siRNA 抑制 HM GA1基因表达对 LX-2细胞生物学功能的影响

目的：探讨高迁移率蛋白 A1（HMGA1）siRNA 对人肝星状细胞 HMGA1、α-SMA 、E-钙黏素（E-cadherin）基因的表达调控作用及增殖活性的影响,并探讨其可能的机制。方法将有效的人工合成的 HMGA1 siRNA 转染人肝星状细胞 LX-2（LX-2）后沉默 HMGA1基因的表达。通过实时荧光定量 PCR（RT-PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 LX-2细胞中HMGA1、α-SMA 和 E-cadherin 的 mRNA 及蛋白表达水平。采用四甲基偶氮唑盐（M TT ）法检测 LX-2细胞增殖水平。结果以HMGA1-siRNA 序列1组沉默效果最好。 TGF-β1刺激组与 TGF-β1＋ NC-siRNA 组之间细胞增殖水平、HMGA1、α-SMA 、E-cad-herin 的基因及蛋白表达水平差异无统计学意义（P ＞0．05）,细胞增殖水平、HMGA1、α-SMA 表达均明显高于正常对照组（P ＜0．05）,E-cadherin 表达显著低于正常对照组（P＜0．05）;TGF-β1＋ HMGA1 siRNA 组细胞增殖水平及 HMGA1、α-SMA 的 mR-NA 及蛋白表达水平较另外3组均显著下降（P＜0．05）,E-cadherin 表达水平显著增高（P＜0．05）。结论靶向 HMGA1的 siRNA能够沉默 LX-2中 HMGA1的表达;抑制 TGF-β1诱导的 LX-2增殖水平,提示 HMGA1参与了 TGF-β1诱导的肝星状细胞活化。     

EGCG对低氧诱导下胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对低氧培养下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 将人胃癌细胞株SGC7901进行传代培养,并采用氯化钴（CoCl2）建立低氧模型,实验设空白对照组（常氧组）、低氧对照组及低氧加不同浓度的EGCG组.分别采用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting检测细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子-A（VEGF-A）的表达.结果 低氧条件下,低浓度EGCG短时间内（24 h）对SGC7901细胞生长无明显抑制作用（P〉0.05）;但随着浓度的升高和作用时间的延长,EGCG可抑制低氧SGC7901细胞的增殖（P〈0.01）,100 μg/mL EGCG作用72 h后,其抑制率可达（76.3±2.9）%.流式细胞仪检测显示,EGCG在低氧环境下可呈时间-剂量依赖性地诱导胃癌细胞凋亡（P〈0.05或P〈0.01）.EGCG可明显抑制低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）,并下调VEGF-A mRNA表达（P〈0.05或P〈0.01）,但对HIF-1α mRNA的转录无明显影响（P〉0.05）.结论 低氧条件下,EGCG可抑制胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A的表达有关.     

EGCG抑制HL-60细胞增殖作用的机制研究

目的探讨EGCG抑制白血病HL-60细胞增殖的作用机制。方法采用软琼脂集落形成实验和绘制细胞生长曲线,检测EGCG对HL-60细胞增殖的影响;FCM及DNA凝胶电泳法检测EGCG处理HL-60细胞后的凋亡情况;实时荧光定量RT-PCR和Wester blotting检测AKT1的表达。结果细胞生长曲线和软琼脂集落形成实验结果均显示EGCG呈浓度依赖性抑制HL-60细胞的增殖（P〈0.05）;FCM及DNA凝胶电泳法结果显示EGCG呈浓度依赖性诱导HL-60细胞的凋亡（P〈0.05）。实时荧光定量RT-PCR和Wester blotting结果显示EGCG浓度升高,HL-60细胞中AKT1的表达降低。结论 EGCG可能通过下调AKT1的表达,促进细胞凋亡,发挥其对HL-60细胞增殖的抑制作用。     

