转录因子NF-E2相关因子2对急性肺损伤小鼠的保护作用研究

目的探讨转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）对急性肺损伤（ALI）小鼠的保护作用及其机制。方法采用随机数字表法将小鼠分为对照组、ALI组、Nrf2干扰溶剂对照组（干扰溶剂组）和Nrf2干扰组4组,每组9只。Nrf2干扰组于尾静脉注射Nrf2小干扰RNA（siRNA）,干扰溶剂组尾静脉注射等量干扰溶剂,对照组和ALI组于尾静脉注射等量0.9%氯化钠溶液,1次/d,连续3d。第4天时,ALI组、干扰溶剂组和Nrf2干扰组腹腔注射脂多糖（LPS）10mg/kg制备内毒素诱发ALI模型,对照组则腹腔内注射等量0.9%氯化钠溶液。注射LPS或0.9%氯化钠溶液6h后,麻醉开腹,从下腔静脉取静脉血,采用ELISA法检测血清IL-6、TNF-α水平。光镜下观察肺组织形态学变化,并进行肺损伤评分,测定并计算小鼠肺湿重/干重比值。采用Westernblot法检测肺组织Nrf2核蛋白表达水平,采用比色法检测肺匀浆组织中髓过氧化物酶（MPO）、一氧化氮合酶（iNOS）水平。结果与对照组比较,ALI组、干扰溶剂组和Nrf2干扰组肺组织病理学损伤评分、湿重/干重比值、IL-6、TNF-α、MPO、iNOS水平升高,Nrf2核蛋白表达水平上调,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与ALI组比较,Nrf2干扰组肺组织病理学损伤评分、湿重/干重比值、IL-6、TNF-α、MPO、iNOS水平升高,NRF2核蛋白表达水平下调,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论Nrf2siRNA可下调Nrf2核蛋白表达水平,从而加重LPS诱导的小鼠ALI的严重程度,使血清促炎症因子水平和肺组织中氧化应激损伤指标升高,提示Nrf2对ALI的保护作用与其抗炎和抗氧化作用有关。     

萝卜硫素通过Nrf2/ARE信号通路对急性肺损伤小鼠的保护作用研究

目的 探讨萝卜硫素(SF)能否通过上调转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2),起到抗炎和抗氧化应激作用减轻小鼠急性肺损伤(ALI)。 方法 将36只健康小鼠随机分成4组:对照组(C组),急性肺损伤组(ALI组),SF溶剂组和SF组。SF组于腹腔注射SF 20 mg/kg,SF溶剂组于腹腔注射同等量的SF载体溶剂,2次/d,连续3 d。第4天时,ALI组、SF溶剂组和SF组腹腔注射脂多糖(LPS)10 mg/kg制备内毒素诱发急性肺损伤模型,C组则腹腔内注射同等容量的生理盐水。注射LPS或生理盐水6 h后,麻醉开腹,从下腔静脉取静脉血,通过ELISA法检测血清中IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。光镜下观察肺组织病理学结果,并进行肺损伤评分。检测并计算小鼠肺湿重/干重比,并采用Western blotting法测定肺组织内Nrf2核蛋白表达,比色法检测肺组织匀浆中髓过氧化物酶(MPO)、一氧化氮合酶(iNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。 结果 与C组比较,ALI组和SF溶剂组肺损伤评分、IL-6、TNF-α、MPO、iNOS升高,SOD和湿重/干重比值降低,Nrf2蛋白表达上调(均P<0.05)。与ALI组比较,SF组肺损伤评分、IL-6、TNF-α、MPO、iNOS降低,SOD、湿重/干重比值升高,Nrf2蛋白表达上调(均P<0.05),而SF溶剂组各项指标与ALI组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。 结论 SF可通过诱导Nrf2的表达,减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤的严重程度,使血清促炎症介质浓度降低,使组织中氧化应激损伤指标降低,Nrf2转录因子对ALI的保护作用与其抗炎和抗氧化作用有关。      

