对照组显著提高（X^2=4．44，P〈0．05；X^2=4．20，P〈0．05）。③各组造模后不同时间给予高频刺激后群体电位振幅的变化：造模后4，8周模型对照组较正常对照组均明显降低（P均〈0．01）；脐血单个核细胞组较模型对照组均显著提高（P均〈0．01）。④各组高频刺激前后脑海马齿状回长时程增强潜伏期的变化：造模后4，8周模型对照组较正常对照组均明显延长（P均〈0．01）；脐血单个核细胞组较模型对照组均显著缩短（P均〈0．05）。结论：慢性脑缺血可使大鼠脑海马齿状回长时程增强的诱导率、群体电位的振幅和潜伏期呈显著下降趋势，引起大鼠认知功能的损害。而颈内动脉输注脐血单个核细胞可显著易化脑海马齿状回神经元突触的可塑性，改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力。     

电针对大鼠海马兴奋性突触后电位长时程增强的作用

背景：海马长时程增强(long-term potentiation，LTP)与行为学研究相结合，已被广泛用于包括中医药在内的改善学习记忆功能和治疗老年性痴呆的研究。目的：观察电针对麻醉状态下正常和东莨菪碱引起的学习记忆减退模型大鼠海马兴奋性突触后电位(excitatory postsynaptic potential，EPSP)LTP的作用。设计：随机对照研究。地点和材料：SD大鼠40只，体质量270～310g，单纯随机分成为：对照组、电针组、模型组和模型+电针治疗组，每组10只。干预：引导大鼠海马齿状回颗粒细胞层突触后兴奋性电位群(EPSPs)，强直刺激大脑皮质前穿质区引起海马突触LTP反应；用东莨菪碱制备学习记忆障碍模型；电针(疏密波3～5mA，30min)大椎和双侧肾俞穴；观察电针对正常和模型大鼠海马LTP的影响。主要观察指标：强直刺激前和强直刺激诱发后0，60，120min LTP群发电位信号(PS)，PS的EPSP潜伏期，PS锋值潜伏期，EPSP的斜率，PS锋值和PS锋面积(PSa)。结果：①电针对强直刺激诱发的海马突触LTP效应的作用强于对照组。与对照组比．EPSP潜伏期明显缩短[相对于强直刺激前的变化率对照组与电针组分别为(-7．8&;#177;2．6)％比(-14．4&;#177;7．7)％，差异有显著性意义(t=2．5681，P&;lt;0．05)]；EPSP的斜率增加(t=2．4364，P&;lt;0．05)；PS锋面积增大(t=2．7508～2.9909，P&;lt;0．05)，且维持时间长于对照组。②东莨菪碱可显著抑制强直刺激诱发的海马突触LTP，表现为：EPSP潜伏期和PS锋值潜伏期延长，与对照组比较差异均有非常显著性意义(t=4．5648～5．9965，P均&;lt;0．01)；EPSP的斜率下降，PS锋值和PS锋面积变小。③电针能显着对抗东莨菪碱对海马突触LTP的抑制作用，与模型组比较各参数均有统计学意义。结论：电针对强直刺激引起的海马突触LTP有一定的易化作用，并对东莨菪碱引起的学习记忆障碍有显著的对抗作用。     