儿茶素单体EGCG与ECG体外抗人肝癌细胞BEL-7402的作用

目的研究儿茶素单体表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)抗人肝癌细胞BEL-7402的作用。方法形态学观察EGCG、ECG作用后BEL-7402细胞的生长;MTT法检测EGCG、ECG对BEL-7402细胞生长的抑制;流式细胞术(FCM)检测EGCG、ECG诱导BEL-7402细胞凋亡水平;RT-PCR检测增殖相关信号分子Gli2和凋亡受体Fas的表达水平。结果 EGCG、ECG均能以时间依赖和浓度依赖的方式抑制BEL-7402细胞生长,并诱导细胞凋亡。EGCG对BEL-7402细胞的生长抑制和诱导凋亡作用均较ECG强。EGCG和ECG均能下调Gli2的表达,但对Fas表达无影响。结论EGCG抗人肝癌BEL-7402细胞作用较ECG强。     

EGCG抑制结肠癌HT-29细胞生长及血管生成的作用机制

目的   探讨表没食子儿茶素没食子酸酯( EGCG )对人结肠癌细胞HT-29生长的影响及抑制血管生成的相关机制。方法   EGCG（0、25、50、100μg /mL）作用于结肠癌细胞株HT-29 24h后, 采用MTT法检测EGCG对HT-29细胞生长的作用,应用RT-PCR及Western blot分别检测EGCG干预前后HT-29结肠癌细胞中TGFβ1、 15-PGDH、COX-2、VEGFmRNA及蛋白的表达情况。结果   MTT显示EGCG抑制HT-29细胞的生长,并随着浓度的增加及时间的延长抑制作用逐渐增强（P＜0.05）; TGF-β1、15-PGDH mRNA及蛋白表达量随着EGCG 浓度的增加而增加,COX-2、VEGF mRNA及蛋白表达量随着EGCG 浓度的增加而下降(P<0.05) 。结论   EGCG呈浓度及时间依赖性抑制HT-29细胞的增殖,可能通过诱导HT-29细胞中TGF-β1、15-PGDH, 抑制COX-2、VEGF mRNA及蛋白表达预防结肠癌的血管生成。     

新城疫病毒抑制肝星状细胞活化的初步研究

目的：探讨新城疫病毒（newcastle disease virus,NDV）在活化肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）中的复制对HSC的活化增殖以及细胞生物学功能的影响。方法：用不同滴度的NDV溶瘤株Italien（NDV-Italien）感染经转化生长因子-β1（trans－formation growth factor-β1,TGF-β1）刺激活化的人HSC系LX-2。MTT法检测NDV 对细胞增殖率的影响。免疫荧光显微镜技术检测活化标志物α-SMA的表达变化。结果：NDV的感染抑制了LX-2细胞的增殖,细胞增殖率和病毒滴度呈负相关。与未刺激组相比,NDV在TGF-β1刺激的LX-2细胞中的增殖抑制率提高,LX-2细胞的活化标志物α-SMA的表达显著性下调。结论：NDV在活化LX-2细胞中的复制具有抑制细胞增殖和HSC活化的作用。     

EGCG对低氧诱导下胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对低氧培养下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法 将人胃癌细胞株SGC7901进行传代培养,并采用氯化钴（CoCl2）建立低氧模型,实验设空白对照组（常氧组）、低氧对照组及低氧加不同浓度的EGCG组。分别采用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting检测细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子-A（VEGF-A）的表达。结果 低氧条件下,低浓度EGCG短时间内（24 h）对SGC7901细胞生长无明显抑制作用（P>0.05）;但随着浓度的升高和作用时间的延长,EGCG可抑制低氧SGC7901细胞的增殖（P<0.01）,100 μg/mL EGCG作用72 h后,其抑制率可达（76.3±2.9）%。流式细胞仪检测显示,EGCG在低氧环境下可呈时间—剂量依赖性地诱导胃癌细胞凋亡（P<0.05或P<0.01）。EGCG可明显抑制低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）,并下调VEGF-A mRNA表达（P<0.05或P<0.01）,但对HIF-1α mRNA的转录无明显影响（P>0.05）。结论 低氧条件下,EGCG可抑制胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A的表达有关。     