骨髓间充质干细胞对小鼠急性肺损伤治疗作用的研究

目的探讨输入外源性骨髓间充质干细胞(MSCs)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(AL)I的治疗作用.方法实验随机分为3组(n=10):对照组、ALI组和MSCs治疗组.健康小鼠LPS气管滴入方法建立ALI模型,尾静脉输入全骨髓培养法分离纯化的MSCs.流式细胞分析鉴定MSCs.HE染色组织切片观察输入MSCs前后肺组织病理形态学改变,W/D比值和髓过氧化物酶(MPO)活性评价肺水肿和炎症反应程度.ELISA检测肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的含量.结果流式细胞分析鉴定:培养MSCs表面标记CD105为阳性,CD34为阴性.肺组织病理学显示:ALI组小鼠肺组织呈现典型的炎症病理变化,包括肺泡充血、出血、水肿,肺泡腔和血管壁中性粒细胞浸润,肺泡壁增厚等肺损伤性病变;MSCs治疗组小鼠肺组织损伤程度明显减轻.肺W/D比值、肺组织MPO活性及TNF-α和IL-6含量:ALI组小鼠肺W/D比值、肺组织MPO活性及TNF-α和IL-6含量高于对照组(P<0.05);MSCs治疗组肺W/D比值、肺组织MPO活性及TNF-α和IL-6含量低于ALI组(P<0.05).结论输入MSCs能够减轻脂多糖致急性肺损伤程度,其作用可能与降低肺W/D比值和肺组织MPO活性、IL-6及TNF-a含量有关.     

熊果苷通过PI3K/Akt/mTOR信号通路减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的 探究熊果苷对脂多糖（LPS）所致急性肺损伤小鼠的保护作用及机制。方法 SPF级BCLB/C小鼠随机分为对照组、模型组、熊果苷组、熊果苷+PI3K抑制剂组。熊果苷组及熊果苷+PI3K抑制剂组分别使用相应药物干预;LPS滴鼻构建急性肺损伤模型;建模6h后处死小鼠。肺组织切片染色后观察肺组织病理改变并行肺损伤评分,计算湿干重比（W/D）;ELISA法测定血清及BALF中TNF-a与IL-6含量;测量肺内ROS含量、MDA水平、MPO活力;Western blot法检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3II/I及PI3K/Akt/mTOR通路蛋白表达。结果 与对照组相比,模型组小鼠肺组织病理改变加重,W/D、肺损伤评分升高,血清及BALF中IL-6、TNF-α升高,肺内ROS含量、 MDA表达、MPO活力升高,肺内Beclin-1、LC3II/I表达升高,肺内PI3K/Akt/mTOR通路蛋白表达降低（P<0.05）。熊果苷组较模型组小鼠肺组织病理改变减轻,W/D、肺损伤评分降低,BALF及血清中IL-6、TNF-α水平降低,肺内ROS含量、MDA表达、MPO活力降低;肺内Bec...     

氢吗啡酮对急性肺损伤大鼠水通道蛋白1、5表达的影响

目的：研究氢吗啡酮对内毒素性急性肺损伤（ALI）大鼠水通道蛋白（AQP）-1和AQP-5表达的影响。方法：健康雄性SD大鼠36只,体质量300～350 g,随机分为3组（n=12）：假手术组（Sham组）、急性肺损伤组（ALI组）和氢吗啡酮预先给药组（HYD组）。ALI组和HYD组采用静脉注射LPS 8 mg/kg建立ALI模型。HYD组于注射LPS前10 min静脉注射氢吗啡酮0.1 mg/kg。LPS注射后6 h处死大鼠,取肺组织,测定肺湿/干重（W/D）比值及肺通透指数（LPI）,HE染色观察肺组织病理学改变,ELISA法测定肺组织TNF-α、IL-1β含量,RT-PCR法和Western Blot法测定AQP-1、AQP-5 mRNA及蛋白表达。结果：与Sham组比较,ALI组和HYD组肺组织W/D比值、LPI及病理学损伤评分增高,TNF-α、IL-1β含量升高,AQP-1、AQP-5 mRNA及蛋白表达下调(P<0.05),W/D比值及病理学损伤评分均增高(P<0.05);与ALI组比较,HYD组肺组织W/D比值、LPI及病理学损伤评分降低,TNF-α、IL-1β...     