脐血单个核细胞颈内动脉输注对血管性痴呆大鼠学习记忆能力和海马神经元突触可塑性的干预

目的:以主动回避反应和脑海马齿状回长时程增强为指标,观察颈内动脉输注脐血单个核细胞后血管性痴呆大鼠学习记忆能力和脑海马神经元突触可塑性的变化。方法:实验于2005-03/07在解放军第三军医大学生理教研室和大坪医院野战外科研究所完成。选取清洁级24月龄Wistar大鼠36只,随机分为正常对照组、模型对照组、脐血单个核细胞组,12只/组。选取解放军第三军医大学大坪医院产科的健康足月妊娠产妇(产妇均签署知情同意书),无菌条件下穿刺脐静脉,收集胎盘脐血后体外分离脐血单个核细胞。模型对照组、脐血单个核细胞组应用改良Pulsinellis四血管阻断法建立血管性痴呆大鼠模型,正常对照组不进行椎动脉烧灼和颈总动脉夹闭。造模后24h脐血单个核细胞组颈内动脉输注5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的脐血单个核细胞6×109L-1,正常对照组和模型对照组输注等量生理盐水。采用电脑控制的穿梭箱系统和海马齿状回长时程增强系统检测各组大鼠学习记忆能力及其电生理的改变。结果:实验选用36只大鼠,全部进入结果分析。①造模后4,8周各组大鼠主动回避反应率的比较:与正常对照组比较,模型对照组明显降低[(90.0±4.3)%,(42.5±5.0)%;(92.5±5.0)%,(45.8±3.6)%;P均<0.01];与模型对照组比较,脐血单个核细胞组显著提高(P均<0.01)。②造模后4,8周各组大鼠脑海马齿状回长时程增强诱导率的变化:模型对照组诱导率较正常对照组均明显降低(91%,17%,χ2=13.59,P<0.01;91%,25%,χ2=10.97,P<0.01);脐血单个核细胞组诱导率较模型对照组显著提高(χ2=4.44,P<0.05;χ2=4.20,P<0.05)。③各组造模后不同时间给予高频刺激后群体电位振幅的变化:造模后4,8周模型对照组较正常对照组均明显降低(P均<0.01);脐血单个核细胞组较模型对照组均显著提高(P均<0.01)。④各组高频刺激前后脑海马齿状回长时程增强潜伏期的变化:造模后4,8周模型对照组较正常对照组均明显延长(P均<0.01);脐血单个核细胞组较模型对照组均显著缩短(P均<0.05)。结论:慢性脑缺血可使大鼠脑海马齿状回长时程增强的诱导率、群体电位的振幅和潜伏期呈显著下降趋势,引起大鼠认知功能的损害,而颈内动脉输注脐血单个核细胞可显著易化脑海马齿状回神经元突触的可塑性,改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力。     

Cathepsin B抑制剂对发育期惊厥大鼠海马自噬相关蛋白表达的调节

目的 探讨新生期大鼠反复惊厥后海马自噬、凋亡相关蛋白Beclin-1,Cathepsin B和Bcl-2的表达及溶酶体蛋白酶抑制剂CBI对表达的干预作用.方法 实验在苏州大学神经科学研究所进行.日龄6 d的Sprague-Dawley大鼠90只随机(随机数字法)分为3组,每组30只:对照组、反复惊厥组及CBI组.反复惊厥组(RS)每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次,每次间隔30 min,连续9 d;对照组同样操作但不吸入三氟乙醚;CBI组于惊厥前腹腔注射cathepsin B(2 μL,0.5μg/μL),同样方法吸入三氟乙醚诱导惊厥发作.各组分别于末次惊厥后1.5 h,3 h,6 h,24 h和生后35 d 5个时间点[(n=6/(每点,每组)]取海马组织,采用免疫印迹技术检测自噬相关蛋白Beclin-1,Cathepsin B和Bcl-2的表达,采用方差分析进行统计.结果 对照组和CBI组同一时间点Beclin-1,Cathepsin B和Bcl-2的表达差异无统计学意义,惊厥组(1.5 h,3 h,6 h,24 h)海马组织中Beclin-1和Cathepsin B的表达明显高于对照组和CBI组同一时间点的Beclin-1表达(F值分别为Beclin-1:7.44,6.58,5.43,9.69,P＜0.05;Cathepsin B:4.62,2.02,3.49,4.86);而惊厥组(1.5 h,3 h,6 h,24 h)Bcl-2的表达则明显低于对照组和CBI组同一时间点Bcl-2的表达(F值分别为4.34,3.79,4.88,4.42,P＜0.05).结论 发育期大鼠反复惊厥后海马神经元自噬信号通路激活,同时抗凋亡基因Bcl-2蛋白水平显著下调,表明自噬信号途径与凋亡途径共同激活,协调参与发育期大鼠惊厥急性期兴奋毒性脑损伤的病理生理机制.