EGCG对体外培养子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的研究EGCG对体外培养子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的作用,及对p-AKT和PTEN蛋白表达的影响。方法体外培养子宫肌瘤细胞,不同浓度EGCG干预后,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增生活性;PI染色FCM法分析检测细胞周期变化及凋亡率;免疫细胞化学测定p-AKT和PTEN蛋白表达情况。统计学分析采用方差分析和t检验。结果 EGCG对体外培养子宫肌瘤细胞有增殖抑制作用（P〈0.05）,呈时间、浓度依赖性,以剂量依赖方式诱导子宫肌瘤细胞凋亡（P〈0.05）,上调PTEN表达,下调p-AKT表达。结论 EGCG通过上调PTEN表达、下调p-AKT表达抑制肌瘤细胞的体外增生。     

HIF-2琢对自噬介导的肝癌细胞顺铂耐药的影响及机制

目的探究低氧诱导因子-2琢（HIF-2琢）对自噬介导的人肝癌阿霉素耐药细胞株（HepG2/ADM）顺铂（cisplatin）耐药的影响及机制,以期为疾病的临床治疗提供新思路。方法将人肝癌细胞HepG2和HepG2/ADM分为7组并加入相应试剂：（1）HIF-2琢-siRNA＋cisplatin组;（2）HIF-2琢-siRNA组;（3）NC-siRNA组;（4）3-甲基腺嘌呤（3-MA）＋cisplatin组;（5）cisplatin组;（6）3-MA组;（7）对照组。采用Westernblot法检测微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）、Beclin1、HIF-2琢蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率。结果cisplatin组HepG2、HepG2/ADM细胞中LC3-Ⅱ、Beclin1、HIF-2α蛋白表达水平及细胞凋亡率较对照组均显著升高（均P＜0.05）。3-MA组HepG2/ADM细胞中LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达水平较对照组均显著下降（均P＜0.05）。3-MA＋cisplatin组HepG2/ADM细胞凋亡率较cisplatin组、3-MA组和对照组均显著升高（均P＜0.05）;cisplatin组HepG2/ADM细胞凋亡率较3-MA组和对照组均显著升高（均P＜0.05）。HIF-2琢-siRNA组HepG2/ADM细胞中HIF-2琢、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达水平较NC-siRNA组均显著下降（均P＜0.05）。HIF-2琢-siRNA＋cisplatin组HepG2/ADM细胞凋亡率较HIF-2琢-siRNA组、NC-siRNA组和cisplatin组均显著升高（均P＜0.05）;HIF-2琢-siRNA组和NC-siRNA组HepG2/ADM细胞凋亡率较cisplatin组均显著降低（均P＜0.05）。沉默HIF-2琢表达后,随cisplatin处理浓度增加,HepG2/ADM细胞增殖抑制率升高。结论HIF-2琢可能通过调节自噬影响肝癌细胞HepG2/ADM的cisplatin耐药性,因此临床上可通过降低HIF-2α表达水平,提高cisplatin对肝癌细胞HepG2/ADM的杀伤作用,为晚期肝癌治疗提供新思路。     

山竹提取物对胃癌SGC-7901细胞的体外实验研究

目的观察山竹提取物（GME）对人胃癌细胞SGC-7901增殖情况的影响,探讨其作用机制。方法采用新型四氮唑盐法（MTS）检测GME对SGC-7901细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测GME对SGC-7901细胞凋亡和诱导活性氧（ROS）水平的影响;采用Westernblot检测不同浓度GME对BGC-7901细胞的PTEN、Bax、Bcl-2表达的影响。结果GME显著抑制SGC-7901细胞的增殖（P＜0.05）,与阳性对照组5-氟尿嘧啶（5-FU）相比抑制率也较高（P＜0.05）,其半数抑制浓度为：7.89滋g/ml。经5、7.5滋g/ml的GME处理24h后,可有效促进SGC-7901细胞凋亡（P＜0.05）,ROS水平的累积;GME相同方式处理后,SGC-7901细胞中PTEN和Bax的蛋白表达量上调,Bcl-2蛋白表达量降低（P＜0.05）。结论GME能够显著抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,能够诱导SGC-7901细胞ROS水平的累积,并通过影响PTEN、Bax和Bcl-2蛋白的表达,促进其凋亡。     