脱氢穿心莲内酯琥珀酸半酯通过抑制iNOS 减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化应激

目的探讨脱氢穿心莲内酯琥珀酸半酯（DAS）通过抑制iNOS减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化应激。方法30只雄
性BALB/C小鼠平均分为对照组（Control组）、治疗组（LPS+DAS组）和模型组（LPS组）。使用ELISA对肺泡灌洗液（BALF）中
IL-1β、IL-6和TNF-α水平进行测定。测量BALF中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。对肺组织进行湿/干比（wet
to dry ratio, W/D）测定。HE染色用于肺组织病理变化观察和肺组织损伤评分测量。RT-PCR被用于iNOS mRNA的测定。使
用Western blot测定iNOS和β-肌动蛋白（β-actin）蛋白的表达。结果LPS干预后小鼠BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平
明显上升而SOD水平显著下降,W/D比值和肺组织损伤评分明显升高,iNOS mRNA和蛋白的表达明显增加。LPS+DAS组小
鼠BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平、W/D比值、肺组织损伤评分、iNOS mRNA和蛋白的表达较LPS组小鼠明显下降;同
时BALF中SOD水平较LPS组小鼠明显增加。结论DAS可能是通过抑制iNOS表达减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化
应激。
     

叔丁基对苯二酚对急性肺损伤小鼠的保护作用

目的 探究叔丁基对苯二酚（tBHQ）在急性肺损伤（acute lung injury, ALI）中调节炎症反应的作用和机制。方法 通过腹腔注射脂多糖（LPS）建立C57BL/6J小鼠ALI模型,将C57BL/6J雄性小鼠随机分组。LPS组小鼠按两种剂量（10mg/kg和20mg/kg）腹腔注射,高剂量组观察小鼠生存率,低剂量组观察炎症反应;磷酸盐缓冲液（PBS）组小鼠给予等体积PBS腹腔注射;tBHQ+LPS/tBHQ组小鼠预先24h腹腔给予tBHQ并在LPS处理的同时给予tBHQ;LPS/tBHQ组小鼠在LPS处理的同时给予tBHQ。监测7d生存率;LPS诱导3h后病理组织学观察评估其肺组织损伤程度,实时定量PCR（RT-qPCR）和多重液相蛋白定量技术分别检测小鼠肺组织和血清中IL-6、TNF-α和IL-10的水平,Western印迹法和RT-qPCR检测各组小鼠肺组织中核外转录因子NF-E2相关因子（Nrf2）的表达。结果 与LPS组相比,LPS/tBHQ组和tBHQ+LPS/tBHQ组小鼠的死亡率均明显降低（P分别为0.0005和0.0001）,并且小鼠肺组织损伤程度明显减轻,小鼠肺组织和血清中促炎症介质IL-6和TNF-α的表达降低,抗炎介质IL-10的表达增加;同时与LPS组相比,tBHQ可明显增加肺组织中Nrf2的mRNA水平以及核内蛋白水平。结论 tBHQ能够通过调节小鼠肺组织中促炎、抑炎反应平衡发挥对ALI的保护作用,其机制可能与促进Nrf2核转位有关。     