Abstract：

Objective To explore the dynamic expressions of autophagia and apoptosis associated protein Beclin-1, Cathepsin B and Bcl-2 in hippocampus and the intervention efficacy of cathepsin-B inhibitor (CBI) after recurrent neonatal seizure. Method Ninty 6-day-old SD rats were randomly (random number) divided into the recurrent neonatal seizure group (RS group, n = 30), CBI-treated seizure group (CBI group, n = 30) and the control group (n = 30). Rats in RS group were subjected to 55 attacks of seizure induced by using flurothyl during the consecutive 9 days beginning on the 6 th postnatal day (P6). In CBI group, CBI (2 μL, 0.5 μg/μL) was administered every day before seizures induced. Western blot was employed to determine the protein level at different intervals (1.5 h,3 h,6 h,24 h) after the last convulsion.Results There were higher expressions of Beclin-1 and Cathepsin B, and lower expressions of Bcl-2 expression in RS group(1. 5 h,3 h,6 h and 24 h) than those at the same time in control group (P ＜ 0.05). Beclin1 and Cathepsin B expressions were lower while Bcl-2 expressions were higher in CBI group at the intervals of 1.5 h,3 h,6 h and 24 h compared with those in RS group (P ＜ 0. 05). Conciusions Autophagic and apoptotic pathways were activated immediately after recurrent neonatal seizures as indicated by expression changes of Beclin-1, Cathepsin B and Bcl-2 in hippocampus, which suggests a synergistic effect of the two pathways in the pathophysiology of the long-term brain damage of neonateε resulted from the adverse effects of recurrent neonatal seizures.     

重复经颅磁刺激对脑缺血大鼠海马突触素表达及学习记忆的影响

目的:观察10 Hz重复经颅磁刺激(r TMS)对脑缺血大鼠海马突触素(SYN)的表达及学习记忆的影响。方法:将36只雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组和r TMS组,每组12只。制备双侧颈总动脉永久结扎脑缺血模型,假手术组不造成缺血,r TMS组给予10 Hz r TMS,共28次。采用Morris水迷宫评价学习记忆能力;利用电生理实验检测海马CA1区的长时程增强(LTP);Western blot检测海马SYN蛋白的含量。结果:与假手术组比较,模型组的逃避潜伏期明显延长,60 s内跨越平台次数减少;与模型组比较,r TMS组大鼠的逃避潜伏期缩短,60 s内跨越平台次数增加,f EPSP波幅提高,海马SYN蛋白的表达增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:r TMS能促进脑缺血大鼠海马SYN蛋白的表达和增强高频刺激引起的LTP,这可能是r TMS改善脑缺血损伤引起的学习记忆障碍的作用机制之一。     