探讨EGCG对人肝癌细胞体外增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨茶多酚主要成分没石子儿茶素没石子酸酯（EGCG）诱导人肝癌细胞株SMMC27721体外增殖和凋亡过程中的影响,预测其对人肝癌的抗癌作用及机制。方法体外培养人肝癌SMMC27721细胞,采用不同浓度的EGCG对其进行干预,用MTT法观测其对肝癌细胞增殖能力的影响;用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响;用免疫细胞化学法检测肝癌细胞中p-Akt（sel473）蛋白的的表达变化;用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响。结果在EGCG的作用下,SMMC27721细胞增殖能力明显受到抑制（P〈0.05）,p-Akt（sel473）细胞凋亡明显增加（P〈0.05）。结论 EGCG可通过抑制Akt信号通路而诱导肝癌细胞凋亡。     

EGCG联合紫杉醇对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯［(-)-Epigallocatechin gallate,EGCG］及紫杉醇单独使用和联合使用时对肺癌A549细胞的形态、活性、细胞凋亡以及相关信号通路的影响。方法：不同浓度的EGCG、紫杉醇单用及联合应用在不同时间作用于肺癌A549细胞,用细胞集落形成实验检测细胞活力、WST-1法检测细胞增殖能力、Hoechst-33342荧光法检测细胞凋亡的情况、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western blot检测内质网应激标志蛋白GRP78表达。结果：①EGCG和紫杉醇均能抑制肺癌A549细胞的增殖;EGCG与紫杉醇联合的抑制率高于单用EGCG或紫杉醇组（P＜0.05）。②EGCG和紫杉醇均可诱导细胞凋亡,2种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强。③蛋白免疫印迹实验显示EGCG和紫杉醇联合可能是通过内质网应激信号通路发挥作用。结论：EGCG、紫杉醇均可抑制人肺癌A549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡,两者联合应用具有协同作用,能显著增强细胞凋亡作用。     

EGCG对人肺癌细胞NCI-H1975和NCI-H520细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系增殖凋亡、周期的作用机制.方法 对数生长期NSCLC细胞系NCI-H1975和NCI-H520,分为空白对照组(0 mol/LEGCG)和不同剂量(20、40、80、160、320 mol/L) EGCG组,分别处理作用24、48、72 h,CCK-8法检测细胞凋亡率;细胞流式细胞术检测细胞凋亡和周期;Western blot检测细胞周期、凋亡相关蛋白表达及NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路变化;细胞分为:Control siRNA组、EGFR siRNA组和EGFRsiRNA+EGCG组,采用siRNA转染技术,分析下调EGFR对NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路的影响.结果 分组的相应浓度EGCG组NCI-H1975和NCI-H520细胞的增殖显著降低(P＜0.05),同时G1/G0细胞比例增高,G1/S期细胞比例下降(P＜0.05),CyclinD1、CyclinE、CDK6蛋白表达降低(P＜0.05),但对CDK4无明显影响(P＞0.05),同时细胞凋亡增多,Cleaved caspase 3和Cleaved caspase 9蛋白表达上调(P＜0.05).P-P65、Bcl2、P-EGFR、P-AKT蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,但对P-ERK没有明显的影响.而EGCG+EGFR siRNA组,相比于EGFR siRNA组,明显降低各蛋白的表达,升高Bax蛋白(P＜0.05).结论 EGCG下调NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路抑制NCI-H1975和NCI-H520细胞增殖、促进凋亡,并阻断细胞周期.     

草乌甲素对人肝星状细胞LX-2增殖及凋亡的影响

目的研究草乌甲素(bulleyaconitine A,BLA)对肝星状细胞LX-2增殖、凋亡以及相关凋亡蛋白表达的影响。方法体外培养LX-2细胞,分别给予不同BLA浓度处理24 h后采用CCK8法检测BLA对LX-2细胞的抑制率;流式细胞术检测LX-2细胞凋亡的情况;Western blot法检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达量。结果 BLA对LX-2细胞有明显抑制作用,BLA能使LX-2细胞处于S期、G2/M的细胞明显减少,差异均有统计学意义(t=9.71、4.88,P0.05),处于G1期的细胞显著增多,差异有统计学意义(t=9.71,P0.05);使Bax、Caspase-3蛋白表达量增加,Bcl-2表达降低。结论 BLA可能通过促进Bax、Caspase-3表达,抑制Bcl-2表达抑制LX-2细胞增殖,促进其凋亡。     

莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的：探讨莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法：采用CCK-8法检测不同浓度（5、10、25、50、100 μmol/L）莪术醇,0 μmol/L莪术醇为对照组,干预SKOV3细胞24 h、48 h的增殖抑制率,并计算IC50值;划痕实验和Transwell小室法分别检测细胞的迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测莪术醇及PI3K/AKT通路阻断剂LY294002对细胞PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达的影响。结果：莪术醇对SKOV3细胞的增殖有明显抑制作用,呈浓度依赖性但不呈现时间依赖性,IC50值为48 μmol/L;莪术醇能明显抑制SKOV3细胞的迁移与侵袭,促进其凋亡（均P＜0.01）,降低细胞PI3K、AKT总蛋白表达（均P＜0.05）,显著降低其活化形式p-PI3K、p-AKT的表达（均P＜0.01）;莪术醇与LY294002联用后表现出良好的协同作用,较单独用莪术醇时下调p-PI3K、p-AKT蛋白更为显著（P＜0.05）。结论：莪术醇能抑制SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭,并诱导其凋亡,其作用机制与抑制PI3K/AKT通路有关。     

R-Spondin2、Syndecan-1在小鼠肝星状细胞活化中的作用研究

目的探讨R-脊椎蛋白2（R-Spondin2）、多配体蛋白聚糖1（Syndecan-1）在小鼠肝星状细胞（HSC）活化中的作用及可能的作用机制。方法将24只雄性昆明种小鼠随机分为6组,每组4只,将每组小鼠肝脏分离并培养HSC。H1组：HSC分离培养1d;H2组：HSC分离培养3d;H3组：HSC分离培养7d;R+S-组：HSC分离培养24h后,给予20ng/mlR-Spondin2刺激24h;R-S+组：HSC分离培养24h后,给予20ng/mlSyndecan-1刺激24h;R-S-组：HSC分离培养48h,未予任何刺激。采用Westernblot、RT-PCR法分别检测各组小鼠HSCR-Spondin2、Syndecan-1、α-平滑肌肌动蛋白（琢-SMA)蛋白与mRNA表达情况。结果与H1组比较,H2、H3组小鼠HSCR-Spondin2、α-SMA蛋白与mRNA表达均上调（均P＜0.05）,Syndecan-1蛋白与mRNA表达均下调（均P＜0.05）;与H2组比较,H3组小鼠HSCR-Spondin2、α-SMA蛋白与mRNA表达均上调（均P＜0.05）,Syndecan-1蛋白与mRNA表达均下调（均P＜0.05）;与R-S-组比较,R+S-组小鼠HSCSyndecan-1蛋白表达水平无统计学差异（P＞0.05）,琢-SMA蛋白表达水平上调（P＜0.05）;与R-S-组比较,R-S+组小鼠HSCR-Spondin2、琢-SMA蛋白表达水平均下调（均P＜0.05）。结论随着HSC体外培养时间的延长,Syndecan-1表达下调,R-Spondin2、α-SMA表达上调,HSC发生活化;其作用机制可能为HSC培养时间延长,Syndecan-1发生降解,R-Spondin2表达上调诱导α-SMA蛋白表达增加,促使HSC活化。     

EGCG诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡及对Survivin蛋白表达的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocat-echin-3-gallate,EGCG)对人前列腺癌细胞PC-3凋亡及对其Survivin蛋白表达的影响。方法使用不同浓度的EGCG(0、20、40、80μg/mL)处理前列腺癌细胞株PC-3,通过细胞增殖曲线实验检测EGCG对PC-3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度EGCG处理PC-3细胞48h后对细胞周期及凋亡的影响;用RT-PCR法检测各浓度EGCG作用48h后PC-3细胞中Survivin基因的表达差异,使用Western blot进行确认。结果 EGCG可以抑制PC-3细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用随EGCG浓度的增加而增强(P<0.05);Sur-vivin在PC-3细胞中高表达,EGCG促使PC-3细胞的Survivin表达下调,其表达水平随EGCG浓度的增加而减少(P<0.01)。结论 EGCG能下调PC-3细胞中Survivin蛋白的表达,这可能是EGCG抑制PC-3细胞增殖、诱导其凋亡的关键机制。     