赤藓糖醇在脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤中的保护作用研究

目的 探讨赤藓糖醇（Ery）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）的保护作用及机制。 方法 采用随机 抽签法将 40 只小鼠分为空白对照组（NT 组）、药物对照组（Ery 组）、模型组（LPS 组）和治疗组（LPS+Ery 组）,每组 10 只。Ery 组 及LPS+Ery组小鼠胃部灌注Ery（100 mg/kg Ery粉末溶于100 μL 0.9%氯化钠注射液）,1次/d,共6 d;NT组及LPS组小鼠胃部灌注 100 μL 0.9%氯化钠注射液。6 d 后,LPS 组及 LPS+Ery 组小鼠鼻内滴注 LPS（1.25 mg/kg LPS 粉末溶于 20 μL PBS）诱导小鼠 ALI,NT 组及 Ery 组小鼠鼻内滴注 20 μL PBS。12 h 后,每组随机选取 5 只小鼠,获取新鲜肺组织,采用肺组织湿重/干重（湿/干） 比值和 HE 染色评估肺组织损伤情况,检测肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性,采用 Western blot 法检测炎症相关蛋白磷酸化 p65（p-p65）蛋白表达水平。每组剩余的 5 只小鼠进行肺泡灌洗,获取肺泡灌洗液,采用 ELISA 法检测小鼠肺泡灌洗液中炎症 因子 IL-6 水平。应用 AutoDock 工具及 PyMOL 软件将 Ery 分子与 p65 蛋白进行对接模拟。 结果 与 NT 组比较,LPS 组小鼠可 见肺组织损伤,肺组织损伤评分、肺组织湿/干比值、肺泡灌洗液中 IL-6 水平、肺组织中 MPO 活性及 p-p65 蛋白表达水平均升 高,差异均有统计学意义（均 P＜0.05）;与 LPS 组比较,LPS+Ery 组小鼠肺损伤程度明显减轻,肺组织损伤评分、肺组织湿/干比 值、小鼠肺泡灌洗液中 IL-6 水平、肺组织中 MPO 活性及 p-p65 蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义（均 P＜0.05）。此 外,Ery 分子与 p65 蛋白具有较强的结合作用。 结论 Ery 可以减轻 LPS 诱导的 ALI 小鼠肺损伤的严重程度,降     

法舒地尔对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用

目的:探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔(fasudil)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致小鼠败血症继发急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的保护作用及机制?方法:C57BL/6小鼠随机分为对照(Control)组?LPS模型组?LPS+fasudil(10 mg/kg)组?LPS + 地塞米松(dexamethasone,Dex,5 mg/kg)组?造模后观察不同时间点各组生存率,6 h处死小鼠收集血清?支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)?肺组织,ELISA测定血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)?白细胞介素(IL)-1β?IL-10水平,检测BALF中细胞计数和蛋白浓度,HE染色观察各组肺组织病理改变,湿干重比评估肺含水量,ELISA测定肺组织中性粒细胞髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)含量?结果:fasudil可显著改善动物生存率?延长生存时间;缓解肺组织炎性损伤及肺水肿程度,降低MPO含量,下调血清中促炎细胞因子IL-1β?TNF-α水平,上调抗炎细胞因子IL-10表达?结论:fasudil可有效缓解LPS所致的小鼠ALI,其作用可能与减轻受累肺组织炎症反应相关?     

还原型谷胱甘肽对内毒素性休克小鼠肺损伤的保护作用

目的 探讨还原型谷胱甘肽对内毒素诱导小鼠的急性肺损伤保护作用的可能机制.方法 于小鼠腹腔注射LPS(10 mg/kg)复制ALI动物模型.将小鼠随机分为对照组(n=10)、LPS组(n=10)、还原型谷胱甘肽(GSH)+LPS组(n=10).观察各组肺组织病理学改变,测量肺干/湿(D/W)重比,用免疫组织化学技术检测肺组织NF-κB的表达,ELISA法检测肺匀浆中TNF-α和IL-6.结果 病理学改变B组与A,C组比较的肺组织有更多白细胞浸润和肺泡壁结构的破坏.B组肺组织中TNF-αd和IL-6含量与A和C比较明显增加,B组肺组织NF-κB的表达组与A和C组比较明显增加.结论 GSH通过抑制NF-κB、TNF-α和IL-6的表达减轻LPS所致急性肺组织损伤.     