电针辅助治疗对阿尔茨海默病大鼠认知功能和学习记忆能力的影响分析

目的分析电针辅助治疗对阿尔茨海默病(AD)大鼠认知功能、学习记忆能力的影响,为AD的临床干预提供实验数据。方法60只清洁级雄性Wister大鼠60只清洁级雄性Wister大鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组、西药组、电针辅治组,每组8只;模型组、西药组和电针辅治组双侧脑室注射β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导AD大鼠模型;西药组、电针辅治组采用电针治疗2周,电针频率分别为2 Hz、50 Hz;假手术组双侧脑室0.9%氯化钠注射,且正常组、模型组及假手术组仅在电针组大鼠行电刺激时给予同样的抓取及固定动作,不进行其他处理;采用Morris水迷宫测试行定位航行实验、空间探索实验并Morris水迷宫测试结束后取大鼠海马及皮质组织;采用免疫印迹检测法(WB)检测大鼠海马区及皮质组织的糖原合酶激酶(GSK-3β)蛋白表达及GSK-3β第9位的丝氨酸(Ser-9)和216位的酪氨酸(Try-216)水平。结果①模型组各时间点的逃避潜伏期、首次跨越时间明显较正常组长,跨越平台次数明显较正常组少提示造模成功;而较模型组,西药组、电针辅治组各个时间点的逃避潜伏期、首次跨越时间明显缩短跨越平台次数明显增多,且电针辅治组的各个时间点的逃避潜伏期、次跨越平台时间明显短于西药组,跨越平台次数明显较西药组多差异均有统计学意义(P<0.05);②较正常组及假手术组,模型组海马及皮质组织GSK-3β、GSK-3β(Try-216)明显升高,GSK-3β(Ser-9)明显降低;而与模型组比较,西药组及电针辅治组海马及皮质组织GSK-3β、GSK-3β(Try-216)均下降,GSK-3β(Ser-9)则上升,且电针辅治组海马及皮质组织GSK-3β、GSK-3β(Try-216)显著低于西药组,GSK-3β(Ser-9)显著高于西药组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论电针辅助治疗对阿尔茨海默病大鼠认知功能、学习记忆能力的改善优于西药干预。     

电针对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力及海马NSF表达的影响

目的 观察电针对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)所致的阿尔茨海默病（AD）模型大鼠学习记忆能力及海马CA1区N-乙基马来酰亚胺敏感蛋白（NSF）表达的影响，探讨电针防治AD的作用机制。 方法 选取健康雄性SD大鼠40只，按照随机数字表法将其分为正常组、假手术组、模型组和电针组，每组10只。模型组与电针组双侧海马注射寡聚态Aβ25-35制备AD大鼠模型，假手术组在相同部位同法注射等量的生理盐水。造模成功后第1天开始，电针组选取双侧“肾俞”、“百会”穴进行治疗，每日1次，每周6次，共治疗2周。在电针组大鼠行电刺激时，正常组、模型组和假手术组仅给予同样的抓取和固定动作。电针治疗结束后第2天，采用Morris水迷宫测试对各组大鼠进行学习记忆能力检查，测试结束后第2天，取海马组织采用免疫组织化学法检测CA1区NSF表达的累计光密度值（IOD）。 结果 电针组大鼠逃避潜伏期［（42.09±2.24）s］明显低于模型组大鼠［（61.70±3.02）］，电针组大鼠穿越平台次数［（7.70±0.67）次］显著多于模型组［（3.50±0.85）次］，差异有统计学意义（P<0.05）。电针组大鼠NSF表达的IOD（1734.26±264.65）与模型组（771.50±195.28）比较，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 电针能有效改善AD模型大鼠的学习记忆能力，其作用机制可能与电针增加海马CA1区NSF的表达含量有关。     