丹参素对肝星状细胞增殖、活化及TGF β/BMP受体表达的影响

目的:观察丹参素对肝星状细胞增殖、活化及TGF β,BMP受体表达的影响,进一步探索丹参素抗肝纤维化的机制.方法:用不同浓度(0.25、0.125、0.062 5 mmol/L)的丹参素作用于经TGFβ1(5 ngml)处理人肝星状细胞LX-2 48 h,CCK8法检测其对细胞增殖的影响,免疫化学染色法观察α平滑肌动蛋白(α-SMA)的表达,RT-PCR检测TGFβⅠ、Ⅱ型受体,BMPⅡ型受体mRNA的表达.结果:TGFβ1 5 ng/ml处理48 h后,LX-2细胞的增殖与细胞对照组无明显差异,高,中,低浓度丹参索处理组的细胞增殖受到浓度依赖性抑制(P＜0.01).TGF β1诱导的细胞活化也可被丹参素浓度依赖性抑制.丹参素可浓度依赖性减少TβR Ⅰ、Ⅱ和增加BMPRⅡmRNA表达(P＜0.01).结论:丹参素可通过抑制肝星状细胞增殖和TGFβ1诱导的肝星状细胞活化,负性调控肝纤维化过程,其机制可能为抑制TGFβ受体表达并拮抗TGFβ引起的BMP受体表达下调,进而影响下游Smad分子.     

神经酰胺诱导LX-2细胞凋亡抑制肝纤维发生的作用

目的:探讨神经酰胺对人源肝星状细胞株（HSCs）LX-2的影响以及在肝纤维化治疗中的作用,为寻求肝纤维化治疗的新方法提供理论依据。方法:体外培养人源肝星状细胞LX-2,分为正常细胞对照组及给药组（C2终浓度为30、45、60 μmol/L）,应用神经酰胺从头合成途径的限速酶即丝氨酸棕榈酰转移酶的特异性抑制剂多球壳菌素（myriocin）进一步分析神经酰胺的作用。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测LX-2的细胞增殖情况,酶消化法测定上清中羟脯氨酸（Hyp）的含量,比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）的活性,Western blot法检测bax、bcl-2及caspase-3的蛋白表达量。结果:C2各浓度组对LX-2的增殖均有明显的抑制作用,且具有剂量依赖性（P<0.05）;LX-2经C2处理后细胞内羟脯氨酸含量显著下降（P<0.05）;LDH活性与对照组比较均无显著性差异;C2下调LX-2中抗凋亡蛋白bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白bax与凋亡执行效应分子caspase-3的表达（P<0.05）,bax/bcl-2比值增大。但是,以myriocin 15 μmol/L作用LX-2细胞24 h后,细胞增殖较对照组增多,羟脯氨酸的含量明显升高（P<0.05）;LDH活性与对照组比较无显著性差异;bcl-2蛋白表达上调,bax、caspase-3蛋白表达下调（P<0.05）,bax/bcl-2比值减小。结论:神经酰胺可通过上调bax和caspase-3的表达,下调bcl-2的表达而诱导LX-2细胞凋亡,同时抑制其增殖,从而减少羟脯氨酸的生成,产生抑制肝纤维发生的作用。     

蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用

目的:研究蒿鳖养阴软坚方在体外对LX-2细胞的影响,从而探讨蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用。方法:体外培养人肝星状细胞LX-2,实验分为正常对照组、TGF-β1刺激组和蒿鳖养阴软坚方低、中、高浓度给药组。MTT法检测LX-2细胞增殖情况;比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性;酶消化法检测细胞上清羟脯氨酸（Hyp）的含量;Western blot法检测collagen Ι以及α-SMA蛋白表达量。结果:TGF-β1作用于LX-2能够明显促进细胞的增殖,collagen I、α-SMA的表达量显著升高。蒿鳖养阴软坚方能抑制LX-2细胞增殖并且能够降低collagen Ι和α-SMA的表达。结论:蒿鳖养阴软坚方能够显著抑制LX-2增殖,下调collagen Ι和α-SMA的表达,降低Hyp生成,从而发挥抗肝纤维化的作用。