sh-RNA沉默HMGB1对脓毒症小鼠肺损伤保护作用研究

目的 探讨短发夹RNA(sh-RNA)沉默高迁移率族蛋白1(HMGB1)对脓毒症小鼠肺损伤的保护作用。方法 采用脂多糖(LPS)诱导小鼠脓毒症模型,随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、LPS组、LPS+sh-RNA阴性对照(sh-NC)组和LPS+sh-HMGB1组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清前列腺素E2(PGE2)及炎症细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-1β)和IL-6]表达水平,并且检测各组小鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性及组织细胞凋亡情况。结果 LPS组小鼠PGE2、TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平均明显高于PBS组,LPS+sh-HMGB1组小鼠PGE2、TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平均明显低于LPS+sh-NC组,LPS组小鼠肺组织MPO活性、凋亡细胞比例均明显高于PBS组,LPS+sh-HMGB1组小鼠肺组织MPO活性、凋亡细胞比例均明显低于LPS+sh-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LPS诱导的脓毒症可刺激炎性反应,并对肺组织造成明显损伤。而体内沉默HMGB1可抑制炎性反应,对...     

NMDA受体阻断剂美金刚胺对小鼠内毒素急性肺损伤的保护作用

目的:探讨NMDA受体阻断剂美金刚胺对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用.方法:健康成年雄性昆明小鼠随机分为正常组、美金刚胺组、ALI组和美金刚胺+ALI组.腹腔注射美金刚胺(10 mg/kg) 30 min后腹腔注射LPS(10 mg/kg)制作ALI小鼠模型.各组小鼠处理后6h测定全肺测定湿/干重比值;采用苏木精-伊红染色观察肺组织病理学改变,采用比色法测定髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)含量;采用ELISA法检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果:美金刚胺预处理可降低LPS诱导的ALI小鼠肺湿/干重比值,减轻其肺组织病理学改变,减少肺组织中MPO和MDA的含量,同时可降低BALF中TNF-α含量以及LDH活性(均P＜0.05).结论:采用美金刚胺阻断NMDA受体可减轻LPS诱导的小鼠ALI,为临床治疗ALI提供了新思路.     

盐酸戊乙奎醚和山莨菪碱对"二次打击"大鼠急性肺损伤保护作用的比较

目的 观察比较盐酸戊乙奎醚和山莨菪碱对"失血性休克-内毒素"二次打击大鼠急性肺损伤（ALI）的保护作用。方法 健康Wistar 大鼠54只,随机分为6组（n=9）,对照组(C组)、二次打击ALI模型组(M组)、山莨菪碱5 mg/kg组(A1组)、山莨菪碱10 mg/kg组（A2组）、盐酸戊乙奎醚1 mg/kg组(P1组)和盐酸戊乙奎醚2 mg/kg（P2组）。在失血性休克首次打击的基础上,静脉注射内毒素（LPS）2 mg/kg,作为第二次打击建立ALI模型。A1组、A2组、P1组和P2组,在模型建立1 h后分别经股静脉注射山莨菪碱5、10 mg/kg、盐酸戊乙奎醚1 mg/kg、2 mg/kg,C组和M组分别给予等量的生理盐水。给药2 h后放血处死动物,股动脉取血测定血清白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。测定肺组织湿干质量比（W/D）,髓过氧化物酶（MPO）及超氧化物歧化酶（SOD）活性,光镜下观察肺组织形态学改变。结果 A1组、A2组、P1组、P2组,血清IL-1、IL-8、 TNF-α含量和肺组织W/D、MPO活性均明显高于C组（P <0.01）,低于M组（P <0.05）;肺组织SOD活性明显低于C组（P <0.01）,高于M组（P <0.05）。与A1组比较,A2组血清IL-1、IL-8、TNF-α含量、肺组织W/D、MPO活性均明显降低（p <0.05),SOD活性稍高但差异无统计学意义(p >0.05)。与P2组比较,P1组血清IL-1、IL-8、TNF-α含量和肺组织W/D、MPO活性均明显降低（p <0.05),肺组织SOD活性明显升高（p <0.05)。P1组血清IL-1、IL-8、TNF-α含量和肺组织W/D与A2组相比均明显降低（p <0.05),两组肺组织SOD和MPO活性差异无统计学意义(p >0.05)。光镜观察,A1组、A2组、P1组、P2组肺组织病理学变化较M组明显减轻,P1组和A2组减轻更明显。结论 盐酸戊乙奎醚和山莨菪碱对"失血性休克-内毒素"二次打击大鼠急性肺损伤有不同程度的保护作用, 山莨菪碱10 mg/kg组优于5 mg/kg组,盐酸戊乙奎醚1 mg/kg组优于2 mg/kg组。相对而言,盐酸戊乙奎醚1 mg/kg组肺保护作用优于山莨菪碱10 mg/kg组。     