电针促进阿尔茨海默病模型小鼠（SAMP8）海马神经元突触可塑性的神经细胞黏附机制

目的:研究电针对快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)海马神经元突触超微结构、神经细胞黏附分子(NCAM)、多聚唾液酸转移酶ST8SiaII/IV的影响,从神经细胞黏附角度探讨电针治疗阿尔茨海默病(AD)的可塑性作用机制。方法:以SAMP8小鼠作为AD动物模型,电针"百会"、"涌泉"穴,1次/d,连续刺激21d。以Morris水迷宫测试小鼠学习记忆能力的变化;电镜观察海马神经元突触界面曲率、突触后致密物(PSD)厚度和突触间隙宽度的变化;以免疫组织化学、原位杂交方法检测海马神经元NCAM及其mRNA、ST8SiaII/IVmRNA的表达。结果:①模针组小鼠平均逃避潜伏期较模型组小鼠短(P<0.05);模针组小鼠在平台所在象限停留的时间(39.55±5.47s)较模型组小鼠(30.27±6.12s)长(P<0.05);②模针组突触后致密物厚度(76.928±25.236nm)较模型组(65.371±24.219nm)增厚(P<0.05);突触间隙宽度(25.941±6.217nm)较模型组(29.161±7.830nm)减小(P<0.05);突触界面曲率(1.083±0.049)较模型组(1.062±0.048)变化不明显(P>0.05);③与模型组比较,模针组小鼠NCAM及其mRNA、ST8SiaII/IVmRNA阳性表达明显增强(P<0.05)。结论:①电针能有效改善SAMP8小鼠学习记忆能力;②电针能有效调整海马神经元突触形态,使PSD增厚,突触间隙宽度变窄,促进突触形态可塑性的发挥;③电针改善SAMP8小鼠学习记忆能力的效应可能是通过诱导NCAM及ST8SiaII/IVmRNA的合成,促进神经细胞黏附,促进神经元突触形态可塑性来实现的。     

神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠海马突触素表达和学习记忆能力的影响

背景:前期实验已证实,移植入阿尔茨海默病大鼠脑内的神经干细胞能够存活、增殖,但其是否可替代损伤或坏死的神经细胞而重建神经通路,改善学习记忆能力尚不清楚.突触素是突触重建的重要标记之一.目的:观察神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力及突触表达的影响.方法:SD大鼠随机数字表法分为正常对照组、阿尔茨海默病模型组、2周移植组和4周移植组,除正常对照组外制各阿尔茨海默病模型.另取新生24 h SD大鼠海马齿状回分离、培养神经干细胞,经Hoechst33258标记后植入2周和4周移植组海马CA1区,行Y迷宫实验检测大鼠的学习记忆能力,然后取脑进行尼氏染色和突触寨免疫组织化学染色.阿尔茨海默病模犁组则以同样的方法、同样的位点注入等量无菌生理盐水.正常对照组不施以任何处理.结果与结论:①2周和4周移植组海马CA1区细胞比阿尔茨海默病模型组增多,但仍少于正常对照组(P＜0.05),平均吸光度与正常对照组相比差异无显著性意义(P＞0.05).②2周移植组和4周移植组大鼠海马结构内突触奈吸光度值明显高于正常对照组和阿尔茨海默病模型组(P＜0.05).③与阿尔茨海默病模型组相比,2周和4周移植组大鼠学习能力和记忆能力均显著增强,正确反应率明显提高(P＜0.05),而与正常对照组相比,差异无显著性意义(P＞0.05).提示移植入脑内的神经干细胞可促进突触形成,改善学习记忆能力.     

电磁脉冲对大鼠学习记忆能力和长时程增强的影响

目的　以Y迷宫和长时程增强（LTP）为指标,探讨电磁脉冲（EMP）对动物学习记忆能力和海马神经突触可塑性的影响。方法　2级Wistar雄性大鼠25只,随机分为EMP组15只,其中5只用于6h内引发LTP,5只用于12h以后引发LTP,5只进行Y迷宫试验;对照组10只,5只用于引发LTP,5只进行Y迷宫试验。结果　EMP组在刺激后6h内引发LTP的群峰电位（PS）幅值增高［（148.0±4.9）%］,明显低于对照组［（204.4±2.9）%］,两组比较差异具有非常显著性意义(P<0.01),12h后引发的LTP的PS趋于恢复;EMP组的学习能力［(55.0±5.0)%］和记忆能力［(53.0±8.3)%］与对照组［学习能力为(77.0±12）%;记忆能力为（77.0±9.7)%］相比均降低,两组比较差异有显著性意义（P<0.05）。结论　电磁脉冲可使海马神经元在形态结构、功能及突触可塑性上发生某些变化,并进一步影响到大鼠学习记忆功能。     