抑制炎症反应治疗急性肺损伤的实验研究

目的通过观察急性肺损伤（ALI）大鼠血液和肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒ等炎性细胞因子的变化,探讨抑制炎症反应在治疗急性肺损伤中的作用。方法应用气管内滴入内毒素（LPS）复制大鼠急性肺损伤模型。将48只大鼠随机分成4组：对照组（N组）、LPS组、N-乙酰半胱氨酸（NAC）治疗组（NAC组）、NAC联合地塞米松（Dex）治疗组（NAC＋Dex组）,采用免疫印迹法（Western Blotting）检测NF-κΒ的含量,采用RT-PCR检测肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒmRNA的表达,并采用放免检测血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）中的IL-6、TNF-α的含量。结果LPS组大鼠肺病理可见明显的肺损伤表现,NAC组及NAC＋Dex组肺组织病理改变明显减轻;NAC组及NAC＋Dex组肺NF-κB,肺IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒmRNA表达水平及血清和BALF中的IL-6、TNF-α含量明显高于N组（P〈0.01）,而明显低于LPS组（P〈0.05）。结论NAC、Dex等可以抑制炎症反应,减少炎性介质的释放从而减轻肺损伤的程度,达到防治急性肺损伤的目的。     

卡托普利对急性肺损伤大鼠血清TNF—α和IL-8浓度的影响

目的：探讨烟雾吸入导致大鼠急性肺损伤（ALI）时血清TNF—α、IL-8含量变化及卡托普利对ALI和TNF-α、IL-8的影响。方法：36只健康成年Wistar大鼠随机平均分成正常对照组、烟雾致伤组（ALI组）和卡托普利干预组（CAP组）。CAP组腹腔注射卡托普利（5mg／kg），对照组和ALI组则腹腔注射等量生理盐水。15min后复制大鼠重度烟雾吸入性肺损伤模型。致伤后5min、5h分别采动脉血进行血气分析，检测烟雾致伤后5h血清TNF—α、IL-8含量，光镜观察肺病理形态学变化。结果：ALI组致伤后5h血清TNF-α、IL-8含量明显高于正常对照组（P〈0．01），肺组织病理学改变明显；CAP组致伤后5h血清IL-8含量显著低于ALI组（P〈0．05），肺损伤相对较轻。结论：TNF-α、IL-8可能在烟雾吸入性ALI中起重要作用，卡托普利能降低大鼠ALI时血清IL-8浓度，减轻烟雾吸入致ALI时的肺组织损伤。     

小窝蛋白-1在白藜芦醇治疗小鼠急性肺损伤中的作用研究*

目的 研究小窝蛋白-1（Cav-1）在急性肺损伤（ALI）中的作用以及白藜芦醇抗炎的可能分子机制。方法 将50只BALB/c小鼠随机分为正常组、ALI组、ALI+白藜芦醇干预组、Cav-1过表达的ALI组、Cav-1过表达的ALI+白藜芦醇干预组,每组10只。采用脂多糖（LPS）气管滴注复制小鼠ALI模型,尾静脉注射GV287-Cav-1过表达载体复制Cav-1过表达小鼠,白藜芦醇腹腔给药干预小鼠ALI模型。模型复制成功后取肺组织观察病理组织学变化,采用免疫组织化学和Western blotting检测Cav-1在肺组织中的表达,提取小鼠血清检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）。结果 过表达Cav-1能促进ALI小鼠释放更多的TNF-α、IL-6（P?<0.05）,白藜芦醇能降低Cav-1蛋白的表达水平,改善ALI,抑制TNF-α、IL-6的释放（P?<0.05）,减轻肺组织炎症损伤。结论 白藜芦醇可能通过抑制Cav-1的表达起到对小鼠ALI的治疗作用。     

血管紧张素转化酶2在内毒素诱导大鼠急性肺损伤中的作用

目的探讨血管紧张素转化酶2（ACE2）在内毒素（LPS）诱导大鼠急性肺损伤（ALI）中的治疗作用。方法 24只Wistar大鼠随机分为三组：对照组、ALI组和ACE2治疗组（ACE2组）。LPS静脉注射法复制大鼠ALI建立模型。ACE2组在接受LPS静脉注射后立即给予腹腔注射重组大鼠ACE2 0.1 mg/kg。于术后2 h取大鼠动脉血,全自动动脉血气分析仪测定动脉血气;测肺组织湿重/干重（W/D）比值;酶联免疫吸附试验法（ELISA）测定各组大鼠肺组织中TNF-α、IL-8和IL-1β含量;光学显微镜观察肺组织病理形态学改变。结果成功复制了大鼠LPS肺损伤模型。ACE2干预后可以明显改善ALI大鼠动脉血氧和水平（P〈0.05）、降低W/D比值（P〈0.05）、降低肺组织匀浆内TNF-α、IL-8和IL-1β质量浓度;改善ALI大鼠肺组织损伤及病理评分。结论 ACE2对大鼠LPS诱导肺损伤有治疗作用。     

姜黄素对小鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨姜黄素对小鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)的保护作用。方法 40只健康成年BALB/c小鼠被随机分为:对照组、模型组、姜黄素组和乌司他丁组。对照组腹腔注射生理盐水,其他各组腹腔注射脂多糖(LPS)20 mg/kg建立急性肺损伤小鼠模型;姜黄素组在ALI造模前30 min腹腔注射姜黄素200 mg/kg;乌司他丁组于ALI造模前1 h腹腔内注射乌司他丁(1×105 U/kg)。12 h后处死小鼠,留取血样,ELISA法测定小鼠血清中肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF-α)、白介素-6(Interleukin 6,IL-6)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)水平的变化;留取肺组织,观察肺组织病理学变化并计算各组小鼠肺湿重/干重比值(W/D)。结果与对照组相比,模型组小鼠血清TNF-α、IL-6、MDA水平显著升高,SOD水平显著下降;而与模型组相比,姜黄素组和乌司他丁组小鼠血清TNF-α、IL-6、MDA水平明显降低,SOD水平显著升高。与对照组相比,模型组小鼠肺W/D显著升高;与模型组相比,姜黄素组和乌司他丁组小鼠肺W/D明显降低。模型组小鼠肺泡结构破坏严重,肺泡间隔增厚,间质渗出较多,而姜黄素组和乌司他丁组小鼠肺泡结构相对较完整,炎性细胞渗出较少。姜黄素组和乌司他丁组两组相比无差异。结论姜黄素可减轻LPS诱导的急性肺损伤小鼠炎症反应,其机制可能与抑制脂质过氧化反应有关。     