光刺激对痴呆小鼠海马长时程增强及β淀粉样 蛋白含量的影响

目的:观察光刺激对3x Tg阿尔茨海默病(AD)模型小鼠海马长时程增强(LTP)及β淀粉样蛋白(Aβ)的影响。方法:4～6月3x Tg AD小鼠20只随机分为光刺激(PS)组,未刺激(NS)组,同背景野生型小鼠10只为对照组。PS组小鼠接受2 Hz光刺激4周,其余2组正常环境饲养。4周后断头取脑,制作离体脑片,诱导海马LTP,并检测小鼠海马组织内Aβ蛋白含量。结果:NS组小鼠LTP明显受抑,海马组织内Aβ含量较对照组明显升高(P<0.05)。PS组小鼠较NS组小鼠海马Aβ蛋白水平明显降低(P<0.05),LTP明显增强(P<0.05)。结论:光刺激增强3x Tg AD模型小鼠海马LTP,降低海马Aβ含量。     

电针百会对APP/PS1转基因小鼠学习记忆能力及Tau蛋白磷酸化的影响

目的:基于Tau蛋白磷酸化探讨电针百会对APP/PS1转基因痴呆模型小鼠学习记忆能力的影响及其可能机制。方法:30只4月龄雌性APP/PS1转基因小鼠随机分为模型组、百会组和非穴组,10只同窝阴性野生小鼠为野生组;百会组电针百会穴,非穴组电针非穴,干预28d。采用Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆能力;尼氏染色观察小鼠海马神经元形态结构变化;蛋白免疫印记杂交技术(Western blot)检测小鼠海马组织在Ser-396位点上Tau蛋白磷酸化水平。结果:与模型组相比,百会组可改善小鼠的学习记忆能力(P0.05),减轻海马神经元形态结构的损伤,降低海马组织中Ser-396位点上Tau蛋白磷酸化水平(P0.05),非穴组与模型组相比无显著性差异(P0.05)。结论:电针百会能够改善APP/PS1转基因痴呆模型小鼠的学习记忆能力,其机制可能与抑制Tau蛋白磷酸化有关。     

雌二醇对大鼠海马CA3区长时程增强诱导的影响

目的：应用细胞外电生理记录方法，来探讨1713-雌二醇对大鼠海马CA3区长时程增强(LTP)诱导阶段的影响并探讨其可能的机制。方法：应用细胞外电生理技术，刺激大鼠海马穿通纤维，在CA3区记录群体锋电位(population spike，PS)，通过在CA3区分别急性注射171β-estradiol，电压敏感性钙通道(voltage-sensitive Ca^2+ channels．VSCCs)拮抗剂尼非地平(Nifedipine)，和三氯化铝(Alcl3)来观察不同的药物在给予动物高频刺激诱导出的LTP中PS幅值的相应变化。结果：高频刺激前5man给予不同浓度雌激素能抑制海马CA3区LTP的诱导过程：1 pmol／L的雌激素使海马CA3区LTP的诱导减弱，药物在1min内开始起作用，持续整个诱导阶段，并且当浓度的加大为10pmol／L和。100pmol/L，抑制作用加强，3种浓度雌激素PS的幅值抑制峰值分别是基础值的(118．56&;#177;11.97)％，(90，82&;#177;9．23)％和(68，10&;#177;10，37)％。选择性钙通道阻断剂Nifedipine也明显抑制LTP诱导过程。(112.24&;#177;7.59)％，50min时抑制作用达峰值，为基础的(78．92&;#177;11.69)％，与雌激素有相互加强的作用。结论：雌激素对诱导阶段LTP抑制作用至少部分的与细胞钙水平降低有关。小剂量的Alcl3(0．25mol／L)对LTP的诱导无明显抑制作用，此剂量与中等浓度(10pmol／L)的雌激素共同作用时有部分增强效应，提示两者可能的共同作用与抑制高电压激活的钙通道有关。