白藜芦醇通过转录因子Nrf2对感染性休克小鼠肝损伤保护作用的研究

目的探讨白藜芦醇（RES）能否通过上调转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2），起到抗炎和抗氧化应激作用，从而减轻感染性休克小鼠肝损伤。方法采用随机数字表法将40只小鼠分为对照组、感染性休克模型组（模型组）、RES溶剂对照组（溶剂组）、RES干预组（RES组）4组，每组10只。模型组、溶剂组和RES组腹腔注射脂多糖（LPS）（25mg/kg，溶于200滋l0.9%氯化钠注射液）制备内毒素诱发感染性休克模型，对照组则腹腔内注射等量0.9%氯化钠注射液。RES组注射LPS后即刻在腹腔内注射RES（60mg/kg，溶于40滋l40%乙醇，再用9倍体积的PBS进行稀释）；溶剂组在腹腔内注射等量RES溶剂（1:9的40%乙醇和PBS）。6h后予以麻醉，眼球取血后处死并立即取出肝组织。光镜下观察小鼠肝组织形态学变化；采用比色法测定肝组织中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性，ELISA法检测肝组织中TNF-α和IL-6水平，微板法检测血清ALT和AST水平，Westernblot法检测肝组织中Nrf2、血红素氧合酶1（HO-1）蛋白表达水平。结果与对照组比较，模型组小鼠肝损伤明显，肝组织中MDA含量、IL-6、TNF-α水平、HO-1蛋白表达水平均升高，SOD活性降低，血清ALT、AST水平均升高，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与模型组及溶剂组比较，RES组肝损伤减轻，肝组织中MDA含量、IL-6、TNF-α水平均降低，SOD活性、Nrf2、HO-1蛋白表达水平均升高，血清中ALT、AST水平均降低，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论RES可通过上调Nrf2，激活抗氧化基因HO-1的表达，使肝组织中抗氧化指标升高、氧化应激损伤指标和炎症介质水平降低，从而起到减轻感染性休克小鼠肝损伤的作用。     

内毒素复合油酸二次打击致大鼠急性肺损伤模型的建立

目的研究腹腔注射内毒素（LPS）和（或）静脉注射油酸（OA）的方法致大鼠急性肺损伤（ALI）模型的不同特点及其可能机制。方法将24只雄性Wistar大鼠随机分为4组,每组6只。对照组（C组）：腹腔注射生理盐水10ml/kg;内毒素组（LPS组）：腹腔注射1%LPS10mg/kg;油酸组（OA组）：静脉注射OA0.15ml/kg;内毒素＋油酸组（LPS＋OA组）：腹腔注射1%LPS10mg/kg,30min后静脉注射OA0.15ml/kg。观察120min内各组大鼠平均动脉压和心率变化率的改变。120min后处死动物采集标本。分别检测肺组织核转录因子κB（NF-κB）P65、血清IL-6、肺组织髓过氧化物酶（MPO）含量、动脉血气指标和肺组织湿-干重比（W/D）,HE染色观察肺组织病理学改变。结果与C组比较,LPS组肺组织NF-κBp65水平、MPO含量及血清IL-6含量显著增加,肺组织W/D比值及血气分析结果无显著性差异,病理组织学改变轻微;OA组肺组织NF-κBp65水平和MPO含量及血清IL-6含量无显著改变,肺组织W/D比值升高,pH值和PaO2降低,PaCO2升高,肺脏出现严重的肺泡上皮细胞损伤和肺泡结构破坏。LPS＋OA组肺组织NF-κBp65水平、MPO含量和W/D比值及血清IL-6含量显著增加,pH值和PaO2降低,PaCO2升高,肺泡破坏严重,大量组织液渗出。结论内毒素复合油酸可以产生协同作用,产生大量致炎细胞因子,并造成大鼠严重的肺脏病理生理改变,临床ALI/ARDS发病过程更为接近,是一种研究ALI发病机制及早期干预的较理想的动物模型。